Sempract3Análisis de Orina

Dr.
J
D José
éHH. Vill
Villanueva R
Roig
i
Dpto. Bioquímica y Biología Molecular
• Ampliamente solicitado al laboratorio.
laboratorio
• Contiene todas las sustancias que

elimina el organismo PARA
MANTENER LA HOMEOSTASIS: agua,
iones y pH.
pH
• NO SUELE CONTENER UNA

CANTIDAD GRANDE DE PROTEÍNAS.
Í
• Preparación del
paciente.
Proporcionar al paciente
la información suficiente
para que los resultados
que se obtengan en el
laboratorio sean de utilidad
para ell facultativo.
f lt ti
1.- Explicando
p la utilidad del examen.
2.- Explicando
p las condiciones p para tomar la
muestra.
Consideraciones pre-analíticas que afectan a los
resultados
lt d
Aspectos fisiológicos:
• Dieta: no • Evitar ejercicio • Evitar
ingerir previo. exposición al
alimentos o frío
frío.
líquidos antes
del análisis.
2.- Explicando
muestra.
resultados
lt d
Uso de medicamentos:
• Algunos tratamientos
continuados pueden
alterar algunos de los
parámetros obtenidos y
hay que considerarlos.
• El consumo previo de
algunos fármacos puede
dar resultados erroneos:
falsos positivos,
positivos etc..
etc
2.- Explicando
muestra.
resultados
lt d
Alteraciones en la RECOGIDA de la MUESTRA :
• La orina debe recogerse
según las indicaciones para
evitar errores pre-analíticos.
Alteraciones en la RECOGIDA de la MUESTRA:
• Procedimiento de toma
inadecuado.
• Recipientes de toma
inadecuados.
• Aseo
A d fi i t
deficiente d
de l
los
genitales.
• Ciclo menstrual de la mujer,

salvo
l en estudios
di
relacionados con el propio
ciclo.
• DIFERENTES FORMAS DE RECOGIDA DE MUESTRA.
L muestra
•La t másá utilizada
tili d para ell estudio
t di de
d la
l
orina es la primera de la mañana, la orina ha
quedado almacenada durante la noche tras
una cena normal y un ayuno de unas 8 horas.
•Está más concentrada y nos aporta más
información que otra orina espontanea.
•En caso de urgencia o hipertensión

paroxística (puntual),
(puntual) se utiliza la orina
espontanea y se analiza antes de 24 horas.
• Procedimiento
P di i t habitual
h bit l de
d recogida
id de
d muestra.
t
R id de
•Recogida d muestra
t en niños.
iñ
•En el caso de niños se

resuelve el problema de la
recogida, incorporando una
pequeña ñ bolsa
b l que tiene
ti un
orificio para recoger la orina,
se fija bien a los genitales,
genitales
posteriormente se observa si
hayy orina en la bolsa.
ORINA DE 24 HORAS.
•ORINA HORAS
Es frecuente solicitar un estudio
metabólico
t bóli en ell que considere
id más
á
interesante el estudio de la orina de
24 horas,
horas
Recogida: se tira la primer orina de la
mañana y se recoge en un
contenedor apropiado toda la orina
del día y la primera de la mañana del
día siguiente.
siguiente
Debe analizarse justo tras su recogida.
Alteraciones en la CONSERVACIÓN de la MUESTRA:
•FRASCOS con CONSERVANTES.

•En
E ocasiones
i es recomendable
d bl
recoger la orina con algún
conservante que impida la
contaminación o la alteración de su
contenido.
•Es frecuente añadir ácido para bajar
el pH a 5-6 para evitar que se formen
cristales
i t l d Fosfato
de F f t Cálcico
Cál i (
(cuando
d
se alcaliniza la orina). De este modo
podemos medir calcio en la orina sin
interferencias.
Alteraciones en la CONSERVACIÓN de la MUESTRA:
•Presencia de sustancias FOTOLABILES en orina.

