Mecanotransducción de flujo de fluido en células musculares lisas vasculares y fibroblastos

Resumen: Comprender cómo las células endoteliales de la pared vascular (CE), las células
musculares lisas (SMC) y los fibroblastos (FB) perciben y transducen los estímulos de las
fuerzas hemodinámicas (esfuerzo cortante, tensión cíclica y presión hidrostática) en señales
bioquímicas intracelulares es fundamental para prevenir el desarrollo y la progresión de la
enfermedad vascular. Los EC que recubren la luz del vaso detectan directamente alteraciones
en el estrés por cizallamiento del flujo sanguíneo y luego se comunican con SMC medianos y FB
adventicios para regular la función y la enfermedad de los vasos. La mecanotransducción por
esfuerzo cortante en CE ha sido ampliamente estudiada y revisada. En el caso de daño
endotelial, el estrés por cizallamiento del flujo sanguíneo puede actuar directamente sobre la
capa superficial de las SMC y el flujo intersticial transmural puede elevarse en las SMC
medianas y los FB adventicios. Por lo tanto, también es importante investigar los efectos de
cizallamiento directo en las SMC vasculares y en los FB. El trabajo publicado en las últimas dos
décadas ha demostrado que el esfuerzo cortante y el flujo intersticial tienen influencias
significativas en los SMC y los FB vasculares. Esta revisión resume el trabajo que consideró los
efectos de cizallamiento directo en SMC y FB y proporciona la primera descripción completa de
los mecanismos subyacentes que modulan la secreción, alineación, contracción, proliferación,
apoptosis, diferenciación y migración de SMC en respuesta a laminar bidimensional (2D) ,
esfuerzos de corte por flujo pulsátil y oscilante y flujo intersticial en 3D. También se
proporciona un modelo mecanicista de detección de flujo por SMC para dilucidar posibles vías
de mecanotransducción a través de glucocalix superficial, integrinas, receptores de membrana,
canales iónicos y cilios primarios. La comprensión de la mecanotransducción de mediación
baja en SMC y FB y la interacción con las CE debería ser útil para explorar estrategias para
prevenir la aterosclerosis iniciada por flujo y la formación de neoíntima y tiene implicaciones
en la ingeniería del tejido vascular.

INTRODUCCIÓN.

Células musculares lisas y fibroblastos en remodelación vascular y enfermedad.

Las funciones principales de las células del músculo liso vascular (SMC) en la capa medial de la
pared arterial son mantener y regular el tono de los vasos sanguíneos, la presión arterial y la
distribución del flujo sanguíneo.62 Dentro de los vasos sanguíneos adultos, las SMC tienen una
tasa de proliferación extremadamente baja y actividad sintética, y expresan un repertorio
único de proteínas contráctiles requeridas para la función contráctil celular.63 Sin embargo, las
SMC poseen una notable plasticidad que permite cambios bastante profundos y reversibles en
el fenotipo entre un estado contráctil y un estado sintético en respuesta a las alteraciones en
las señales ambientales locales que desempeña un papel crucial en la reparación y
remodelación vascular49,63,72,79. Además, las SMC pueden contribuir a la formación de
lesiones vasculares, incluida la formación de neoíntima y la aterosclerosis por activación y
migración de los medios a la íntima en condiciones ambientales anormales20,49. , 63 El
trabajo in vivo ha demostrado que los fibroblastos adventicios (FB) y su contraparte activada,
miofibroblas ts (MFBs), también contribuyen a la formación de neoíntima después de una
lesión vascular42,86. En respuesta a la lesión vascular, de manera similar a las SMC medianas,
las FBs adventicias pueden activarse rápidamente y experimentar cambios dramáticos en el
fenotipo, la proliferación y la migración, que contribuyen a la formación de neoíntima.80,94 La
formación de neoíntima a menudo se induce en regiones donde el endotelio ha sido dañado
por procedimientos vasculares como la angioplastia o en las anastomosis de injertos
vasculares. Además, la aterosclerosis ocurre en sitios donde se altera el flujo
sanguíneo.51,53,81,102 Ambas condiciones involucran múltiples procesos que incluyen
disfunción endotelial, inflamación, proliferación y migración vascular de SMC y FB y alteración
de la matriz.14 La Figura 1 muestra la contribución de las SMC vasculares y FBs a la formación
de lesiones vasculares en respuesta a la lesión vascular.

Las SMC y los FB se exponen al flujo de fluidos y al esfuerzo cortante después de una lesión
vascular.

