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AZÚCAR. Métodos de análisis microbiológico en el azúcar refinada

AZÚCAR. Métodos de análisis microbiológico en el azúcar refinada

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NORMA TÉCNICA NTP 207.028-2
PERUANA 2005
Comisión de Reglamentos Técnicos y Comerciales-INDECOPI
Calle de La Prosa 138, San Borja (Lima 41) Apartado 145 Lima, Perú
AZÚCAR. Métodos de análisis microbiológico en el
azúcar refinada
SUGAR: Methods of assay microbiologycal in refined sugar
2005-08-04
5ª Edición
R.0065-2005/INDECOPI-CRT.Publicada el 2005-09-03 Precio basado en 17 páginas
I.C.S.: 67.180.10 ESTA NORMA ES RECOMENDABLE
Descriptores: Azúcar, método microbiológico, azúcar refinada
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ÍNDICE
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ÍNDICE i
PREFACIO ii
1. OBJETO 1
2. REFERENCIAS NORMATIVAS 1
3. CAMPO DE APLICACIÓN 2
4. DEFINICIONES 2
5. REQUISITOS 4
6. HIGIENE 5
7. PRINCIPIOS 5
8. DILUYENTES, MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS 6
9. APARATOS 11
10. MUESTRAS 12
11. PROCEDIMIENTO 13
12. EXPRESIÓN DE RESULTADOS 14
13. ANTECEDENTES 15
ANEXO A 17
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PREFACIO
A. RESEÑA HISTÓRICA
A.1 La presente Norma Técnica Peruana ha sido elaborada por el Comité
Técnico de Normalización de Azúcar y sus derivados, mediante el sistema 2 u ordinario,
durante los meses de julio del 2001 a febrero del 2005, utilizando como antecedentes a
los que se mencionan en el capítulo correspondiente.
A.2 El Comité Técnico de Normalización de Azúcar y sus derivados,
presentó a la Comisión de Reglamentos Técnicos y Comerciales – CRT, con fecha
2005-04-08, el PNTP 207.028-2:2005 para su revisión y aprobación, siendo sometido a
la etapa de Discusión Pública el 2005-06-03. No habiéndose presentado observaciones
fue oficializada como Norma Técnica Peruana NTP 207.028-2:2005 AZÚCAR.
Métodos de análisis microbiológicos en el azúcar refinada, 5ª Edición, el 03 de
setiembre del 2005.
A.3 Esta Norma Técnica Peruana reemplaza a la NTP 207.028:1987. La
presente Norma Técnica Peruana ha sido estructurada de acuerdo a las Guías Peruanas
GP 001:1995 y GP 002:1995.
B. INSTITUCIONES QUE PARTICIPARON EN LA ELABORACIÓN
DE LA NORMA TÉCNICA PERUANA
Secretaría Colegio de Ingenieros del Perú - Filial
La Libertad
Presidente Roberto Acosta Jarama - Empresa
Agroindustrial Laredo S.A.A.
Secretario Noé Costilla Sánchez- Colegio de
Ingenieros del Perú - Filial La Libertad
ENTIDAD REPRESENTANTE
Colegio de Ingenieros del Perú - Adela Rodríguez Paredes
Filial La Libertad
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Agroindustrial Paramonga S.A. Marino Rodríguez Valverde
Empresa Agroindustrial Casa Grande S.A. Juan Pichén Saavedra
Complejo Agroindustrial Cartavio S.A Jaime Cabellos Vargas
Cía. Peruana del Azúcar San Jacinto Virgilio Rosell Dioses
Empresa Agroindustrial Tumán S.A. Oscar Samamé Nevado
Empresa Agroindustrial Pucalá S.A. Lorenzo Melgarejo Casimiro
Empresa Azucarera Andahuasi S.A Dante Barzola Cámara
Ministerio de Agricultura Dacio Muñoz Alva
INDECOPI José Alvarez Castañeda
Embotelladora Latinoamericana S.A. Víctor Quispe Carranza
Industrial Cartavio S.A. Fredy Chávez Cruzado
Universidad Nacional del Santa Gilbert Rodríguez Páucar
CERPER S.A. José Valdivia Ilizarbe
SAT - SAC Diana Quispe Ramírez
Universidad Nacional de Trujillo Carlos Vásquez Blas
Instituto del Azúcar del Perú Ketty Vásquez Santiago
Ministerio de Agricultura SENASA Ulises García Armas
Facultad de Ciencias Agrarias Luis Marquez Villacorta
Universidad Particular Antenor Orrego
SGS del Perú Ricardo Saavedra Zapata
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NORMA TECNICA NTP 207.028-2
PERUANA 1 de 17
AZÚCAR. Métodos de análisis microbiológico en el azúcar
refinada
1. OBJETO
Esta Norma Técnica Peruana establece los métodos de análisis microbiológico, por el
método de vertido en placas (oficial), para determinar los siguientes microorganismos en el
azúcar refinada:
- Microorganismos aerobios mesófilos viables
- Mohos y levaduras
- Enterobacteriáceas:
- Coliformes totales
- E. Coli
- Salmonella sp.
