BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

LICENCIATURA EN QUÍMICO FARMACOBIOLOGO

MICROBIOLOGIA

ALUMNO: ALEJANDRO TEPOZ CARMONA

MATRICULA: 201854449

ACTIVIDAD 8

M.C. CARLOS CABRERA MALDONADO

PRIMAVERA 2020

FECHA DE ENTREGA: 31/05/2020

  Describe y utiliza de manera apropiada los conceptos sobre
metabolismo, enzimas, fuentes de carbono, fuentes de energía, rutas
metabólicas, factores de crecimiento y su aplicación en las pruebas de
laboratorio
Metabolismo: El término metabolismo se refiere al conjunto de reacciones
químicas que tiene lugar en una célula, tiene 3 funciones específicas y se divide
en 2 procesos
1. obtener energía química del entorno, almacenarla, para utilizar luego
en diferentes funciones celulares.
2. convertir los nutrientes exógenos en unidades precursoras de los
componentes macromoleculares de la célula bacteriana.
3. formar y degradar moléculas necesarias para funciones celulares
específicas, como por ejemplo, movilidad y captación de nutrientes.
1) Anabolismo: proceso de síntesis de constituyentes celulares a partir de
moléculas más sencillas. Requiere energía.
2) Catabolismo: proceso de degradación de compuestos orgánicos.
Produce energía.
 Aplicación: Determinar el metabolismo oxidativo o fermentativo de un
hidrato de carbono.

Enzimas: son catalizadores orgánicos que actúan por presencia y aceleran la

reacción (incrementan la velocidad en que se alcanza el estado de equilibrio en las
reacciones químicas)
 Aplicación: pruebas bioquímicas relacionadas con enzimas como las
fosfatasas o las hemolisinas

Fuentes de Carbono: es el lugar del que obtiene el carbono necesario para

transformarlo en los compuestos que necesite
 Aplicación: en la prueba citrato se identifican una única posible fuente de
carbono

Fuentes de energía: es el lugar de donde obtiene la energía necesaria para llevar

a cabo la transformación o degradación de los compuestos que necesite
  Aplicación: crear las condiciones necesarias para que crezcan los medios
de cultivo

Rutas metabólicas: En las bacterias se encuentran las 3 vías centrales del

metabolismo intermediario de los hidratos de carbono:
- la vía glucolítica o de Embden Meyerhof Parnas
- la vía de pentosa fosfato o shunt de las pentosas
- la vía de Entner-Doudoroff
 Aplicación: determinar el metabolismo oxidativo o fermentativo de un
hidrato de carbono.

Factores de crecimiento: Son sustancias que deben ser aportadas preformadas,

ya que la bacteria que las requiere no las puede sintetizar a partir de los nutrientes
más simples, por falla o ausencia de una vía metabólica
 Aplicación: Lactobacilus, Leuconostoc y otros son reconocidas por su
complejo requerimiento de factores de crecimiento (vitaminas)

 Definición de metabolismo.
Es el conjunto de reacciones y transformaciones químicas que tiene lugar en un
microorganismo para mantener su viabilidad. Permite obtener energía química y
almacenarla y luego utilizarla; convertir los nutrientes exógenos en unidades
precursoras de componentes macromoleculares de la bacteria y; formar y
degradar moléculas para funciones específicas.

 Ejemplos de enzimas microbianas (exoenzimas, endoenzimas,

constitutivas, inducidas).
Endoenzimas: tienen su fábrica dentro de la célula y cuya función es sintetizar
material celular y degradar los nutrientes que entraron gracias a las exoenzimas
 Ejemplos:
o Oxidasas
o Reductasas
 o Transaminsas

Exoenzimas: tienen su fábrica fuera de la célula y cuya función consiste en

efectuar cambios precisos en los nutrientes del ambiente externo para que puedan
ser transportados dentro de la célula
 Ejemplos:
o Amilasas
o Lipasas
o Proteasas
o Pectinasas
o Xilanasas
o Celulasas

Constitutivas: siempre son producidas por las células independientemente del

medio.
 Ejemplos:
o Hexoquinasa
o Fosfofructoquinasa
o Aldolasa
o Triosa fosfato Isomerasa
o Piruvato quinasa
o Enolasa

Adaptativas o inducidas: son producidas en la aparición de un sustrato

específico
 Ejemplos:
o Galactosidasa
o Penicilinasa

 Fuentes de carbono, energía.

