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PRODUCCIN INDUSTRIAL DE PENICILINA

1. Historia de la penicilina
Aunque generalmente se atribuye a Alexander Fleming el descubrimiento de la penicilina,
muchas pocas y culturas diferentes llegaron mediante la observacin y la experiencia a
conocer y emplear las propiedades bactericidas de los mohos. Se han descubierto
precedentes en la Grecia e India antiguas, y en los ejrcitos de Ceiln del siglo II. Ha
estado tambin presente en las culturas tradicionales de regiones tan distintas y distantes
como Serbia, Rusia o China, as como en los nativos de Norteamrica. Se sola aplicar
alimentos florecidos o tierra del suelo que contuviera hongos a las heridas de guerra.
Desde el siglo VIII por lo menos, los mdicos rabes curaban infecciones untando las
heridas con una pasta blanca que se formaba en los arneses de cuero con que se ensillaban
los burros de carga. A lo largo del siglo XVII algunos farmaclogos y herboristasingleses,
como John Parkington, incluyeron el tratamiento con hongos en los registros de farmacia.
A finales del siglo XIX, Henle (uno de los grandes cientficos de la llamada "generacin
intermedia") suscita en su discpulo Robert Koch, en la Universidad de Gotinga, el inters
por los trabajos de Agostino Bassi y Casimir Davaine, que le llevara a investigar a los
microorganismos como agentes causales de las enfermedades. Esto le conducira
en 1876 a descubrir que Bacillus anthracis era el agente causal especfico del carbunco, en
la lnea de la teora microbiana de la enfermedad, y a enunciar sus clebres postulados.
Ms tarde, Paul Ehrlich, que trabaj con Koch en Berln, desarroll el concepto
de "Magische Kugel" o bala mgica, denominando as a aquellos componentes qumicos
que pudieran eliminar selectivamente a los grmenes.
Al mismo tiempo o poco despus, conocido el hecho de que las bacterias podan
provocar enfermedades, se sucedieron multitud de observaciones, tanto in vivo como in
vitro, de que los mohos ejercan una accin bactericida. Por solo citar algunos nombres,
sirvan de ejemplo los trabajos de John Scott Burdon-Sanderson, Joseph Lister, William
Roberts, John Tyndall, Louis Pasteur y Jules Francois Joubert, Carl Garr, Vincenzo
Tiberio, Ernest Duchesne, Andre Gratia y Sara Dath.
En marzo de 2000, mdicos del Hospital San Juan de Dios de San Jos (Costa Rica)
publicaron los escritos del cientfico y mdico costarricense Clodomiro Clorito Picado
Twight (1887-1944). En el reporte explican las experiencias que adquiri Picado
entre 1915 y 1927 acerca
de
la
accin
inhibitoria
de
los
hongos del gnero Penicillium sobre
el
crecimiento
de estafilococos y estreptococos (bacterias causantes de una serie de infecciones
humanas).12 Aparentemente, Clorito Picado report su descubrimiento a la Academia de

Ciencias de Pars, pero no lo patent, a pesar de que su investigacin haba sido iniciada
unos pocos aos antes que la de Fleming.
2. INTRODUCCIN
Son sustancia qumica producida por un ser vivo o derivado sinttico, que mata o impide
el crecimiento de ciertas clases de microorganismos sensibles, generalmente son
frmacos usados en el tratamiento de infecciones por bacterias, de ah que se les conozca
como antibacterianos.
Los
antibiticos
se
utilizan
en medicina humana, animal y horticultura para
tratar infecciones provocadas por grmenes. Normalmente los antibiticos presentan
toxicidad selectiva, siendo muy superior para los organismos invasores que para los
animales o los seres humanos que los hospedan, aunque ocasionalmente puede producirse
una reaccin adversa medicamentosa, como afectar a la flora bacteriana normal del
organismo. Los antibiticos generalmente ayudan a las defensas de un individuo hasta
que las respuestas locales sean suficientes para controlar la infeccin. Un antibitico
esbacteriosttico si impide el crecimiento de los grmenes, y bactericida si los
destruye, pudiendo generar tambin ambos efectos, segn los casos.
3. PRODUCCION DE PENICILINAS
3.1.