- Esporas termófilas
- Totales
- Flat Sour
- Anaeróbicas no productoras de H
2
S
- Anaeróbicas productoras de H
2
S
2. REFERENCIAS NORMATIVAS
No hay normas especificas, ni disposiciones, que sean citadas como referencia en el presente
texto que constituyan requisitos de esta Norma Técnica Peruana.
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NORMA TECNICA NTP 207.028-2
PERUANA 2 de 17
3. CAMPO DE APLICACIÓN
Esta Norma Técnica Peruana se aplica a la determinación de bacterias aerobias mesófilas
viables, levaduras, mohos, enterobacteriáceas (coliformes totales, E. Coli y Salmonella) y
esporas termófilas en azúcar refinada.
4. DEFINICIONES
Para los propósitos de esta Norma Técnica Peruana se aplican las siguientes definiciones.
4.1 azúcar: Es el producto sólido cristalizado obtenido de los jugos de la caña
de azúcar (Saccharum sp.) o de remolacha (Beta vulgaris L. variedad rapa), mediante
centrifugación de la masa cruda.
Al estado puro el azúcar es un hidrato de carbono denominado sacarosa cuya fórmula
general es C
12
H
22
0
11 .
4.2 azúcar refinada: Es el azúcar obtenida mediante procedimientos
industriales de refinación del azúcar crudo por carbonatación, fosfatación o intercambio
iónico.
Hay varias clases o grados de azúcar refinada y éstas son:
− Azúcar refinada farmacopea
− Azúcar refinada industrial
− Azúcar refinada doméstica
4.2.1 azúcar refinada farmacopea: Es un azúcar refinada de alta pureza
inodora, estable al aire y en solución neutra.
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NORMA TECNICA NTP 207.028-2
PERUANA 3 de 17
4.2.2 azúcar refinada industrial: Es aquel azúcar refinada usada en el ámbito
industrial y que reúne condiciones de pureza suficientes para tal empleo y que se definen
en sus características.
4.2.3 azúcar refinada doméstica: Es aquel azúcar refinada de menor grado de
pureza, definida por su estándar y que es apta para el consumo humano.
4.3 bacterias mesófilas: Son las que tienen su crecimiento óptimo entre 20 ºC
y 45 ºC. La temperatura de incubación seleccionada es un promedio para un crecimiento
óptimo. Las condiciones favorables para el crecimiento de amplio espectro de bacterias son
establecidas por el uso de medios de cultivo general.
4.4 levaduras y mohos: Son microorganismos, que forman colonias a 30 ºC en
un medio selectivo a pH bajo (<5) o en presencia de un antibiótico. El mismo medio
soporta el crecimiento de levaduras y mohos e inhibe el crecimiento de bacterias.
4.5 enterobacteriáceas: Familia de bacterias lactosa + y lactosa – utilizadas
como indicadores de contaminación.
4.6 recuento de colonias: Es la enumeración de unidades formadoras de
colonia (U.F.C.). Los resultados son reportados en U.F.C./10 g.
4.7 vertido en placas: Estas son placas de agar las cuales han sido inoculadas
por mezclar cantidades conocidas de muestra diluida con medio de agar líquido (47 ºC ± 1
ºC).
4.8 bacterias termofílicas formadoras de esporas: Las bacterias termofílicas
formadoras de esporas pueden ser seleccionadas porque sus endosporas son resistentes al
calor. Las células de bacterias formadores de esporas morirían después de un periodo de
ebullición de 5 minutos a 100 ºC y el crecimiento de las endosporas sería estimulado.
4.9 bacterias formadoras de mucílago: Estas son bacterias que crecen en
substratos conteniendo sacarosa y forman cápsulas brillantes, especialmente las cepas de
Bacillus, Streptococcus y Leuconostoc.
