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Capitulo 38: Normas generales para

tratamiento de muestras biológicas


• Alejandro Ojeda Maroto
o Correo: alejandro_ojeda_maroto@hotmail.com
o Titulación académica: Diplomado en Enfermería
o Centro de Trabajo: Unidad de Urgencias. Hospital
Torrecárdenas. Almería. España
• Miguel Sanz Martínez
o Correo: willytrauma@hotmail.com
o Titulación académica: Diplomado en Enfermería
o Centro de Trabajo: Unidad de Urgencias. Hospital
Torrecárdenas. Almería. España
Resumen:
El análisis clínico de las muestras biológicas en las unidades
de cuidados intensivos pediátricos y neonatales es una
herramienta fundamental en el diagnóstico y tratamiento de
los niños enfermos. Estudiaremos las muestras biológicas
más solicitadas en el ámbito hospitalario: sangre, orina,
heces, LCR y esputo.
Tan importante como su obtención es su manipulación,
transporte y procesamiento en laboratorio. Existen unas
normas que facilitan el procedimiento.
Normas generales para tratamiento de
muestras biológicas
INTRODUCCIÓN
La calidad de los resultados de los análisis clínicos de
muestras biológicas de pacientes en unidad de cuidados
intensivos pediátricos y neonatales comienza con la solicitud
del facultativo y una correcta obtención de la muestra. Igual
de importante es su manipulación, conservación, transporte y
procesado. Una buena metodología de trabajo por parte del
personal de enfermería y el resto del equipo asegura la
fiabilidad de los datos obtenidos reduciendo al mínimo errores
que conllevan el rechazo de las muestras, repetición de los
análisis y un perjuicio para el paciente disminuyendo la
calidad del servicio, aumentando la exposición del profesional
y el gasto económico.

DEFINICIÓN
Una vez obtenida la muestra, normas para la correcta
manipulación, conservación y transporte para un correcto
procesamiento en laboratorio.
OBJETIVO
Tratamiento adecuado de las muestras biológicas para
obtener un resultado fiable y de calidad de cara a la
continuidad de los cuidados.

NORMAS GENERALES PARA EL TRATAMIENTO DE


MUESTRAS DE SANGRE
Introducción
En la práctica clínica la sangre es la muestra biológica más
solicitada para el análisis por la gran cantidad de información
que ofrece sobre la enfermedad. Se estudia de diversos
métodos y distintos objetivos.

PRUEBAS PARA ESTUDIO HEMATOLÓGICO Y


BIOQUÍMICO
Introducción
Las pruebas más frecuentes que se solicitan para el estudio
hematológico son:
• Hemograma o hematimetría: donde se van a cuantificar
los diferentes grupos celulares de la sangre (hematíes,
leucocitos y plaquetas) otros parámetros relacionados
con su cantidad, forma y contenido (hemoglobina,
hematocrito, volumen corpuscular medio)
• Estudio de Coagulación: que consta, además de otros
parámetros, de tiempo de protrombina (T.P.) que mide la
integridad de la vía extrínseca del sistema de
coagulación sanguínea y el tiempo de tromboplastina
activada (APTT) que mide la vía intrínseca.
• Velocidad de sedimentación globular (VSG) de la 1ª y 2ª
hora: Se mide para detectar procesos inflamatorios o
infecciosos.
El estudio bioquímico de la sangre determina como están
las substancias concentradas en la parte líquida de la sangre
(suero)

Material
La sangre debe ser recolectada en tubos de vidrio o
plástico, preferiblemente cristal siliconado y barosilicatado
irrompible, con sistema de vacío, estériles y herméticos.
En otro tipo de estudios se utilizan láminas portaobjetos de
vidrio o plástico comercial (extensiones para formula y
recuento leucocitario, parásitos en sangre, biopsia de la
medula ósea).
Es importante conocer si el bote debe llevar anticoagulante
en polvo o líquido y seleccionar el apropiado para el estudio
que se quiere realizar.
Los más utilizados son:
• EDTA (ETILENDIAMINO TETRACETATO)
Anticoagulante líquido utilizado principalmente en el
estudio de recuento de células.
• CITRATO DE SODIO
Anticoagulante líquido, generalmente se utiliza en
estudios de coagulación.
• HEPARINA
Su presentación puede incluir concentraciones de sodio
y litio. Normalmente la heparina con litio es utilizada
para estudios bioquímicos y la sódica en recuento
celular.
• OXALATO
Anticoagulante en polvo utilizado sobre todo en
determinación de alcoholemia, estudios del metabolismo
de la glucosa.
Existen códigos de colores estandarizados para las
diferentes presentaciones comerciales de los tubos.
• TAPÓN ROJO CAPACIDAD 9 cc
Tubo seco sin anticoagulante, se obtiene suero tras
retracción del coágulo. Se utiliza para pruebas cruzadas
en banco de sangre.

• TAPÓN ROJO, MARRÓN, AMARILLO, CAPACIDAD 3,5 cc, 5


cc. TAPÓN AMARILLO MICROMETODO CAPACACIDAD 500
microlambdas.
Tubo con gelosa, se centrifuga y se separa el suero de
las células. Se utiliza para análisis bioquímico de la
sangre.
• TAPÓN VIOLETA: CAPACIDAD 2 cc, 2,5 cc, 3cc. TAPÓN
VIOLETA MICROMÉTODO CAPACIDAD 250, 500
microlambdas.
Con anticoagulante EDTA. Se utiliza para hemograma.

• TAPÓN VERDE O BLANCO


Capacidad hasta 4 cc con anticoagulante heparina
sódica. Se utiliza para cariotipo.

• TAPÓN NEGRO
Capacidad 1 +/- 0,2 ml con anticoagulante citrato, tubo
de dos elementos utilizado para VSG.
No confundir con el modelo de tapón negro para pruebas de
alcoholemia, capacidad 4 ml y con anticoagulante oxalato
potásico y fluoruro sódico.

• TAPÓN AZUL
Capacidad 1.8 cc, 2.5 cc, 4 cc con anticoagulante citrato
de sodio 3.8% se utiliza para estudio de coagulación.