Autótrofos: si su fuente de carbono son compuestos inorgánicos y la energía
proviene de la luz (energía radiante)
 Fuente: CO2
 Energía: Luz solar (energía luminosa/ radiante) y reacciones químicas
(quimiosíntesis)
Heterótrofos: si su fuente de carbono la obtienen de uno o más compuestos
orgánicos y la energía la obtienen por reacciones de óxido-reducción (energía
química)
 Fuente: reacciones de óxido-reducción
 Energía: carbohidratos, lípidos o proteínas (glucosa)

 Factores de crecimiento.
Factores de crecimiento: son compuestos orgánicos que son requeridos en muy
pequeñas cantidades y solo por algunas bacterias; requieren tomar uno o más
compuestos preformados del ambiente.
 Tiamina (B1)
 Biotina
 Piridoxina (B6)
 Cobalamina (B12)

 Analizar las principales diferencias bioquímicas y fisiológicas de las

bacterias.
Diferencias fisiológicas:
 Según su respiración se diferencian en:
o Anaerobios estrictos
o Anaerobios aerotolerantes
o Anaerobios facultativos
o Aerobios obligados
o Microaerofilos
 Según su vía metabólica se diferencian en:
o la vía glucolítica o de Embden Meyerhof Parnas
o la vía de pentosa fosfato o shunt de las pentosas
o la vía de Entner-Doudoroff

Diferencias bioquimicas:
 Según su mecanismo para liberar energía se diferencian en:
o Fosforilación a nivel de sustrato (fermentaciones)
o Fosforilación oxidativa en las respiraciones
o Fosforilación (durante la fotosíntesis)
  Según su forma de obtener energía y carbono se diferencian en:
o Autótrofo.
o Heterótrofo.
o Mixótrofo.
o Litotrofo.
o Organotrofo.
o Quimiotrofo
o Fototrofo.

 Interpretación de pruebas en el laboratorio, relacionadas con el

metabolismo bacteriano

DETECCIÓN DE ENZIMAS Y VÍAS METABÓLICAS

FERMENTACIÓN DE AZÚCARES
Se determina si la bacteria es capaz de fermentar un carbohidrato particular
(producción de ácidos acompañados o no de gases). Se aplica a bacterias con
metabolismo fermentador, ensayándose por separado diferentes carbohidratos. La
producción de ácidos se pone de manifiesto con un indicador ácido-base (púrpura
de bromocresol) y la de gases con una campanita Durham (tubo cerrado por uno
de sus extremos que se coloca invertido en medio de cultivo)
Viraje del indicador: indica producción de ácidos. Presencia de burbujas en la
campanita Durham, producción de gases
PRUEBA DE OXIDACION FERMENTACION (OF):
La utilización de los hidratos de carbono por microorganismos, tiene lugar
mediante dos posibles procesos: la fermentación o la oxidación. Algunas bacterias
pueden metabolizar un hidrato de carbono (manifestado por la producción de
ácido), sólo en condiciones aeróbicas, mientras que otras producen ácido en
forma aeróbica o anaeróbica.
Interpretación de los resultados:
 Amarillo Ácido
 Azul Alcalino
 Verde Sin cambio
ROJO DE METILO Y VOGES PROSKAUER.
Ambos utilizan el medio líquido de Clark y Lubs, y forman parte del test IMVIC
para enterobacterias, junto con el indol y el citrato.
 La prueba del rojo de metilo es positiva para las bacterias que fermentan
la glucosa a ácido láctico, acético, o fórmico. En este caso el indicador
añadido al medio vira a color rojo (pH<4,3). Si es negativa, el viraje es
amarillo.
 El Voges-Proskauer (VP) es una prueba para poner de manifiesto la
fermentación butilenglicólica, mediante la cual algunas bacterias
metabolizan el ácido pirúvico (procedente de la degradación de glucosa) a
acetoína (acetilmetilcarbinol). Al añadir el reactivo VP (alfanaftol y creatina
en medio alcalina) al medio de cultivo, la acetoína formada previamente se
convierte en diacetilo, de color rojo característico.
O.N.P.G.
Permite ver si las bacterias fermentan la lactosa. En tal caso el ONPG
(ortonitrofenil- galactósido) incoloro, se desdobla en galactosa y nitrofenol
(amarillo). Según esto, las bacterias se dividen en fermentadoras o no. Las
fermentadoras tienen los enzimas permeasa (que permite la entrada de lactosa en
la bacteria) y β-galactosidasa (que desdobla la lactosa en glucosa y galactosa).
Las no fermentadoras carecen de ellos. También hay fermentadoras lentas
(carecen de permeasa).
HIDRÓLISIS DEL HIPURATO.
La hipuricasa que poseen algunas bacterias hidroliza el hipurato de sodio, lo que
produce glicina y ácido benzoico. Una suspensión de bacterias se añade a una
solución de hipurato y se incuba 2 horas, añadiendo entonces el reactivo
(ninhidrina). La aparición de una coloración azul-violeta indica una reacción
positiva que revela la presencia de glicina, producto final de la hidrólisis del
hipurato. Se usa para diferenciar especies de Campylobacter y de Streptococcus.