Las SMC vasculares normalmente residen en un entorno tridimensional (3D) compuesto por
componentes de ECM, principalmente colágeno y fibras elásticas. Normalmente, las SMC no
están expuestas directamente a los esfuerzos cortantes de la sangre que fluye en el sistema
vascular, porque la capa de células endoteliales (CE) que recubre todos los vasos sanguíneos
proporciona la superficie de contacto para el flujo sanguíneo y las SMC subyacentes están
protegidas. Sin embargo, en casos de lesión endotelial y denudación, la capa superficial de
SMC está expuesta directamente a tensiones de cizallamiento del flujo sanguíneo a niveles
similares a los que experimentan las CE en los vasos sanguíneos intactos. Un mecanismo más
sutil por el cual los SMC medianos están expuestos al estrés por cizallamiento de fluidos es a
través del flujo transmural (intersticial) impulsado por el diferencial de presión transvascular
(presión arterial-presión del tejido) (Fig. 2). Debido a que este flujo transmural es típicamente
muy pequeño (velocidad superficial del orden de 1025 a 1026 cm / s), sus posibles efectos
mecánicos en las SMC permanecieron sin ser reconocidos hasta que el grupo de Tarbell estimó
que las tensiones de corte intersticiales máximas en las SMC podrían ser del orden ~ 1 dyn /
cm2 .99–101,109 Su teoría, basada en células cilíndricas suspendidas en un medio Darcy,
condujo a la siguiente estimación para el (los) esfuerzo (s) intersticial de bajo esfuerzo
cortante: s lU = Kp1 = 2; donde l es la viscosidad del fluido intersticial, U es la velocidad de
flujo superficial y Kp es la permeabilidad de Darcy de los tejidos o medios porosvel

Sin embargo, las SMC cercanas a los poros fenestrales pueden experimentar tensiones de
cizallamiento de flujo intersticial transmural mucho más altas debido al efecto de embudo de
los poros.99 Además, la tensión de cizallamiento de flujo intersticial en los FB adventicios debe
ser menor que en los SMC, ya que la permeabilidad de la 'floja '' la adventicia es más alta que
la de los medios '' densos ''. 85 Además, la adventicia de una arteria grande tiene sus propios
microvasos (es decir, vasa vasorum y linfáticos). La presión en la luz de la arteria huésped es
mayor que la presión dentro de estos microvasos, 76 lo que resulta en un flujo intersticial
convectivo desde la luz de la arteria hacia la adventicia.52,76 El patrón de flujo intersticial
dentro de esta capa adventicia suelta puede ser muy complicado, pero el Se espera que la
velocidad de flujo superficial sea bastante pequeña, lo que da como resultado una velocidad
de flujo baja en el intersticio adventicio y un menor esfuerzo cortante en los FB adventicios
que en los SMC medianos. Como se muestra en la figura 2, el flujo intersticial transmural y el
esfuerzo cortante en SMC y FB se elevan después de una lesión química o mecánica del
endotelio y la mejora de la permeabilidad vascular inducida por inflamación o
hipertensión.52,77,102 Por ejemplo, cuando el endotelio está desnudo, la conductancia
hidráulica aumenta 2.5 veces en aortas de conejo6 y 1.75 veces en aortas de rata, 90 lo que
conduce a un aumento proporcional en el esfuerzo de corte intersticial por cizallamiento.
Durante la cicatrización de heridas o la formación de lesiones vasculares, disminuye el flujo
intersticial transmural en SMC y FB. Un estudio reciente mostró que poco después de la
denudación endotelial, las SMC medianas se activan y desdiferencian rápidamente, mientras
que cuando aparece el engrosamiento intimal, la mayoría de las SMC medianas ya no se
activan.49 Claramente, el perfil de activación de las SMC es concomitante con el cambio en la
intensidad del flujo intersticial.

Las CE perciben principalmente el esfuerzo cortante del flujo sanguíneo en su superficie

luminal. Las alteraciones en el entorno hemodinámico pueden ser detectadas directamente
por los EC que luego se comunican con los SMC subyacentes y los FB adventicios a través de
señales químicas paracrinas para regular la función vascular y la
enfermedad.12,21,27,28,58,105 De manera análoga, después de una lesión vascular El
esfuerzo cortante y el flujo intersticial transmural tienen influencias mecánicas directas en las
SMC y los FB que modulan su liberación de moléculas vasoactivas, contracción, proliferación,
fenotipo y migración y, por lo tanto, juegan un papel directo en la función vascular, la
remodelación vascular y la formación de lesiones vasculares.77,85 La mayoría de los estudios
de los efectos directos de corte en SMC se han llevado a cabo in vitro, ya que es difícil estudiar
los efectos directos de corte en SMC vasculares in vivo debido a su ubicación en la pared del
vaso. Los efectos biológicos del esfuerzo cortante del flujo de fluido en las SMC se han
abordado en una serie de estudios en 2 dimensiones (2D) durante dos décadas. Los efectos de
un flujo intersticial 3D más sutil en las SMC no han llamado mucho la atención hasta hace
poco. Esta revisión resume estos estudios 2D y 3D en las siguientes secciones y cierra con una
sección sobre conclusiones y direcciones futuras.