Normas generales
La no consecución de estas normas conlleva el rechazo de
la muestra o la no realización de una o varias
determinaciones.
• La muestra debe ir debidamente identificada con una
etiqueta o escrita a mano y acompañada de una petición
escrita por el facultativo. Se rechaza si carece de
identificación o esta es errónea, también si no es
remitida o llega sin volante al laboratorio.
• El tubo debe estar íntegro, sin fracturas o grietas, sin
defectos, con vacío, dentro del periodo que indica la
fecha de caducidad, con la cantidad adecuada de aditivo
o anticoagulante.
• El tubo debe ser el indicado para el tipo de análisis con
el aditivo o anticoagulante adecuado. Por ejemplo un
hemograma no se puede solicitar en un tubo con gelosa,
no tiene anticoagulante.
• Volumen adecuado de sangre en el tubo. El volumen
total extraído debe ser suficiente para realizar el análisis
en su totalidad. Para determinar un mayor número de
parámetros bioquímicos se requiere más cantidad de
sangre. En extracciones pediátricas se utilizan
microtubos y los analizadores permiten realizar múltiples
determinaciones con volúmenes pequeños de sangre. La
muestra insuficiente debe ser rechazada, pero también
si se introduce más cantidad de la adecuada, como
ocurre en los tubos de estudio de coagulación o
hemograma si no se respeta la proporción sangre –
anticoagulante
• La sangre debe mezclarse inmediatamente con el
anticoagulante una vez que ha entrado en el tubo.
Invertir suavemente varias veces o colocarlo en rotores
para obtener muestras homogéneas, nunca agitar
enérgicamente.
• Cumplir las condiciones de preparación del paciente ya
que la ingesta de alimentos altera numerosos
parámetros como la concentración de glucosa, colesterol
o ácido úrico. Hay estudios que requieren guardar
ayuno. En el caso de los niños el tiempo de ayuno se
relaciona con el peso y la talla y no debe prolongarse
demasiado. A veces la muestra de ser obtenida en un
intervalo de tiempo preciso debido a que el paciente
toma alguna medicación que altera el análisis o hay
alguna variación biológica que queremos evitar.
• Evitar la contaminación de las muestras.
Las muestras contaminadas están hemodiluidas o
presentan substancias que pueden alterar los valores del
análisis.
Esto puede ocurrir en diversas situaciones:
o Pacientes sometidos a procedimientos terapéuticos
o diagnósticos antes de realizar la extracción. P. Ej.
Contrastes, quimioterapia, isótopos radiactivos.
o Pacientes portadores de catéteres periféricos y que
reciben una solución IV y en los que se ha realizado
una extracción en el mismo brazo por encima del
catéter sin interrumpir la administración y sin
esperar al menos dos minutos. O cuando se extrae
del mismo catéter sin desechar sangre suficiente
para lavar la vía. También ocurre con las vías
centrales y en reservorios heparinizados. Por ello
los estudios de coagulación no deben extraerse del
catéter, porque incluso cantidades mínimas de
heparina pueden alterar resultados. Lo ideal es que
se extraigan individualmente mejor que como una
parte de la extracción para varias muestras.
o En general y sobre todo con las muestras obtenidas
por punción capilar tener en cuenta si se ha
utilizado povidona yodada, porque si la sangre está
contaminada pueden encontrarse niveles falsos
elevados de potasio, fósforo y ácido úrico.
o Puede existir una contaminación progresiva de la
muestra de un tubo a otro cuando no se respeta el
orden de llenado:
 Tubos o envases estériles para estudio
bacteriológico (Hemocultivos) si los hubiere.
 Tubos sin aditivos para análisis del suero.
 Tubos con citrato para pruebas de
coagulación.
 Tubos con citrato para VSG.
 Tubos con EDTA.
 Resto de los tubos
• Transporte adecuado de la muestra.
El tiempo excesivo o la temperatura inadecuada de la
muestra hacen que se deteriore y sea rechazada o
aporte datos erróneos.
Hay determinaciones que han de enviarse de forma
inmediata para su análisis o conservación en el
laboratorio hasta que este se realice, por ejemplo el
amonio o las catecolaminas.
Otras necesitan refrigerarse inmediatamente después de
la extracción, por ejemplo la gastrina o actividad de
renina.
A veces es necesaria la congelación de la muestra como
en la determinación de ACTH (hormona
adenocorticotropa).
Hay análisis como los de las crioglobulinas o el de ácido
láctico donde la muestra necesita una temperatura de
37º y un transporte rápido al laboratorio.
Con la correcta conservación y rápido transporte de la
muestra se evita formación de amoniaco, glicólisis,
degradación de las proteínas, alteración de las
substancias por la luz y otros procesos que alteran los
resultados.
Hay otros factores relacionados con el rechazo de la
muestra que aun siendo evitables dependen mas de la
técnica del profesional y de la propia muestra que de los
protocolos.
• Muestra hemolizada.
La hemólisis es la ruptura de los hematíes que libera
hemoglobina y otras substancias en el plasma y este
adquiere un color entre rosa y rojo. Esto afecta a varias
determinaciones por el aumento en el suero de la
sustancia a medir por ejemplo sodio o potasio o también
por interferencia óptica o química durante la fase
analítica.
Hay varias causas:
o Relacionadas con la extracción sanguínea:
 Aguja demasiado fina, hay que elegir calibre
22G,20G.
 Se aspira demasiado fuerte durante la
extracción. Desplazar el embolo suavemente.
 Se fuerza el paso de la sangre al tubo a través
de la aguja. Es mejor quitar el tapón y dejar
resbalar la sangre por las paredes del tubo.
 Evitar venas muy pinchadas para no extraer
sangre de un hematoma.
o Relacionadas con la manipulación en el laboratorio.
La muestra debe centrifugarse antes de que este
completamente coagulada si el bote no contiene
anticoagulante, como el tubo con gelosa. Hay que
centrifugar las muestras a las revoluciones
adecuadas y en aparatos bien calibrados.
o Relacionados con el paciente:
Reacción antígeno anticuerpo, reacción
postransfusional, anemia hemolítica, enfermedades
hepáticas.
• Muestra coagulada.
Debido a una extracción difícil de larga duración, por no
mezclar la sangre en los tubos adecuadamente o por las
características del paciente.
• Muestra con ictericia.
La presencia de bilirrubina en la sangre puede alterar
algunas determinaciones pero no se considera error
dado que no esta relacionado con la extracción o el
tratamiento de la muestra.
• Muestra lipemica .
Son las que tienen alto contenido en grasa y aspecto
lechoso y se pueden presentar en pacientes que no han
guardado el ayuno recomendado y con una ingesta
copiosa de alimentos. También en muestras
contaminadas de pacientes sometidos a nutrición
parenteral.
HEMOCULTIVOS
Introducción
El cultivo de sangre es el estudio microbiológico más
importante y utilizado para la determinación del agente
etiológico de algunas patologías.
En las bacteriemias intermitentes el momento idóneo para
la obtención de la muestra es lo mas cerca posible del pico
febril y después de aparecer los síntomas como escalofríos.
Siempre que sea posible obtener la muestra antes de
instaurar el tratamiento antibiótico.
En caso de bacteriemias resistentes al tratamiento como la
endocarditis cualquier momento es adecuado para tomar la
muestra.

Material
Los frascos disponibles para Hemocultivos en el servicio de
microbiología son:
• Pareja de frascos de uso habitual en adultos y niños
grandes. Frasco aerobio volumen del inoculo 5 a 10 cc
tapón azul. Frasco anaerobio volumen del inoculo 5 a 10
cc tapón rojo.

• Frasco único pediátrico volumen del inoculo 1 a 4 cc


tapón amarillo. A veces en niños pequeños neonatos,
prematuros y lactantes es suficiente con 0.5 cc.