•Otra circunstancia común es evitar la
alteración de las sustancias por la
acción de la luz,
luz para esto se protege
el recipiente con papel de aluminio.
• Un ejemplo
j p sería evitar la
descomposición de las porfirinas (*)
que se alteran fácilmente con la
exposición
ó a la luz.
(*) Metabolitos de la ruta de síntesis del
grupo
g p hemo q que se acumulan p por fallos
enzimáticos: PORFIRIAS.
Errores de ETIQUETADO de la MUESTRA:
•Para evitar errores la orina debe

ser correctamente etiquetada y
asociada a la hoja de petición de
muestra de modo que una vez
en el laboratorio pueda ser
identificada en cualquier
momento y sometida al análisis
correcto.
SIP
ETIQUETAS IDENTIFICATIVAS
DUPLICADAS EN LA MUESTRA:
-Incluye Clave del centro de
donde procede, etc.
TIPOS DE PRUEBAS PEDIDAS
ORINA
HECES
TIPOS DE PRUEBAS PEDIDAS
Tipo
p de BOTE/TUBO
/
Etiqueta
Tipos de ANÁLISIS
Creatinina
Proteina
ANALISIS DE CABECERA: tiras reactivas
• Tira de plástico con almohadillas impregnadas en diversos
reactivos que al contacto con la orina producen reacciones
ENZIMÁTICAS y CROMOGÉNICAS que producen
cambios de color.
• ANALISIS VISUAL: comparar el cambio
de color con los patrones
p
suministrados.
• ANALIZADORES AUTOMÁTICOS: miden
ANALIZADORES AUTOMÁTICOS: miden
el cambio de color mediante
espectrometría (colorimetría).
espectrometría (colorimetría).
La correcta conservación de las tiras es muy importante

para que los resultados analíticos sean fiables:
Mantener las tiras en un rango de temperaturas entre 2ºC

2C
y 25ºC.
Observar siempre que el desecante esté dentro y seco.
Vigilar la fecha de caducidad.

Interpretación de los resultados:
• Como cualquier otra técnica, para interpretar correctamente
l
los resultados
lt d obtenidos
bt id con una tira
ti reactiva,
ti d b
debemos
tener en cuenta las condiciones Pre-analíticas y
Analíticas:
•Pre-Analíticas:
•Hay que tener en cuenta todas las posibles
interferencias o errores pre-analíticos que pudieran dar
lugar a falsos positivos o negativos.
•Analíticas:
•Se trata de una técnica cualitativa o semi-cuantitativa,
por lo que los resultados obtenidos solo nos darían
positivos o negativos, pero no valdrían para
cuantificar la cantidad de analito detectado.
ANALISIS DE ORINA COMPLETA.
• Pruebas realizadas con la orina:
•Las pruebas más utilizadas en el análisis de la orina son:
1. El estudio de eliminación “anormal” de analitos:
puede ser cualitativo o cuantitativo.
2 Análisis del sedimento urinario.
2. urinario
• Utilidad del análisis de orina
completo:
• Evaluación del estado renal y/o del
tracto urinario.
• Auxiliar para detectar enfermedades
metabólicas o sistémicas NO
relacionadas con problemas renales.
• Aspectos físicos y •Microscópico (sedimento):