4.10 esterilización: Acción y efecto de esterilizar.
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NORMA TECNICA NTP 207.028-2
PERUANA 4 de 17
4.11 esterilizar: Destrucción total de las formas viables y esporuladas de
microorganismos. La elección del método depende de la naturaleza física del Material que
va a ser esterilizado.
5. REQUISITOS
5.1 Los azúcares refinados deberán cumplir los siguientes requisitos:
TABLA 1 - Requisitos microbiológicos del azúcar refinada doméstica expresados en
U.F.C./10 g (unidades formadoras de colonias)
n m M C
- Numeración de bacterias aerobias mesófilas viables 5 0 < 200 2
- Numeración de levaduras 5 0 < 50 2
- Numeración de mohos 5 0 < 10 2
- Detección de Enterobacteriáceas 5 Ausencia en 10 g 0
TABLA 2 - Requisitos microbiológicos del azúcar refinada industrial expresados en
U.F.C./10 g (unidades formadoras de colonias)
Tipo 1
Azúcar refinada industrial n m M C
- Numeración de bacterias aerobias mesófilas viables 5 0 < 200 2
- Numeración de levaduras 5 0 < 10 2
- Numeración de mohos 5 0 < 10 2
- Detección de Enterobacteriáceas 5 Ausencia en 10 g 0
- Numeración de esporas termófilas totales 5 50 150 3
- Numeración de esporas termófilas “Flat Sours” 5 10 75 3
- Detección de esporas anaeróbias termófilas no
productoras de H
2
S 5 0/6* 4/6* 3
- Numeración de esporas anaeróbicas termófilas
productoras H
2
S 5 1 5 2
* tubos
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NORMA TECNICA NTP 207.028-2
PERUANA 5 de 17
Donde:
n = Es el número de unidades de muestra que deben ser examinadas de un lote de
alimentos, para satisfacer los requerimientos de un plan de muestreo particular.
m = Límite menor de microorganismos.
M = Es un criterio microbiológico que en un plan de muestreo separa calidad
marginalmente aceptable de calidad defectuosa. Valores mayores a “M” son
inaceptables.
c = Es el número máximo permitido de unidades de muestra defectuosa. Cuando se
encuentran cantidades mayores de este número el lote es rechazado.
6. HIGIENE
Se recomienda que el producto regulado por las disposiciones de esta NTP se prepare de
conformidad con las secciones I al X del Código Internacional recomendado de prácticas:
Principios Generales de Higiene de los Alimentos del Codex Alimentarius.
7. PRINCIPIO
7.1 Para bacterias aerobias mesófilas viables, levaduras y mohos
Alícuotas diluidas de las muestras son mezcladas con volúmenes pequeños de un agar
fundido y tibio (47 ºC) en placas de Petri. Estas placas luego son incubadas y las colonias
que desarrollan son contadas.
El medio de cultivo es selectivo y específico para cada microorganismo.
7.2 Para enterobacteriáceas
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NORMA TECNICA NTP 207.028-2
PERUANA 6 de 17
Muestras pesadas de azúcar son adicionadas a un medio líquido de enriquecimiento para
enterobacterias. Son incubadas a 37 ºC por 20 h a 24 h. La presencia de turbidez es
consecuencia del crecimiento bacteriano, esta muestra se siembra por estría en placas de
agar específico y se incuba a 37 ºC por otras 20 h a 24 h. Las colonias de color rojo con
halo de precipitación rojiza se consideran tentativamente como pertenecientes a la familia
de enterobacteriáceas. Con pruebas bioquímicas se determinan la presencia o ausencia de
enterobacterias.
7.3 Para bacterias termófilas formadoras de esporas
Alícuotas de la muestra diluida son mezcladas con volúmenes pequeños de agar fundido
enfriado en placas de Petri. Se usa un medio de cultivo selectivo para bacterias termófilas.
Se incuban las placas y se cuentan las colonias que desarrollan.
7.4 Para bacterias formadoras de mucílago
Alícuotas diluidas de la muestra son mezcladas con el medio de cultivo selectivo líquido en
placas de Petri e incubadas cuando el medio de agar ha solidificado.
Material de vidrio estéril y una técnica aséptica se emplea en el desarrollo de estos
métodos.