Estructura qumica:
Las penicilinas pertenecen a una familia de compuestos qumicos con una estructura
qumica peculiar que le confiere una actividad caracterstica contra un grupo
determinado de bacterias. A pesar de que existen diferentes variantes, la estructura
qumica esencial de la penicilina fue descubierta por Dorothy Crowfoot
Hodgkin entre 1942 y 1945. La mayora de las penicilinas poseen como ncleo
qumico el anillo 6-aminopenicilnico y difieren entre s segn la cadena
lateral anclada a su grupo amino. Este ncleo 6-aminopenicilnico o
ncleopenam consta, a su vez, de un anillo tiazolidnico (un anillo aminofenlico de
los tiazoles) enlazado a un anillo -lactmico; este ltimo, aparentemente esencial
para
la
actividad
antimicrobiana
del
compuesto, es
hidrolizado
mediante penicilinasas (enzimas tipo -lactamasas) por las bacterias resistentes a
penicilinas.
Adems del nitrgeno y el azufre del anillo tiazolidnico y -lactmico, la penicilina
tiene las siguientes agrupaciones:

Un grupo carboxilo en la posicin 2.


Un radical 2-metil en la posicin 3.

Un grupo amino en la posicin 6, con distintos derivados del


grupo acilo como posibles sustituyentes, que son los responsables de las
diversas caractersticas de las diferentes penicilinas.

En la molcula hay tres carbonos asimtricos:

El carbono C2, que tiene una configuracin absoluta S (sentido contrario a las
agujas del reloj).
Los carbonos C5 y C6, que tienen una configuracin absoluta R, presentando
cada uno de sus hidrgenos isomera cis entre ellos.

Fig. 1 Estructura de la penicilina

3.2.

Propiedades:
La penicilina natural o penicilina G es cristalina, totalmente soluble en agua,
soluciones salinas y dextrosas isotnicas. El radical R, es el responsable de la
sensibilidad a la hidrlisis por parte de las -lactamasas, del enlace a protenas
transportadoras y del vnculo con las protenas bacterianas PBP que transportan a la
penicilina dentro de la clula. Adems, se le asocia a la penicilina un
dipptido cistena-valina, haciendo que la penicilina tenga la ideal afinidad por la
enzima bacteriana transpeptidasa, la cual no se encuentra en el cuerpo humano y que
permite la sntesis del peptidoglucano.
Existe una analoga estructural entre la penicilina y el dipptido D-alanil-Dalanina terminal asociado a las unidades de peptidoglicano que aparecen durante la
formacin de lapared celular de ciertas bacterias (proceso de transpeptidacin).
El nuclefilo O(-) serina de la transpeptidasa ataca los grupos carbonilos de los -

lactmicos, como la penicilina, por esa analoga a su sustrato D-Ala-D-Ala, el


dipptido antes mencionado. De esa manera, unindose covalentemente a los residuos
de serina del sitio activo de la enzima en forma de complejo peniciloil, la penicilina
inhibe a la transpeptidasa bacteriana.
3.3.

Clasificacin
Las penicilinas se clasifican en dos grupos, naturales y semisintticas, y en cada uno
de ellos hay compuestos relativamente resistentes al jugo gstrico y por lo tanto se
pueden administrar por va oral, por ejemplo, la penicilina V, la dicloxacilina y la
amoxicilina.
El trmino penicilina se usa a menudo, en sentido genrico, para cualquiera de las
variantes que derivan de la penicilina misma, en especial, la benzilpenicilina. Estas
tienen la mayor actividad contra organismos Gram positivos, cocos Gram negativos y
organismos anaerobios que no producen -lactamasa. Sin embargo, presentan una
baja actividad contra bacilos Gram negativos. Todos son susceptibles a la hidrlisis
por -lactamasas. La penicilamina, un metabolito de la penicilina y anlogo
del aminocido cistena, es efectivo para el alivio de la artritis reumatoide reduciendo
la velocidad de aparicin de nuevos daos a articulaciones, aunque rara vez es
recetado debido a su elevada toxicidad. Tambin existen en el mercado penicilinas
sintticas, como la ticarcilina, la mezlocilina y la piperacilina.

3.3.1. Penicilinas naturales y biosintticas


Las penicilinas naturales son aquellas generadas sin intervencin biotecnolgica.
Entre ellas destacan la bencilpenicilina, como producto final de inters
teraputico, y los intermediarios aislables como la isopenicilina N o la penicilina
N. Las biosintticas, en cambio, se producen mediante adicin de determinados
compuestos en el medio de cultivo del biorreactor empleado durante su
produccin, es decir, sin que tenga lugar un aislamiento y una modificacin
qumica ex vivo. Entre las biosintticas destacan: la fenoximetilpenicilina, la
alilmercaptometilpenicilina y, de nuevo, la bencilpenicilina (pues es posible
inducir su sntesis aplicando ciertos precursores en el fermentador).