químicos (analitos): ((Objetivo
j 40).
)
Color: amarillo ámbar Células epiteliales: 0 – 5 /cpo.
Olor: levemente aromático. Eritrocitos: 0 – 2/cpo.
A
Aspecto:
t transparente
t t claro.
l Leucocitos: 0 – 4/cpo.
4/cpo
pH: 4.5 – 8.0
Densidad:1005 –1030 mg/ml Cilindros: Hialinos 0 - 2/cpo.
Otros cilindros : ( - )
Proteínas: (-) Cristales: Frecuente (valor diagnóstico
Glucosa: (-) relativo).
Cuerpos cetónicos: (-) Bacterias: (-)
Bilirrr bina (-)
Bilirrrubina: () Levaduras (-) ()
Urobilinógeno: (-) Parásitos: (-)
Hemoglobina:(-)
Sangre: ((-)) CPO: células p
por campo
p observado
Nitritos (-)
Leucocitos : (-) Parámetros orina normal
SEDIMENTO URINARIO
 Está recomendado en casos de:
• Orinas turbias, o con color rojizo (hematuria).
• Sospecha de daño renal o tubular renal.
renal
• Sospecha de infección de orina (tira positiva en leucocitos y o sangre, positiva en nitritos,
alcalinizadas, etc).
• En algunos casos de orinas ácidas para identificar cristales (cristaluria), causantes de
urolitiasis renal.
 Procedimiento: se centrifuga a baja velocidad (para evitar hemolisis), la orina de 1ª hora de la

mañana, y se elimina el sobrenadante mirando el sedimento al microscopio (objetivo 40),
procediendo a identificar:
• Glóbulos rojos (Hematuria): sangrado dentro del tracto genitourinario: (Infección,
traumatismo, obstrucción, tumor).
• Glóbulos Blancos: Infección. Inflamación.
• Células epiteliales: descamación.
• Cilindros: su hallazgo es muy importante, ya que su presencia indica que esos materiales o
células estuvieron en los túbulos renales, adoptando la morfología cilíndrica típica del
hueco de los túbulos. Por lo tanto son indicativos de un posible daño del parénquima
renal (hialinos) o tubular (epiteliales).
• Bacterias y parásitos: localización visual de bacterias y parásitos
• Color: Dieta – Medicamentos – Enfermedades.
• Color: Dieta – Medicamentos – Enfermedades.
Orina marrón oscuro: puede ser Orina púrpura en bolsa de orina: infeccion
causada
d por alimentos,
li d l tracto urinario
del i i por algunos
l tipos
i d
de
medicamentos, bilirrubina o bacterias.
hematuria.
• Olor: Dieta – Medicamentos – Enfermedades
Olor a fruta fresca ó a acetona con cetonuria: posible
acidosis metabólica (cetoacidosis),
(cetoacidosis) producida por ayuno
prolongado o diabetes mellitus no controlada.
Hedor hepático:(olor a rancio en orina y aliento), posible
encefalopatía hepática.
Olor a alcohol: intoxicación alcohólica.
Olor amoniacal: puede deberse a infección bacteriana
(descomponedores de urea), cirrosis hepática y/o al ejercicio.
Olor a sulfuro de hidrógeno: posible infección bacteriana con
proteinuria (putrefacción de proteínas).
Otros: ciertos alimentos y medicamentos producen olores
típicos en orina.
 Turbidez : Cristales, células, grasas.
- Suele aconsejarse realizar estudio del sedimento
urinario.
i i
 Densidad:
• < 1005 mg/ml: Diabetes insípida

(secreción insuficiente de hormona
antidiurética (ADH) actualmente llamada
Arginina vasopresina (AVP)).
• >1035 mg/ml: Síndrome nefrótico o

