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Universidad Latina
Sede Santiago
Facultad Ciencias de la Salud
Escuela de Medicina
Asignatura De Bioquímica
Informe De Laboratorio
Experiencia De Laboratorio N°5
LAS ENZIMAS
Elaborado Por:
Markelda Flores
Torres Inelis
Marciaga Ana
Profesor De Cátedra:
José Amores
Fecha De Entrega:
18/3/2017
INTRODUCCIÓN
Las células llevan a cabo simultáneamente una gran cantidad de reacciones químicas necesarias para
la vida. Muchos de los productos de esas reacciones se necesitan inmediatamente, y si no fuera por
la participación de las enzimas, algunas reacciones no se producirían tan rápido. Las enzimas, en su
mayoría proteínas o RNA (riboenzimas), son catalizadores químicos que agilizan una reacción que
envuelve la formación o rompimiento de enlaces químicos.
Las enzimas no se consumen en las reacciones, ni tampoco se alteran, razón por lo cual no se necesitan
en grandes cantidades. Las enzimas actúan sobre los sustratos formando un complejo enzima-sustrato;
esto ocurre en un lugar en específico conocido como el sitio activo de la enzima. Las enzimas son
muy selectivas porque pocas moléculas pueden interactuar bien con este sitio. Las enzimas reducen
la energía de activación necesaria para llevar a cabo una reacción; es decir, reducen la barrera de
energía que hay que sobrepasar para que la reacción se lleve a cabo.
Las enzimas trabajan óptimamente bajo condiciones específicas y ciertos cambios pueden alterar el
funcionamiento de la enzima, desactivarla o hasta destruirla. Algunas enzimas necesitan activadores
para cambiar su conformación de modo que pueda formarse el complejo enzima–sustrato. Estos
activadores se conocen como cofactores y pueden ser tan simples como iones metálicos. Los
cofactores orgánicos se conocen como coenzimas.
Las enzimas pueden afectarse negativamente por inhibidores que impidan la actividad enzimática.
Estos inhibidores pueden afectar el sitio activo de dos maneras: competitivamente, al bloquear el sitio
activo, o no competitivamente, al pegarse en otro lugar de la enzima y alterar indirectamente la forma
del sitio activo.
Las enzimas requieren de la presencia de sustancias de naturaleza no proteica para exhibir su actividad
catalítica. Si la sustancia es de naturaleza orgánica se le llama coenzima y si es un ion metálico, se le
denomina como ion metálico activador.
Las propiedades de los enzimas derivan del hecho de ser proteínas y de actuar como catalizadores.
Como proteínas, poseen una conformación natural más estable que las demás conformaciones
posibles. Así, cambios en la conformación suelen ir asociados en cambios en la actividad catalítica.
Los factores que influyen de manera más directa sobre la actividad de un enzima son: pH,
temperatura, las concentraciones de sustrato y de la enzima y de muchos activadores e inhibidores.
La mayoría de las enzimas exhiben su máxima actividad a una temperatura y pH determinado, los
cuales se conocen como temperatura y pH óptimos.
La ureasa es una enzima que cataliza la hidrólisis de urea a dióxido de carbono y amoníaco. La
reacción ocurre de la siguiente manera: (NH2)2CO + H2O → CO2 + 2NH3.
Esta reacción enzimática se produce mediante el uso de indicadores adecuados, que muestran los
cambios que ocurren en el pH del medio donde se da la reacción, por la producción de amoniaco en
la reacción.
CÁLCULOS DE SOLUCIONES
𝑴𝟏 𝑽𝟏 = 𝑴𝟐 𝑽𝟐
𝑴𝟐 𝑽𝟐 (𝟎. 𝟏 𝑴)(𝟏𝟎𝟎𝒎𝒍)