Bencilpenicilina o penicilina G
La bencilpenicilina, comnmente conocida como penicilina G, es el estndar
de las penicilinas. Por lo general se administra por va parenteral (intravenosa,
intratecal o intramuscular), porque tiende a perder estabilidad con el jugo
gstrico del estmago. Debido a que se administra inyectada, se pueden
alcanzar mayores concentraciones del medicamento en los tejidos que con la
penicilina V ofenoximetilpenicilina. Estas mayores concentraciones se
traducen en una mayor eficacia antibacteriana.

Fig. 2 Bencilpenicilina

Bencilpenicilina procana
La bencilpenicilina procana (DCI), conocida tambin como penicilina G
procana, es una combinacin de la penicilina G con un anestsico local, la
procana. Esta combinacin tiene como fin reducir el dolor y la incomodidad
asociada con la voluminosa inyeccin intramuscular de penicilina. Tras la
administracin de una inyeccin intramuscular, el frmaco se absorbe
lentamente en la circulacin y se hidroliza a bencilpenicilina.

Bencilpenicilina benzatnica
La bencilpenicilina benzatnica o penicilina G benzatnica (DCI), es una
combinacin con benzatina que se absorbe lentamente en la circulacin
sangunea despus de una inyeccin intramuscular y luego se hidroliza a
bencilpenicilina. Es la primera opcin cuando se requiere una concentracin
baja de bencilpenicilina, permitiendo una accin prolongada del antibitico
por ms de 2-4 semanas por cada inyeccin.

Fenoximetilpenicilina o penicilina V
La fenoximetilpenicilina, comnmente llamada penicilina V, es la nica
penicilina activa por va oral. Tiene una actividad menor que la
bencilpenicilina, por lo que se administra cuando no se requiere alcanzar
concentraciones elevadas en los tejidos.

Fig. 3 Fenoximetilpenicilina
3.3.2. Penicilinas semisintticas
Las penicilinas semisintticas son aquellas generadas mediante el aislamiento de
un
intermediario
estable
durante
una
produccin microbiolgica

industrial (fermentacin en biorreactores) continuada por la modificacin


qumica o enzimtica del compuesto aislado. Se dividen segn su accin
antibacteriana en cinco grupos: resistentes a -lactamasas, aminopenicilinas,
antipseudomonas, amidinopenicilinas y resistentes a -lactamasas (Gram
negativas)

Resistentes a -lactamasas
Su uso es principalmente en infecciones por estafilococos productores de lactamasas, como el Staphylococcus aureus. Tambin presentan actividad,
aunque reducida, frente a estreptococos, pero carecen de ella frente a
enterococos.

Fig. 4 Meticilina

Aminopenicilinas
Su espectro de accin es muy grande, pero son sensibles a las -lactamasas. Se
administran en casos de infecciones respiratorias de las vas altas por
estreptococos (sobre todo, S. pyogenes y S. pneumoniae) y por cepas
de Haemophilus influenzae, infecciones urinarias por ciertas enterobacterias
(como Escherichia coli y diversas infecciones generadas por Streptococcus
faecalis, Salmonella spp., Shigella spp. y Listeria monocytogenes.

Fig. 5 Ampicilina

Antipseudomnicas
Estas penicilinas son de amplio espectro porque su cobertura de accin
comprende Gram positivos, Gram negativos y anaerobios. Dentro de este
grupo existen dos subgrupos, las carboxipenicilinas y las ureidopenicilinas,
atendiendo a su eficacia frente a pseudomonas.

Carboxipenicilinas
Fueron desarrolladas para ampliar el espectro de bacterias Gram negativas
cubiertas por penicilinas, tales como infecciones nosocomiales causadas
por Pseudomonas aeruginosa. Inicialmente se produjo la carbenicilina por
sustitucin del grupo amino por un grupo carboxilo en la ampicilina y
posteriormente algunas sustituciones en la carbenicilina permitieron
desarrollar la ticarcilina.