EL ESTRÉS POR CORTE ESTIMULA LAS CITOQUINAS Y LAS MOLECULAS DE SEÑALIZACIÓN EN

LAS SMCs.

Las EC y las SMC pueden secretar citocinas y mediadores vasoactivos como factores de
crecimiento, óxido nítrico (NO), prostaglandina y otras moléculas, y desempeñar funciones
críticas en la función y enfermedad de los vasos. Bodin et al.7 mostraron que, a diferencia de
las CE vasculares, las SMC no aumentaron la liberación de trifosfato de adenosina (ATP) en
respuesta al aumento del flujo. Sin embargo, el esfuerzo cortante (3–25 dyn / cm2) promueve
tanto la liberación del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) como el factor de
crecimiento de fibroblastos básico (bFGF o FGF-2) de las SMC.73,96,97 La mayor secreción de
bFGF puede ser involucrado en la expresión de la enzima convertidora de angiotensina (ECA)
inducida por el esfuerzo cortante.22 En 2D, el estrés cortante (1 dyn / cm2) puede inducir una
regulación positiva significativa de la producción de prostaglandina (PGE2 y PGI2) .3 El flujo
intersticial también puede inducir la producción de prostaglandina. en SMC en 3D, sin
embargo, la tasa de producción es mucho más baja que la observada en 2D.110 Papadaki et
al.66 presentaron datos que indican que el alto esfuerzo cortante regula la expresión del
receptor 1 activado por la proteasa humana (PAR-1), mientras que el bajo esfuerzo cortante
up lo regula, de acuerdo con las variaciones conocidas en la expresión humana de PAR-1 en la
lesión vascular y la aterosclerosis. En contraste, mostraron que la expresión del activador
tisular del plasminógeno (tPA) aumenta en áreas de alto esfuerzo cortante y disminuye en
áreas de bajo esfuerzo cortante, donde el trombo es propenso a formarse. El esfuerzo cortante
puede inducir la producción de NO a través de la regulación positiva de la óxido nítrico sintasa
(NOS) neuronal o inducible, 23,67 y el NO puede cruzarse con prostaciclina.61 Contradictorio a
estos estudios, Wagner et al.108 no observaron inducción de NOS inducible en respuesta al
fluido Esfuerzo cortante. El estrés por cizallamiento de los fluidos puede perturbar el
intercambiador de Na + / H +, lo que lleva a un aumento del pH en las SMC, que es opuesto al
de las CE en los mismos niveles de estrés por cizallamiento.91 El flujo turbulento puede
promover la absorción de Na + y colesterol en las SMC.78 Estrés de cizallamiento laminar
también aumenta el influjo de Ca2 +.82 Además, el esfuerzo cortante laminar promueve la
translocación de TRPM7, un miembro de la familia de canales catiónicos del potencial de
receptor transitorio (TRP), a la membrana plasmática de los SMC aórticos A7R5, lo que resulta
en una mayor actividad del canal y un mayor influjo de Ca2 + y Mg2 + .24,57 A diferencia de
las CE, las SMC vasculares tienen altos niveles de corriente similar a TRPM7 y proteína TRPM7
que puede activarse significativamente por flujo.24,57 In vivo, la liberación de citocinas y
alteraciones en las moléculas de señalización no solo pueden afecta las funciones de SMC a
través de una vía autocrina, pero también puede influir en otros tipos de células como EC y FB
a través de una vía paracrina. La capacidad del estrés cortante para regular las citocinas, los
mediadores vasoactivos y otras moléculas de señalización en las SMC vasculares indica que los
efectos de la cizalla en las SMC pueden desempeñar un papel importante en el mantenimiento
de la homeostasis vascular y la modulación de las patologías vasculares.

El flujo induce la alineación y contracción de SMC.

El flujo de fluido induce la alineación SMC.

Las SMC y las CE vasculares están dispuestas en distintos patrones en la pared de la arteria. Se
ha demostrado que diferentes tipos de estímulos mecánicos regulan la morfología de las
células vasculares. El esfuerzo cortante fluido induce la orientación y el alargamiento CE
paralelos al flujo.8,40 Sin embargo, Lee et al.38 demostraron que el esfuerzo cortante laminar
(20 dyn / cm2 durante 48 h) indujo una alineación perpendicular de las SMC al flujo, que varió
con la magnitud de y tiempo de exposición al esfuerzo cortante. La alineación de SMC
también dependía de Ca2 + y mecanismos basados en el citoesqueleto.38 Rice et al.74
mostraron que ~ 10 dyn / cm2 de esfuerzo cortante indujeron SMC alineado ~ 45 a la dirección
del flujo después de 24 h. Después de la exposición a la tensión pulsátil y al esfuerzo cortante,
las SMC sembradas en andamios de polímeros 3D se alinearon circunferencialmente, de
manera similar a la de las SMC vasculares nativas.33 El flujo intersticial induce la alineación
dérmica de FB perpendicular al flujo en geles de colágeno 3D.55 Los estudios in vivo muestran
que al aplicar El esfuerzo de corte de flujo sanguíneo no uniforme en las CE en un implante de
polímero vascular, los SMC en el implante se alinean perpendicularmente al flujo luminal
(paralelo al flujo transmural) y migran hacia la luz, mientras que el esfuerzo de corte uniforme
no afecta significativamente la alineación y migración de SMC.47 , 48 La orientación
circunferencial de las SMC es importante para que los vasos sanguíneos resistan las tensiones
del aro inducidas por la presión sanguínea. Los cambios en la orientación pueden causar
disfunción de los vasos sanguíneos. Una mejor comprensión y control de la alineación SMC
bajo f tiene implicaciones para la ingeniería del tejido vascular.