8. DILUYENTES, MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS
8.1 Agua destilada estéril autoclavada a 121 ºC por 15 minutos.
8.2 Medios de cultivo
8.2.1 Para bacterias aerobias mesófilas viables
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NORMA TECNICA NTP 207.028-2
PERUANA 7 de 17
- Agar Nutriente (1 L)
Ingredientes: g/l
Extracto de carne 1
Extracto de levadura 2
Peptona 5
Cloruro de sodio 5
Agar 15
pH 7,5
- Medio para recuento en placa (PCA) (1L)
Ingredientes: g/l
Peptona 5
Extracto de levadura 2,5
Glucosa 1
Agar 12
pH 7
8.2.2 Para levaduras y mohos
Utilizar uno de los tres medios siguientes:
- Agar Mosto ( 1L)
Ingredientes : g/l
Extracto de malta 15
Peptona 0,78
Maltosa 12,75
Dextrina 2,75
Glicerol 2,35
Sulfato de Potasio hidrogenado 1,00
Cloruro de amonio 1,00
Agar 15,00
pH 4,8
- Agar Extracto de levadura –glucosa- cloranfenicol (1 L)
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NORMA TECNICA NTP 207.028-2
PERUANA 8 de 17
Ingredientes: g/l
Extracto de levadura 5
Glucosa 20
Cloranfenicol 0,1
Agar 15
pH 6,6
NOTA: La oxitetraciclina puede ser usada en lugar del cloranfenicol. La oxitetraciclina es sensible al
calor, por lo que deberá ser adicionada al medio justo antes de su uso, en forma de solución
esterilizada por filtración.
- Agar micofílico (1 L)
Ingredientes: g/l
Peptona fitona 10
Glucosa 10
Agar 16
pH 4,0
NOTA: Ajustar el pH a 4,0 por adición al 15 ml, de ácido láctico estéril al 10 % (v/v) por cada litro de
medio estéril diluído antes de plaquear.
8.2.3 Para enterobacteriáceas
- Caldo de Enriquecimiento para enterobacteriáceas (según Mossel)
Ingredientes: g/l
Peptona 10
Glucosa 5
Fosfato monohidrógenodisódico 8
Fosfato monopotásico dihidrógeno 2
Bilis de Buey desecada 20
Verde brillante (solución acuosa
al 0,5 %, m/v) 3 cm
3
ó 0,015 mg
pH 7,3
NOTA: Este medio se utiliza a doble concentración. Para lo cual se duplica las cantidades de
ingredientes.
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NORMA TECNICA NTP 207.028-2
PERUANA 9 de 17
- Agar bilis lactosa – glucosa rojo neutro cristal violeta
Ingredientes: g/l
Extracto de levadura 3
Peptona de carne 7
Cloruro sódico 5
Sales biliares # 3 1,5
Lactosa 10
Glucosa 10
Agar 15
Rojo neutro 0,03
Cristal violeta 0,002
pH 7,4
- Agar Mac Conkey
Ingredientes: g/l
Peptona de caseina 17
Peptona de carne 3
Cloruro de sodio 5
Lactosa 10
Mezcla de sales biliares 1,5
Rojo neutro 0,03
Cristal violeta 0,001
Agar 13,5
8.2.4 Para bacterias termófilas formadoras de esporas
- Agar dextrosa triptona (1 L)
Ingredientes: g/l
Triptona (tripticasa) 10
Dextrosa 5
Púrpura de bromocresol 0,04
Agar 12
pH 7
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NORMA TECNICA NTP 207.028-2
PERUANA 10 de 17
- Agar sulfito (1 L)
Ingredientes: g/l
Triptona 10
Sulfito sódico (anhidro) 1
Agar 20
NOTA: Adicionar 10 ml de una solución de citrato férrico al 5 % para 1 litro y distribuir en tubos a
razón de 15 ml por tubo.
- Caldo infusión de hígado (1 L)
Ingredientes: g/l
Infusión de hígado de ternera 500
Triptona o peptona 10
Almidón soluble 1
Fosfato dipotásico 1
pH 7,6
- Shapton Agar (1 l)
Ingredientes: g/l
Extracto de carne 3
Peptona 5
Extracto de levadura 1
Púrpura de Bromocresol 0,25
Agar 15
pH 7,5
8.3 Para bacterias formadoras de mucílago
- Medio de Weman (1 L)
Ingredientes: g/l
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NORMA TECNICA NTP 207.028-2
PERUANA 11 de 17
Azúcar crudo 40
Cloruro de sodio 0,5
Sulfato de Magnesio 0,1
Sulfato ferroso 0,01
Tiza precipitada 10
Fosfato ácido disódico 2
Agar 20
pH 5,0
- Medio de McClesky-Faville (1 L)
Ingredientes: g/l
Triptona 10
Extracto de levadura 5
Azúcar crudo 100
Agar 20
pH 6,5
8.4 Oxitetraciclina.
8.5 Desinfectante para el área de trabajo.
9. APARATOS
9.1 Ambiente de trabajo estéril.
9.2 Autoclave: Para la esterilización de medios de cultivo, aguas y material de
desecho a 121 ºC ± 1 ºC.
