ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE

CHIMBORAZO
INFORME DE PRACTICA DE LABORATORIOS
ASIGNATURA MICROBIOLOGIA
Dra. Nelly Guananga

INFORME DE PRÁCTICA N° 4

CULTIVO EN CALDO Y REVITALIZACIÓN

INTEGRANTES: CÓDIGOS:

CHICAIZA MISHELL 3562

MAJI EDISON 3488
MITA KATERIN 3609
MONTERO ANABEL 3481
YUMISACA NADIA 3758

GRUPO No.: 5
PARALELO: CUARTO “B”
FECHA DE ENTREGA: 2021-01-08

1. OBJETIVOS:
GENERAL

Conocer sobre los caldos de cultivos, el proceso de revitalización, y la verificación

del crecimiento de bacterias y sus características en diferentes medios
ambientales.

ESPECÍFICOS
▪ Conocer los conceptos y procesos de elaboración de cultivo en caldo y
revitalización.
▪ Preparar caldo de cultivo casero, toma de muestra e inoculación.
▪ Evaluar el crecimiento de bacterias en diferentes medios ambientales.
 2. RESULTADOS
2.1. TABLA RESULTADOS Y OBSERVACIONES

FOTOS TIPO DE FOTOS TIPO DE FOTOS TIPO DE FOTOS TIPO DE

MUESTRA (fuente) FOTO CULTIVO CULTIVO CULTIVO CULTIVO OBSERVACIONES

0 horas T= 20°C 24 horas T=21°C 48 horas T=29°C 72 horas T=24°C

Este caldo en condiciones anaerobia y

con sal añadida presentó luego de 3

Anaerobia – caldo días sin luz, pero con el calor del sol

con NaCl que entraba desde la ventana, un

crecimiento bacteriano muy ligero y
llegamos a decir esto porque su
turbidez era de (+), sí se lograba
observar el otro lado del recipiente,
Además que las partículas que se
Muestra de garganta
hallaban dentro del vaso estaban
sedimentadas.
Anaerobio – solo El vaso en el que no se añadió NaCl y
caldo se encontraba en condiciones
anaerobias presentó una solución un
poco más turbia (++) pero sin mucha
diferencia a la que sí contenía NaCl

Aerobio – caldo Este vaso contenía caldo con la

con NaCl muestra, más sal y estaba en un
ambiente aerobio tenía una turbidez
de (++) además de un poco de
sedimento en el fondo del vaso como
los anteriores vasos ya observados.

Aerobio – solo Este último vaso tubo una turbidez de

caldo (+++), es decir las bacterias habían
logrado su crecimiento.
2.2. CUESTIONARIO

- En la sección de lectura, y otros materiales informativos de la materia

aprendió que hay varios tipos de medios que se pueden usar para cultivar
bacterias. Investigue tres tipos de caldos definidos:

a) ¿Cuáles son los tres tipos de caldo definidos?

▪ Caldo nutritivo: Para el cultivo de microorganismos no fastidiosos en
agua, heces y otros materiales. (DIBICO, 2014)
▪ Caldo Infusión Cerebro Corazón (BHI): Para el crecimiento de cocos
patógenos y otros microorganismos, incluidas las bacterias aeróbicas y
anaeróbicas de gran variedad de materiales clínicos y no clínicos.
(CONDALAB, 2019)
▪ Caldo Sabouraud: Este medio de cultivo es utilizado para cultivo de mohos
y levaduras patógenas y no patógenas. (CONDALAB, 2019)
b) ¿Cómo se elaboran los diferentes tipos de caldos definidos?
- CALDO NUTRITIVO
PREPARACIÓN: Rehidratar 23 g del medio en un litro de agua destilada.
Reposar 10 a 15 minutos. Calentar agitando frecuentemente hasta el punto de
ebullición durante 1 minuto para disolverlo por completo. Esterilizar en
autoclave a 121ºC (15 lbs de presión) durante 15 minutos. Enfriar
aproximadamente a 45ºC. Vaciar en cajas de Petri estériles. Conservar en
refrigeración de 2 a 8ºC. (DIBICO, 2014)
- CALDO INFUSIÓN CEREBRO CORAZÓN (BHI)