El flujo de fluido induce la contracción SMC en 2D y 3D.

La función principal de las SMC vasculares es la contracción. Por lo tanto, es importante

investigar si el estrés por cizallamiento de los fluidos juega algún papel en la respuesta
miogénica y la vasomotión mediada por el flujo. Civelek et al.9 presentaron la primera
evidencia directa que muestra que las SMC en un fenotipo contráctil de hecho se contraerán
cuando se expongan al estrés por cizallamiento de fluidos en 2D. El fenotipo contráctil de las
SMC se indujo mediante la eliminación del suero del medio de crecimiento normal. La
respuesta de contracción inducida por el corte está regulada por una vía de fosfatasa de
cadena ligera de miosina mediada por Rho quinasa (MLCP) e independiente de Ca2 + .9 Esto es
consistente con estudios de la respuesta miogénica (reducción en el diámetro del vaso
después de un aumento de presión) in vivo que muestran una contracción independiente de
Ca2 + que es independiente del estiramiento de los vasos31 y está regulada por el flujo
intersticial transvascular.35 Ainslie et al.1 demostraron además que los componentes de
glucocalix de superficie SMC heparán sulfato y condroitín sulfato pueden servir como sensores
para regular la contracción inducida por el esfuerzo cortante. En experimentos no publicados,
suspendimos SMC aórticas de rata contráctiles sin suero en geles 3D de colágeno tipo I, y
después de la diseminación celular, tratamos las células con suero o KCl. Observamos que
tanto el suero como el KCl indujeron significativamente la contracción del gel de colágeno (Fig.
3a). Usando microscopía confocal, encontramos que las SMC se contrajeron
significativamente después de la exposición al suero durante 30 minutos (Fig. 3b). Además,
cuando aplicamos flujo intersticial (el medio de flujo era DMEM sin suero) a las SMC en geles
de colágeno, las células se contrajeron significativamente después de la exposición a f
intersticial durante 60 minutos (Fig. 3c). KCl induce la contracción de SMC a través del
mecanismo dependiente de Ca2 +, 9 mientras que la contracción de SMC inducida por el
esfuerzo cortante en suero y 2D es independiente de Ca2 + .2,9 Sería interesante determinar si
la contracción de SMC inducida por flujo intersticial 3D en geles de colágeno también es
independiente de Ca2 + y dependiente de Rho. Nuestros estudios sugieren que tanto el
esfuerzo cortante laminar (2D) como el flujo intersticial (3D) pueden inducir la contracción de
SMC. Estos estudios brindan una nueva visión del mecanismo de control miogénico del flujo
sanguíneo que regula la distribución del flujo en respuesta a los cambios en la presión arterial.
Estos estudios también indican que, en la lesión vascular, el estrés por cizallamiento elevado
en las SMC contráctiles puede inducir vasoconstricción que limita el sangrado.

EL ESTRÉS DE LA CORTE DE FLUIDO AFECTA LA PROLIFERACIÓN Y LA SUPERVIVENCIA DE SMC.

Se ha demostrado que el esfuerzo cortante laminar activa las vías de señalización que
controlan la EC para detener en la fase G0 o G1, mientras que el flujo perturbado acelera el
recambio de la CE y el bajo flujo induce la apoptosis EC8,27. En estudios in vitro en 2D, el
estrés cortante laminar también reduce el SMC la proliferación, 15,34,58,65,95,96,98,106 y la
inhibición de la proliferación de SMC pueden estar mediadas por el factor de crecimiento
transformante beta 1 (TGF-b1) .106 Los estudios in vivo de las tasas de crecimiento vascular de
SMC después de la lesión del catéter con balón tienen demostró una correlación inversa entre
las tasas de crecimiento y el esfuerzo cortante, 37 apoyando las observaciones in vitro. El
esfuerzo cortante laminar también puede inducir apoptosis SMC al inhibir la actividad de
Akt16, aumentando la expresión del inhibidor de la vía del factor tisular SMC-2 (TFPI-2), 15 o
mediante una vía Fas / FasL autocrina.4 Sin embargo, otros estudios 2D han demostrado que
El esfuerzo cortante pulsátil u oscilatorio puede promover la proliferación SMC.5,26,78,88 El
aumento de la proliferación SMC está regulado por la activación inducida por el esfuerzo
cortante de Akt y ERK1 / 2.5,26 Otro estudio reciente reveló que el estrés cortante laminar
también puede inducir la expresión de factor de transcripción crecimiento temprano
respuesta-1 (Egr-1) en SMC.56 Esta inducción se controla mediante la activación de c-Jun
inducida por cizallamiento a través de un mecanismo dependiente de ERK1 / 2 y JNK e
independiente de p38.56