deshidratación severa. Secreción
excesiva
i ded ADH (AVP).
(AVP)
 pH:
•Alcalino pH>7,5: Infecciones.
Alcalosis metabólica o
respiratoria. A veces puede
deberse al tipo de
Alimentación
Alimentación. Tendencia a
formar cálculos de carbonato
cálcico, fosfato cálcico, y
magnesio
fosfato de magnesio.
•Ácido pH<5: Acidosis
metábólica o respiratoria,
Cuerpos cetónicos (ayuno
prolongado o diabetes Mellitus).
Tendencia a producir cristales
de xantina, cistina, ácido úrico
y oxalato cálcico.
Glucosa: posible diabetes mellitus. Proteínas:
Síndrome de Cushing (exceso de
produción de cortisol).
cortisol) Fallo • LA PROTEINURIA: es uno de
tubular renal. los parámetros más importantes
Cuerpos cetónicos: posible medidos en orina, ya que
diabetes mellitus
mellit s o dieta severa.
se era permiten
it d t t
detectar f ll
fallos o
Post diarreas o vómitos severos. enfermedades renales, fallo
Bilirrubina: Problemas hepáticos glomerular, tubular, pre-renal.
(ictericia). etc.
Urobilinógeno: • Adicionalmente en algunos
-Mayoritariamente indica: daño casos indican otras afecciones:
hepático ó procesos mielomas, enfermedad
hemolíticos. reumática, diabetes,
-Minoritariamente
Minoritariamente indica: hipertensión, etc.
terapia antimicrobiana o • A veces pueden ser benignas
diarrea severa. (ortostáticas).
IMPORTANCIA DE LA PROTEINURIA.
DEFINICIÓN:
• La orina normal suele contener cantidades inferiores a 150 mg de
proteína/ orina 24 horas.
• De esa proteína excretada en orina, el 40% es albúmina, otro 40% sería

proteína de Tamm Horsfall ((T.H.),
p ), y el 20% restante serían Proteínas de
Bence Jones (cadenas ligeras de inmunoglobulinas).
• La albúmina y las proteínas de Bence Jones proceden del plasma

sanguíneo.
•La proteína Tamm Horsfall es una proteína de alto peso molecular

sintetizada por el propio riñón ó y que parece tener efectos
f beneficiosos
f
en el balance hidro/electrolito, mantener estéril la orina, evitar la formación
de cálculos.
Corpúsculo
Filtración del glomérulo renal. de Malpighi
• Las paredes de los capilares de los
glomérulos de ambos riñones filtran
aproximadamente 180 litros de
sangre all día,
dí produciéndose
d ié d entre
t
1,5 y 2 litros de orina/día.
• Moléculas de tamaño superior p a
70 Kd o con cargas negativas
(albumina), no pasan en
condiciones normales: Son
eficientes para evitar el paso de
proteínas de la sangre a la
cápsula de Bowman.
Bowman
Reabsorción en los túbulos
renales.
• En condiciones normales solo una
pequeña cantidad de la fracción de
albúmina y p proteínas de p peso
molecular bajo llegan a los túbulos y
aparecen en la orina ya que existen
mecanismos de reabsorción de
proteínas por endocitosis en las
células epiteliales de los túbulos
proximales el sistema
megalina/cubilina.
• Este mecanismo también reabsorbe
vitaminas
it i li
liposolubles
l bl D y A,
A y otras
t
hidrosolubles como la B12.
CAUSAS DE LA PROTEINURIA.
1. Exceso de proteínas que llegan a los riñones: los
linfocitos B producen un exceso de cadenas ligeras
de inmunoglobulinas que al no poder unirse a las
cadenas pesadas llegan en exceso a los riñones
(proteínas de Bence Jones). Estas superan la
capacidad de filtración glomerular y son nefrotóxicas.
Caso de la enfermedad del mieloma múltiple.
2. Afección glomerular: por enfermedad renal o

sistémica. El glomérulo deja pasar proteínas de > 70
Kda. Esto satura los receptores tubulares y acaba
dañando el túbulo.
túbulo
3. Afección tubular: efecto de analgésicos, plomo, etc.

Se caracteriza por la eliminación de proteínas de bajo
peso molecular.
molecular
4. Secreción tubular: es normal y contiene

fundamentalmente pequeñas cantidades de proteína
de Tamm Horsfall.
Horsfall En este caso,
caso la falta de síntesis de
esta proteína puede incrementar el riesgo de sufrir
cálculos renales.
TIPOS DE PROTEINURIA.
1. Transitoria: aparece en un momento determinado y no vuelve a aparecer
(requiere hacer un seguimiento preventivo), suele ser causada por una infección o
por un exceso de ejercicio
j ) Son proteinurias
((deterioro de fibra muscular).
normalmente benignas.
2. Ortostática: aparece en niños mayores, adolescentes y jóvenes nenores de 30

