USO DEL MTODO ELISA PARA DETECTAR LA PRESENCIA DE LA HORMONA HGC EN EL EMBARAZO 1.

INTRODUCCIN

Si una mujer que, por lo general, tiene menstruaciones regulares sufre un retraso de una semana o ms, puede estar embarazada. Como se sabe existen una serie de sntomas que pueden ser causados por los

estrgenos y la gonadotropina corinica humana (HCG). Estas dos hormonas, que actan durante el embarazo, son generadas por la placenta a partir de unos 10 das despus de la fecundacin.

Habitualmente, se puede determinar si una mujer est embarazada mediante una prueba de embarazo de sangre u orina. Un test ELISA de embarazo (enzimoinmunoanlisis) puede detectar incluso valores muy bajos de gonadotropina corinica humana en la orina de una forma rpida y fcil. Algunas de las pruebas de embarazo de mayor sensibilidad que usan este mtodo pueden detectar concentraciones casi inapreciables de gonadotropina corinica humana como las que aparecen alrededor de una semana y media despus de la fecundacin, y los resu ltados se obtienen en media hora.

Otras pruebas incluso de mayor sensibilidad, que tambin detectan esta hormona, pueden determinar si una mujer est embarazada pocos das despus de la fecundacin (antes de la primera falta de menstruacin). 2. MARCO TERICO La Gonadotropina Corinica Humana (hCG) es la "hormona propia del embarazo", encargada de mantener al cuerpo lteo produciendo

progesterona luego de haberse logrado la concepcin. Los niveles de esta hormona en particular presentes en la orina de las mujeres son medidos y analizados por la mayora de las pruebas de embarazo caseras, a fin de determinar si la mujer que se estuviera realizando dicha prueba estara embarazada o no. Los incrementos en los niveles de la hormona hCG contribuyen significativamente en la exacerbacin de los sntomas propios del embarazo, especialmente en las nuseas matinales. Los anlisis de sangre realizados son para controlar los niveles de esta hormona presentes en su torrente sanguneo, son mucho ms sensibles y arrojan resultados ms precisos que los arrojados por las pruebas de embarazo caseras y, a la vez, podran ser capaces de detectar si uno se encuentra embarazada diez das despus de la fecha de fertilizacin del vulo, (habiendo sido ste el momento preciso de la concepcin).

Con el embarazo, los niveles de la hormona hCG podran duplicarse cada dos o tres das. Sin embargo, a algunas mujeres se les deb e inyectar dicha hormona a fin de provocar la ovulacin o para poder extender la fase ltea de su ciclo menstrual; siendo caracterstico que en dichos casos, pequeos rastros o indicios de esta hormona podran permanecer en su sistema por un perodo aproximado de diez das, los cuales podran dar lugar a que si usted se hubiera realizado una prueba de embarazo dentro de ese perodo de tiempo; la misma podra arrojar un falso resultado positivo. Un nivel de la hormona hCG menor a 5 mIU/ml, por lo general, indicara que usted no estara embarazada. Las mujeres embarazadas normalmente logran concentraciones en el suero que pueden oscilar entre los 10 y los 50 mIU/ml en la semana posterior a la concepcin. Por otro lado, el nivel mximo de concentracin de dicha hormona se presentara entre el segundo y el tercer mes de embarazo, seguido de un descenso del mismo, el cual se producira durante el tercer trimestre. Las pruebas de embarazo caseras ms sensibles podran llegar a medir hasta aproximadamente 20 mIU/ml de hCG en su orina.

Niveles de hCG, la hormona del embarazo La siguiente lista indica la norma de niveles de hCG en sangre, los cuales pueden diferir entre mujer y mujer. (D1dc = desde el da 1 del ciclo o comienzo del ltimo periodo). Mujeres no embarazadas: <5.0 mUI/ml 3 semanas D1dc: 5-50 mUI/ml 4 semanas D1dc: 5-426 mUI/ml 5 semanas D1dc: 18-7340 mIU/ml 6 semanas D1dc: 1080- 56500 mUI/ml 7-8 semanas D1dc: 7650-229000 mIU/ml 9-12 semanas D1dc: 25700-288000 mUI/ml 13-16 semanas D1dc: 13300-254000 mUI/ml 17-24 semanas D1dc: 4060-165400 mUI/ml 25-40 semanas D1dc: 3640-117000 mUI/ml Mujeres posmenopusicas: <9.5 mUI/ml

La prueba de suero, utilizando 2-4 mL de sangre venosa, es tpicamente un inmunoanlisis quimioluminiscente o fluorimtrico, que puede detectar niveles de hCG tan bajos como 5 mUI/ml y permite la cuantificacin de la concentracin de hCG.

