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• Mantener una esmerada limpieza e higiene personal. Realizar la desinfección de
las manos cuando manipule: materias primas, residuos sólidos y canecas.
• Lavarse las manos, antes de comenzar su trabajo, cada vez que salga y regrese
al área asignada.
• Mantener las uñas cortas, limpias y sin esmalte, de ser necesario el uso de
guantes. No se permite usar anillos, aretes, joyas u otros tipos de accesorios
mientras el personal realice sus labores. No se permite el uso de cosméticos,
perfumes, cremas de manos y maquillaje
• No está admitido comer, beber o masticar cualquier objeto o producto.
• Usar vestimenta de trabajo que cumpla con los siguientes requisitos: bata blanca
de color claro (blanco) que permita visualizar su limpieza, con cierres o
cremalleras en lugar de botones u otros accesorios que puedan caer al alimento.
• Conservar el cabello recogido y cubierto totalmente mediante malla, gorro u otro
medio efectivo.
• Las personas que utilicen lentes deben asegurarse a la cabeza mediante bandas
cadenas u otros medios ajustables.
• El uso del celular está restringido dentro del laboratorio.
• Deje todos los equipos y mesas perfectamente limpios.
• Maneje los reactivos requeridos con precaución y siguiendo las indicaciones
dadas por el docente.
• Etiquete las muestras y reactivos preparados.
• Localice los extinguidores, mantas contra incendios, así como las salidas de
emergencia.
• Comunique al profesor cualquier anomalía, que, a su criterio, pueda ser peligrosa
en el laboratorio
• Manejar los solventes y ácidos en campana de extracción, usar guantes y lentes
protectores. Usar propipetas para pipetear ácidos, bases y solventes.
PRACTICA 1
CUANTIFICACIÓN DE BIOMASA Y CONSUMO DE SUSTRATO
Objetivo
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• Evaluar el crecimiento celular de un microorganismo y determinar el consumo de
sustrato.
Materiales
• Microorganismo a estudiar (preferiblemente bacterias de rápido crecimiento
como E. coli)
• Caldo nutritivo en earlenmeyer de 250 mL
• 1 L de reactivo DNS
• Glucosa
• Agua destilada
• Baño de hielo
• Espectrofotómetro y celdas
• Plancha de calentamiento
• Puntas micropipetas estériles
• Balanza analítica
• Centrífuga
• Vórtex
• Pinza
• 20 tubos de ensayo
• 2 gradillas
• 2 pipetas de 10 mL, 5 mL y 1 mL
• Micropipeta de 100-1000 µL
• Pipeteador
• 2 Beakers de 600 mL
• 2 balones aforados de 100 mL
• 3 Beakers de 50 mL
• 1 vidrio de reloj
• 1 espátula
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4. Una vez estériles los medios de cultivo, y con ayuda de un asa de cultivo, se
toma una muestra del microorganismo a utilizar en la práctica y se transfiere
al tubo de ensayo dispuesto con los cinco mililitros del medio de cultivo.
5. Incubar el microrganismo a 30 °C con una agitación orbital permanente de
aproximadamente 100 r.p.m hasta alcanzar la fase exponencial.
6. Una vez se llega a la fase exponencial, este volumen completo se utiliza como
inóculo del Erlenmeyer y se incuba a 30 °C con una agitación orbital
permanente de aproximadamente 100 r.p.m.
7. Con una periodicidad descrita por el docente encargado, se deben tomar 4 mL
de medio de cultivo y cuantificar la absorbancia con ayuda de un
espectrofotómetro (550 - 600 nm), utilizando como blanco el medio de cultivo
estéril que se almacena en los frascos pequeños.
8. Realizar curva de crecimiento del microorganismo graficando absorbancia en el
eje Y y tiempo en el eje x.
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7. Leer la absorbancia a 540 nm y graficar mg de glucosa/mL en el eje X y
absorbancia en eje Y. El factor de correlación debe ser superior a 0,97.
PRACTICA 2.
ELABORACIÓN Y ANÁLISIS DE UN VINO DE FRUTAS
Objetivo
• Obtener un metabolito primario (alcohol) a partir de una fermentación realizada
por la levadura de Saccharomyces cerevisiae en un mosto de fruta.
Materiales
• 1 kg de fruta
• 1 frasco de vidrio de boca para la fermentación
• Levadura comercial liofilizada
• Reloj Cubrebocas
• 1 espátula pequeña de acero inoxidable
• 1 asa bacteriológica
• 1 matraz Erlenmeyer de 500 mL
• agitador de vidrio
• pipetas volumétricas de 5, 10 y 25 mL
• 1 probeta de 100 mL
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• Dicromato de Potasio
• Ácido Sulfúrico concentrado
• Refractómetro
• Incubadora
• Cabina de flujo laminar
• Balanza
• Bisulfito de Sodio ortofenantrolina ferrosa
• Sulfato ferroso amoniacal (FeSO4(NH4 )2SO4)
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mismo balón; adicionar perlas de vidrio y adicionar unas gotas del
antiespumante. Ensamblar el equipo y destilar recibiendo el destilado en el
mismo matraz donde se midió la muestra, el cual debe permanecer en baño
de hielo.
2. Tomar 25 mL de disolución problema de etanol y colóquelos en un matraz
Erlenmeyer de 250 mL, que contiene 25 mL de disolución de dicromato de
potasio.
3. Deje reposar en un baño a 60°C durante a 15 a 20 min con el fin de que la
oxidación sea completa. Para la titulación de una solución en blanco, mida 25
mL de agua destilada y colóquelos en un matraz Erlenmeyer de 250 mL que
contenga 25 mL de disolución de dicromato de potasio. Deje reposar en un
baño a 60°C durante a 15 a 20 min para que en caso de que exista materia
orgánica en el agua, ésta se oxide por completo.
