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OBJETIVOS:
PRESENTACION
En esta sesión se hablará de "procedimientos operativos estándar" (SOP’s), revisando temas como
balanzas, pipetas mecánicas, cristalería, reactivos, precisión y exactitud, manejo de datos, informes de
datos.
Sabemos que nada puede reemplazar la experiencia real de laboratorio como una herramienta de
aprendizaje, pero esperamos que esta sesión nos ayude a aprender las técnicas de laboratorio
adecuadas para corregir hábitos inapropiados más adelante.
FUNDAMENTO TEORICO
1. PRECISIÓN Y EXACTITUD
Cuanto menores sean estos valores, más reproducible o precisa será la medición. La precisión se
determina mediante el uso de muestras de alimentos reales, que cubren un rango de concentraciones
y una variedad de materiales interferentes que generalmente encuentra el analista. Estos datos no
deben recopilarse hasta que el analista esté familiarizado con el método y haya obtenido una curva
estándar reproducible (una relación matemática entre la concentración de analito y la respuesta
analítica).
Hay varios métodos diferentes disponibles para la determinación de la precisión. Sigue un método:
1. Deben estudiarse tres niveles de concentración distintos, incluida una concentración baja
cercana al nivel de sensibilidad del método, una concentración intermedia y una concentración
cercana al límite superior de aplicación del método.
2. Deben realizarse siete determinaciones repetidas en cada una de las concentraciones
ensayadas.
3. Para permitir cambios en las condiciones del instrumento, el estudio de precisión debe cubrir
al menos 2 h de funcionamiento normal del laboratorio.
4. Para permitir las máximas interferencias en la operación secuencial, se sugiere que las
muestras se procesen en el siguiente orden: alto, bajo e intermedio. Luego, esta serie se repite
siete veces para obtener la replicación deseada.
5. La declaración de precisión debe incluir un rango de desviaciones estándar sobre el rango de
concentración probado. Por tanto, se obtendrán tres desviaciones estándar en un rango de tres
concentraciones.
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La exactitud se refiere al grado (absoluto o relativo) de diferencia entre los valores observados y
"reales". El valor "real" a menudo es difícil de determinar. Puede ser el valor obtenido por un método
de referencia estándar (la forma aceptada de realizar una medición). Otro medio de evaluar la exactitud
es mediante la adición de una cantidad conocida del material que se está analizando a la muestra de
alimento y luego realizar el cálculo del % de recuperación. Este último enfoque implica los siguientes
pasos:
Un medio rápido y menos riguroso de evaluar la precisión y exactitud es analizar una muestra de
alimento y replicar una muestra de alimento enriquecida, y luego calcular la recuperación de la cantidad
enriquecida. En la Tabla 1.1 se muestra un ejemplo.
A continuación, la exactitud se puede medir calculando el % del contaminante (0,75 g/L) detectado
comparando los valores medidos de las muestras sin contaminante y con contaminante:
% ó 100%
2.0955
% ó 100%
1.2955 0.75
% ó 102.44%
2. BALANZAS
Tipos de balanzas
Se utilizan dos tipos generales de balanzas. Balanzas de carga superior y las balanzas analíticas.
Las balanzas de carga superior suelen ser sensibles a 0,1–0,001 g, dependiendo del modelo específico
en uso. En general, a medida que aumenta la capacidad (mayor masa que se puede medir), la
sensibilidad disminuye.
Las balanzas analíticas suelen ser sensibles a 0,001–0.00001 g, dependiendo del modelo específico. Sin
embargo, hay que recordar que la sensibilidad (capacidad de detectar pequeñas diferencias de masa)
no es necesariamente igual a la exactitud (el grado en que las balanzas informan correctamente de la
masa real). La precisión de una balanza es independiente de su sensibilidad.
Elección de la balanza
El tipo de balanza a utilizar depende de "cuánta exactitud" se necesita en una medida determinada.