años, detectándose en orina espontanea cuando el individuo está en pie durante
el día pero NO en la orina de primera hora de la mañana (diagnóstico diferencial). Es
benigna.
3
3. horas) indicativo de enfermedad renal o
Persistente: hasta 1 g/día (orina de 24 horas),
sistémica (reumática, lupus, diabetes mellitus tipo II).
4. De origen nefrótico: >3,5 g/día (orina de 24 horas), se pierde albúmina

principalmente Las nefronas no filtran bien (Sdr.
principalmente. (Sdr nefrótico).
nefrótico)
5. Proteinuria de Bence-Jones: >3,5 g/día (orina de 24 horas), no debe confundirse

con la nefrótica ya que en este caso no se pierde albúmina sino proteínas de Bence-
Jones debido a una sobreproducción de las mismas (Mieloma).
IDENTIFICACIÓN y CUANTIFICACIÓN DE PROTEINURIAS
Paso 1: Tira reactiva para identificar cualitativamente un positivo en proteinuria
TIRA REACTIVA URINARIA POSITIVA PARA PROTEINURIA
•En función del contenido en

albúmina daría los siguientes
rangos:
g
Negativo ((0-10 mg/dl).
g )
Trazas (10-20 mg/dl.
 + (30 mg/dl).
 ++ (100 mg// dl).
dl)
+++ (300 mg/dl).
++++ (1000 mg/dl).
mg/dl)
Las tiras p
pueden dar falsos p
positivos en p
proteinuria si…
1.La tira es sumergida en la orina durante CUIDADO!
un tiempop p prolongado
g ((> 1 minuto).
)
2. Son orinas concentradas por
deshidratación.
3 Son
3. orinas con hematuria o
leucocituria.
4. Existen infecciones urinarias.
5 Si son orinas muy alcalinas (pH > 8).
5. 8)
6. El paciente está consumiendo
tolbutamida, sulfonamidas o penicilina.
L orina
7 La
7. i contiene
ti moco, secreciones
i
vaginales o espermatozoides.
O falsos NEGATIVOS en p
proteinuria si…
1.Las proteínas excretadas son CUIDADO!
inmunoglobulinas o proteína de
Bence-Jones (no detectables por la
tira).
) Ya q que solo detectan
albúmina.
2. Son orinas diluidas o alcalinas.
•Cuando la proteinuria es mayor de
un g
gramo en 24 horas, raras veces
ocurre un resultado falso negativo.
Paso 2: Si la “tira reactiva” resulta persistentemente positiva (2
pruebas consecutivas), la proteinuria debe ser cuantificada.
• La medición estándar es la cuantificación de proteínas en orina

recolectada durante 24 horas ((límite máximo 150 mg/día).
g )
• Para evitar errores en la recolección de orina, puede usarse la relación
proteína/creatinina urinaria en las mismas unidades (mg/dl por
ejemplo) medidas en muestra aislada. El valor normal es <0.2 (*).
El valor de esta razón se correlaciona bien con la cuantificación de
proteinuria en 24 horas.
(*) Esta razón puede subestimar la proteinuria en pacientes musculosos

(alta producción de creatinina) o sobreestimarla en pacientes delgados y
de edad avanzada.
Paso 2: Si la “tira reactiva” resulta persistentemente positiva (2
pruebas consecutivas), la proteinuria debe ser cuantificada.

