Guía de Laboratorio – Laboratorio de Análisis Químico Instrumental

PRÁCTICA N° 03. ESPECTROFOTOMETRÍA ULTRAVIOLETA VISIBLE:

DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA POR ADICIÓN ESTÁNDAR
SANDRA LILIANA MOLINA CORREA

Universidad de La Sabana

Introducción

El hierro es un bioelemento que juega un importante papel en los procesos metabólicos de los animales y
humanos. Su función más representativa está relacionada con el transporte de oxígeno en la sangre, a
través de la hemoglobina, además de esto, el hierro puede estar presente en algunas enzimas que catalizan
reacciones de oxidación celular. En el organismo humano los órganos que presentan los niveles más altos
de este metal son el hígado y el bazo. Una baja concentración de este elemento en el cuerpo puede generar
algunas enfermedades, como la anemia. Para contrarrestar este problema, es común que estas personas
deban consumir suplementos como el sulfato ferroso.

En la presente práctica, se analizará una muestra comercial de sulfato ferroso, usando una técnica
espectrofotométrica y una curva de adición estándar, con el fin de determinar si la cantidad ofrecida de
sulfato ferroso por pastilla por el fabricante es o no correcta.

Reactivos

• Sulfato ferroso
• Sulfato ferroso amoniacal hexahidratado
• Buffer acetato pH=3,5
• Clorhidrato de hidroxilamina
• 1,10-fenantrolina monohidrata
• Agua destilada

Materiales

• Mortero con mazo (x1) • Pipeta graduada de 5 mL (x1)

• Balanza analítica (x1) • Pipeta aforada de 1 mL (x1)
• Vaso de precipitados de 100 mL (x2) • Pipeta graduada de 3 o 5 mL (x2)
• Papel Filtro (x1) • Celdas
• Vidrio de reloj (x1) • Espectrofotómetro de UV-VIS
• Embudo de filtración (x1) • Pipeta graduada de 5 mL (x1)
• Aro con nuez (x1) • Balón aforado de 100 mL (x1)
• Soporte universal (x1) • Vaso de precipitado de 50 o 100 mL (x2)
• Estufa (x1) • Pipeta pasteur (x1)
• Balón aforado de 100 mL (x1) • Balones aforados de 25 mL (x11)
• Balón aforado de 250 mL (x1) • Pipeta aforada de 5 mL (x1)
• Pipeta graduada de 2 mL (x1)
Procedimiento

Preparación de la solución stock problema

1. Tomar una pastilla de sulfato ferroso, reducir el tamaño de partícula triturando con un mortero con
mano
2. Pesar 68 mg del producto triturado en un vaso de precipitados de 100 mL
3. Adicionar cerca de 50 mL de agua destilada, agitar vigorosamente para llevar a cabo el proceso de
extracción.
4. Pesar un papel filtro seco y limpio
5. Filtrar la solución resultante en el punto 3
6. Lavar el sólido con pequeñas cantidades de agua destilada (máximo el volumen total de lavado 30
mL)
7. Secar el papel filtro y pesar
8. El filtrado resultante llevarlo a un balón aforado de 100 mL y completar a volumen con agua destilada
9. Etiquetar como SOLUCIÓN STOCK PROBLEMA

Preparación de la solución problema diluida

1. Tomar una alícuota de 4 mL de la SOLUCIÓN STOCK PROBLEMA

2. Transferir a un balón de 100 mL
3. Completar a volumen con agua destilada.
4. Etiquetar como SOLUCIÓN PROBLEMA DILUIDA

Preparación de solución patrón de hierro

Preparar 250 mL de una solución de 50 ppm de Fe+2 a partir de sulfato ferroso amoniacal hexahidratado

Preparación de la curva de adición estándar para la determinación de hierro

En balones aforados de 10 mL, adicionar las cantidades correspondientes de los reactivos a utilizar según
la tabla 1, después completar con agua destilada hasta el volumen correspondiente, homogenizar y dejar
reposar por 5 minutos para el desarrollo del color.

Tabla 1. Volúmenes de reactivos necesarios para la preparación de las soluciones para la curva de adición
estándar

Balón Volumen de (mL):

aforado
Slón problema* Slón patrón Hidroxilamina Buffer o-fenantrolina
N°
Blanco 0,0 0,0 0,4 1,0 1,0
1 2,0 0,0 0,4 1,0 1,0
2 2,0 0,1 0,4 1,0 1,0
3 2,0 0,2 0,4 1,0 1,0
4 2,0 0,3 0,4 1,0 1,0
5 2,0 0,4 0,4 1,0 1,0
6 2,0 0,5 0,4 1,0 1,0
7 2,0 0,6 0,4 1,0 1,0
8 2,0 0,7 0,4 1,0 1,0
9 2,0 0,8 0,4 1,0 1,0
10 2,0 1,0 0,4 1,0 1,0
* Solución problema diluida
Determinación espectrofotométrica de hierro

1. Realizar un espectro de absorción de la solución 9 o 10 (contra el blanco preparado), entre 400 y 700
nm
2. A partir del espectro obtenido, determinar la longitud de onda de máxima absorción
3. Medir la absorbancia de las soluciones preparadas (1-10) a la longitud de onda seleccionada en el
punto anterior

TEMAS DE CONSULTA

Los temas que el estudiante deberá consultar antes de realizar la práctica son:

- Consultar sobre la Ley de Lambert-Beer: definición, generalidades y las limitaciones de esta ley.
- Existen tres metodologías de cuantificación (métodos de calibración), realice un cuadro comparativo
de estas donde consigne la siguiente información:
a) Nombre de la metodología
b) Caso en el que se usa
c) Preparación de las soluciones
d) Elaboración de la gráfica
e) Forma de encontrar la solución del analito desconocido
f) Limitaciones que presenta
- Generalidades de la reacción que utilizaremos para el análisis espectrofotométrico.