UNIVERSIDAD CATÓLICA “NUESTRA SEÑORA DE LA ASUNCIÓN”

CAMPUS UNIVERSITARIO DEL GUAIRÁ

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD-CARRERA DE MEDICINA
Cá tedra de Microbiología – Parte Prá ctica

PRACTICA NRO 1

NOMBRE Y APELLIDO: Oliver Euribiades González Espínola CÓDIGO: Y 17199

GRUPO NRO: G6 DIA Y FECHA: 04/04/2022

MATERIALES, INSUMOS, REACTIVOS Y EQUIPOS UTILIZADOS EN UN

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

MÉTODOS DE ELIMINACIÓN DE MICROORGANISMOS Y DESECHO

BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

OBJETIVOS:

1. Conocer los diferentes materiales, insumos, reactivos y equipos utilizados en

un laboratorio de Microbiología y el modo de manipularlos
2. Diferenciar los diferentes métodos de eliminación de microorganismos
utilizando diferentes productos químicos y físicos
3. Identificar las partes y funciones de un autoclave
4. Identificar los diferentes tipos de medios de cultivo y su utilidad
5. Conocer y considerar las normas de bioseguridad y de comportamiento en un
laboratorio de Microbiología
6. Valorar la importancia de evitar la contaminación de los medios de cultivo
como de los materiales que deben permanecer estériles durante los
procedimientos
7. Valorar el trabajo en equipo

ESTRATEGIA DE EVALUACIÓN: lista de cotejo, pruebas escritas sobre la práctica,

entrega, presentación y defensa de los resultados obtenidos al final de la práctica

FUNDAMENTO DEL ENSAYO:

Es necesario que el estudiante que se inicia con los procedimientos microbiológicos,

conozca todos los materiales, insumos, reactivos y equipos que se utilizan en un
laboratorio de Microbiología así como el modo de manipularlos y operarlos, como
también los cuidados que se deben tener en cuenta para evitar accidentes. Se dará
énfasis en el procedimiento de uso del autoclave, el microscopio y la estufa de

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esterilización y cultivo. El estudiante debe no solo La preparación de los medios de

cultivos requiere la operación correcta del autoclave como equipo fundamental e
indispensable en el laboratorio de Microbiología y el mejor método de eliminación de
microorganismos. En esta primera práctica el estudiante será adiestrado en el
manejo de estos equipos y de los instrumentales más utilizados: placas de Petri,
ansas bacteriológicas, balanza, etc., además de valorar el respeto a las normas de
bioseguridad, considerando que se estará trabajando con microorganismos vivos
potencialmente infecciosos.

MARCO TEÓRICO

Un autoclave es una máquina que utiliza la combinación de alta presión y vapor

caliente con una temperatura por encima de la de ebullición del agua, con el fin de
transferir el calor a los microorganismos que se encuentran en los artículos
colocados dentro de él. Fue inventado en 1879 por Charles Chamberland, el primer
autoclave era esencialmente una olla de presión. Y al igual que la olla a presión, el
autoclave ha pasado por innumerables mejoras de diseño en los últimos siglos.
Desde las primeras máquinas básicas y mecánicas, hasta las computarizadas de
esterilización

En la actualidad, los hospitales, laboratorios y consultorios médicos utilizan

autoclaves para esterilizar equipos sólidos, instrumentales quirúrgicos, suministros,
líquidos y desechos, etc. Aunque los autoclaves vienen en una variedad de tamaños
y modelos, el principio básico sigue siendo: aprovechar el poder de la presión y el
vapor a altas temperaturas para matar a los microorganismos, desnaturalizando
todas sus proteínas y destruyendo toda la arquitectura estructural del
microorganismo, incluyendo las esporas.

Los tres parámetros a tener en cuenta inherentes al autoclave son la temperatura

de 121ªC, la presión de 1,3 a 1,5 atm y el tiempo de 20 a 30 minutos. Estos
parámetros pueden variar de acuerdo del tipo de material que se desea esterilizar,
aunque dichas variaciones son mínimas

Controles de esterilización

Existen dispositivos de distinta naturaleza que sirven como indicadores de la calidad

de la esterilización realizada. Los más simples son productos químicos que cambian
de color a 121ºC. Se comercializan dentro de sobres, o en la superficie de cintas. Se

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utilizan también monitores biológicos como controles de esterilización. Consisten en