> 150 mg. en 24
Cuantificacion < 150 mg. en 24
horas
Proteína en Orina horas
ó
de 24 h ó
Relación > 0.2
y/o Relación < 0.2
relación
Evaluación Proteína/creatinina
diagnóstica por Reevaluar en
médico de Evaluación próximo control
atención
t ió Nefrológica por de salud
primaria especialista
A. Prueba de cabecera: realizar la prueba de tira reactiva en el bote de orina
de 24 horas .
1) Sumergir la tira en la orina durante 1 minuto (no exceder este tiempo ).
• Comparar la tira con el patrón colorimétrico del kit.
• Si el indicador de proteína vira de amarillo ((negativo)
g ) a verde ((positivo),
) se
considera posible positivo en proteinuria: en este caso proceder con el
protocolo de cuantificación descrito en el guión de prácticas.
B. PROTOCOLO DE DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE PROTEÍNA EN
ORINA:
1. Preparar los stocks para la serie I: a partir de un Stock de Albúmina a
4g/L (Patrón no diluido o N-D) debemos preparar 4 diluciones de la
misma: 1:4 ; 2:3; 3:2 y 4:1.
4:1
ORINA:
2. Stocks para la serie II: a partir de las 4 diluciones de la serie I y del
Stock de Albumina (N-D), obtendremos otras 5 diluciones más: 1:4
(1/2); 2:3 (1/2); 3:2 (1/2); 4:1 (1/2) y N-D
N D (1/2).
(1/2)
ORINA:
3. Estandares: a partir de los estándares no diluidos St-1 y St-2 que se
emplearán para calibrar la determinación colorimétrica (tabla I),
prepararemos los estandares diluidos (1/2): St-1(1/2)
St 1(1/2) y St-2(1/2),
St 2(1/2) que
se emplearán para calibrar la determinación turbidimétrica (tabla II).
ORINA:
4. Orina problema: a partir de 3 ml de orina problema que se empleará
para ser determinada colorimétricamente por duplicado (Pr-1 y Pr-
1bis)(tabla I),
I) prepararemos las muestras de orina problema diluida
(1/2): Pr-1(1/2) y Pr-1bis(1/2), para ser determinadas mediante
turbidimetría (tabla II).
ORINA:
ORINA:
5) Rotular 2 series adicionales de 10 tubos cada una tal y como indica las
tablas I y II.
ORINA:
6) Adicionar a los tubos correspondientes de la TABLA I 50 µl de los
stocks de la serie I, 50 µl de los estandares 1 y 2 (St-1 y St-2) y 50 µl
de la orina problema (Pr-1
(Pr 1 y Pr-1bis)
Pr 1bis) tal y como indica la tabla
ORINA:
7) Adicionar a los tubos correspondientes de la TABLA II 1 ml de los
stocks diluidos (1/2) de la serie II, 1 ml de los estandares diluidos
(1/2) (St-1
(St 1 (1/2) y St-2
St 2 (1/2)) y 1ml de la orina problema diluida (1/2)
(Pr-1 (1/2) y Pr-1bis (1/2)) tal y como indica la tabla.
ORINA:
ORINA:
8) Adicionar el Reactivo PR-Mo a los tubos de la TABLA I: adicionar a cada
tubo de la TABLA I 3 ml de reactivo de Pirogalol Rojo (PR-Mo), mezclar con
ayuda del agitador orbital (vortex) y incubar 20 minutos a T
Tª ambiente.
ambiente Ajustar
blanco (0), y medir Abs. A 600 nm.
ORINA:
9) Adicionar el Reactivo TCA a los tubos de la TABLA II: adicionar a cada
tubo de la TABLA II 4 ml de reactivo Tricloroacético (TCA), mezclar MUY
FUERTEMENTE con ayuda del agitador orbital (vortex) y incubar 10 minutos a
Tª ambiente. Adicionar 3 ml más de agua a cada tubo, tapar con parafilm y
agitar muy fuertemente POR INVERSIÓN. Ajustar blanco (0), y medir Abs. A 420
nm.
ORINA:
10) Calculamos la concentración albúmina de cada dilución de la serie I:
V1 * [ ] 1 = V2 * [ ] 2
Stock inicial (N-D) = 4gr/L

