Facultad de Ciencias de la Vida

Departamento de Ciencias Biológicas

BIOL252

Metabolismo bacteriano

Dr. Juan Carlos Velásquez M.

 Metabolismo
Todos los procesos bioquímicos que ocurren al interior de la célula

Productos de desecho
Nutrientes para
la síntesis

Anabolismo
(Biosíntesis)
Energía Energía
para biosíntesis para la movilidad,
transporte
de nutrientes
Macromoléculas y Catabolismo
otros componentes

Productos químicos, luz

(fuente de energía)
 Principios bioquímicos aplicados a la microbiología

Enzimas

H2O2 H2O + O2 > años

H2O2 E H2O + O2 < seg.

 Las enzimas son proteínas catalíticas (biocatalizadores) que disminuyen la energía

de activación requerida para que ocurra una reacción química.

Energía de activación: energía necesaria para juntar las moléculas reactantes

(sustratos) de la manera adecuada de modo que alcancen el estado de transición.
 Catabolismo. Obtención de energía a partir de glucosa

Ruta aeróbica

 Glicólisis o glucólisis.

 Ciclo de Krebs o ácidos tricarboxílicos (ATC)

Sistema de transporte de electrones y Fosforilación

Oxidativa
 Glicólisis

 Glicólisis ( lisis del azúcar)

– Degradación de glucosa (6C) a 2 piruvatos (3C)
 Ocurre en el citoplasma de procariontes y eucariontes.

• Ganancia neta 2ATP por cada molécula de glucosa

• Fosforilación Oxidativa con 2NADH produce 5 ATP
 Destinos del piruvato

Glicólisis Ácido Pirúvico

Glucosa
(piruvato)

Fermentación Respiración
anaeróbica aeróbica

Piruvato Piruvato Ciclo de Krebs

piruvato
lactato
descarboxilasa
deshidrogenasa
Acetaldehido Fosforilación
oxidativa
Lactato alcohol
deshidrogenasa

Etanol
CO2 + H2O

F. Láctica F. Alcohólica
 Ciclo de Krebs

 Oxidación completa y degradación

de glucosa y otras moléculas.

 común en bacteria aeróbica,

protozoos, mayoría de las algas, y
hongos.
 La oxidación de glucosa produce 2
moléculas de ácido pirúvico (2
moléculas de Acetil CoA).
 Por cada molécula de acetil-CoA,
el Ciclo de Krebs genera:
• 2 moléculas de CO2
• 3 moléculas de NADH
equivalente a 7,5 ATP
• 1 FADH2 equivalente a 1,5 ATP
• 1 GTP o 1 ATP
Transporte de electrones y fosforilación oxidativa

1 Glucosa = 32 ATP

Glicólisis = 7 ATP (considerando NADH)

Oxidación de piruvato = 5 ATP
Ciclo de Krebs = 20 ATP (considerando NADH y FADH2)
Respiración aeróbica y respiración anaeróbica

E. coli es capaz de realizar

ambos tipos de respiración,
dependiendo si esta
creciendo en presencia o
ausencia de oxígeno.

Aeróbica Anaeróbica
 Fermentación

• Permite obtener energía desde azucares y otras moléculas

orgánicas.
• No requiere oxígeno.
• No requiere el uso del ciclo de Krebs o cadena transportadora
de electrones.
• Usa una molécula orgánica como aceptor final de electrones.
• Permite la generación de baja cantidad de ATP
Fermentación alcohólica
 Fermentación láctica
 Fermentación usada por bacterias cariogénicas en la cavidad oral.
El lactato producido baja el pH lo que induce la desmineralización del
esmalte dental.

Lactato
deshidrogenasa

2 Lactato
Variabilidad de la fermentación en los microorganismos
 Clasificación según fuente de energía

Quimiotróficas o Fototróficas o
Quimiosintéticas: Fotosintéticas:
“Son aquellas que obtienen “Son aquellas que obtienen
su energía a partir de su energía captándola de la
reacciones químicas” luz solar”

E. coli (Enterobacteria) Oscillatoria (Cianobacteria)

 Clasificación según fuente de energía

Quimiotróficas o Quimiosintéticas:
a) Quimioorganotróficas

Quimioorgano: Sustancia química orgánica

(trophos: alimento)
“Obtienen su energía a través de la utilización
de sustancias químicas orgánicas”
 Clasificación según fuente de energía

Quimiotróficas o Quimiosintéticas:
b) Quimiolitotróficas

Quimiolito: Sustancia química inorgánica

(lithos: piedra; trophos: alimento)
Obtienen su energía a través de la utilización
de sustancias químicas inorgánicas”
 Clasificación según fuente de energía

Fotosintéticas o Fototróficas:

Membrana plasmática de una cianobacteria fotosintética

La luz solar aporta la energía requerida para el proceso de transferencia de
electrones en la membrana, generándose un gradiente de protones que se
acopla a la síntesis de ATP.
 Anabolismo

Síntesis de componentes estructurales

Según su fuente de carbono, las bacterias se clasifican en:

 Heterótrofas:
Obtienen el carbono a partir de moléculas más complejas. Ej.:
hidratos de carbono, aminoácidos, lípidos.