PREPARACIÓN: Suspender 37 gramos del medio en un litro de agua

destilada. Mezclar bien y disolver calentando con agitación frecuente. Hervir
durante un minuto hasta disolver por completo. Dispensar en recipientes
apropiados y esterilizar a 121 ºC durante 15 minutos. El medio preparado debe
almacenarse a 2-8 ºC. Para obtener mejores resultados el medio debe usarse el
mismo día, de no ser así, debe calentarse en agua hirviendo para expulsar el
oxígeno disuelto y dejar enfriar antes de usar. (CONDALAB, 2019)

- CALDO SABOURAUD

PREPARACIÓN: Suspender 30 gramos del medio en un litro de agua

destilada. Mezclar bien y disolver con calor y con agitación frecuente. Hervir
 durante un minuto hasta su completa disolución. Dispensar en recipientes
apropiados y esterilizar en autoclave a 118-121 ºC durante 15 minutos. NO
SOBRECALENTAR. (CONDALAB, 2019)

c) ¿Son los más adecuados para diferentes tipos de bacterias?

Los caldos definidos que mencionamos con anterioridad son adecuados para
el estudio de bacterias, pero el más adecuado es el Caldo Infusión Cerebro
Corazón (BHI) nos sirve para el crecimiento de cocos patógenos y otros
microorganismos, incluidas las bacterias aeróbicas y anaeróbicas de gran
variedad de materiales clínicos y no clínicos como, por ejemplo, Bacillus spp,
Lactobacillus spp, etc.

- Los medios definidos tienen cantidades medidas de ingredientes, mientras

que los medios no definidos tienen alguna variación en algunos de los
ingredientes. Según su investigación sobre medios definidos e indefinidos:

a) ¿Uno de ellos es mejor que el otro?

Se considera que un medio indefinido es mejor que el definido ya que se
encuentran algunos microorganismos nunca se han cultivado en medios
definidos. Y estos son escogidos a veces, en función del precio o por
necesidad.
b) ¿Se pueden usar indistintamente?
No se pueden utilizar indistintamente porque un medio definido tendrá
cantidades conocidas de todos los ingredientes en cambio un medio indefinido
tiene algunos ingredientes complejos en donde se puede cultivar
microorganismo no cultivados en medios definidos.
c) ¿Se adapta mejor a determinadas bacterias que a otras?
Medio indefinido.

- Las bacterias anaerobias aerotolerantes se dispersan uniformemente por

todo el caldo de cultivo.

a) ¿Cuáles son algunos ejemplos de bacterias anaeróbicas aerotolerantes?

- Clostridium carnis
- Clostridium histolyticum
- Clostridium tertium. (Quintero, s.f)
 b) ¿Cuáles son algunos ejemplos de bacterias anaeróbicas?
- Peptostreptococcus
- Propionibacterium
- Bacteroides
- Micrococcus
- Clostridium. (Corrales, Antolinez , Bohórquez, & Corredor, 2015)

- Las bacterias aeróbicas forman una capa en la parte superior del medio, por
lo que pueden estar más cerca de la fuente de oxígeno.

a) ¿Cuáles son algunos ejemplos de bacterias aeróbicas?

- Bacilos.
- Mycobacterium tuberculosis.
- Nocardia.
- Lactobacillus.
- Pseudomonas.
- Staphylococcus (facultativo)
- Especies de Enterobacteriaceae (facultativas) (Barmatec, 2016)
- Investigue más sobre el caldo de Luria:

a) ¿Como se hace el caldo de Luria?