Una manera de determinar esto es calculando cuánto error relativo (%) sería introducido por un tipo
determinado de balanza. Por ejemplo, Si se necesita 0,1 g de un reactivo, pesarlo en una balanza de
carga superior con una exactitud de solo ± 0,02 g de la masa real introduciría aproximadamente un 20%
de error:
! ó
% 100%
0.02 "
% 100% 20%
0.1 "
Esto sería claramente inaceptable en la mayoría de las situaciones. Por lo tanto, se necesitaría una
balanza más exacta. Sin embargo, la misma balanza (con una exactitud inferior a 0,02 g) probablemente
sería aceptable para pesar 100 g de reactivo, ya que el error sería aproximadamente del 0,02 %:
! ó
% 100%
0.02 "
% 100% 0.02%
100 "
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La decisión sobre "cuánta exactitud" es necesaria sólo puede ser respondida cuando se conoce la
función del reactivo en el método analítico y la química involucrada en el mismo. Otra situación en la
que se debe tener cuidado es cuando se debe calcular una diferencia en las masas, ya que dado muchas
veces se está determinando una diferencia de peso muy pequeña el error aportado por la balanza
debería ser muy pequeño. En este caso, definitivamente se requiere una balanza analítica.
Estas instrucciones son generalizadas, pero se aplican al uso de la mayoría de los modelos de balanzas
de carga superior:
1. Nivele la balanza utilizando el nivel de burbuja y los pies ajustables (se requiere nivelación para
que la balanza funcione correctamente).
2. Poner en cero o tarar la balanza con un contenedor que sostenga la muestra (vaso vacío, bote
de pesaje, etc.) en la bandeja de pesaje.
3. Pesar la muestra.
Uso de balanzas analíticas
1. Las balanzas analíticas son instrumentos de precisión caros; tratarlos como tales.
2. Asegúrese de que la balanza esté nivelada y esté en una mesa o banco robusto y libre de
vibraciones.
3. Una vez que se cumplen estas condiciones, se utiliza el mismo procedimiento especificado
anteriormente para las balanzas de carga superior para pesar la muestra en una balanza
analítica.
4. Siempre deje la balanza limpia.
Información adicional
Otros puntos a tener en cuenta con respecto al uso de balanzas son los siguientes:
1. Muchos análisis (humedad, cenizas, etc.) requieren el pesaje de la muestra seca con el
recipiente. La masa del recipiente debe ser conocida para que pueda ser restada de la masa
final para obtener la masa de la muestra seca o ceniza. Por lo tanto, asegúrese de obtener la
masa del recipiente antes del análisis. Esto se puede hacer pesando el recipiente antes y luego
añadir la muestra u obtener la masa del recipiente y luego la masa del recipiente más la
muestra.
2. La acumulación de humedad del aire o huellas dactilares en la superficie de un recipiente
añadirá una pequeña masa a la muestra. Esto puede introducir errores en masa que afectan a
los resultados analíticos, especialmente cuando se utilizan balanzas analíticas.
3. Por lo tanto, los recipientes de pesaje deben manipularse con pinzas o con las manos
recubiertas. Los recipientes de pesaje deben secarse previamente y almacenarse en un
desecador antes de su uso, y luego almacenarse en un desecador después de secar, cenizas,
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etc. antes de pesar la muestra enfriada. Las corrientes de aire o la inclinación en el banco
pueden causar un error apreciable en las balanzas analíticas. Lo mejor es tomar la lectura
después de cerrar las puertas laterales de un balance analítico.
https://www.youtube.com/watch?v=oik6gbPSouM
3. PIPETAS MECANICAS
Aunque estas pipetas pueden ser vistas por muchos como más fáciles de usar que las pipetas
volumétricas de vidrio convencionales, esto no significa que se pueda obtener la precisión y exactitud
necesarias sin prestar atención a la técnica de pipeteo adecuada.
Operación
https://www.youtube.com/watch?v=fRBJ5c9D4II
Pre-enjuague
Para pipetear soluciones muy viscosas o disolventes orgánicos suele generarse una película que se
retiene en la pared interior de la punta, esto dará lugar a un error que será mayor que la tolerancia
especificada. Dado que esta película permanece relativamente constante en pipeteos sucesivos con la
misma punta, la exactitud puede mejorarse llenando la punta, dispensando el volumen en un
contenedor de residuos, rellenando la punta por segunda vez y utilizando esta cantidad como muestra.