 Autótrofas:
Obtienen el carbono a partir de moléculas simples. Ej.: CO2, CH4

La gran mayoría de las bacterias de interés clínico son heterótrofas

Anabolismo. Biosíntesis de macromoléculas
 Anabolismo. Fijación de CO2
Ciclo de Calvin: Es realizado
por todas las bacterias
fototróficas.
 Anabolismo. Fijación de moléculas simples
Fijación de Fósforo (P)

Fotofosforilación: Formación de ATP desde ADP y Pi durante la

fotosíntesis.

Fosforilación Oxidativa: Formación de ATP desde ADP y Pi durante la

cadena transportadora de electrones.

Fosforilación a Nivel de Sustrato: Durante la glicólisis

1,3-Bisfosfoglicerato + ADP 3-Fosfoglicerato + ATP

Gliceraldehido-3-P + Pi + NAD+ 1,3-Bisfosfoglicerato + NADH + H+

 Anabolismo. Fijación de moléculas simples

Fijación de Azufre (S)

ATP
SO42- H2S

H2S + Serina Cisteína + H2O

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Crecimiento bacteriano

Dr. Juan Carlos Velásquez M.

División bacteriana. Fisión binaria

Se requiere coordinación espacial y

temporal (secuencial) en la síntesis
de macromoléculas:

DNA
Proteínas
Hidratos de Carbono
Lípidos

Reflejado (poblacionalmente)
por un aumento en el número
de organismos presentes
 Definiciones

 Crecimiento: Aumento del número de individuos en una población de

microorganismos (Implica un aumento de la biomasa del microorganismo).

Velocidad de crecimiento: Crecimiento de un microorganimo por unidad de

tiempo.

Tiempo de generación (g): Tiempo requerido para que se formen dos células
hijas a partir de una célula parental (Implica la duplicación de todos los
componente estructurales de la célula). Es el tiempo necesario para que la
población microbiana se duplique. Este tiempo es distinto para cada especie y
depende de las condiciones de cultivo (Ej: 20 min para Escherichia coli; 24
horas para Mycobacterium tuberculosis).
Crecimiento exponencial (logarítmico)
 Curva de crecimiento bacteriano

 Fase lag: Crecimiento lento (etapa de acondicionamiento ambiental)

 Fase exponencial o logarítmica: Crecimiento bacteriano a máxima capacidad
Fase estacionaria: Detención del crecimiento, no del metabolismo (estrés,
hambruna)
 Fase de decaimiento: Muerte celular (agotamiento del cultivo)
 Medición del crecimiento bacteriano
1.- Recuento total de células:
Conteo directo bajo el microscopio usando una muestra (diluida) de cultivo
bacteriano y una cámara de recuento calibrada (Petroff-Hausser).

14 células.
Factor de dilución:
1.250.000
Recuento total:
14 X FD
17.500.000

Este método no discrimina la viabilidad de las bacterias en la muestra.

 Medición del crecimiento bacteriano

1) Recuento total de células

DESVENTAJAS

 Las células muertas normalmente no se distinguen de las células vivas

(Existen excepciones que requieren tinciones y microscopio
especiales).
 Las células pequeñas son difíciles de ver al microscopio y algunas de
ellas probablemente no se cuenten.
 Se requiere tiempo y habilidad para conseguir precisión por este
método.
 Se requiere un microscopio de contraste de fases cuando la muestra no
está teñida.
 No es un método recomendable cuando la suspensión de células está
muy diluida.
 Crecimiento bacteriano. Colonia bacteriana

S. aureus

S. aureus

S. aureus

Colonias de
S. aureus

S. aureus
 Medición del crecimiento bacteriano
2.- Recuento de células viables (o Recuento viable):
2.1.- Dilución de la muestra y siembra (“plaqueo”) sobre medio sólido o
siembra de la muestra incluida en el medio sólido dependiendo del volumen
de muestra.
Medición del crecimiento bacteriano

2.- Recuento de células viables:

Dilución seriada de la muestra en
medio o buffer estéril y “plaqueo”
sobre medio sólido.
 Medición del crecimiento bacteriano
2) Recuento de células viables (vivas)

VENTAJAS
 En condiciones adecuadas, es un método sensible
Se pueden contar bacterias específicas gracias a la los medios selectivos
y diferenciales

DESVENTAJAS
El número de colonias no depende sólo del tamaño del inóculo.
También depende de:
 El medio de cultivo
 Las condiciones de incubación
 Tiempo de incubación
 No siempre las colonias son del mismo tamaño: Las colonias pequeñas
pueden ser ignoradas
 Medición del crecimiento bacteriano

Medición espectrofotométrica, fotométrica o turbidimétrica de

un cultivo bacteriano líquido

Este método no discrimina la viabilidad de las bacterias en la muestra

Medición del crecimiento bacteriano

3) Medición espectrofotométrica

A turbidez muy alta se pierde precisión

 Medición del crecimiento bacteriano

3) Medición espectrofotométrica

VENTAJAS
 Esta técnica no distorsiona a las muestras
 Generalmente muy precisas
 Fácil, rápido y barato