- Rehidratar 20 g del medio en un litro de agua destilada.
- Reposar 10 a 15 minutos.
- Calentar agitando frecuentemente hasta completa disolución.
- Distribuir en tubos de ensayo o en matraces erlenmeyer.
- Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lbs de presión) durante 15-30 minutos.
- Conservar en refrigeración de 2º a 8ºC.
b) ¿Qué características lo hacen tan popular?
El caldo luria o caldo LB contiene peptona de caseína y extracto de levadura
que proporcionan al medio los nutrientes necesarios para el desarrollo óptimo
de la mayoría de los microorganismos. El cloruro de sodio ayuda a mantener
el equilibrio osmótico. (Norma Interna DIBICO, 2016)
c) ¿Hay otros caldos nutritivos que funcionen tan bien como el caldo de Luria?
Existen caldos nutritivos, pero no funcionan como el caldo de luria o sus
acrónimos.
- ¿En el caldo de cultivo se puede observar la morfología de las bacterias?

Los cultivos en caldo son básicamente una forma para que se desarrollen y
mantengan los cultivos de bacterias y si se pueden observar sus distintas
morfologías ya que dentro del cultivo están en constante reproducción.

- ¿Qué tipo de bacterias según los textos, crecen en los diferentes cultivos y
condiciones realizados en la parte experimental?

Un medio de cultivo es una técnica de laboratorio, que consta de un gel o

una solución que contiene los nutrientes necesarios para permitir, en condiciones
favorables de pH y temperatura, el crecimiento de virus, microorganismos,
bacterias aeróbicas de los cultivos con mayor profundidad crecen solamente en
la superficie estas son Pseudomonas sp, Bacillus. (Vargas, 2016)

- ¿Según la temperatura de incubación, que tipo de bacterias se desarrollaron?

Durante el proceso de incubación lo que se logró observar fueron Bacterias Gram

positivas y Gram negativas a una temperatura de 29ºC.

- ¿Cuáles son los nutrientes que contiene el caldo de cultivo preparado?

El Caldo Nutriente se utiliza para el cultivo general de una amplia variedad de

microorganismos, se usa en muchos procedimientos de laboratorio con
indicadores agregados, carbohidratos, líquidos orgánicos, sales, etc. (Condalab,
2019)

- ¿Qué función cumple el NaCl en los caldos de cultivo añadidos?

El cloruro de sodio suministra electrolitos esenciales para el transporte y el

equilibrio osmótico.

- ¿Qué es la revitalización de caldos de cultivos? ¿Qué se toma en cuenta para

realizar la revitalización?

La revitalización de caldos de cultivo consiste en otorgar mayor vitalidad o vigor

a microorganismos en estudio, para este proceso se necesita de varios procesos, es
importante tomar en cuenta los grados centígrados en los que se encuentra el
ambiente, las horas de incubación, las soluciones a utilizar, para que no exista
 lesión de microorganismos se debe tomar en cuenta el calor, frío, desecación,
liofilización, congelación, baja actividad de agua e irradiación. (Vargas, 2016)

3. CONCLUSIONES
▪ Se conoció mediante una búsqueda en bibliografía y guiándonos en la guía de
laboratorio los diferentes procesos para la elaboración de un medio de cultivo
casero.
▪ Se aplicó las correctas medidas de esterilización para dar vida a un medio de
cultivo tomando muestras de la garganta y amígdalas.
▪ Al realizar la práctica y después de haber transcurrido los tres días se pudo notar
que en la muestra que más crecieron las bacterias en el medio caldo-anaeróbico
dando una turbidez de (+) y presentando una parte sedimentada en el fondo. El
caldo anaeróbico-caldo con NaCl presento un poco más de turbidez (++) pero no
había mucha diferencia entre los dos caldos. Si comparamos estos resultados con
lo que nos dice (Basantes, 2015) en su Artículo de “Tipos de bacterias…” seria
bacterias anaeróbico estricto por la parte sedimentada del fondo y por la pequeña
turbidez hay presencia de bacterias anaeróbicas facultativas, pero en baja
cantidad.
▪ En el caldo-aeróbico hubo más turbidez (++) y muy poca sedimentación en el
fondo lo que quiere decir que hay presencia de bacterias microaerófilos y en el
caldo-aeróbico con NaCl hubo mucha más turbidez (+++) que en las otras
muestras lo que quieres decir que hubo gran cantidad de bacterias aeróbicas
estrictas. Comparando con lo que dice (Paredes , 2009) en su Artículo de tipos de
medios de cultivo…bacterias Aerobios estrictos son las que requieren oxígeno
para crecer…lo que concuerda con nuestros resultados.