FLUJO DE FLUIDO MODULA EL FENOTIPO DE SMC.

Los efectos del estrés cortante sobre la diferenciación vascular EC han sido bien revisados.75 El
estrés cortante también puede modular el fenotipo vascular SMC. Se ha demostrado que la
tensión de corte inducida en un agitador orbital reduce la expresión de marcadores
contráctiles SMC (a-actina y calponina) y estimula la expresión de marcadores de fenotipo
sintético (vimentina y b-actina) .5 Otros estudios indican que la tensión de corte laminar
también puede disminuir los niveles de marcadores SMC (a-actina, calponina, SM-MHC y
SM22), 83,111 al tiempo que aumenta la expresión de marcadores EC (PECAM-1, vWF y VE-
cadherina) .111 El último estudio sugiere que el estrés por corte podría promueven la
transdiferenciación de EC de SMC.111 Más recientemente, Shi et al.83 presentaron la primera
evidencia de que el flujo intersticial 3D también modula la expresión de marcadores
fenotípicos SMC vasculares. Este estudio demostró que el flujo intersticial (velocidad: 0.5 lm /
s; cizallamiento: ~ 0.05 dyn / cm2, 4.5 h) inhibe la expresión de los genes SM-MHC, smoothelin
y calponin en el colágeno 3D, lo cual es consistente con el estrés de cizallamiento laminar 2D
( esfuerzo cortante promedio: 8 dyn / cm2; 15 h). Sin embargo, en contraste con el flujo
laminar 2D, el flujo intersticial mejora la expresión de a-actina y SM22 en 3D.83 Los efectos
diferenciales del flujo laminar y el flujo intersticial pueden deberse al diferente estado
fenotípico inicial de los SMC, debido a que los SMC se cultivaron en 3D el colágeno muestra
menos propagación y menos proliferación y expresa niveles más bajos de a-actina45,72,92.
Este estudio demuestra además que la modulación del fenotipo SMC por el flujo laminar y el
flujo intersticial depende de la mecanotransducción por ERK1 mediado por el proteoglicano
heparán sulfato (HSPG) / 2 activación.83 El flujo intersticial también induce la expresión de a-
actina tanto en FBs como en MFBs en colágeno 3D.54,83 Otros estudios in vitro mostraron que
cuando SMC vasculares desdiferenciados inmaduros se sembraron en andamios de polímeros
3D y se expusieron tanto a tensión pulsátil como a Al mismo tiempo, los SMC mostraron un
aumento significativo en la producción de ECM, la proliferación y la expresión de marcadores
SMC.33,60 Un estudio in vivo también demostró que t cuando los microvasos mesentéricos de
rata (<40 lmin de diámetro) están expuestos a presión elevada y tensión en la pared durante 5
a 10 días, los microvasos exhiben una cobertura mejorada de SMC maduros y diferenciados
que expresan SM-MHC y a-actina.107 El esfuerzo cortante que actúa sobre Las CE pueden
inducir una modulación fenotípica sintética-contráctil de las SMC tanto in vitro como in
vivo.59,105 Tomados en conjunto, los estudios en esta sección han sugerido que, durante la
lesión vascular, el flujo intersticial y el esfuerzo cortante pueden tener efectos significativos
sobre la modulación fenotípica de la SMC vascular y, por lo tanto, contribuir a la remodelación
vascular o la formación de lesiones. Sin embargo, el estrés cortante parece inducir la
diferenciación endotelial de las células madre embrionarias113 y las células madre
mesenquimales de la médula ósea, 13 mientras que el estiramiento induce la diferenciación de
las células madre hacia SMC.89 La presión hidrostática promueve una mayor expresión de
marcadores SMC en las células madre que el estrés por corte, 36 y elevado la presión y la
tensión de la pared mejoran la cobertura SMC de los microvasos.107 Estos resultados indican
que la tensión mecánica y la presión pueden desempeñar un papel más importante que el
estrés cortante en el desarrollo de SMC vascular y la arteriogénesis, mientras que el estrés
cortante puede ser más importante en la patología y enfermedad vascular SMC.

FLUJO DE FLUIDO REGULA LA MIGRACIÓN SMC Y FB.