Fig. 5 Tirarcilina
Ureidopenicilinas
Se crearon derivadas de la molcula de ampicilina para ampliar an ms el
espectro contra las bacterias Gram negativas y las Pseudomonas. Las
ureidopenicilinas penetran bien en los tejidos y tiene excelentes
concentraciones tisulares, incluyendo el lquido cefalorraqudeo en pacientes
con meninges inflamadas, y niveles adecuados en hueso para el tratamiento
de osteomielitis. Al igual que las carboxipenicilinas, estn asociadas
a hipopotasemia, hipernatremia y disfuncin plaquetaria. En este grupo de
penicilinas estn lamezlocilina, azlocilina y la piperacilina.
Amidinopenicilinas
Presentan gran eficacia frente a Gram negativos, pero escasa ante cocos Gram
positivos, debido a su estructura qumica, la 6-amidinopenicilina.

TABLA 1: Clasificacin de Penicilinas


Naturales

Resistentes
al cido

Antiestafiloccicas

Gram negativas

Penicilina G
(bencil)

Isoxazolilopenicilinas:
Penicilina V

Penicilina G

Feneticilina

Procana
Penicilina G
benzatina

Meticilina

Nafcilina

Temocilina

Cloxacilina

Dicloxacilina

Flucloxacilina

Oxacilina

Propicilina

Aminopenicilinas

Antipseudomonas

Amidinopenicilinas

Ampicilina:
Amoxicilina

Becampicil
ina

Ticarcilina

Carbenicilina:

Metampici
lina

Pivampicil

Carfecilin
a

ina
Hetacilina

Mecilinam

Carindaci
lina

Talampicili

Apalcilina

Pivmecilinam

na
Espicilina

3.4.

Ciclacilina

Azlocilina

Mezlocilina

Espicilina

Produccin biotecnolgica
La produccin industrial de penicilina emergi y floreci como industria a causa de
la Segunda Guerra Mundial, en especial por la cantidad de empleos disponibles en
los Estados Unidos. En julio de 1943, se present un plan para distribuirla en masa a
las tropas en el frente de batalla de Europa y, gracias a ello, se produjeron 425
millones de unidades. Por entonces, el hongo se haca crecer sobre una capa delgada
de cultivo puesto en bandejas o botellas. Para mejorar los requerimientos de espacio
y de los materiales se desarroll un nuevo mtodo comercial
de fermentacin sumergida en calderos de 20.000 a ms de 100.000 litros de
capacidad, haciendo que se redujesen los precios de coste y aumentase la produccin.
Como consecuencia, en 1945, se produjeron ms de 646 billones de unidades. Por
tanto, lo que era un compuesto caro y difcil de aislar es hoy una
commodity qumica, es decir, un compuesto qumicamente puro que se compra y
vende a gran escala en un mercado competitivo.

El desarrollo biotecnolgico de cepas super productoras ha sido otro campo de


investigacin de gran inters. El aislado original de Fleming produca alrededor de
2u/mL (unidades internacionales por mL). Los procesos empleados a finales de la
dcada de los 80 generaban 85.000 u/mL. El desarrollo de las cepas se ha basado en:
El anlisis de numerosos aislados de especies y cepas distintas;
Su mutagnesis mediante rayos
X,
metilbiscloroetilamina,
nitrosoguanidina, radiacin UV de onda corta y otros;
La recombinacin mediante ciclos parasexuales en P. chrysogenum;
La fusin de protoplastos;
Tcnicas moleculares de barajado de ADN, que permiten realizar evolucin
dirigida de fragmentos de ADN mediante PCR.
BIOSNTESIS Y SEMISNTESIS
La estrategia de produccin industrial de penicilina est ligada al tipo de penicilina a
sintetizar. Bsicamente, esta variedad reside en la sustitucin del grupo acilo de la
posicin 6 en el cido 6-aminopenicilnico. Cuando la fermentacin se produce sin
aadir ningn precursor se producen las penicilinas naturales. De entre ellas, solo la
penicilina G es til teraputicamente y por tanto es el compuesto a purificar. Por otra
parte, de aadir otros precursores para la cadena lateral, el control de la reaccin
mejora y es posible producir el compuesto deseado con una alta especificidad. Esta
estrategia da lugar a las penicilinas biosintticas, como la penicilina V o la penicilina
O (en pequeas cantidades). La aproximacin al problema ms empleada, no
obstante, pasa por la modificacin qumica del compuesto obtenido mediante
fermentacin. De este modo es posible obtener una gran diversidad depenicilinas
semisintticas.
La generacin de penicilinas semisintticas requiere la produccin, mediante
fermentacin, de penicilina G (en algunos casos penicilina V), compuesto que se
convierte en cido 6-aminopenicilnico mediante una transformacin qumica, o,
ms frecuentemente, enzimtica. Este compuesto es luego modificado mediante la
enzima penicilina acilasa de modo que se aada la cadena lateral deseada a la
posicin 6, lo que da lugar a la penicilina semisinttica final. De hecho, el 38 % de
las penicilinas producidas comercialmente se emplean en medicina humana, el 12 %
en veterinaria y el 43 % como precursores para el diseo de penicilinas
semisintticas.