𝑽𝟏 = = = 𝟎. 𝟖𝟑𝒎𝒍
𝑴𝟏 𝟏𝟐𝑴
𝟎. 𝟏 𝒎𝒐𝒍 𝟏𝟑𝟔. 𝟏𝒈
𝟏𝟓𝟎𝒎𝑳 𝒙 = 𝟐. 𝟎𝟒𝒈
𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝑳 𝟏 𝒎𝒐𝒍
7. 30 mL HgCl2 0.2 M
𝟎. 𝟐 𝒎𝒐𝒍 𝟐𝟕𝟏. 𝟓𝒈
𝟑𝟎𝒎𝑳 𝒙 = 𝟏. 𝟔𝒈
𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝑳 𝟏 𝒎𝒐𝒍
8. 50 ml Pb(NO3 ) 2 0.2 M
𝟎. 𝟐 𝒎𝒐𝒍 𝟑𝟑𝟏. 𝟐𝒈
𝟓𝟎𝒎𝑳 𝒙 = 𝟑. 𝟑𝒈
𝟏𝟎𝟎𝟎𝒎𝑳 𝟏 𝒎𝒐𝒍
PARTE EXPERIMENTAL
A. Preparación de un extracto crudo de ureasa.
Observaciones: al licuar las semillas de zapallo con agua destilada fría se procedió
a centrifugar con el objetivo de separar los sólidos de líquidos de diferente
densidad que se encuentran en la solución de semilla de zapallos. Luego se
procedió a retirar con un hisopo la capa de grasa que se encontraba en la parte
superior del tubo y por ultimo filtramos la solución, como resultado se obtuvo un
extracto de ureasa.
B. Especificidad de la ureasa
Observaciones:
Tubos Contenido de los tubos de Coloración
ensayo
TUBO A Urea+ureasa+rojo de fenol fucsia
TUBO B Acrilamida+ureasa+rojo de amarilla
fenol
En esta prueba se pudo observar que el tubo A (urea) se tornó de color fucsia
esto quiere decir que la ureasa reacciono positivamente con la urea y por ello
esta es más específica ya que la ureasa descompone a la urea, mientras que
la acrilamida se tornó de color amarilla esta es un sustrato análogo, por la
coloración la ureasa está actuando sobre la acrilamida pero en menor
proporción.
Cuestionario:
1. ¿En cuál de los tubos hubo evidencia de que ocurrió una reacción?
En el tubo A que contenía urea, ureasa y rojo de fenol hubo evidencia de
una reacción evidencia de esto es la coloración fucsia que tomo la solución.
Cuestionario:
1. ¿A qué se debe el cambio de color del indicador?
El cambio de color del indicador rojo fenol se debe a que las soluciones
están en un rango de pH 6.4 -8.2 básico.
El tubo 1 que la solución estaba formada por urea, agua destilada y rojo de
fenol se colocó en un baño de agua con hielo y luego se le añadió 1 ml de
extracto de ureasa, fue el tercer tubo en tomar una coloración fucsia definida
debido a que se encontraba a bajas temperaturas y la actividad enzimática
disminuyo
En el tubo 2 que contenía urea, agua destilada, rojo de fenol se colocó en
baño maría luego de esto agregamos 1 ml de extracto de ureasa y fue el
primero en adquirir una coloración fucsia definida ya que se encontraba dentro
de su temperatura óptima 40ºC.
el tercer tubo contenía urea, agua destilada, rojo de fenol, fue el segundo tubo
que se tornó fucsia ya que se encontraba a una temperatura ambiente.
En el cuarto tubo la solución contenía urea, agua destilada y rojo de fenol
posteriormente se le añadió 1 ml de extracto de ureasa calentado y este se
tornó amarillo indicando que la enzima se ha desnaturalizado por la influencia
de la temperatura.
Cuestionario:
1. ¿Cuál es el efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática?
En general, la velocidad de la reacción se incrementa con la temperatura
hasta que un punto máximo es alcanzado. Este incremento se debe a que
aumenta el número de moléculas ricas en energía que pueden pasar la
barrera energética de estado de transición, para formar a los productos.
Al añadirle a las tres soluciones el indicador de pH azul de timol, el tubo 3 fue el que
adquirió una coloración azul que indica que el pH=8 es el óptimo para la actividad
enzimática
La ureasa actúa en los compuestos a nivel de los puentes C-N excepto en aquellos
que contiene puentes peptídicos.
Cuestionario:
1. De acuerdo con sus resultados, ¿Cuál es el pH óptimo para la actividad de la
ureasa?
Según los resultados de nuestra prueba el pH=8 es el óptimo para la actividad
enzimática de la ureasa
Extracto de
ureasa en
Extracto
prueba de
de
Biuret
ureasa
B. Especificidad de la ureasa.
Acrilamida
Ureasa
C. Efecto de la concentración de la enzima sobre la velocidad de la reacción.
Urea+agua
Reaccionaron No hubo
destilada+solucion de rojo reacción se
fenol desnaturalizo
Solución amortiguadora pH=4
Urea+HgCl2+ureasa+rojo de fenol