UTILIZACIÓN DE UNA FUENTE ÚNICA DE CARBONO

CITRATO
Es uno de los test del IMVIC usado para diferenciar especies de enterobacterias
capaces de utilizar el citrato como única fuente de carbono. Se cultiva el
microorganismo en agar citrato de Simmons, que es un agar inclinado en tubo con
citrato de sodio y fosfato de amonio como fuentes de carbono y de nitrógeno
respectivamente, y azul de bromotimol como indicador de pH. Sólo las bacterias
capaces de metabolizar el citrato podrán crecer y liberarán iones amonio, lo
cual añadido a la eliminación del citrato (ácido) alcaliniza el medio y origina el
viraje del indicador, de verde a azul.

RELACIONADAS SOLO CON ENZIMAS

LECITINASA
Actúa sobre la lecitina. Se utiliza el agar yema de huevo, que se inocula e incuba
en anaerobiosis. Las colonias productoras de lecitinasa (Ej. Clostridium,
estafilococos) forman una zona opaca a su alrededor.
PRUEBA DE LA COAGULASA
Es la prueba principal para diferenciar Staphylococcus aureus (coagulasa
positivos) del resto de estafilococos (coagulasa negativos). La coagulasa es un
enzima que coagula el plasma sanguíneo, por desnaturalización de la fibrina; se
considera un factor de virulencia porque induce la agregación del plasma
alrededor de la bacteria, dificultando así la fagocitosis y la acción del
complemento. Se añade una suspensión de bacterias a un tubo pequeño con
plasma y se incuba a 37o C. Se observa la coagulación entre las 4 y 24 h.
FOSFATASAS
Se usa el agar PP (fosfato de fenolftaleína). Si la bacteria tiene fosfatasa, el enlace
fosfato se hidroliza y se libera fenolftaleína (indicador de pH), que en contacto con
vapores de amoníaco, tiñe la placa de rosa.
DESOXIRRIBONUCLEASAS (DNA-asas).
Algunas bacterias segregan nucleasas que hidrolizan el DNA. Para realizar la
prueba, se hace una estría gruesa en una placa de medio que contenga DNA. Se
revela después de incubar con HCl 0,1 N que precipita el DNA no hidrolizado. Es
positiva cuando aparece un halo transparente alrededor del crecimiento
bacteriano, que indica que se ha degradado el DNA en esa zona.
HEMOLISINAS
Producen hemólisis (destrucción de los hematíes), lo cual se observa en agar
sangre, que es un medio de cultivo muy utilizado en clínica. Se distinguen tres
tipos de hemólisis:
 Hemólisis completa o ß-hemólisis. Las bacterias lisan completamente los
hematíes formando halos claros alrededor de las colonias (Ej:
Streptococcus pyogenes).
 Hemólisis parcial o α-hemólisis. Los glóbulos rojos sólo se destruyen
parcialmente. Se forman halos traslúcidos verdosos, caso de los
estreptococos tipo viridans.
 No hemólisis (hemólisis gamma). Las bacterias no lisan los eritrocitos.
 Hacer mapa conceptual correspondiente a la unidad 8
Bibliografía:
Aquiahuatl, M., Pérez, M. (2004). Manual de prácticas del laboratorio de microbiología general. Mayo 18, 2020, de
Universidad Autónoma Metropolitana - Iztapalapa Sitio web:
https://uamenlinea.uam.mx/materiales/licenciatura/diversos/AQUIAHUATL_RAMOS_MARIA_DE_LOS_ANGELES
_Manual_de_practicas_de.pdf

Sanz, S. (2011). Prácticas de Microbiología. España: Universidad de la Rioja.

https://dialnet.unirioja.es/descarga/libro/100835.pdf

Castillo, J. Gurrola, A. Herrera, T. & Islas, Y. (2005). Introducción al Análisis Bacteriológico. Mayo 18, 2020, de
Escuela Nacional Preparatoria, UNAM Sitio web: http://www.ete.enp.unam.mx/IntroAnaBacter.pdf