Fig. 6 Ruta de biosntesis de los antibiticos -lactmicos: penicilina G,


cefalosporina C y cefamicina C

REGULACIN DE LA SNTESIS
El anillo tiazolidnico de la -lactama se genera mediante la unin de los
aminocidos L-cistena, L-valina y cido -aminoadpico. Este ltimo, aminocido
no proteico, se une al residuo de cistena mediante una sntesis de pptidos no
ribosomal, a cuyo producto se fusiona una valina mediante una epimerizacin,
reaccin que da lugar a un tripptido. Este tripptido se cicla mediante un proceso
an no descrito dando lugar al primer producto aislable, laisopenicilina N. La accin
de la penicilina transacetilasa, que sustituye la cadena de -aminoadpico en el C6
por una molcula de cido fenilactico activada, produce la bencilpenicilina.
La produccin de penicilina es un rea que requiere la colaboracin de cientficos e
ingenieros para la efectiva produccin de cantidades industriales del antibitico. La
penicilina es un metabolito secundario del hongo Penicillium, es decir, el hongo no
produce el antibitico cuando crece bajo condiciones normales, solo cuando su
crecimiento se encuentra inhibido por verse sometido a condiciones de estrs. Otros
factores inhiben la produccin de penicilina, incluyendo su misma ruta de
produccin. Por ejemplo, la lisina inhibe su sntesis debido a que inhibe a
la homocitrato sintasa, enzima implicada en la sntesis de cido -aminoadpico. No
obstante, la retroinhibicin por lisina no parece ser un factor limitante en la
produccin industrial del compuesto. Otros elementos reguladores son: la
concentracin de fosfato, de glucosa y de ion amonio.
Las clulas de Penicillium son crecidas usando una tcnica conocida como fedbatch (cultivo de lote nutrido), en el que se ven continuamente sujetas a condiciones
de estrs y, por ende, producen penicilina en abundancia. Las fuentes de carbono
disponibles son tambin importantes porque la glucosa inhibe a la penicilina mientras
que la lactosa no. El valor del pH, los niveles de nitrgeno, fosfato y oxgeno son
tambin crticos en los lotes de produccin y deben controlarse automticamente.
PRODUCCION DE PENICILINA
La extraccin de penicilina se puede realizar en una o ms etapas sucesivas, con una
acidificacin del caldo filtrado con H 2SO 4 o H 3PO 4 al 10% P/V y con el
agregado de un agente surfactante (0,003 - 0,1% P/P, en el solvente), realizndose la
extraccin y concentracin en extractores centrfugos.
Dependiendo de las especificaciones de uso final, el solvente conteniendo penicilina
se puede tratar con carbn para separar pigmentos y otras impurezas. Esta etapa
actualmente no se realiza debido a las bajas impurezas de los caldos y a los altos
rendimientos obtenidos.
El medio de un cultivo tpico alimentado puede variar dependiendo de la cepa, y
generalmente consiste en:

Lquido de maceracin de maiz (4-5% peso seco).


Una fuente de Nitrgeno adicional, harina de soja, extracto de levadura o suero.
Una fuente de carbono, lactosa.
Varios tampones
El pH se mantiene constante a 6,5.
El cido fenilactico o el fenoxiactico se alimentan continuamente como
precursores (0,5-0,8% del total).

Los procesos con alimentacin de glucosa o melazas tambin tienen xito. En estos
casos las velocidades de alimentacin son de 1.0-2.5 kg*m -3*h-1, con una
concentracin de glucosa de 500 kg*m-3. Aproximadamente el 65% de la fuente de
carbono metabolizada se utiliza para el mantenimiento energtico, el 25% para el
crecimiento y slo el 10% para la produccin de penicilina.

Fig. 7 Proceso de Obtencin de Penicilina