determinados microorganismos con una tolerancia conocida al método que se está
empleando. Las esporas de Bacillus stearotermophilus, por ejemplo, tienen una
tolerancia conocida al calor húmedo. Se colocan ampollas con suspensión
bacteriana o tiras impregnadas con esporas en lugares estratégicos en el interior del
autoclave. Como regla general, los portadores de esporas deben colocarse en el
centro del paquete de mayor carga, o en aquellos lugares dentro de la carga con
posibilidades de no alcanzar la temperatura de esterilización. Cuando se abren los
paquetes o recipientes luego de ser esterilizados, la ampolla con su contenido o la
tira asépticamente colocada en un caldo de cultivo, se incuban durante 24 a 48
horas. Si la esterilización fue eficiente no deberá haber desarrollo en estos cultivos.
Así mismo existen otros monitores biológicos para esterilización con calor seco,
irradiación con rayos gamma, óxido de etileno etc., eligiendo las especies
bacterianas a utilizar según su susceptibilidad conocida para cada procedimiento.
Los autoclaves modernos están equipados con termómetros y manómetros que
producen un registro continuo y permanente de las temperaturas en el interior del
aparato.
La utilización de controles químicos se presentan en forma de cintas reactivas que
se adhieren al material a esterilizar. La ventaja de usar un indicador químico es que
dan una lectura inmediata y, junto con las mediciones físicas (presión, temperatura
y tiempo) proporcionan la primera indicación que se han alcanzado las condiciones
del proceso de esterilización. Están diseñados para reaccionar solo cuando se
exponen a condiciones químicas y físicas específicas, como el vapor saturado, la
temperatura y la presión. Estos indicadores químicos son sustancias tales como
tintas, ceras y soluciones químicas que mediante una reacción química cambian su
aspecto cuando se exponen al proceso de esterilización, normalmente de incoloro a
un color gris a negro. Los indicadores químicos son específicos para cada proceso
de esterilización; esto quiere decir por ejemplo que, si un Indicador químico está
diseñado para el control de la esterilización por vapor, no puede ser usado para el
control de esterilización por calor seco.

MATERIALES, REACTIVOS E INSTRUMENTALES:

 Ansas bacteriológicas
 Heladera
 Balanza
 Varilla de vidrio

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 Vaso de precipitado
 Placas de Petri
 Tubos de 5, 10 ml con tapa a rosca
 Gradillas
 Calentador eléctrico
 Autoclave
 Botellas de esterilización 250, 500, 1000 ml
 Cintas de control químico de esterilización
 Esporas de Bacillus stearotermophilus
 Cinta autoclave
 Medios de cultivos: Agar Base Sangre, Agar McConkey, Agar Müeller-Hinton,
Agar SS, Agar CLED, TSI, LIA, UREA, MIO, CITRATO, SIM.

BIOSEGURIDAD:

Se debe tener especial cuidado en los siguientes puntos:

 Especial cuidado, atención y control al operar con el Autoclave. El manómetro

debe ser observado periódicamente de tal manera que no sobrepase la
presión de 1,5 atm
 El calentador eléctrico que se utilizará para calentar y disolver los medios
deben controlarse antes de su uso, pues es frecuente que se encuentre
averiado en su sistema eléctrico y generar un corto circuito
 Mechero: Si es mechero de Bunsen manipular correctamente la perilla de la
válvula de cierre/apertura del flujo de gas. Si es mechero con alcohol, evitar
los derrames ubicando en un lugar que no esté bajo la manipulación
constante de ansas ansas y placas.
 Placas de Petri y otros materiales de vidrio: si son de vidrio manipularlos con
cuidado para evitar roturas
 Cultivos bacterianos: sean líquidos o sólidos, para ser eliminados deben ser
previamente autoclavados.
 En casos de derrame, primero desinfectar con solución de hipoclorito de sodio
y luego limpiar.
 Luego de realizar cualquier procedimiento microbiológico, lavarse bien las
manos con agua y jabón. Luego desinfectarse con alcohol de 70 grados.

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PROCEDIMIENTO:

1. Cerciórese de que el nivel de agua del autoclave se encuentre según el

volumen requerido
2. Introduzca los materiales a esterilizar en la rejilla del autoclave
3. Tape y gire los tornillos de seguridad para un cierre hermético
4. Cierre la válvula de escape sin que constituya un cierre completo para permitir
la salida del exceso de vapor que se encuentra bajo exceso de presión
5. Regule el peso de la válvula auxiliar para mantener la presión una vez que
llegue a 1,3 atmósferas
6. Apague el interruptor luego de 20 minutos
7. Deje despresurizar abriendo suavemente la válvula principal hasta la
despresurización completa
8. Abra la tapa del autoclave, deje que el resto del vapor se elimine por completo
9. Extraiga la rejilla y luego los materiales con un paño limpio para evitar
quemaduras
10. Controle la cinta reactiva de control químico de esterilización
11. Cierre la tapa del autoclave y deje limpio el lugar de práctica
12. Guarde en lugar seco y cerrado los materiales esterilizados listos para su uso
o en heladera en caso de medios de cultivo

RESULTADOS CON EVIDENCIAS FOTOGRÁFICAS:

MICROSCOPIO ANSAS
OPTICO AUTOCLAV BACTERIOLOGICOS DESCARTEX
E

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ERLEN MEYER - PLACA DE AGAR EN SANGRE

CONCLUSIÓN:

Al termino de la práctica podemos concluir que, el conocimiento de los métodos de

eliminación de microorganismos es de suma importancia para evitar el uso de
instrumentos contaminados en un procedimiento que pueden ocasionar alguna
infección en el lugar de la intervención, además consideramos que el método más
efectivo para esterilizar en los hospitales y laboratorio es el autoclave, ya que el
calor húmedo provoca la desnaturalización y coagulación de proteínas, fluidización
de lípidos.

Hemos podido también identificar los distintos materiales empleados en el

laboratorio como también conocer las normas de bioseguridad para garantizarnos
seguridad ante riesgos o infecciones derivadas de la exposición o manejo de
agentes infecciosos.

Logramos poder conocer las ventajas del uso de los marcadores químicos (tintas,
ceras y soluciones), que gracias a una reacción química cambian su aspecto cuando
se exponen al proceso de esterilización.

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FIRMA Y SELLO DEL INSTRUCTOR:

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