Cálculos Dilución 1:4 Cálculos Dilución 2:3
1ml * 4 gr/L = 5 ml * X gr/L 2ml * 4 gr/L = 5 ml * X gr/L
X = 1ml * 4gr/L / 5 ml = 0,8 gr/L X = 2ml * 4gr/L / 5 ml = 1,6 gr/L
Cálculos
Cál l Dil
Dilución
ió 3:2
32 Cálculos
Cál l Dil
Dilución
ió 4:1
41
3ml * 4 gr/L = 5 ml * X gr/L 4ml * 4 gr/L = 5 ml * X gr/L
X = 2ml * 4gr/L / 5 ml = 2,4 gr/L X = 4ml * 4gr/L / 5 ml = 3,2 gr/L
ORINA:
11) Calculamos la concentración albúmina de cada dilución de la serie II:
V1 * [ ] 1 = V2 * [ ] 2
(N-D) diluida (1/2) = 4gr/L / 2 = 2 gr/L

Cálculos Dilución 1:4 ((1/2)) Cálculos Dilución 2:3 ((1/2))
[ ] = 0,8 gr/L / 2 = 0,4 gr/L [ ] = 1,6 gr/L / 2 = 0,8 gr/L
Cálculos
Cál l DilDilución
ió 33:2
2 (1/2) Cálculos
Cál l DilDilución
ió 44:1
1 (1/2)
[ ] = 2,4 gr/L / 2 = 1,2 gr/L [ ] = 3,2 gr/L / 2 = 1,6 gr/L
ORINA:
12) Representamos la Concentración (gr/L) de albúmina frente a la
absorbancia tanto para la serie I como para la serie II. Para ello
utilizaremos una aplicación EXCELL para realizar la regresión lineal
y calcular el coeficiente de regresión lineal R2. Es decir, el grado de
cumplimiento de la Ley de Lambert
C
Cumplimiento
li i t ded la
l ley
l ded lambert
l b t E
Ecuación:
ió y = m*x* +b
1,2
1 R2 aceptable > 0,9
Absorbanccia
08
0,8 LINEALIDAD
0,6 Ley de Lambert-Beer
0,4 Abs =  * D * [ ]
0,2 Abs = Cte * [ ]
0 Ecuación de una Recta
0 1 2 3 4 5 Y= m *X
[Proteína] gr/L
ORINA:
13) Sobre la propia Recta podemos observar la posición en que
quedarían los estandares (St-1 y St-2 para la colorimetría ó St-1(1/2) y
St 2(1/2) para la turbidimetría),
St-2(1/2) turbidimetría) que utilizaremos como control de
calidad interno de nuestra recta de calibrado.
CALIBRACIÓN E
Ecuación:
ió y = m*x
* +b
1,2
Absorbanccia
08
0,8
0,6 Los estándares deben
coincidir con de la recta
0,4
de calibrado.
calibrado Si no es
0,2 así existirá un error de
0 la calibración que
0 1 2 3 4 5 deberá corregirse
[Proteína] gr/L
ORINA:
13) Finalmente sobre la ecuación de la recta ya comprobada
extrapolaremos la media aritmética de los datos de absorbancia de
los tubos problema duplicados (Pr-1
(Pr 1 y Pr-1bis
Pr 1bis (colorimetría) y (Pr-1
(Pr 1
(1/2) y Pr-1bis (1/2) turbidimetría), calculando la concentración de
proteína en la orina problema.
EXTRAPOLACIÓN → [Proteina]
[P t i ]orina E
Ecuación:
ió y = m*x* +b
1,2
Absorbanccia
08
0,8 L comparación
La ió ded los
l
0,6 resultados entre ambas
0,4 series nos permitirá
poder conocer la
0,2
precisión y exactitud
0 de cada una de las dos
0 1 2 3 4 5 técnicas
[Proteína] gr/L
• Para que las pruebas analíticas resulten útiles para el médico, deben
ser precisas,
i exactas,
t sensibles
ibl y específicas.
ífi
Preciso: cuando los valores de distintos ensayos de la misma muestra se