4. RECOMENDACIONES
▪ Debemos tener mucho cuidado durante la desinfección de todos los materiales que
serán utilizados en la realización de la práctica de laboratorio ya que estos pueden
ser un interferente al momento de la realización de esta.
▪ Se debe tener muy claro el cultivo de caldo adecuado en el cual todos los
microorganismos que se utilizaron en esta práctica se desarrollan.
 ▪ Etiqueta debidamente tu material de vidrio antes de verter los medios de cultivo
en ellos.
▪ Utilizar las medidas de higiene necesarias para no contaminar el cultivo de caldo
con el cual se va a trabajar ya que esto conllevaría a que obtengamos datos
erróneos o en otros casos la muestra a analizar no se desarrolle.

5. BIBLIOGRAFÍA

Barmatec. (2016). ZONA AEROBIA. Obtenido de

https://www.iagua.es/noticias/espana/barmatec/16/09/15/que-consiste-zona-
aerobia

Basantes, E. (2015). UCV. Obtenido de UCV:

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/08_T
ema_5_Cultivo.pdf.

Condalab. (14 de 05 de 2019). Caldo Nutriente. Obtenido de Inspired by knowledge:

file:///C:/Users/User/Downloads/2107_es_1.pdf

CONDALAB. (25 de Julio de 2019). CONDALAB. Obtenido de CONDALAB:

https://www.condalab.com/int/es/index.php?controller=attachment&id_attachme
nt=11148#:~:text=Suspender%2037%20gramos%20del%20medio,121%20%C2
%BAC%20durante%2015%20minutos.

CONDALAB. (13 de Mayo de 2019). CONDALAB. Obtenido de CONDALAB:

https://www.condalab.com/int/en/index.php?controller=attachment&id_attachm
ent=8466

Corrales, C., Antolinez , M., Bohórquez, A., & Corredor, M. (2015). Bacterias
anaerobias: procesos que realizan y contribuyen a la sostenibilidad de la vida
en el planeta. Obtenido de
http://www.scielo.org.co/pdf/nova/v13n24/v13n24a06.pdf

DIBICO. (Enero de 2014). Probiotek. Obtenido de Probiotek:

http://www.probiotek.com/wp-content/uploads/2014/01/1022-A_AGAR-
NUTRITIVO.pdf
 Norma Interna DIBICO. (2016). CALDO LURIA . México: Bacteriología General-
Catálogo 1236.

Paredes , R. (2009). SCIELO. Obtenido de SINTESIS:

https://www.sintesis.com/data/indices/9788490773185.pdf.

Quintero, A. (s.f). INFECCIONES POR BACTERIAS ANAEROBIAS:CRITERIOS DE

MANEJO CLÍNICO Y PROCEDIMIENTOS MICROBIOLÓGICOS DE
DIAGNÓSTICO. Obtenido de
file:///C:/Users/Antonio%20Yumisaca/Downloads/Dialnet-
InfeccionesPorBacteriasAnaerobias-4018693.pdf

Vargas, M. R. (2016). Variabilidad de la inactivación microbiana y de la fase de

latencia de los microorganismos supervivientes a un proceso de acidificación.
Madrid.

6. ANEXOS

Ilustración 1 Preparación del recipiente Ilustración 2 Preparación del caldo nutritivo

alto para filtrar. (FILTRADO)
Ilustración 3 Separación del caldo en dos recipientes por partes iguales,

Ilustración 4 Recipientes con los caldos de cultivo con y sin NaCl.

 Ilustración 5 Toma de muestra

Ilustración 6 Recipientes con los caldos de cultivo con y sin

NaCl, inoculados
Ilustración 7 Recipientes con los caldos de cultivo con y sin NaCl
Ilustración 8 Todo el conjunto de cultivos de caldos preparados coloque en una caja de
cartón