Normas generales
• El numero de muestras de sangre depende del cuadro
clínico. En general se considera idóneo la obtención de
tres hemocultivos seriados aerobio y anaerobio con un
intervalo de 30 minutos entre las extracciones.
• El volumen de sangre a cultivar y el intervalo entre
tomas son un factor importante en la determinación de
microorganismos pero a veces estos serán menores por
las características del paciente porque urge instaurar
tratamiento antibiótico.
Inocularemos el volumen recomendado por el fabricante
en cada tipo de frasco.
• Mantener asepsia estricta durante todo el proceso para
que los resultados sean fiables, obteniendo cada
muestra de lugares de venopunción diferentes
implicando a otro profesional sanitario si es necesario
para que la técnica sea lo más estéril posible.
• No extraer muestras de Hemocultivos de catéteres
intravenosos permanentes colocados con anterioridad
mas de 48 horas pues existen muchas posibilidades de
estén colonizados por bacterias y contaminan la
muestra.
Se puede obtener la muestra si la extracción coincide
con la inserción del catéter con técnica aséptica.
• Si se obtiene la muestra con jeringa transferir la sangre
a los frascos con la misma aguja de la venopunción.
Diferentes estudios demuestran que el cambio de aguja
no disminuye la contaminación de la muestra y aumenta
el riesgo de pinchazo accidental.
• También podemos utilizar el sistema de recogida directa
por vacío de doble aguja que nos permite la introducción
de la sangre directamente en los frascos y al no existir
manipulación disminuye el riesgo de contaminación.
• Examine los frascos de hemocultivo antes de usarlos por
si presentan indicios de deterioro. Deseche aquel frasco
en el que se observe turbidez, decoloración, fugas, tapón
hinchado o hundido y en general cualquier alteración
que nos haga sospechar de su buen estado.
• Desinfecte el tapón de caucho del bote de hemocultivo
con antiséptico povidona yodada, dilución de
clorhexidina o alcohol 70º y esperar a que se evapore
para evitar la entrada en interior del frasco. No es
necesario tapar los frascos con gasas y antiséptico pues
quedan sellados tras la extracción de la aguja.
• Llenar los frascos suavemente haciendo resbalar la
sangre para que no se produzca hemólisis pero sin
demora para evitar que se coagule.
• Introducir la sangre atravesando el tapón con la aguja en
posición vertical primero el bote anaerobio y después el
aerobio, de forma que las burbujas de aire queden junto
al embolo evitando así su paso al frasco.
• Remita la muestra al laboratorio de microbiología
acompañada de un volante debidamente cumplimentado
por el facultativo con el nombre del paciente, servicio,
fecha y hora de la extracción, numero de orden de la
muestra 1ª, 2ª o 3ª y si el paciente ya esta sometido a
terapia antimicrobiana haga constar tipo de antibiótico,
dosis y hora de la ultima administración.
• Identificar las muestras según protocolo rotulando los
frascos o con etiquetas adhesivas.
• Utilizar el espacio disponible para la identificación
evitando escribir sobre el código de barras o taparlo con
las etiquetas. Esto impide su lectura y retrasa el
procesamiento de la muestra. Además hay sistemas que
disponen de códigos de barras duplicados adhesivos que
se extraen de los frascos y se pegan en las peticiones
para relacionarlas y que no haya confusión.
• Enviar al laboratorio de microbiología lo antes posible
para su procesamiento y cada vez que se obtiene una
muestra.
Si no se pudiera enviar en ese momento o hubiera que
esperar las otras tomas seriadas proteger de la luz pues
la detección de microorganismos en algunos casos es
por fluorescencia y podría falsear los resultados. Las
muestras deben conservarse incubando en una estufa a
35-38ºC.
GASOMETRÍA ARTERIAL
Introducción
Este análisis tiene como objetivo medir los valores en
condiciones prefijadas de parámetros sanguíneos y gases
presentes en sangre arterial. Esto ayuda a los profesionales
sanitarios a valorar el estado respiratorio del paciente así
como el estado de los órganos reguladores del organismo
como los pulmones o los riñones y el equilibrio ácido-base.
Los parámetros que se miden normalmente son pH, presión
de O2, presión de CO2, concentración de ion bicarbonato,
saturación de O2 y exceso de bases.
El correcto tratamiento de la muestra y la consecución de
unos resultados fiables son de suma importancia ya que los
limites tolerados fisiológicamente son muy estrechos y
cualquier desviación debe ser corregida de inmediato con
oxigenoterapia o terapia intravenosa.
Material
El material de elección es el vidrio o cualquier estructura
similar que impide la difusión de gases a través de la jeringa.
En neonatos, prematuros, lactantes y niños muy pequeños
se utilizan mas los capilares de vidrio.
El anticoagulante mas utilizado es la heparina sódica ya
que el oxalato tiende a aumentar el pH y el citrato y EDTA
tienden a disminuirlo. Con una cantidad mínima de heparina
sódica se anticoagula proporcionalmente un mayor volumen
de sangre con un mínimo efecto sobre los resultados de la
gasometría, pero su exceso puede acidificar en gran medida
la muestra y aumentar el pH.
Este problema se corrige con jeringas de polímero plástico
con aguja 22G, capacidad para 3 cc de sangre y como
conservante 200 UI de heparina de litio en polvo. Estas
jeringas están disponibles en la mayoría de los servicios
hospitalarios y por ello las extracciones en jeringas de plástico
estándar deben ser desechadas ya que tienen que prepararse
con 0.1 cc de heparina sódica y esta operación es delicada. La
excesiva dilución y la difusión de gases a través de la jeringa
altera substancialmente los valores de la gasometría.

Normas generales
• Enviar la muestra correctamente identificada
acompañada de una petición rellenada por el facultativo
según el protocolo y especificando en que condiciones
se haya el paciente en el momento de la extracción:
basal, oxigenoterapia, ventilación mecánica, tipo y
concentración de O2 administrada.
• La presencia de burbujas de aire en la jeringa altera o
invalida los resultados siendo estas muestras
rechazadas por riesgo de avería del gasómetro. Si la
muestra recién extraída con jeringa contiene aire hay
que expulsarlo antes de 20 segundos y la jeringa debe
quedar herméticamente cerrada con un tapón
eliminando la aguja. Cuanto más pequeñas son las
burbujas mayor será la superficie de contacto con la
sangre y como consecuencia, más rápido varía la
presión de O2.
• Durante la extracción es importante dejar que el pulso
contribuya al llenado de la jeringa ya que de este modo
se reduce la presencia de aire.
• Para purgar la jeringa colóquela en posición vertical y
golpéela suavemente con el dedo empujando el embolo
expulsando el aire y un poco de sangre que puede
retirar con una gasa.
• Si la muestra se recoge con capilar heparinizado y
contiene aire, este y la heparina sobrante serán
desplazados al exterior por la sangre y después se
sellaran ambos extremos.
• Ha de admitirse el error incluso obviando el inherente al
analizador de gases ya que desde los primeros
momentos de la extracción el aumento de unos valores
y la disminución de otros es inevitable. A esto debemos
unir que en el medio hospitalario el transporte al
laboratorio se demora tanto como para desconfiar de los
resultados si las muestras no han sido conservadas a
temperatura optima y transportadas convenientemente.
Remita inmediatamente la muestra coordinando con el
laboratorio para que no coincida el envío con el
momento de la calibración.
• La muestra obtenida en jeringa debe ser enviada para su
análisis antes de 15 minutos después de su obtención si
va a permanecer a temperatura ambiente. A partir de
27º C los cambios en el pH son ostensibles. Si la muestra
se obtiene en capilar el traslado debe ser inmediato a
temperatura ambiente. Basta con sellar los extremos
con material tipo plastilina o llevarlo con guantes entre
los dedos índice y pulgar.
• Hay factores que se relacionan con el paciente que
pueden causar resultados erróneos en la medición de
gases.
o Si no registramos o tenemos en cuenta las
condiciones en que la muestra ha sido obtenida:
cuando el niño se acaba de despertar o esta
llorando, en cuyo caso hiperventila.
o Cuando el paciente hipoventila o esta mal
oxigenado porque ha dejado de recibir aporte de
O2 por accidente, inmediatamente después de la
aspiración de secreciones o durante el destete del
respirador.
o Cuando cambian las condiciones del paciente y
esto no se refleja en la petición: 20-30 minutos tras
el inicio de la oxigenoterapia o un cambio en la
concentración de O2 y tras un cambio de
parámetros de la ventilación asistida.
• En niños muy pequeños, neonatos, prematuros y
lactantes donde se obtiene una muestra de sangre
capilar del talón este debe calentarse para que se
arterialice la sangre. Es necesario tenerlo en cuenta
porque los valores de gasometría pueden diferir de las
muestras de sangre arterial de niños mayores.
NORMAS GENERALES DE TRATAMIENTO DE MUESTRAS
DE ORINA
Introducción
La orina es uno de los fluidos resultantes del metabolismo y
su análisis aporta mucha información de forma rápida y
económica. Su obtención es relativamente fácil, lo que hace
que sea una prueba fundamental al alcance de cualquier
servicio sanitario y está muy extendida.
El estudio de la orina es muy útil en el diagnóstico de la
enfermedad renal y del tracto urinario y en la detección de
enfermedades metabólicas o sistémicas no relacionadas
directamente con el sistema urinario.
Las muestras de orina se analizan de varias maneras y con
diversos objetivos:
Exámenes sistemáticos de sustancias anormales y de
sedimento, con tiras reactivas, urocultivos, triage de drogas
de abuso y medicamentos y análisis de orina 12-24 horas.
Además al ser una biopsia líquida de los tejidos del tracto
urinario nos aporta datos anatomopatológicos.

