Práctica 2 Aplicación de los criterios de Cowan y Steel para la identificación de bacterias

Aplicación de los criterios de Cowan y Steel para la identificación de bacterias

PALOMINO GARCÍA, Angelina; PÉREZ OLVERA, Santiago

Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, Departamento de Microbiología

Resumen: Objetivo: En esta práctica se conocerá
el método Cowan y Steel en el cual nos permite
realizar la identificación de los géneros
bacterianos con los que se trabajan en el
laboratorio
Metodología: Para llevar a cabo la práctica se
deberán realizar siembras en cultivos como TSI,
OF, MIO o agar nutritivo y tinciones como la
tinción de Gram al igual que ciertas pruebas
como la de catalasa para conocer las
características de la bacteria desde su
morfología, sus propiedades bioquímicas como
la fermentación y reacción de sus enzimas.
Posterior al análisis de los resultados, se
realizará una comparación en una tabla donde se
diagnosticará el tipo de bacteria con la que se
está trabajando.
Contribución: los miembros del equipo
realizaron diversas siembras en los cultivos, así
como pruebas de catalasa donde a la bacteria le
agregaron peróxido de hidrogeno para ver su
reacción y también realizaron una tinción de
Gram la cual fue observada en microscopio. Al
final se anotaron los resultados y se hizo revisión
de estos con diversas bacterias en lista.
Palabras clave: Criterios, Identificación,
Cowan y Steel.
Abstract: Objetive: In this practice, the Cowan
and Steel method will be known, in which it
allows us to identify the bacterial genera with
which we work in the laboratory
Metodology: To carry out the practice, sowings
should be carried out in cultures such as TSI, OF,
MIO or nutrient agar and stains such as Gram's
stain as well as certain tests such as catalase to
know the characteristics of the bacteria from
their morphology, their properties biochemicals
such as the fermentation and reaction of its
enzymes. After analyzing the results, a
comparison is made in a table where the type of
bacteria with which one is working will be
diagnosed.
Contrubition: The team members carried out
various sowings on the cultures, as well as
catalase tests where they added hydrogen
peroxide to the bacteria to see their reaction and
also performed a Gram stain which was
observed under a microscope. At the end the
results were recorded and reviewed with various
bacteria listed.
Key words: Criterion, Identification, Cowan y
Steel

PALOMINO GARCÍA, Angelina. PÉREZ OLVERA, Santiago. Aplicación de los criterios de Cowan y Steel para la
identificación de bacterias. Benemérita Universidad Autónoma de Puebla. 2020.