4. Titule con la disolución de sulfato ferroso amoniacal hasta una coloración
verde a la luz del día. Después añada dos gotas del indicador ortofenantrolina
ferrosa y continua la titulación hasta que la solución cambie del color azulado
a negro parduzco
5. La determinación del contenido de alcohol se lleva a cabo mediante la
ecuación:
𝐵
%𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚é𝑡𝑟𝑖𝑐𝑜 = 25 − 25 ×
𝐴
donde: B es el volumen gastado de sulfato ferroso amoniacal en el blanco y A
es el volumen gastado de sulfato ferroso amoniacal en la muestra.
PRACTICA 3.
EXTRACCIÓN DE ADN BACTERIANO
Objetivos:
• Comprender y analizar la metodología establecida para la extracción de ácidos
nucleicos
• Conocer el fundamento fisicoquímico de la extracción de ácidos nucleicos y su
importancia como herramienta analítica.
Materiales
• Sódiododecilo sulfato (SDS) al 10%
• Solución salina EDTA (SSE)
• Etanol 70%
• Alcohol isoamílico (grado analítico, 99.5%)
• Medio de cultivo: caldo LB (Luria Bertani)
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• Solución de NaCl al 4M
• Material microbiológico
• Cepa de Escherichiacoli cultivo ONb
• Incubadora
• Autoclave
• Centrifuga y microcentrifuga
• Espectrofotómetro (λ : 600 nm)
• Baño termostatado o Shaker con agitación
• Balanza analítica
• Mechero bunsen
• Vortex
• Baño de agua a 60 oC
• Micropipetas 200 μl y 1000 μl
• Puntas para micropipetas
• Espátula
• Gradillas para tubos de ensayo
• Pipetas estériles (5 y 10 ml)
• Pipeteador
• Tubos de ensayo cónicos para centrifuga de 20 ml
• Tubos de ensayo (10 ml)
• Elenmeyer (250 ml)
• Capilares de vidrio
• Vaso de precipitado (250 ml)
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8. Centrifuga por 8 min a 3000rpm y se elimina el sobrenadante nuevamente. Se
mezcla con 600 μl de etanol al 70% (Etanol Frio). Lavar por inversión por 5
min. Centrifugar, eliminar el sobrenadante y se deja el tubo boca abajo sobre
una toallita secando.
9. Disuelva el ADN en 700 μl de buffer TE con muy suave agitación.
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componente practico, en la fecha que él designa y debe presentar la siguiente
estructura:
• Portada
• Resumen: Breve resumen sobre el tema de las prácticas y la importancia en
el desarrollo de estas
• Revisión Bibliográfica: Realice un marco conceptual y teórico sobre cada una
de las prácticas
• Metodología: Realice el diagrama de flujo sobre los procedimientos realizados
para desarrollar las prácticas.
• Resultados y discusión: Cuantifique los resultados y preséntelos en tablas y
gráficas, argumente y explique con bases científicas las razones de los
resultados
• Conclusiones: Redacte de forma analítica las conclusiones más importantes
que quedan a partir de la evolución de los procesos biotecnológicos
realizados
• Referentes bibliográficos: Realice una lista de las fuentes consultadas,
teniendo en cuenta las normas APA 7ª edición.
• Todos los integrantes del grupo deben participar con sus aportes en el
desarrollo de la actividad.
• Antes de entregar el producto solicitado deben revisar que cumpla con todos
los requerimientos que se señalaron en esta guía para el desarrollo del
componente práctico.
• Solo se deben incluir como autores del producto entregado, a los integrantes
del grupo que hayan participado con aportes durante el tiempo destinado para
la actividad.
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• Realizar todas las recomendaciones que sugiere el tutor del componente
practico.
Tenga en cuenta que todos los productos escritos individuales o grupales deben
cumplir con las normas de ortografía y con las condiciones de presentación que se
hayan definido.
En cuanto al uso de referencias considere que el producto de esta actividad debe
cumplir con las normas APA
En cualquier caso, cumpla con las normas de referenciación y evite el plagio
académico, para ello puede apoyarse revisando sus productos escritos mediante la
herramienta Turnitin que encuentra en el campus virtual.
Las sanciones académicas a las que se enfrentará el estudiante son las siguientes:
a) En los casos de fraude académico demostrado en el trabajo académico o
evaluación respectiva, la calificación que se impondrá será de cero puntos sin perjuicio
de la sanción disciplinaria correspondiente.
b) En los casos relacionados con plagio demostrado en el trabajo académico
cualquiera sea su naturaleza, la calificación que se impondrá será de cero puntos, sin
perjuicio de la sanción disciplinaria correspondiente.
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4. Formato de Rúbrica de evaluación
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Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
entre 0 puntos y 2 puntos
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Quinto criterio de
evaluación: Nivel alto: El informe final de componente práctico se presenta de
forma clara, organizada, sin errores de redacción y usando
Criterios de forma: El apropiadamente las normas APA para las referencias.
informe final se Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
presenta de forma entre 12 puntos y 20 puntos
clara, organizada y
con el uso apropiado Nivel medio: El informe final de componente práctico presenta
de las normas APA. algunos errores de forma o no se usa apropiadamente las normas
Colaborativo APA para las referencias.
Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
Este criterio entre 3 puntos y 11 puntos
representa 20
puntos del total Nivel bajo: No presenta el informe final de componente práctico
de 140 puntos de Si su trabajo se encuentra en este nivel puede obtener
la actividad entre 0 puntos y 2 puntos
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