El esfuerzo cortante 2D afecta la migración SMC y FB.

La migración de SMC y FB vasculares desde los medios y la adventicia juegan un papel clave en
la formación de neoíntima, la aterosclerosis y la restenosis. Las SMC han mostrado una
actividad migratoria reducida en respuesta al flujo sanguíneo elevado en un modelo de lesión
por catéter con balón in vivo.37 Las SMC también han demostrado inhibición de la migración
en respuesta al estrés de cizallamiento laminar (12 dyn / cm2) in vitro a través de la regulación
negativa de las metaloproteinasas de la matriz (MMP) ) y el receptor PDGF-b.64 Garanich et
al.19 observaron que el esfuerzo cortante laminar (promedio ~ 15 dyn / cm2) suprimió la
migración de SMC mediante la regulación negativa mediada por NO de la actividad de MMP-2.
Sin embargo, otros estudios mostraron que el estrés por cizallamiento por flujo pulsátil
aumenta la migración de SMC in vitro29, 71. Un estudio de implante vascular in vivo indicó que
el flujo sanguíneo en vórtice que actúa sobre los CE induce significativamente la migración de
SMC mediante la activación de ERK1 / 2 y la cinasa de cadena ligera de miosina ( MLCK) .21
Garanich et al.18 revelaron que el esfuerzo cortante también podría inhibir la migración de
MFB y promover la migración de FB. La mejora de la migración de FB en respuesta al esfuerzo
de corte sugiere una condición fisiopatológica en la que los FB están expuestos a un esfuerzo
de corte de flujo intersticial mejorado durante la lesión arterial, lo que estimula su migración
hacia la íntima y acelera la formación de lesiones.

El flujo intersticial 3D promueve la movilidad SMC y FB.

El flujo de líquido en el intersticio tisular es muy bajo debido a la resistencia de las fibrillas y las
células ECM.41 Sin embargo, se ha demostrado que dicho flujo bajo puede afectar
significativamente la fisiología y la función celular.11,30,32,83–85,87,110 Wang y Tarbell110
informaron los primeros efectos 3D intersticiales f bajos en SMC in vitro. Demostraron que
existen diferencias dramáticas en las tasas de liberación de citoquinas entre las células en los
modelos 2D y 3D, lo que refuerza la importancia de estudiar el comportamiento vascular SMC
y FB en respuesta al flujo intersticial utilizando modelos 3D in vitro realistas. Recientemente,
para investigar las influencias del flujo intersticial en la movilidad SMC y FB, Shi y Tarbell
establecieron un ensayo de migración de células de flujo intersticial 3D utilizando un sistema
de cámara Boyden modificado.84,85,87 En estos estudios, el período de flujo (hasta 6 h) se
separó desde el período de migración (48 h) para minimizar los posibles efectos de la
quimiotaxis autóloga inducida por el flujo sobre la migración celular.17,85,87 Usando este
sistema 3D, han generado los siguientes hallazgos principales: (1) el flujo intersticial puede
promover SMC vascular vascular, FB, y motilidad de MFB en geles de colágeno mediante
regulación positiva de colagenasa intersticial de rata (MMP-13) 85; (2) el flujo intersticial de
alta intensidad suprime la motilidad de las células vasculares debido a una combinación de
efectos que incluyen una expresión mejorada del inhibidor tisular de la metaloproteinasa-1
(TIMP-1) y la apoptosis y necrosis celular85; (3) la regulación positiva inducida por el flujo de
MMP-13 está mediada por la activación de la proteína quinasa activada por mitógeno ERK1 / 2
(MAPK) y el factor de transcripción aguas abajo, activando la proteína-1 (AP-1),
específicamente c-Jun84; (4) el flujo intersticial también induce la activación de p38 MAPK,
pero parece que p38 MAPK no juega un papel importante en la expresión de MMP inducida
por flujo y la motilidad celular, 84 respaldado por un informe reciente56; (5) además, los HSPG
de glucocalix de la superficie celular detectan el flujo intersticial, mediando la activación de la
quinasa de adhesión focal (FAK) y el eje de señalización ERK1 / 287; y (6) finalmente, se
propuso un modelo conceptual de mecanotransducción en el que el glucocalix de la superficie
celular, con la cooperación de las adherencias de la matriz de células mediada por integrina y
la rigidez del citoesqueleto, detecta el flujo intersticial y activa el eje FAK-ERK, lo que lleva a la
regulación positiva de MMP-13 y la célula motilidad en 3D.87 Este es el primer estudio que
describe un mecanismo de mecanotransducción inducida por flujo en 3D. Debería ser un buen
punto de partida para comprender la mecanobiología relacionada con el flujo en la
remodelación vascular y la enfermedad, la diferenciación de células madre y tiene
implicaciones en la ingeniería de tejidos. En los estudios de flujo 2D, la tensión de corte
laminar mejora la migración de FB, pero inhibe la migración de MFB y SMC utilizando Matrigel,
gelatina o fibronectina como materiales de sustrato18,19,64. Otros estudios muestran que la
tensión de corte de flujo pulsátil 2D aumenta la migración de SMC in vitro. 29,71 En estudios
de flujo en 3D, se ha demostrado que el flujo intersticial puede aumentar la actividad de MMP
y promover la motilidad de los FB, MFB y SMC en geles de colágeno.85 Diferencias en el patrón
de flujo, nivel de tensión de corte, material de matriz y dimensión del sistema ( 2D vs. 3D)
indudablemente contribuyeron a estas diferencias. Además, en el sistema 3D más fisiológico,
las distintas adherencias célula-matriz, 10 y otros elementos como la estructura de la matriz, el
glicocalix superficial y la inmovilización pueden dar lugar a una mecano-señalización
amplificada43,68,87. Los mecanismos subyacentes de mecanotransducción aún no se han
definido. investigado más a fondo.