ANÁLISIS SISTEMÁTICO DE ORINA


Cuando obtenemos una muestra de orina primero
realizamos un examen macroscópico directo del color,
turbidez olor, que en algunos casos nos oriente sobre su
composición y alteración.
Esto se complementa con el análisis sistemático de orina,
sustancias anormales y sedimento de orina, que consiste en
la medición por métodos físicos y químicos de diferentes
parámetros para diagnosticar la presencia de infecciones
urinarias, enfermedades renales y otras enfermedades
generales que producen metabolitos en orina.
También para evaluar la función renal de las diferentes
hormonas y situación de la regulación homeostásica.
La orina normalmente está compuesta por urea, creatinina,
sodio, potasio y cloro. El estudio de anormales detecta su
exceso o no, y la presencia de otras como glucosa,
hemoglobina, bilirrubina, leucocitos, cetonas, nitritos,
proteínas y densidad alta de solutos que determinan diversas
alteraciones.
El estudio del sedimento de orina se hace al microscopio
una vez centrifugada. En la orina normal no deben aparecer
bacterias, cilindros, cristales, grasas, hematíes, leucocitos,
células epiteliales, células tubulares renales. El hallazgo de
estas substancias es patológico.

Material
• Envase de plástico irrompible, boca ancha, seco, limpio o
estéril, hermético con tapón de rosca, capacidad 50 cc o
tubos de boca estrecha capacidad 10 cc.

• Tiras reactivas para análisis de orina. Este método nos


permite un análisis de algunos componentes de la orina
rápido, sencillo y económico a veces previo a otros más
específicos. Consiste en unas tiras reactivas que se
sumergen en la orina y producen una reacción química
colorimétrica que describe la alteración de las diferentes
substancias. A veces es suficiente con unas gotas de
orina y es ideal cuando la muestra es escasa. Este
sistema tiene una fiabilidad del 99% a la hora de
rastrear hematíes, nitritos, aumento de la densidad, pH,
glucosa, proteínas, bilirrubina, hemoglobina y cuerpos
cetónicos. Los leucocitos se leen a los dos minutos de
iniciada la prueba.
Normas generales
• El recipiente de la muestra deberá ir debidamente
identificado y acompañado de la petición rellenada por
el facultativo.
• Las muestras deben estar libres de contaminación fecal
o de papel higiénico. Si hay posibilidad de contaminación
con secreción vaginal o menstruación puede ser
necesario taponar la vagina o posponer la prueba. La
contaminación por bacterias alcaliniza la orina y provoca
turbidez y cambios de color y olor. Tener en cuenta que
hay medicamentos como la rifampicina que modifican el
color y olor de la orina y esto no debe ser tomado como
anormal.
• El volumen de orina necesario depende del numero de
pruebas que se van a realizar en el laboratorio. En
general bastan 2 cc en niños pequeños pero es
recomendable obtener un volumen superior a 15 cc. Si el
volumen es inferior se puede hacer un examen con tiras
reactivas. Entre 3 y 10 cc ya se puede centrifugar para
estudiar el sedimento.
• En general una orina mas concentrada es preferible a
una mas diluida para el análisis, por tanto si el análisis
no es urgente la primera orina de la mañana es la mas
adecuada ya que el paciente no ha bebido agua durante
las horas del sueño.
• Si la orina se recoge por micción espontánea desechar el
primer chorro y recoger la orina intermedia. Para
recoger muestras de lactantes, neonatos, prematuros y
niños pequeños que no controlan sus esfínteres se
dispone de bolsas colectoras de orina con anillo
adhesivo que rodea los genitales. Si no se obtiene la
orina en 20-30 minutos, la bolsa se despega o se ensucia
hay que cambiarla.
• Si estos métodos son inútiles la muestra se obtendrá por
sondaje vesical continuo o intermitente. A veces se
utilizan técnicas mas agresivas como la aspiración
suprapúbica o cateterización ureteral.
• Si el exterior del recipiente se contamina limpiarlo para
evitar la transferencia de gérmenes a los demás.
• Realizar el análisis durante los 15 minutos posteriores a
la obtención de la muestra ya que los eritrocitos,
leucocitos y cilindros se descomponen cuando la
muestra permanece varias horas a temperatura
ambiente y varia la composición de la orina. Por ello las
muestras deben refrigerarse si no pueden estudiarse de
inmediato. Si se utilizan tiras reactivas es necesario que
la orina este a temperatura ambiente, nunca refrigerada.
• A veces es necesario no exponer la muestra a la luz
porque algunas substancias se alteran como la
bilirrubina que disminuye. Cubrir el bote con papel de
aluminio.
ORINA DE 24 HORAS PARA ANÁLISIS CUANTITATIVO
Introducción
La concentración de la orina varia en un periodo de 24
horas y por ello solutos como hormonas, células, proteínas y
electrolitos aparecen en mayor o menor cantidad en
determinadas horas del día dependiendo de la ingesta y
actividad del paciente entre otros factores.
La mejor manera de realizar un estudio fiable cuantitativo
de estas substancias es analizar muestras recogidas durante
12-24 horas como en el caso de patologías nefrológicas donde
es necesario conocer la función renal y establecer que
substancias se eliminan y como o en el estudio de la
formación de cálculos renales.

Material
Recipientes de plástico con capacidad suficiente 1000-2000
cc, limpios, estériles y secos, herméticos con tapón de rosca,
irrompibles, preferiblemente opacos. También podemos cubrir
con papel de aluminio si es preciso proteger la muestra de la
luz.
Normas generales
• En el periodo de recogida unas horas antes hay que
restringir la ingestión de líquidos y evitar la ingesta de
alcohol, ciertos alimentos y fármacos.
• Se indica al paciente que vacíe la vejiga a las 8 de la
mañana al levantarse y deseche esta primera orina.
Todas las demás muestras deben recogerse sin perder
ninguna incluso la eliminada a las 8 de la mañana del día
siguiente cuando termina la prueba.
• Cada cantidad de orina eliminada se recoge en un
recipiente pequeño limpio o estéril y se vacía en el
contenedor grande. A continuación se mezcla la orina
del contenedor con una varilla y se extrae una muestra
de unos 50 cc que se envía al laboratorio previamente
identificada y con un volante cumplimentado por el
facultativo según protocolo que indique además el total
de la orina recogida.
• En caso de orina perdida, extraída del contenedor o
desechada por error y cuando se olvida recolectar
parcial o totalmente alguna muestra debe ser registrado
y debemos plantearnos iniciar de nuevo el estudio sobre
todo en niños.
• El transporte al laboratorio será inmediato. Si no
disponemos de conservante se guardara el frasco en el
refrigerador hasta su traslado. Lo ideal es refrigerar a
4ºC en nevera todo el volumen de la muestra durante
todo el periodo de recogida. Esto impedirá la
descomposición bacteriana. La congelación es útil para
retrasar la perdida de substancias labiles o cuando se
quiera fraccionar la muestra para su estudio.
• Muchos protocolos necesitan que añadamos
conservantes químicos y agentes antibacterianos y
antimicóticos a los recipientes antes de comenzar la
recogida. El fin de estos es asegurar la integridad de la
muestra. Estas substancias disminuyen la oxidación y el
crecimiento bacteriano y evitan cambios en el pH
manteniéndolo ácido. Los mas utilizados son el ácido
bórico, benzoico, los fenoles, timol, tolueno, formol y
compuesto de mercurio.
• Hay determinaciones que requieren instrucciones
especiales para la recogida de orina de 24 horas, por
ejemplo el ácido 5-hidroxiindalacético donde no se
pueden comer aguacates, ciruelas, nueces y berenjenas,
no administrar jarabes para la tos que contengan
guayacolato de glicerino y paracetamol 24 horas antes
de la prueba y durante su obtención.
UROCULTIVO
Introducción
El cultivo de orina es un análisis para determinar si existe o
no infección de orina y en caso que exista identificar con
exactitud el germen responsable y cual es el antibiótico mas
adecuado. A veces la infección ya esta evidenciada por el
análisis de anormales con presencia de nitritos y de leucocitos
y presencia de bacterias en el sedimento y el cultivo nos sirve
de confirmación.
Consiste en sembrar la muestra de orina recogida con
técnica estéril en un medio de cultivo y esperar a que crezcan
las bacterias. No es una prueba inmediata y a veces hay que
esperar días incluso semanas como el cultivo de Lowestein
para el diagnostico de la tuberculosis.
Con un buen recuento de colonias se confirma el cultivo
positivo identificando exactamente el microorganismo y con
el antibiograma sabemos cual es el antibiótico al que no tiene
resistencias y va a eliminarlo.