DESVENTAJAS
 No discrimina entre células vivas y muertas
 El crecimiento celular es una estimación de la biomasa
 A elevadas concentraciones celulares (alta turbidez) se
pierde precisión
 Tipos de cultivo. Cultivo en “batch”

1) Cultivo Batch o de medio no renovado: Cultivo en Tubos. Cambios

notables en el medio de cultivo, sobretodo en estadíos tardíos del
crecimiento
 Tipos de cultivo. Cultivo continuo
2) Cultivo Continuo o de medio renovado: Cultivo de volumen constante al
cual se le añade medio fresco.
Cuando se alcanza el equilibrio, el número de células y el estadío metabólico
se mantienen constantes (ESTADO DE EQUILIBRIO).

Quimiostato
Para cultivo continuo
Factores que afectan el crecimiento bacteriano

 Temperatura
 Salinidad
 pH o acidez
 Disponibilidad de oxígeno
 Temperatura

Consecuencias moleculares de la temperatura en el crecimiento bacteriano

Las reacciones Las reacciones

enzimáticas van enzimáticas
aumentando su ocurren a la
velocidad de máxima velocidad
reacción. posible.

Congelación de la Desnaturación de
membrana; el proteínas; colapso
transporte es tan de la membrana
lento que no hay citoplasmática;
crecimiento. lisis térmica.
 Temperatura

 Psicrófilos: Temperatura óptima baja (<1 a 15ºC)

 Mesófilos: Temperatura óptima en rango medio (25 a 42ºC)
 Termófilos: Temperatura óptima alta (50 a 70ºC)
 Hiper termófilos: Temperatura óptima muy alta (80 a >100ºC)
 Salinidad

 No halófilos: No toleran ni siquiera concentraciones moderadas de sal.

 Halotolerantes: Toleran concentraciones moderadas de sal
 Halófilos: Leves (1 a 6% NaCl) y Moderados (6 a 15% NaCl).
 Halófilos extremos: 15 a 30% NaCl.
Acidez (pH)

Saliva (6,75-7,25)
 Organismos según su requerimiento de oxígeno

Grupo Relación con el O2 Metabolismo Ej.

Aerobios
Estrictos Requerido Respiración aeróbica Micrococcus
luteus
Facultativos No requerido (Mejor con O2) Respiración, fermentación Escherichia
coli
Microaerofílicos Requerido (Bajos niveles) Respiración aeróbica Spirillum
volutans

Anaerobios
Aerotolerantes No requerido (No mejoran con O2) Fermentación Streptococcus
pyogenes
Estrictos Dañina o Letal Respiración, fermentación Methanobacterium
formicicum
 Organismos según su requerimiento de oxígeno

Resazurina
(Indicador de presencia de oxígeno)

(a) Aeróbica
(b) Anaeróbica
(c) Facultativa
(d) Microaerofílica
(e) Anaerobio aerotolerante

Tioglicolato (reacciona
con el oxigeno del aire y
lo reduce a H2O)

Medio de cultivo con un poco de agar (semisólido), resazurina y tioglicolato

 Respiración. Formas tóxicas del oxígeno

 Estas moléculas tóxicas se generan durante el metabolismo normal de

las bacterias (Respiración aeróbica).
Los radicales superóxido (O2-) e hidroxilo (HO•) reaccionan rápidamente
oxidando diversas macromoléculas orgánicas como lípidos, proteínas y
ácidos nucleicos.
 Esta oxidación provoca la destrucción de estructuras biológicas, como
membranas, complejos multiproteicos, DNA, etc.
 Defensa contra formas tóxicas del oxígeno

La presencia de enzimas capaces de degradar los derivados tóxicos del O2

le permite a un determinado microorganismo utilizar esta molécula como
aceptor final de electrones durante el proceso de la respiración aeróbica.

Prueba de la presencia de
catalasa: Colonia suspendida
en agua oxigenada (30%)

( 2H2O2  2H2O + O2 )
 Anaerobiosis

Jarra Anaeróbica (GasPack)

Diseñada para el crecimiento de bacterias anaerobias.
Mecanismo hermético, que posee un catalizador químico que
consume todo el oxígeno presente dentro del recipiente.
 Anaerobiosis
Capnofilia
Cámara Anaeróbica
 Medios de cultivo

Requisitos de los medios de cultivo y condiciones de cultivo

 Esterilidad

Tener todos los nutrientes esenciales (agua, fuente de nitrógeno,

fuente de carbono, sales minerales, micronutrientes, vitaminas, etc.)

 Cumplir con requisitos físicos: temperatura (37ºC), pH neutro (7.0 - 7.2

), condición atmosférica (10% CO2)

 Estar protegidos del medio ambiente (Evitar su contaminación con

microbiota ambiental y/o comensal)
 Esterilización

Autoclave
 Esterilización

Filtración

Normalmente el tamaño de poro es 0.22 µm - 0.45 µm

Mismo método útil para cosechar cultivos poco densos

 Esterilización

Radiación