Limitaciones de los estudios actuales en 3D.

Los estudios 3D in vitro descritos anteriormente tienen limitaciones relacionadas con la

permeabilidad de la matriz. La permeabilidad del tejido es muy importante ya que controla el
transporte de masa a las células por difusión y convección, y el esfuerzo cortante en las células.
La permeabilidad depende fuertemente de la concentración del material de la matriz. La
permeabilidad de Darcy (Kp) es de aproximadamente 1028 a 10212 cm2 para geles de
colágeno de 2.5–45 mg / ml, 55,70,85,110, que es al menos dos órdenes mayor que en las
capas de la pared aórtica del conejo (10214 cm2) .41 Las bajas velocidades intersticiales
utilizadas en los estudios 3D fueron mayores a 0.5 lm / s, que también es sustancialmente más
alta que la velocidad del flujo transmural en la aorta normal (0.010.1 lm / s) .104,109 Sin
embargo, el esfuerzo cortante estimado en las células suspendidas (0.05–1.0 dyn / cm2) están
en el rango esperado para la aorta.85 Por lo tanto, la forma en que los SMC vasculares y los FB
responden al flujo en un modelo 3D con un esfuerzo cortante similar pero más permeabilidad
fisiológica, estructura matricial y velocidad de flujo siguen siendo interesantes , pero
desafiante, para explorar. Los componentes principales de la matriz intersticial de los medios y
la adventicia son el colágeno I y III, producido por SMC vasculares y FB.69,72 Sin embargo, las
fibras elásticas y los proteoglicanos también se presentan abundantemente en la matriz
intersticial.69,72,93 Por lo tanto, Sería de gran interés determinar las respuestas de los SMC
vasculares y los FB al flujo intersticial en un modelo mixto de ECM. Esto podría incluir
investigaciones de las respuestas de las células de la pared vascular al flujo intersticial
utilizando un modelo 3D cocultivado con EC o utilizando un vaso intacto o lesionado que
recapitulará fielmente el entorno in vivo.

CAMINOS DE MECANOTRANSDUCCIÓN INICIADOS POR FLUJO EN SMC.

Para comprender los mecanismos del desarrollo de la enfermedad vascular, es de gran

importancia desentrañar los mecanismos por los cuales las células de la pared vascular
perciben y transducen los estímulos de las fuerzas hemodinámicas (tensión de corte, tensión
cíclica y presión hidrostática) en señales bioquímicas intracelulares27,39. 46 Los estudios
sobre los efectos de cizalladura en las SMC revisadas anteriormente sugieren que los
receptores relacionados con la membrana celular, los canales iónicos, el glucocalix de la
superficie celular, así como las integrinas, son mecanosensores de las fuerzas de cizalla,
mientras que las NO, Ca2 +, las quinasas y las MAPK son señales de mensajería a los sensibles
al cizallamiento. genes que regulan las respuestas SMC incluyendo síntesis, secreción,
proliferación, apoptosis, diferenciación y migración. El flujo de fluido también puede regular la
contracción de SMC a través de la activación de la vía Rho-MLCP mediada por glucocalix.
Además, las superficies vasculares de SMC también contienen cilios primarios, que pueden
actuar como mecanosensores que regulan la entrada de Ca2 + y la migración de SMC en
respuesta a una interacción baja o celular-ECM.50 El desplazamiento de los cilios primarios y el
glucocalix por el flujo puede afectar los receptores mecanosensibles relacionados con la
membrana , canales iónicos, integrinas u otras estructuras. Estas vías de mecanotransducción
inducidas por cizallamiento en las SMC vasculares se resumen brevemente en la Fig. 4. En este
modelo, los HSPG de glucocalix de la superficie celular desempeñan un papel dominante en la
detección del estrés cortante laminar 2D para controlar la contracción SMC in vitro1 y en la
detección del flujo intersticial 3D para modular el fenotipo SMC83 y motilidad.87 La
contracción y migración celular requiere el desmontaje de la adhesión focal mediada por
integrina. Por lo tanto, en 2D, el glicocalix puede detectar las fuerzas de cizalladura en la
superficie apical de la célula y luego transmitirlas a las integrinas en el lado basolateral a través
del citoesqueleto.103,112 En 3D, por otro lado, ambas adherencias de la matriz celular
mediadas por integrinas y El glicocalix cubre toda la superficie celular, lo que puede amplificar
la mecanotransducción mediada por flujo del flujo intersticial con su esfuerzo cortante
relativamente pequeño.83–85,87 Sigue siendo interesante determinar si los cilios primarios
también detectan el flujo intersticial. Además, las vías de transducción de señales sensibles al
flujo de corte también pueden ser compartidas por el estiramiento y la presión.46 In vivo, las
SMC pueden estar expuestas a diferentes fuerzas hemodinámicas (corte, estiramiento y
presión) al mismo tiempo, por lo que estas fuerzas hemodinámicas pueden actuar en
concierto para regular las vías de señalización mecanosensibles que controlan la función
vascular y la enfermedad.