Material
Envase de plástico irrompible, estéril, de boca ancha, seco,
hermético con tapón de rosca y capacidad 50 cc.

Normas generales
• Identificar la muestra correctamente según protocolo. Se
debe acompañar de un volante debidamente rellenado
por el facultativo.
• La muestra debe obtenerse antes de administrar
tratamiento antibiótico. Si ya se ha iniciado hacer
constar en la petición tipo, dosis y hora de la ultima
toma.
• Utilizar siempre que sea posible la primera micción de la
mañana porque las bacterias deben incubarse en la
vejiga al menos 3-4 horas antes de obtener un recuento
de colonias de calidad con significado diagnostico.
• Extremar la asepsia evitando la contaminación fecal,
vaginal, menstrual o partículas de papel higiénico.
• Evitar en lo posible que la muestra tenga contacto con
los genitales externos. Normalmente se encuentran
bacterias en la porción distal de la uretra y el perineo.
Estos microorganismos son contaminantes de la orina.
Lavar los genitales con agua y jabón sin utilizar
antisépticos de dentro a fuera. Desechar la primera
parte de la micción y recoger la orina que se emite a
continuación directamente en un frasco estéril.
• No tocar el interior del frasco ni del tapón.
• En niños mayores la orina se recoge igual que en los
adultos bajo supervisión del profesional.
• En niños pequeños, neonatos, prematuros, lactantes se
utiliza una bolsa colectora de orina estéril con anillo
adhesivo que se coloca después de lavar los genitales. Si
no se consigue orina en 20-30 minutos, se despega la
bolsa o se ensucia, hay que sustituirla por otra.
• Cuando las circunstancias no nos permiten obtener la
orina por micción espontánea recurriremos al sondaje
vesical continuo o intermitente obteniendo la orina con
técnica aséptica evitando llevar una infección donde
antes no la había. Si el sondaje es continuo y el catéter
vesical lleva instalado mas de 24 - 48 horas puede estar
colonizado por múltiples cepas bacterianas y la prueba
se falsea.
• La aspiración de orina por punción suprapúbica evita que
esta se contamine por los gérmenes de la uretra y
perineales, además evita la contaminación inherente al
sondaje vesical. Esta indicada cuando hay dificultad para
obtener la muestra, cuando hay sospecha de infección
por anaerobios en pacientes pediátricos y cuando existe
contaminación o resultados dudosos después de tres
urocultivos realizados en las mejores condiciones.
• Enviar rápidamente la muestra al laboratorio ya que la
orina es un excelente caldo de cultivo que favorece el
desarrollo de los gérmenes y falsea el recuento.
• Es necesario que el cultivo se realice dentro de la
primera hora posterior a su recolección y si esto no es
posible debe mantenerse la muestra refrigerada a 4º C
hasta el momento de su procesamiento durante un
periodo no superior a 24 horas.
• Nunca han de emplearse conservantes convencionales
en las muestras para estudio bacteriológico.
DETECCIÓN DE DROGAS DE ABUSO Y MEDICAMENTOS
EN ORINA. TRIAGE.
Consiste en la detección en orina de sustancias especificas
cuya presencia y continua eliminación en el tiempo determina
altas concentraciones de las mismas.
En el paciente pediátrico se puede presentar intoxicación
accidental y consumo voluntario o inducido de estas
sustancias.
El método triage rastrea tetrahidrocarbaminol, cocaína,
barbitúricos, benzodiacepinas, metadona, antidepresivos
tricíclicos, opiáceos y anfetamina. Consiste en una placa con
un deposito donde se mezcla la orina y los reactivos.
Extendemos la muestra sobre un tampón donde aparece los
nombres de las sustancias a determinar y un control positivo
de la prueba. En unos minutos aparecerá una línea de
positividad en la sustancia detectada y en el control.

MUESTRAS DE ORINA EN ANATOMÍA PATOLÓGICA.


Consiste en el estudio de las células que se eliminan por la
orina sobre todo aquellas malignas procedentes de tumores,
lesiones o malformaciones de la vía urinaria desde el riñón
hasta la vejiga y uretra. Se recoge la primera micción matinal
para obtener células frescas y cilindros durante tres días.
NORMAS GENERALES DE TRATAMIENTO DE MUESTRAS
DE HECES
Introducción
El análisis de las heces abarca el estudio macroscópico y
microscópico de sustancias anormales, el coprocultivo para
determinar presencia de microorganismos patógenos, el
estudio parasitológico de las heces, sangre oculta y
substancias anormales en heces de 24 horas.

ESTUDIO COPROLÓGICO
El examen macroscópico consiste en la observación directa
de las características de la muestra. Se examina la cantidad,
color, olor, forma y consistencia así como fragmentos de
fécula, grasas no digeridas, moco, pus, sangre, etc. que
pueden variar según la dieta, medicación o proceso
patológico del paciente. Por ejemplo, en las hemorragias la
sangre digerida produce heces pastosas negras malolientes
llamadas melenas.
El examen microscópico de las heces determina la
presencia de sustancias como proteínas de la carne y
carbohidratos como el almidón por un defecto en la digestión
o tránsito acelerado a través del colon. Si aparecen
leucocitos es muy útil en el diagnostico diferencial de la
diarrea de origen infeccioso. También detecta pigmentos
biliares anormales como la bilirrubina, enzimas como la
tripsina, coproporfirinas y podemos determinar el pH.

Material
• Envase estéril o limpio capacidad 50 cc, boca ancha, de
plástico irrompible, hermético con tapón de rosca, con o
sin medio de transporte. A veces es preciso que sea
opaco para proteger de la luz o lo cubrimos con papel de
aluminio.
• Depresor de madera.

Normas generales
• Envase correctamente identificado según protocolo
acompañado de petición rellenada por el facultativo.
• Son suficientes cantidades pequeñas de heces, en
general 2.5cc de heces formadas o 15-30 cc de heces
liquidas.
• La muestra se traslada al frasco con depresor o tira de
cartón. Evitar la contaminación con orina, sangre, agua o
papel higiénico. En niños pequeños aislar los genitales
con bolsa colectora de orina. No llenar el envase
demasiado. Liberar el gas aflojando la tapa.
• Evitar contaminar el exterior del envase con la muestra
y vigilar perdidas, derrames o roturas durante el
transporte.
• Las muestras deben ser remitidas lo antes posible al
laboratorio para su procesamiento en las 1-2 horas
siguientes a la recogida y si esto no es posible guardar
en nevera.
• En función del tipo de análisis el paciente a veces deberá
seguir una dieta determinada y evitar o restringir
algunos alimentos o fármacos previa consulta medica los
días previos a la toma de la muestra. Solicite
instrucciones al laboratorio.
• Tras la obtención de la muestra reanudar la dieta
habitual y el tratamiento.
• Evitar la ingestión de antidiarreicos o catárticos así como
aceites minerales para lubricar las heces porque su
composición altera los resultados.
• Hay pruebas en las que se precisa proteger la muestra
de la luz como en la determinación de coproporfirinas y
cubriremos el frasco con papel de aluminio.
COPROCULTIVO
Introducción
Estudio bacteriológico de las heces cuyo objeto es
evidenciar la existencia de un germen no habitual por
microscopia directa o bien por cultivo especifico.