9.3 Incubadora: Para la incubación de placas inoculadas a 30 ºC ± 1 ºC, 37
ºC ± 1 ºC y (44 ºC a 55 ºC) ± 1 ºC, según el análisis.
9.4 Horno: Para la esterilización de material de vidrio a 200 ºC.
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NORMA TECNICA NTP 207.028-2
PERUANA 12 de 17
9.5 Balanza de laboratorio: Para pesar medios de cultivo, reactivos y muestras
de azúcar, de 0 g a 220 g.
9.6 Potenciómetro: Para ajustar a ± 0,1 unidades de pH a 25 ºC (medios de
cultivo y soluciones).
9.7 Estufas eléctricas: Para la preparación de medios de cultivo.
9.8 Equipo contador de colonias: Para la obtención de resultados.
9.9 Mechero de Bunsen: Para mantener la esterilidad del área durante la
realización de los análisis.
9.10 Placas de Petri: De 90 mm a 100 mm de diámetro, estériles de vidrio o
plástico.
9.11 Frascos: Estériles para la toma de muestras.
9.12 Pipetas graduadas: 1 ml, 5 ml para la distribución de muestras y 10 ml
para las diluciones.
9.13 Matraces Erlenmeyer: Graduados, de 200 ml para la preparación de
muestras.
9.14 Tubos de prueba: Para la preparación de diluciones.
9.15 Equipo de baño-maría: Para mantener los medios de cultivo a temperatura
de 47 °C, para uso inmediato.
9.16 Cápsulas metálicas y espátulas: Para pesar muestras, medios de cultivo y
reactivos.
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NORMA TECNICA NTP 207.028-2
PERUANA 13 de 17
10. MUESTRAS
Tomar muestras representativas de 200 g (peso mínimo) en frascos estériles. Retener las
muestras testigo por un período de por lo menos un mes después de realizado el análisis.
11. PROCEDIMIENTO
11.1 Preparación del ambiente
Limpiar y desinfectar el área de trabajo antes de comenzar el análisis.
Marcar las placas de Petri estériles con fecha, muestra y tipo de medio.
11.2 Preparación del medio
Medio de agar: Siguiendo las instrucciones del productor cuidadosamente, rehidrate el
medio con agua destilada o desionizada. Coloque el medio en frascos de vidrio y esterilice
a 121 ºC por 15 minutos.
Los medios para uso inmediato después de esterilizados deben enfriarse a 47 ºC en baño
maría y ser depositados en placas de Petri. Alternativamente debe permitírseles solidificar
y ser almacenadas en oscuridad entre 0 ºC a 5 ºC por un periodo máximo de 1 mes. Los
medios pueden ser refrigerados para su utilización posterior.
11.3 Preparación de material de vidrio
Esterilizar frascos, matraces, placas y pipetas en el equipo de esterilización en seco (170 ºC
a 180 ºC) durante 1 hora.
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NORMA TECNICA NTP 207.028-2
PERUANA 14 de 17
11.4 Preparación de la muestra
En forma aséptica pesar 10 g de azúcar en cristales y colocar en un matraz de 200 ml de
capacidad, agregar agua estéril hasta la marca de 100 ml. Agitar vigorosamente hasta
disolver.
11.5 Inoculación e incubación
Tomar dos placas estériles y pipetear 1 ml de la solución en cada placa. Si es necesario
prepare una de la suspensión inicial (10
-1
) adicionando 1 ml a 9 ml de agua estéril en el
tubo de prueba quedando series de 10
-2
, 10
-3
, etc y poner la muestra en placas y el medio.
Adicionar aproximadamente 15 ml de medio de cultivo diluido y enfriado a cada placa y
mezclar con la muestra con movimientos rotatorios, permitir que la mezcla solidifique.
Preparar una placa control conteniendo el medio de cultivo para chequear la esterilidad.
Invertir las placas e incubar a 30 ºC por 48 h a 72 h.
12. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
- Para bacterias aerobias mesófilas viables
Contar las colonias en cada placa usando el equipo cuenta colonias. Para placas que
muestren más de 200 colonias examine las diluciones. Esta técnica no es útil cuando las
placas tienen menos de 10 colonias y se tendría que usar el método de Membranas
filtrantes inmediatamente.
- Para levaduras y mohos
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NORMA TECNICA NTP 207.028-2
PERUANA 15 de 17
Contar las colonias de levadura de cada placa conteniendo no más de 150 colonias usando
el equipo cuenta colonias. Las levaduras son opacas, blancas, amarillas o rosadas, mientras
que los mohos forman un micelio el cual frecuentemente es blanco, con esporas negras,
marrones o verdes. Para placas con recuentos altos, examine la dilución.
12.1 Recuento en placa
Σc
= U.F.C./g de azúcar
(n
1
+ 0,1 n
2
) d
Σc = Suma de colonias contadas sobre todas las placas.
n
1
= Nº de placas contadas en la primera dilución.
n
2
= Nº de placas contadas en la segunda dilución.
d = Dilución de la cual fue obtenido el primer recuento
Ejemplo: Fueron incubadas dos placas de Petri por dilución
Dilución 10
-1
1ra Placa 97 U.F.C.
2da Placa 110 U.F.C.
Dilución 10
-2
1ra Placa 35 U.F.C.
2da. Placa 46 U.F.C.
97 + 110 + 35 + 46 = 288 = 1309 g UFC
(2 + 0,1 x 2) x 10
- 1
0,22
Por 10 g de azúcar el resultado es: 1,3 x 10
4
U.F.C./10 g
13. ANTECEDENTES
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NORMA TECNICA NTP 207.028-2
PERUANA 16 de 17
13.1 ICUMSA GS 2/3 – 43 (1998) Determinación de Bacterias Mesófilas
Totales. Recuento en productos de azúcar refinado por el método de vertido en placas –
Oficial.
13.2 ICUMSA GS 2/3 – 47 (1998) Determinación de levaduras y mohos en
productos de azúcar refinado por el método de vertido en placas.
13.3 ICUMSA(Tentativo) Detección de Enterobacteriáceas
Sétima recomendación, 21 reunión de (1994).
Detección de patógenos (Salmonella)
13.4 ICUMSA. GS 2/3 – 49 (1998) Determinación de Bacterias Termofílicas
formadoras de esporas en productos de azúcar refinado por el método de vertido en placas
o el método de Membrana Filtrante (Oficial)
13.5 ICUMSA GS 2/3 – 45 (1998) Determinación de Bacterias formadoras de
mucílago. Recuento en productos de azúcar refinado por el método de Vertido en placas o
método de membrana Filtrante (Tentativo).
13.6 NTP 207.028:1987 Métodos de Ensayo Microbiológicos en el
Azúcar Refinado.
13.7 NTP 207.032:2005 Métodos de Ensayo Microbiológicos en el
Azúcar Refinado con uso de membranas
Filtrantes
13.8 NTP 207.050-1:2005 AZÚCAR. Azúcar rubia. Determinación y
recuento de microorganismos
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NORMA TECNICA NTP 207.028-2
PERUANA 17 de 17
ANEXO A
(INFORMATIVO)
DIAGRAMA DE PROCEDIMIENTO -
DETERMINACIÓN DE SALMONELLA
Muestra 25 g
Pre-enriquecimiento en medio líquido no selectivo
Agua peptonada bufferada, 225 ml, 37 ºC, 16 h - 20 h
Enriquecimiento selectivo en medio líquido
10 ml en medio selenito cistina, 0,1 ml en medio R.V.
37 ºC, 18 h – 24 h 42 ºC, 18 h – 24 h
Aislamiento
Plaquear sobre
Medio selectivo sólido
Agar (BPLS) Agar Verde Brillante-rojo de fenol
Agar (XLD) Agar Xilosa-lisina, desoxicolato
37 ºC, 24 h (48 h si es necesario)
Identificación
Seleccionar las colonias, por forma y
5 características de las colonias o de cada medio
selectivo, rayar sobre la superficie de placas con Agar nutriente
previamente secadas
37 ºC, 18 h – 24 h
Confirmación Confirmación
Bioquímica Serológica
Interpretación de resultados
Cepas las cuales son consideradas Salmonella o que pueden ser Salmonella
serán enviadas a un Centro de referencia para Salmonella para su tipificación
definitiva

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