agrupan cerca de un mismo valor promedio.
Exacto: cuando los valores de distintos ensayos de la misma muestra son
precisos y además se aproximan
p p al valor real.
Sensible: cuando el método puede detectar concentraciones bajas de un
analito.
E
Específico:
ífi d no sufre
cuando f lal interferencia
i t f i de
d otras
t sustancias.
t i
• Además el método debe ser preferiblemente barato, sencillo y rápido.
• Calibración y sensibilidad de una prueba: existen varios juegos de muestras
estándares para calibrar los aparatos dependiendo del rango de concentración
de la muestra a analizar.
• Calibración y
sensibilidad de
una prueba:
• En los casos que
ell estándar
tá d d
de
calibración cero
(muestra estándar
sin la sustancia a
analizar), tenga un
valor de
absorbancia
superior al del
blanco habitual
del aparato,
aparato se
optará por usar
como blanco el
estándar
está da de
calibración cero.
• Calibración y sensibilidad de
una prueba:
Las rectas de calibración
•Las
deben tener un rango de
linealidad razonable
(coeficiente de regresión
lineal: R2 > 0,95), y la medición
de absorbancia debe realizarse
en el rangog de concentración
intermedia de dicha
calibración.
•Los valores muy bajos serían

dependientes de la
sensibilidad de la prueba.
prueba
• Calibración y
sensibilidad de una
prueba:
•Los valores muy altos
podrían
dí perder
d l
la
linealidad (cumplimiento
de la ley de Lambert-
Beer)
Beer), siendo
recomendable diluir las
muestras
•Se deben evitar las
concentraciones altas
de analitos, siendo
preferible usar
diluciones diluidas ya
que en ellas se cumple
mejor
ejo la
a Ley
ey de
Lambert-Beer.
Diferencia entre Absorbancia y Dispersión de Luz

Sempract3Análisis de Orina

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Dr.

• Contiene todas las sustancias que

• NO SUELE CONTENER UNA

• Ciclo menstrual de la mujer,

•En caso de urgencia o hipertensión

•En el caso de niños se

•FRASCOS con CONSERVANTES.

•Presencia de sustancias FOTOLABILES en orina.

•Para evitar errores la orina debe

TIPOS DE PRUEBAS PEDIDAS

La correcta conservación de las tiras es muy importante

Mantener las tiras en un rango de temperaturas entre 2ºC

Observar siempre que el desecante esté dentro y seco.

Vigilar la fecha de caducidad.

• Aspectos físicos y •Microscópico (sedimento):

 Procedimiento: se centrifuga a baja velocidad (para evitar hemolisis), la orina de 1ª hora de la

• < 1005 mg/ml: Diabetes insípida

• >1035 mg/ml: Síndrome nefrótico o

• De esa proteína excretada en orina, el 40% es albúmina, otro 40% sería

• La albúmina y las proteínas de Bence Jones proceden del plasma

•La proteína Tamm Horsfall es una proteína de alto peso molecular

2. Afección glomerular: por enfermedad renal o

3. Afección tubular: efecto de analgésicos, plomo, etc.

4. Secreción tubular: es normal y contiene

2. Ortostática: aparece en niños mayores, adolescentes y jóvenes nenores de 30

4. De origen nefrótico: >3,5 g/día (orina de 24 horas), se pierde albúmina

5. Proteinuria de Bence-Jones: >3,5 g/día (orina de 24 horas), no debe confundirse

•En función del contenido en

1.Las proteínas excretadas son CUIDADO!

• La medición estándar es la cuantificación de proteínas en orina

(*) Esta razón puede subestimar la proteinuria en pacientes musculosos

TIRA REACTIVA URINARIA POSITIVA PARA PROTEINURIA

Stock inicial (N-D) = 4gr/L

(N-D) diluida (1/2) = 4gr/L / 2 = 2 gr/L

Preciso: cuando los valores de distintos ensayos de la misma muestra se

•Los valores muy bajos serían

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