Material
• Envase estéril de plástico irrompible, capacidad 50 cc,
estéril, de boca ancha y tapón de rosca, hermético.
• Depresor de madera estéril.
• Escobillón estéril con medio de transporte.
Normas generales
• Envase correctamente identificado según protocolo
acompañado de petición rellenada por el facultativo.
• Siempre que sea posible se tomaran las muestras antes
de administrar cualquier tratamiento antibiótico o
antiséptico intestinal. En caso contrario se hará constar
en la petición tipo de antibiótico, dosis y hora de la
última toma.
• Tomar una pequeña porción de heces recién emitidas
eligiendo, si las hay, las zonas mucosas, hemorrágicas o
purulentas. No cultivar muestras de heces duras o
compactas.
• Introducir la muestra con un depresor estéril evitando
tocar el interior del frasco o la tapa. Evitar la
contaminación con orina y otras substancias. En niños
pequeños aislar los genitales con bolsa colectora de
orina. No llenar el envase demasiado. Liberar el gas
aflojando la tapa.
• Evitar contaminar el exterior del frasco con la muestra y
vigilar perdidas, derrames o roturas en el transporte.
• Si la muestra es tomada con escobillón este debe ser
estéril con medio de transporte. Se introducirá a través
de la ampolla rectal apareciendo claramente manchado
de heces. No es valido el simple frotado de la región
anal.
• Enviar siempre dos escobillones tomados
adecuadamente. En estudios con muestras diarreicas no
utilizar escobillón y envíe un solo frasco.
• Una vez obtenida la muestra enviar inmediatamente al
laboratorio de bacteriología en las 1-2 horas siguientes.
Si no es posible, conservar en nevera. Si se conserva
mas de 4-5 horas en nevera pueden obtenerse falsos
negativos como en la shigellosis y algunas salmonellas.
• Si se están administrando antibióticos, el cultivo es
negativo y el cuadro clínico no cede hay que suspender
el tratamiento dos o tres días y volver a enviar una
nueva muestra.
• Es frecuente que en algunas muestras no se aísle el
germen patógeno responsable por lo que deben enviarse
al laboratorio tres muestras correspondientes a días
distintos o al menos de tres deposiciones diferentes.
ESTUDIO DE SANGRE EN HECES
Introducción
La sangre procedente del estomago o de las partes altas del
intestino suele llegar a las heces digerida recibiendo el
nombre de sangre oculta o hemorragia oculta en heces. Este
estudio es muy útil cuando se sospecha hemorragia digestiva
subclínica que no que no cursa visiblemente con melenas.
Este análisis consiste en el examen químico del pigmento
hemático de las deposiciones con tintura de guayaco.
Actualmente se comercializan test en tabletas, tiras de papel
y otros soportes que utilizan la reacción de guayaco. Seguir
las instrucciones del fabricante.
Existen otras pruebas como la de la bencidina y el
piramidón que verifican la existencia de sangrado y su
magnitud.
Si la muestra se envía al laboratorio debe ir debidamente
identificada acompañada del volante de la solicitud
cumplimentado por el facultativo.

Material
• Envase estéril o limpio, boca ancha, de plástico
irrompible, boca ancha, capacidad 50 cc, hermético con
tapón de rosca.
• Depresor de madera.
Normas generales
• Hay que tener al paciente tres días a dieta rigurosa libre
de carne, embutidos y otros productos que contengan
hemoglobina o un exceso de clorofila como los vegetales
verdes tipo espinacas. Se puede comer carbohidratos
como patatas, cebolla, arroz, leche y pan. Se debe
suprimir la medicación que contenga hierro, nitritos,
bismuto o cobre.
• Conviene repetir el examen varias veces en días
distintos tanto para cerciorarse de la negatividad como
para comprobar en su caso el carácter crónico de la
hemorragia.
• Los resultados negativos no excluyen el sangrado ya que
este puede ser intermitente por lo que se aconseja la
recogida de tres muestras procedentes de tres
movimientos intestinales distintos.
ESTUDIO DE HECES DE 24 HORAS
Introducción
Este estudio determina la excreción fecal de una sustancia
cualquiera en 24 horas, como el nitrógeno y las grasas
fecales, que en exceso puede obedecer a un transito
acelerado, déficit enzimático, déficit de absorción u
obstrucción del conducto biliar. Con este estudio se pueden
diagnosticar procesos como colitis ulcerosas y síndromes de
mala absorción.

Material
Envase de plástico irrompible, capacidad 1000-2000 cc,
hermético con tapón de rosca, seco y limpio sin conservante.

Normas generales
• Muestra debidamente identificada según protocolo
acompañada de petición rellenada por el facultativo.
• Se guardan todas las deposiciones que el paciente
realice en un periodo de 24 horas. Remitir deposición
completa incluyendo sangre, moco, pus, etc.
• Esta cantidad de heces no se corresponde con la
cantidad de comida ingerida en el mismo periodo de
tiempo y que el aparato gastrointestinal no se vacía a
voluntad. Por ello para que el estudio sea más exacto se
guardaran las heces durante tres días y se harán los
cálculos sobre la muestra completa dividiendo entre
tres.
• La exactitud de este método puede aumentarse
haciendo ingerir al paciente un colorante de carmín o
carbón vegetal antes del periodo de recogida
empezando esta con la aparición del colorante hasta que
ya no aparezca en las heces.
• En general debe seguirse la alimentación habitual
siempre que contenga grasas, proteínas y almidón. Si
falta algún componente de la dieta debe añadirse para
que sea equilibrada. En otras determinaciones deberán
restringirse algunos alimentos o fármacos. Por ejemplo
en la investigación cuantitativa de grasa en heces el
paciente deberá llevar una dieta estricta durante seis
días exenta de grasas exceptuando una yema de huevo
cocida y tres cucharadas rasas de mantequilla al día en
el niño.
• La muestra de heces de 24 horas se debe mantener
refrigerada en nevera a 4º C durante todo el periodo de
recogida.
• La muestra para determinación de grasa en heces se
mantendrá congelada hasta su envío a laboratorio.
• El análisis se realiza dentro de las 12 horas siguientes a
la ultima deposición.
EXAMEN PARASICOLÓGICO DE LAS HECES
Introducción
Los parásitos se alojan en el aparato digestivo sobre todo
en el intestino y una porción de ellos, las larvas o los huevos
son eliminados con las heces, de ahí la importancia de esta
muestra en el estudio parasitológico.
Los parásitos mas frecuentes en las heces son de tres
tipos:
• helmintos, gusanos tipo áscaris o tenia.
• protozoos, como la giardia lambia y las amebas.
• oxiuros o lombrices, muy frecuentes en niños pequeños.
Los signos de enfermedad por parásitos son muy variados
por lo que el medico solicitará el estudio en base a la
sospecha clínica y que la técnica es diferente según el
parásito a estudiar.
Es aconsejable realizar varios análisis simultáneamente
para aumentar la fiabilidad.
Primero realizamos el examen macroscópico de la muestra
de heces en el cual observamos directamente parásitos
enteros si los hubiere y la consistencia.
A continuación en el examen microscópico se buscan
huevos de helmintos y quistes de protozoos mediante
técnicas de concentración por flotación o sedimentación,
tricromía, cuantificación de huevos, tinciones permanentes,
etc.

Material
Envase estéril o limpio, de plástico irrompible, boca ancha,
hermético con tapón de rosca. A veces hay que añadir
conservante o medio de transporte.