La Automatizacin de diagnstico gonadotropina corinica humana (hCG) es una hormona glicoprotena secretada por la placenta en desarrollo poco despus de la fertilizacin. En un embarazo normal, HCG se puede detectar en el suero ya en 7 das despus de la concepcin, duplicando cada 1,3 a 2 das. En el momento de la primera falta del perodo menstrual, la concentracin de HCG en suero es de aproximadamente 100 niveles mUI / ml, y el pico de ~ 100 000 200 000 mUI / ml son vistos en el extremo del primer trimestre. La aparicin de hCG poco despus de la concepcin y su posterior aumento en la concentracin durante el crecimiento gestacional temprano lo convierten en un excelente marcador para la deteccin precoz del embarazo. Estas diferentes concentraciones se pueden detectar de manera cualitativa experimentalmente con el mtodo de ELISA que se basa en el uso de antgenos o anticuerpos marcados con una enzima, de forma que los conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunolgica como

enzimtica. Al estar uno de los componentes (antgeno o anticuerpo) marcado con una enzima e insolubilizado sobre un soporte

(inmunoadsorbente) la reaccin antgeno-anticuerpo quedar inmovilizada y, por tanto, ser fcilmente revelada mediante la adicin de un substrato

especifico que al actuar la enzima producir un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un espectrofotmetro o un colormetro. Los diferentes tipos de ELISA son los que se enumeran a continuacin: Anticuerpos marcados: ELISA Indirecto: Se utiliza para detectar la presencia de anticuerpo y es la base del test para la infeccin de HIV y embarazo. ELISA sndwich: Permite tanto la deteccin como la medicin cuantitativa del antgeno (sangre u orina) 3. MATERIALES Y MTODOS Una prueba de embarazo cacera.

Pocillos sensibilizados: 48 pocillos separables individualmente con anticuerpo policlonal anti-HCG adsorbidos en su superficie.

Enzima-Conjugado: un frasco gotero con 2.5 ml de anticuerpo monoclonal anti-HCG conjugado con peroxidasa. El reactivo posee un colorante rosado en su composicin para facilitar la visualizacin de su agregado en cada pocillo.

Reactivo A: un frasco gotero conteniendo 4 ml de solucin de perxido de hidrgeno.

Reactivo B: un frasco gotero conteniendo 4 ml de solucin de tetrametilbenzidina en buffer fosfatos-citrato 50 mmol/l, pH = 5.0

Control Negativo: un frasco gotero conteniendo 1 ml de una solucin proteica de, aproximadamente, 25 mUI/ml HCG

Control Positivo: un frasco gotero conteniendo 1 ml de una solucin proteica de reaccin negativa para HCG

Solucin lavadora: 2 frascos goteros conteniendo, cada uno, 60 ml de solucin salina tamponada a pH = 7.4

Accesorios: Un soporte para los pocillos.

Usamos: TEST DE EMBARAZO CACERO Y MTODO ELISA INDIRECTO 4. PROCEDIMIENTO 1. Separacin del suero y plasma por centrifugacin 2. Tapizado del pocillo con el antgeno o anticuerpo. 3. Adicin de la muestra problema con la mezcla de antgenos o anticuerpos. 4. Unin del antgeno o anticuerpo especfico al anticuerpo o antgeno tapizado en el pocillo. 5. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de antgeno o anticuerpo no unido 6. Adicin del anticuerpo secundario marcado con la enzima 7. Unin del anticuerpo secundario al antgeno o anticuerpo

8. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de enzima no unida 9. Adicin del substrato 10. Unin del substrato a la enzima 11. Desarrollo del color 5. RESULTADOS 5.1 Usando una muestra de orina en la prueba cacera dio positiva ya que la compaera voluntaria lleva 6 meses de embarazo y obviamente la raya test mostr mucha ms amplitud que la de control por la mayor concentracin de HGC.

5.2 La determinacin cualitativa de la HCG fue muy alta, mostrando un color celeste muy concentrado, corroborando nuevamente el tiempo de gestacin de la compaera voluntaria, aqu se us el suero y la orina de la compaera. Y tambin se mostr un pocillo transparente ya que no se le agrego el anticuerpo.

6. DISCUCIN El mtodo inmunoenzimtico para detectar HCG es del tipo indirecto y utiliza muestras de orina como tambin de sangre. En este ensayo, la HCG es capturada por un anticuerpo policlonal anti-HCG de alta afinidad inmovilizado en la fase slida (tira o placa de poliestireno). La reaccin se completa con la adicin de un AcM anti beta HCG y la inmunorreacccin se revela con un conjugado de anticuerpo antiglobulina de ratn purificado por afinidad, con enzima peroxidasa y su correspondiente sustrato colorignico el cual desarrolla una coloracin directamente proporcional a la

concentracin de la HCG en la muestra.

7. CONCLUSIONES A mayor tiempo de embarazo mucho mayor ser la concentracin de la hormona HGC, demostrado en prctica. La velocidad de formacin de color es proporcional a la cantidad de anticuerpo especfico

8. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS Hormona HCG Citado el 21 de Julio del 2013. Disponible en

http://www.proyecto-bebe.es/la_hormona_del_embarazo.htm