Tenga en cuenta que la "no humectabilidad" de la punta de polipropileno no es absoluta y que el pre-
enjuague mejorará la precisión y la exactitud al pipetear cualquier solución.
Especificaciones de rendimiento
https://youtu.be/4E65qctOPUo
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Aunque las pipetas automáticas pueden dispensar una amplia gama de volúmenes, es posible que a
menudo tenga que elegir la pipeta con la mayor exactitu/precisión entre varias opciones. Por ejemplo,
una pipeta automática P5000 (es decir, 5 mL) podría teóricamente pipetear en cualquier lugar entre 0
y 5 ml. Sin embargo, hay varias limitaciones que dictan qué pipetas utilizar. La primera es una limitación
práctica: las pipetas mecánicas están limitadas por las graduaciones (los incrementos) de la pipeta. Los
P5000 y P1000 son típicamente ajustables en incrementos de 0,01 ml (10 µL). Por lo tanto, estas pipetas
no pueden dispensar volúmenes de <10 µL, ni pueden dispensar volúmenes con más precisión que los
de 10 µL. Sin embargo, el hecho de que estas pipetas se puedan ajustar técnicamente a 10 µL no
significa que deban utilizarse para medir volúmenes en cualquier lugar cerca de este valor pequeño. La
mayoría de las pipetas están etiquetadas con un rango de trabajo que enumera el volumen mínimo y
máximo, pero este no es el rango para un rendimiento ideal. Las pipetas mecánicas deben funcionar
desde el 100 % hasta el 10-20 % de su capacidad máxima (cuadro 1.5). Por debajo del 10%-20 % de su
capacidad máxima, el rendimiento (exactitud y precisión) disminuye.
Las pipetas mecánicas deben ser calibradas, lubricadas y mantenidas al menos anualmente por un
técnico experto. Pesar el agua dispensada es a menudo una buena comprobación para ver si la pipeta
necesita calibración.
4. CRISTALERÍA
Tipos de cristalería/plástico
El vidrio es el material más utilizado para la construcción de recipientes de laboratorio. Hay muchos
grados y tipos de cristalería para elegir, que van desde la calificación más simple a otros que poseen
propiedades específicas como resistencia a choque térmico o álcali, bajo contenido de boro, y súper
fuerza.
El tipo más común es el vidrio borosilicato de alta resistencia, como el fabricado por Corning Glass
Works bajo el nombre "Pyrex" o por Kimble Glass Co. Conocido como "Kimax". Tambien podemos
encontrar cristalería actínica marrón/ámbar, que bloquea la luz UV e IR para proteger las soluciones y
muestras sensibles a la luz.
El uso de recipientes y otros aparatos de teflón, polietileno, poliestireno y polipropileno es común. Los
tapones de tope de teflón prácticamente han reemplazado los tapones de vidrio en buretas, embudos
separadores, etc., porque no se requiere lubricación para evitar que se peguen. El polipropileno, un
polímero de metilpenteno, está disponible como botellas de laboratorio, cilindros graduados, vasos e
incluso matraces volumétricos (fiolas). Hay disponibles recipientes de teflón (politetrafluoroetileno,
PTFE), aunque son muy caros. Finalmente, la mayoría de la cristalería tiene una superficie polar. Ante
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esto la cristalería puede ser tratada (normalmente, tetrametilsilano, o TMS) para hacerla no polar, lo
que es necesario para algunos ensayos. Sin embargo, el lavado con ácido eliminará esta capa no polar.
Elegir cristalería/plástico
Algunos puntos a tener en cuenta a la hora de elegir cristalería y/o plastifico son los siguientes:
1. Generalmente, no se requieren tipos especiales de vidrio para realizar la mayoría de los análisis.
2. Los reactivos y las soluciones estándar deben almacenarse en botellas de borosilicato o
polietileno.
3. Ciertas soluciones metálicas pueden adherirse a las paredes de los recipientes de vidrio durante
largos períodos de almacenamiento. Por lo tanto, las soluciones estándar de metalicas deben
prepararse frescas para el momento del análisis.