Normas generales
• Muestra debidamente identificada acompañada de
solicitud de estudio rellenada por el facultativo.
• La cantidad de parásito que se elimina en cada
deposición puede ser variable. Si estos no se encuentran
en gran número en el intestino también serán escasos
en las muestras, por ello no siempre que el resultado sea
negativo se puede descartar la existencia de parásitos.
• Normalmente para descartarlos debe repetirse el
examen al menos tres veces en tres días distintos con
intervalos entre tomas de unos cinco días. Si son todos
negativos se puede afirmar que no hay parásitos.
• Tres días antes de la recogida someter al paciente a una
dieta donde se eliminan o restringen los hidratos de
carbono sobre todo vegetales y féculas.
• No tomar medicamentos a base de bismuto o carbón
pues las muestras son muy opacas y no se analizan
bien.
• Los medios de contraste como sales de bario y los
antibióticos pueden disminuir la cantidad de parásitos en
las heces sobre todo los protozoos.
• Las heces no deben calentarse porque se acelera la
destrucción del parásito. Hay que mantenerlas a
temperatura ambiente.
• La muestra debe enviarse inmediatamente al
laboratorio. Si no es posible fijarla con un conservante
tipo alcohol polivinílico o fenol a temperatura ambiente.
• Si las heces son diarreicas la muestra debe enviarse sin
demora antes de que se enfríe. Si las heces son pastosas
o con huevos o larvas su envío no es tan urgente. En el
caso de muestras de protozoos procesar antes de 30
minutos después de la recogida. Si el paciente elimina
gusanos enviar en un frasco con suero salino.
• En el caso de oxiuros tipo enterovirus vermicularis las
hembras ponen los huevos en los pliegues perianales
produciendo picor en la zona. Estos huevos no aparecen
en las heces y su análisis no sirve para el diagnóstico. En
estos casos realizamos el test de Graham que consiste
en presionar con una cinta de celofán adhesivo sujeta
por un depresor en la zona perianal sin sobrepasar el
esfínter anal, a primera hora de la mañana sin aseo
previo y antes de defecar.
NORMAS GENERALES DE TRATAMIENTO DE MUESTRAS
DE ESPUTO
Introducción
El esputo es una mezcla de secreciones pulmonares y
bronquiales compuesta de plasma, mucina, agua y electrolitos
y las partículas que se adhieren a su paso por la vía aérea
como los restos celulares, secreciones bronquiales y salivales
y la flora bacteriana normal de la cavidad oral. Se expulsa
con la tos profunda y puede infectarse, teñirse de sangre o
contener células anormales que puedan llevar al diagnostico
de una patología.
El objetivo del examen de esputo es analizar la mucosidad
a fin de realizar un estudio citológico o de determinar la
presencia de microorganismos patógenos en el cultivo o
parasitosis.

EXAMEN MACROSCOPICO Y MICROSCÓPICO DEL


ESPUTO
Para el examen macroscópico del esputo la muestra debe
transferirse a una placa de Petri esterilizada colocada sobre
un fondo oscuro. Consiste en la observación directa de la
consistencia y aspecto.
En las muestras normales el aspecto es claro y acuoso y
cualquier opacidad procede de material celular.
Hay enfermedades especificas que presentan aspectos
característicos, por ejemplo en el edema pulmonar el esputo
es seroso, espumoso y teñido de sangre y en los procesos
neumónicos el color amarillo indica pus y células epiteliales.
En los esputos normales y patológicos no se detecta ningún
olor pero en enfermedades como abscesos pulmonares y
cuando hay pseudomonas aparecen olores pútridos.
Una vez realizado el examen macroscópico todas las
partículas sospechosas se transfieren a un portaobjetos limpio
para su examen microscópico.
Cualquier sustancia, célula o bacteria puede observarse
mejor mediante tinción.
El resto de la muestra se cultiva.

CULTIVO DE ESPUTO
El cultivo de esputo identifica el agente causante de las
infecciones en las vías aéreas inferiores: traquea, bronquios y
pulmón.
Sirve para confirmar el diagnostico de infección, saber de que
germen se trata y cual es el antibiótico mas adecuado para su
tratamiento. Es muy útil cuando la infección no ha respondido
al tratamiento inicialmente pautado, se esta convirtiendo en
un proceso muy largo o se trata de pacientes
inmunodeprimidos.
Una vez obtenida la muestra realizaremos una serie de
técnicas dirigidas a detectar un germen determinado según la
sospecha clínica.
• Analizar el frotis de una muestra pequeña de esputo al
microscopio.
• Hacer una tinción de Gram para distinguir gérmenes
Gram + de los Gram – lo cual supone una valiosa
información sobre los antibióticos más idóneos en un
principio.
• Hacer una tinción BAAR baciloscopia ácido alcohol
resistente especial para detectar micobacterias en
especia el bacilo causante de la tuberculosis. Se
recomienda recoger esputo seriado durante tres días
consecutivos y refrigerar.
• El resto de la muestra se siembra en varios medios de
cultivo según el germen del que se sospeche con
nutrientes suficientes a una temperatura adecuada y se
deja incubar un tiempo variable. Después se procede a
su lectura en el microscopio. Se observa cada 24 horas y
solo si al cabo de seis semanas no ha crecido nada se
considera que es negativo. Esto quiere decir que el
paciente puede estar varias semanas sin un resultado
definitivo.
Normalmente si hay gérmenes suelen crecer y dar un
resultado positivo, sin embargo a veces a pesar de que
existen microorganismos el resultado es negativo. Esto
se debe a que algunos son extremadamente sensibles y
mueren en cuanto salen del organismo por lo que
cuando se procede a la siembra en laboratorio ya es
tarde y no crece nada.
En otras ocasiones el resultado se demora de manera
importante. Esto ocurre porque todos los gérmenes no
crecen con la misma velocidad y se requiere un numero
determinado de ellos para que se detecte el positivo. A
veces pueden necesitarse varias semanas para obtener
un resultado. Lo normal son 7-15 días.
• Cuando crece algún germen patógeno se realiza el
antibiograma que consiste en exponer los gérmenes a
diversos antibióticos y ver a cuales son resistentes y
cuales van a hacer que no crezca o lo haga mas
lentamente. Así sabemos que tratamiento es más
efectivo.
• Con el estudio parasitológico del esputo podemos
encontrar fases larvarias de áscaris, estrongyloides,
amebas, huevos de gusanos criptosporidium.
Material
• Bote de plástico irrompible, boca ancha, capacidad
máxima 50 cc, hermético con tapón de rosca, estéril,
seco y desechable.

• Puede estar adaptado a una sonda de aspiración


controlada y a una conexión de aspirador.

• Placas de Petri.

Normas generales
• Muestra identificada correctamente con nombre
completo del paciente, servicio, fecha y hora de la
obtención. Debe ir acompañada de una petición
rellenada por el facultativo según protocolo, donde
además reflejaremos tipo de muestra y estudio que se
solicita.
• La muestra para cultivo debe obtenerse antes de iniciar
tratamiento antibiótico si es posible. En caso de haber
comenzado se debe hacer constar en la petición tipo de
antibiótico, dosis y hora de la ultima administración.
• La colaboración del paciente es esencial para obtener
una muestra de calidad para el estudio. En los niños
grandes que no colaboran se puede estimular la tos y
poner el bote o una placa de Petri junto a la boca. En los
niños pequeños, neonatos, prematuros y lactantes se
opta por la recogida con aspiración controlada.
• La recogida de la muestra se hará con técnica lo más
aséptica posible sin tocar el interior del recipiente ni la
parte interna de la tapa.
• El esputo se obtiene tras expectoración profunda. En
posición erguida de pie o sentado hacer dos o tres
respiraciones profundas y lentas que ayudan a provocar
la tos. Así se consigue obtener secreciones del tracto
respiratorio inferior. Repetirlo tantas veces como sea
necesario para obtener la cantidad deseada.
• Las muestras de esputo se contaminan con saliva,
secreciones nasofaringeas, bacterias, alimentos, pasta
de dientes, etc. La obtención en ayunas y el preenjuague
de la boca con agua sin antiséptico eliminara la mayoría
de estos contaminantes sin afectar al resultado del
análisis.
• La recogida debe ser preferentemente matinal. Las
secreciones bronquiales se acumulan durante el sueño
por lo que puede ser más sencillo para el paciente
obtener la muestra a primera hora de la mañana. Otro
momento adecuado para hacerlo es tras la
administración de un broncodilatador o una sesión de
clapping y drenaje postural.
• Si las mucosidades son escasas o densas y cuando no
podemos obtener una expectoración espontánea se
puede inducir el esputo mediante el aumento del flujo de
la secreción bronquial y estimulación de la tos. Se puede
administrar jarabe expectorante sin antibiótico y
nebulizaciones de aerosoles de suero fisiológico
hipertónico estéril a 37º C. Puede estar contraindicado
administrar estos aerosoles a pacientes asmáticos o con
bronquitis porque hay riesgo de broncoespasmo.
• Si es imprescindible tomar la muestra de secreciones del
la vía respiratoria baja y los métodos reseñados no son
efectivos existen diversas técnicas más agresivas
encaminadas a la obtención del esputo: aspiración
traqueal a través de boca, nariz, tubo orotraqueal y
traqueostomia, aspiración a través de broncoscopio,
aspiración transtraqueal y transtoracica. Estas muestras
son mas apropiadas que las anteriores para identificar el
agente etiológico de la enfermedad porque se obtiene
en condiciones de asepsia. Utilice estos métodos cuando
la infección no esta siendo controlada o cuando se
sospeche infección por anaerobios, en pacientes
difíciles, agitados, comatosos o intubados.
• Tras la obtención de la muestra debe remitirse
inmediatamente al laboratorio. Si no fuese posible puede
conservarse en frigorífico a 4º C durante varias horas
aunque no es aconsejable el cultivo de muestras mas
allá de las 24 horas después de su recogida.
NORMAS GENERALES DE TRATAMIENTO DE MUESTRAS
DE LÍQUIDO CEFALORAQUIDEO (LCR)
Introducción
El LCR baña el cerebro y la medula espinal y amortigua
junto con las meninges los traumatismos que pueda sufrir
este tejido.
Es el vehículo de transporte de los nutrientes al cerebro,
elimina los desechos y compensa los cambios en el volumen y
presión de la sangre intracraneal.
Cuando se produce cualquier alteración tanto en las
meninges como en el sistema nervioso central se liberan
substancias o células anormales en el LCR de modo que
obteniendo unas gotas podemos estudiar estas estructuras y
generalmente aportan la información suficiente para llegar al
diagnostico preciso de diversas patologías como infecciones
meníngeas, enfermedades desmielinizantes del sistema
nervioso central y periférico.
Además podemos medir la presión de salida del LCR muy
útil por ejemplo para confirmar hemorragia.
El examen del LCR consiste en el estudio macroscópico,
conteo de células, cultivo, estudio bioquímico con
determinación de proteínas totales, cloruros y glutamina,
estudio de hongos, serología infecciosa, citología,
inmunofijación.