*(angelina.palomino@alumno.buap.mx) (santiago.perezo@alumno.buap.mx)
Práctica 2 Aplicación de los criterios de Cowan y Steel para la identificación de bacterias
Introducción
El método de Cowan y Steel es utilizado para la
identificación de bacterias en cuanto a su
género. El proceso de diagnóstico se realiza con
los siguientes pasos:
1. Tinción de Gram: Con la finalidad de
observar si la bacteria es un coco o un bacilo
así como también si es una Gram + o - , la
tinción de Gram consiste en realizar una
coloración en la pared celular de la bacteria,
aquellas que se tiñen de azul tienen una
extensa capa de péptido glucano y se les
conoce como Gram +, si se tiñen de rosa, su
pared celular tiene una capa de péptido
glucano muy delgado además de que cuentan
con lipopolisacáridos siendo estas bacterias
las Gram -.
2. Tinción Shaffer-Fulton: El fin de esta tinción
se basa en la observación de esporas que son
producidas por las bacterias principalmente
los bacilos Gram +, las esporas absorben el
colorante verde de malaquita y se observaran
bajo microscopio con un color verde, esto se
puede realizar junto con la tinción de Gram.
3. Tinción Ziehl Neelsen: Es una tinción
diferencial la cual buscan identificar bacterias
como Mycobacterium tuberculosis, estas
bacterias no se tiñen en tinción de Gram por
lo que para observarlas se requiere esta
tinción que demuestra que la bacteria es acido
alcohol resistente.
4. Metabolismo: Esta prueba se realiza con
agar O/F el cual tiene un pH neutro, cuando
realiza fermentación por glucosa el agar se
torna amarillo por la acidez, en cambio sí se
torna azul significa que es oxidativo y su pH
es alcalino.
5. Producción de catalasa: Se realiza con
peróxido de hidrogeno y nos ayuda a
identificar si las bacterias contienen la
enzima catalasa. Su es positiva presentara un
burbujeo.
6. Producción de oxidasa: Determina la
presencia de citocromo C, esto colocándolo
en un papel reactivo que hace que la enzima
reaccione y forme una coloración azul dando
positividad en oxidasa
7. Movilidad: Se realiza en dos medios de
cultivo que son el MIO y el SIM, en el medio
MIO la positividad se muestra con turbidez en
todo el tubo debido al movimiento bacteriano
causado por sus flagelos, esto ocurre también
con el medio SIM con una turbidez difusa.
8. Crecimiento aerobio: Puede desterminarse en
el medio MIO al observar que la turbidez se
presenta en la parte superior del tubo mas no
en el tubo completo, esto debido a la
búsqueda de oxígeno.
9. Crecimiento anaerobio: Se determina en
medio MIO al ver la turbidez en todo el tubo
ya que no busca oxígeno.
10. Producción de ácido a partir de glucosa: Se
determina con el agar TSI, tiene cambios
variados en si coloración, si es
completamente amarillo su pH es acido y se
dice que utilizo la lactosa en el agar, si el tubo
es amarillo, pero con el pico rojo nos indica
el uso de glucosa y si este no presenta cambio
en el fondo y su pico es rojo nos indica que
hay pH alcalino y no utilizo los azucares pero
si las peptonas.
Desarrollo de la práctica
Tomar una cepa problema a la cual se le realizará
lo siguiente:
1.-Tinción de Gram.
2.-Tinción de Shaeffer-Fulton (sólo en caso de
tener BGP).
3.-Tinción de Ziehl-Neelsen (sólo en caso de
tener BGP).
4.-Inocular por estría cruzada una placa de agar.
5.-Inocular por picadura el medio O/F.
6.-Inocular por picadura el medio MIO.
7.-Inocular por picadura una base de CTA con
un carbohidrato.
8.-Incubar todos los medios a 37°C por 24 horas.
9.-Leer morfología colonial de la placa.
10.-Del crecimiento en placa realizar las pruebas
de oxidasa y catalasa
1.-Leer bioquímicas.
12.-Comparar los resultados en tablas.
13.-Identificar familia o género.
Resultados
Figura 1. Tinción de cepa problema. Lectura Práctica 2
 Práctica 2 Aplicación de los criterios de Cowan y Steel para la identificación de bacterias

Figura 6. Prueba de catalasa de la cepa problema. Lectura

Figura 2. Cultivo de la cepa problema en Agar nutritivo.
Práctica 2
Lectura Práctica 2

Figura 7. Prueba de oxidasa de la cepa problema. Lectura

Práctica 2
Figura 3. Tubo de la cepa problema en medio O/F. Lectura
Práctica 2 Tabla 1. Resultados de la cepa problema
Prueba Resultado
Tinción de Gram Bacilos Gram -
Crecimiento aerobio +
Crecimiento anaerobio +
O/F F
Movilidad +
Producción de ácido A/A
Catalasa +
Oxidasa -