4. Los ácidos minerales fuertes (como el ácido sulfúrico) y los disolventes orgánicos atacarán
fácilmente el polietileno; por lo tanto deben almacenarse mejor en vidrio o un plástico
resistente.
5. La cristalería de borosilicato no es completamente inerte, particularmente para los álcalis; por
lo tanto, las soluciones estándar de sílice, boro y sustancias alcalinas (como NaOH) se
almacenan generalmente en botellas de polietileno.
6. Ciertos disolventes disuelven algunos plásticos, incluidos los plásticos utilizados para puntas de
pipeta, pipetas serológicas, etc. En especial la acetona y el cloroformo.
7. Cuando utilice disolventes, compruebe la compatibilidad con los plásticos que está utilizando.
Los plásticos disueltos en disolventes pueden causar diversos problemas, incluyendo la
unión/precipitación del analito de interés, la interferencia con el ensayo, obstrucción en los
instrumentos, etc.
8. Los tapones de vidrio esmerilado requieren cuidado. Evite mezclar bases con cualquier vidrio
esmerilado porque la base puede hacer que se "congelen" (es decir, quedarse atascados). Los
cristales con conexiones de vidrio esmerilado (buretas, matraces volumétricos, embudos
separadores, etc.) son muy caros y deben manipularse con extremo cuidado.
Se sugiere revisar los catálogos de los diversos fabricantes de materiales de vidrio y plástico.
Cristalería volumétrica
La cristalería calibrada para mediciones precisas y exactas de volumen se conocen como cristalería
volumétrica. Este grupo incluye matraces volumétricos (fiolas), pipetas volumétricas y buretas. Los tipos
menos precisos de cristalería son: los cilindros graduados (probetas), las pipetas serológicas y las
pipetas de medición, también tienen usos específicos en el laboratorio analítico cuando los volúmenes
exactos son innecesarios.
Los matraces volumétricos o fiolas deben utilizarse en la preparación de soluciones estándar, pero no
para almacenar reactivos. La precisión de un método analítico depende en parte de la precisión con la
que se pueden medir los volúmenes de soluciones, debido a los parámetros inherentes del instrumento
de medición.
Hay ciertas fuentes de error, que deben ser cuidadosamente considerados. El aparato volumétrico debe
leerse correctamente; la parte inferior del menisco debe ser tangente a la marca de calibración.
Sin embargo, hay otras fuentes de error, como los cambios de temperatura, que dan lugar a cambios
en la capacidad real del aparato de vidrio y en el volumen de las soluciones. Por lo tanto, las soluciones
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deben medirse a la temperatura a la que se calibra el aparato. Esta temperatura (normalmente 20 ºC)
se indicará en todos los utensilios volumétricos.
También puede haber errores de calibración del aparato de medición ajustable, es decir, el volumen
marcado en el aparato puede no ser el verdadero volumen. Estos errores sólo pueden eliminarse
recalibrando el aparato (si es posible) o sustituyéndolo.
Un aparato volumétrico se calibra "para contener" o "para entregar" un volumen definido de líquido.
Esto se indicará en el aparato con las letras "TC" (para contener) o "TD" (para entregar). Los matraces
volumétricos se calibran para que contengan un volumen determinado, lo que significa que el matraz
contiene el volumen especificado. El volumen TC certificado sólo se aplica al volumen contenido en el
matraz y no tiene en cuenta el volumen de solución que se pegará a las paredes del matraz si se vierte
el líquido. Por lo tanto, por ejemplo, un matraz volumétrico TC 250 ml tendrá una tolerancia definida
de 250 ml; si el líquido se vierte, se dispensará un poco menos de 250 ml debido a la solución retenida
en las paredes del matraz (esto es lo contrario de "entregar" o TD). Los cilindros graduados, por otro
lado, pueden ser TC o TD.
Las pipetas volumétricas se calibran normalmente para ofrecer un volumen fijo. Las capacidades
habituales son de 1 a 100 ml, aunque también están disponibles pipetas micro volumétricas. La técnica
adecuada para el uso de pipetas volumétricas es la siguiente (esta técnica es para pipetas TD, que son
mucho más comunes que las pipetas TC):
1. Succione el líquido que será entregado por la pipeta por encima de la línea de aforo de la pipeta.
Utilice siempre una bombilla de pipeta (pipetor) para extraer el líquido en la pipeta. Nunca
pipetee por vía oral.