CONCLUSIONES Y DIRECCIONES FUTURAS.

Aunque los efectos de corte directo en SMC vasculares y FB no se han estudiado tan
extensamente como en EC y los mecanismos de mecanotransducción por los cuales los SMC
vasculares y FB detectan el flujo de fluido requieren más investigación, los datos acumulados
demuestran que los efectos directos del estrés por corte y el flujo intersticial en Las SMC y los
FB pueden desencadenar vías de señalización celular que conducen a alteraciones en las
consecuencias fisiopatológicas asociadas con la remodelación vascular y la enfermedad.
Llegamos a la conclusión de que después del daño endotelial, las alteraciones en el flujo de
fluido pueden ser detectadas directamente por SMC y FB y desencadenar muchas vías de
mecanotransducción que a su vez inducen cambios profundos en las propiedades y funciones
celulares, incluyendo secreción, proliferación, motilidad y contractilidad. La modulación del
flujo de fluidos del fenotipo SMC y FB de un estado inactivo a un estado más activado
eventualmente contribuye a la remodelación vascular y la enfermedad. A diferencia de los EC
que recubren la superficie luminal de la pared de los vasos sanguíneos, los SMC y FB residen en
un ECM 3D y normalmente no están expuestos al flujo sanguíneo, sino al flujo intersticial más
sutil. La orientación, la morfología y los contactos célula-célula y célula-matriz son bastante
diferentes entre SMC / FB y EC. Las estructuras utilizadas por las SMC y las CE para detectar el
flujo de fluidos tampoco son las mismas, aunque existen similitudes. Por ejemplo, las CE
pueden detectar el cizallamiento del fluido a través de un complejo de unión de células
celulares que contiene cadherina VE y PECAM-1,27,44 que no está presente en las SMC. Sin
embargo, tanto las CE como las SMC tienen un glucocalix que participa en la
mecanotransducción, y ambas utilizan integrinas para unirse a su ECM. Además, los fenotipos
de las SMC son muy plásticos en comparación con los de las CE. Estas diferencias y otras se
manifiestan en distintas respuestas de flujo de fluido entre entornos celulares 2D (EC) y 3D
(SMC / FB). Después del daño endotelial vascular, los flujos de cizalladura experimentados por
SMC y FB se asocian predominantemente con el flujo intersticial 3D. El cultivo 3D representa
mejor la fisiología in vivo de SMC y FB que el 2D. Por lo tanto, es más fisiológicamente
relevante investigar la función y el comportamiento de SMC y FB (por ejemplo, contracción,
proliferación, diferenciación y migración) en respuesta al flujo intersticial en modelos 3D más
sofisticados. Además, las CE cortadas tienen influencias significativas en la biología y función
de SMC. Sin embargo, la mayoría de los estudios de cocultivo han utilizado modelos de
cocultivo de contacto directo EC-SMC que omiten los efectos del flujo intersticial. Por lo tanto,
las SMC cultivadas en matriz 3D y las CE cocultivadas en la superficie de la matriz 3D imitarían
más fielmente las condiciones fisiológicas in vivo, lo que puede proporcionar mejores vistas de
la interacción entre las CE y las SMC bajo flujo laminar e intersticial. Además, además del
fluido bajo, el estiramiento mecánico y la presión también afectan las SMC y los FB. Por lo
tanto, una mejor comprensión de la mecanotransducción de baja inducida en SMC y FB junto
con otras fuerzas hemodinámicas puede proporcionar pistas para tratar enfermedades
vasculares, como aterosclerosis, formación de neoíntima y reestenosis, y tener implicaciones
en la ingeniería del tejido vascular.