De acuerdo con los resultados presentados

Figura 4. Tubo de la cepa problema en medio MIO.
Lectura Práctica 2
Figura 5. Tubo de la cepa problema en medio TSI.
Lectura Práctica 2
previamente en este apartado y concentrados en
la Tabla 1 Se da la interpretación de que la
tinción de gram (véase Figura 1) en la cepa
problema tenemos bacilos gram negativos y que
de acuerdo a la Figura 2 en su morfología
colonial no nos da ningún indicio de una
característica particular de alguna bacteria, en la
Figura 3 mediante la prueba de la oxidación o
fermentación de glucosa por el vire al color
amarillo el indicador del medio se da por hecho
que nuestra bacteria es fermentadora de lactosa
mientras que en la Figura 4 en donde se muestra
la prueba de movilidad por la turbidez del tubo
se da por hecho que el resultado es positivo al
igual que el crecimiento aerobio y anaerobio
también es una característica de esta bacteria
prosiguiendo con la prueba de la producción de
ácido a partir de glucosa en medio TSI (véase
Práctica 2 Aplicación de los criterios de Cowan y Steel para la identificación de bacterias
Figura 5) el resultado es A/A donde la
interpretación del cambio del indicador de pH
del medio, en este caso rojo de fenol, Es que la
bacteria es fermentadora de lactosa al igual que
se ve una producción de gas, con el resultado
observado en la Figura 6 como lo es el burbujeo
en la prueba de catalasa es positivo Mientras que
en la Figura 7 se observa la prueba de oxidasa
en donde el resultado es negativo.
Teniendo en cuenta todos los resultados
obtenidas de los criterios de Cowan y Steel y
haciendo la comparación con la tabla 7.1 del
Manual para la identificación de bacterias de
importancia médica de dichos autores, se da la
confirmación de que la cepa problema es de una
Enterobacteria. Por los criterios aplicados sólo
se puede identificar Que pertenece a la familia
Enterobacteriaceae por lo tanto se tendrán que
realizar otras pruebas para llegar más a fondo a
descubrir la identidad de esta cepa problema
Cuestionario
1.- ¿Cuál es la importancia de los criterios de
Cowan y Steel?
• Su importancia radica en el diagnóstico
del género de la colonia bacteriana que
se estudia, además que debido a este
método se pueden conocer se logra
descubrir cuales son las propiedades de
una bacteria desde su morfología hasta
sus propiedades bioquímicas.
2.- ¿Para qué sirve la tinción de Ziehl-Neelsen y
cuál es su fundamento?
• Es una tinción diferencial la cual buscan
identificar bacterias como
Mycobacterium tuberculosis, estas
bacterias no se tiñen en tinción de Gram
por lo que para observarlas se requiere
esta tinción que demuestra que la
bacteria es acido alcohol resistente.
3.- ¿Cuál es el fundamento de la prueba de
oxidasa y de catalasa y cómo se realiza en el
laboratorio?
• Catalasa: La catalasa es una enzima que
poseen la mayoría de las bacterias
aerobias. Descompone el peróxido de
hidrógeno en agua y oxígeno. El
desprendimiento de burbujas
procedentes del oxígeno indica que la
prueba es positiva. La bacteria se coloca
en un portaobjetos para así añadirle el
peróxido de hidrogeno.
• Oxidasa: Determina la presencia del
citocromo C, El citocromo C oxida al
NNN'N’, tetrametil,1-4, fenilendiamina.
La oxidación se detecta como color azul
al colocar la bacteria en un papel con el
reactivo.
4.- ¿En qué medios se puede realizar la prueba
de movilidad y cómo se interpreta?
• MIO: La movilidad es positiva si todo el
tubo presenta una turbidez
• SIM: Su tubo presenta una turbidez
difusa
5.-De cada uno de los criterios de Cowan y
Steel efectuados a la cepa de estudio durante la
práctica, realiza dibujos y menciona tus
resultados.
Revisar la parte de resultados
Conclusiones
Los criterios aplicados de Cowan y Steel para la
identificación de bacterias para esta práctica sólo
nos han permitido identificar lo que es familia
más sin embargo existen otro tipo de pruebas que
son más específicas para identificar género y
especie
Estos criterios no pueden ser omitidos cuando se
necesita saber la identidad de una muestra
problema
La manipulación del especialista en el área
mediante la inoculación y el cultivo añadiendo la
interpretación funge un papel importante para
que los resultados tengan una confiabilidad de
100%
Referencias
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