EXAMEN MACROSCOPICO DEL LCR


El aspecto macroscópico del LCR es claro y transparente. El
cambio de color y opacidad denotan alteraciones como
presencia de leucocitos que enturbian la muestra, sangre mas
o menos hemolizada que da un color rosado o ictérido por una
hemorragia reciente o de varias horas de evolución. Proteínas
y coagulación espontánea son indicativas de obstrucción por
encima de la zona de punción.

RECUENTO CELULAR DEL LCR


El conteo de células del LCR es una prueba que mide la
cantidad de hematíes y leucocitos y puede ayudar a
diagnosticar hemorragias, infecciones, tumores,
inflamaciones, abscesos y muerte por infarto de un área del
sistema nervioso central.
Si se encuentran hematíes puede ser indicio de hemorragia
pero también puede ser ocasionado por una punción lumbar
traumática.
Se procede al recuento de los hematíes en los tres tubos y
si están en cantidad decreciente apoyan un origen puncional
de la sangre. También se hace un recuento leucocitario.
Centrifugamos el LCR, extendemos el sedimento y lo
teñimos para el recuento celular diferencial que también nos
ayuda en el diagnostico de la enfermedad. Un aumento de
polinucleares sugiere enfermedad infecciosa bacteriana. Un
aumento de las células mononucleadas sugiere una
enfermedad viral, fúngica o inmunológica.

ANÁLISIS BIOQUÍMICO DE LCR


El estudio bioquímico del LCR es complementario de los
anteriores. Las variaciones en los niveles de diversas
substancias orientan el diagnostico. Las proteínas y la glucosa
son los parámetros más significativos sobre todo cuando se
conoce su presencia en sangre. Por ejemplo en las
enfermedades infecciosas bacterianas o por hongos los
niveles de glucosa disminuyen y en las infecciones víricas y
en las inmunológicas varían muy poco.

CULTIVO DE LCR
Con el cultivo se pretende identificar los microorganismos
causantes de infecciones del sistema nervioso.
Cuando se sospecha una infección se llevan a cabo los
siguientes estudios:
• Tinción especial de Gram para realizar una distinción
inicial del germen Gram + o Gram - e instaurar el
tratamiento antibiótico más idóneo sobre todo en
situaciones de urgencia.
• Tinción BAAR baciloscopia alcohol resistente y tinción de
Ziehl para detectar micobacterias.
• Tinción de tinta china cuyo resultado positivo aporta
información en el estudio de hongos.
• El resto de la muestra se siembra para su cultivo y al
cabo de cierto tiempo se consigue afinar mas y llegar a
saber no el grupo sino el germen concreto de que se
trate. El crecimiento en el cultivo se observa cada 24
horas. El numero de gérmenes que hay en una muestra
extraída del organismo es escaso y esto hace que sea
difícil verlos al microscopio. Por eso se siembra en varios
medios de cultivo según el germen del que se sospeche
con nutrientes y temperatura adecuada un tiempo
variable. Después se procede a su lectura al
microscopio. Normalmente si hay gérmenes suelen
crecer y dar un resultado positivo. Sin embargo a veces
a pesar de existir gérmenes el resultado es negativo
porque algunos son extremadamente sensibles y
mueren en cuanto salen del organismo. En muchas
ocasiones el facultativo debe orientar la terapéutica en
base a la clínica, tiempo de evolución y otros datos del
LCR. Otras veces el resultado se demora mucho porque
todos los gérmenes no crecen a la misma velocidad y
como se requiere un numero determinado para detectar
resultados positivos pueden necesitarse a veces varias
semanas. Lo habitual son 7-15 días.
• Después realizaremos antibiograma.
Material
Tres tubos de plástico transparente esteriles, secos,
irrompibles y desechables, herméticos con tapón de rosca,
capacidad 10 cc.

Normas generales
• El método más común para recolectar una muestra de
LCR es por punción lumbar con técnica aséptica y aguja
espinal en el interespacio vertebral L3-L4 en niños
grandes y L4-L5 en niños más pequeños. En este nivel el
espacio esta lleno de liquido y hay menos tejido nervioso
siendo el riesgo de lesión menor. Si se presentan
contraindicaciones como hernias medulares, deformidad
o infección en la zona que imposibilitan la punción o
invalidan los resultados recurriremos a métodos
alternativos quirúrgicos como la punción cisternal o
ventricular.
• Identificación de los tubos rotulados o etiquetados con
nombre, servicio, fecha y hora, tipo de muestra y
numero de orden de extracción 1º, 2º o 3º.
• Petición rellenada por el facultativo según protocolo. La
muestra se obtendrá antes de administrar tratamiento
antibiótico al paciente. Si existe tratamiento antibiótico
previo indicar en la petición tipo, dosis y hora de la
ultima administración.
• El LCR se recogerá con técnica aséptica por separado en
tres tubos estériles para los distintos estudios.
• Evitar tocar el interior del tubo o del tapón.
• Tras la punción se medirá la presión de salida del LCR.
• Se obtendrán de 3 a 6 cc de liquido para evitar
accidentes por descompresión. Cada bote se intentara
llenar secuencialmente con al menos 1 cc.
• El tubo 1º se destinara preferentemente al examen
bioquímico. El tubo 2º se enviara al servicio de anatomía
patológica para el examen citológico. El tubo 3º
necesariamente estéril se enviara al laboratorio de
microbiología para su tinción, cultivo y antibiograma. Se
procurara no llenar este tubo el primero ya que es más
fácil que este contaminado con gérmenes de la piel o
una mala técnica aséptica.
• El envío debe ser rápido y se deberá sembrar y teñir
inmediatamente. Si esto no fuera posible hay que
conservar la muestra hasta su procesamiento en estufa
a 35-37º C. Nunca a temperatura ambiente ni
refrigerada. Debemos evitar la perdida de viabilidad de
los microorganismos sensibles a bajas temperaturas.
• Cuando el volumen de LCR obtenido sea pequeño y no
sea suficiente para los tres tubos debemos establecer
prioridades en el procesamiento en función del agente
etiológico más probable en el cuadro clínico. Si se
sospecha infección se enviara al laboratorio de
microbiología. Si se sospechan otros problemas se hará
estudio macroscópico, bioquímico, etc.
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