2. Si utiliza una bombilla de succión retírela una vez realizada la succión y reemplácela con el dedo
índice, si usa un pipetor de succión y entrega no hace falte este paso.
3. Retire la pipeta del líquido y limpie la punta con papel tisú. Toque la punta de la pipeta contra
la pared del recipiente del que se retiró el líquido (o un vaso de precipitados). Suelte
lentamente la presión del dedo en la parte superior de la pipeta y permita que el nivel de líquido
en la pipeta caiga de modo que la parte inferior del menisco esté alineada con la línea de aforo
de la pipeta.
4. Mueva la pipeta al vaso de precipitados u otro instrumento donde se dispondrá el líquido
medido. No limpie la punta de la pipeta en este momento. Deje que la punta de la pipeta toque
el lado del vaso de precipitados o del matraz. Sosteniendo la pipeta en posición vertical, deje
que el líquido drene de la pipeta.
5. Deje que la punta de la pipeta permanezca en contacto con el lado del vaso de precipitados o
el matraz durante varios segundos. Retire la pipeta. Quedará una pequeña cantidad de líquido
en la punta de la pipeta. No sople este líquido con la bombilla, ya que las pipetas TD están
calibradas para tener en cuenta este líquido que permanece.
Tenga en cuenta que algunas pipetas volumétricas tienen marcas de calibración para las mediciones TC
y TD. Asegúrese de usar TD para las transferencias.
Las pipetas de medición y serológicas también deben mantenerse en posición vertical para dispensar
líquidos; sin embargo, la punta de la pipeta sólo se toca a la superficie húmeda del recipiente receptor
después de que la salida haya cesado. Algunas pipetas están diseñadas para que la pequeña cantidad
de líquido que queda en la punta se expulse y se agregue al recipiente receptor; tales pipetas tienen
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una banda esmerilada cerca de la parte superior. Si no hay una banda esmerilada cerca de la parte
superior de la pipeta, no sople ningún líquido restante.
Por lo general, las diluciones se realizan añadiendo un líquido (agua o un disolvente) a una muestra o
solución.
Las concentraciones pueden realizarse mediante una variedad de métodos, incluyendo evaporación
rotativa, evaporación por agitación al vacío, centrifugación al vacío, ebullición, secado al horno, secado
bajo gas N2 o secado por congelación.
Para llevar muestras o soluciones hasta un volumen conocido, el material que proporciona la máxima
precisión y exactitud es un matraz volumétrico de vidrio de clase A (Fig. 1.1a). Estos matraces están
clasificados como TC. Por lo tanto, no se utilizan para entregar o transferir muestras cuantitativamente
porque no se conoce el volumen de entrega.
Para transferir un volumen conocido de una muestra líquida para una dilución o concentración, el
instrumental que proporciona la máxima precisión y exactitud es una pipeta volumétrica de vidrio de
clase A (Fig. 1.2a). Estas pipetas están clasificadas como "para entregar" (TD), lo que significa que la
pipeta entregará el volumen especificado a una tolerancia definida (error). (no forzar a que todo el
líquido salga, ya que está considerado en el error).
Tanto para matraces volumétricos como para pipetas, el nivel de volumen del líquido (aforo) que
proporciona se indica mediante una línea (generalmente blanca o roja) grabada o impresa en el cuello
de la cristalería. Para alcanzar el volumen TD o TC, la parte inferior del menisco del líquido debe estar
en la línea como se muestra en la Fig. 1.4.
Para un matraz volumétrico, la técnica adecuada para alcanzar el volumen correcto es verter el líquido
en el matraz hasta que el menisco esté cerca de la línea de marcado, y luego añadir líquido adicional
por gota (con una pipeta manual o pipeta Pasteur) hasta que la parte inferior del menisco esté en la
línea con el nivel del ojo.
Si el nivel del líquido es demasiado alto, el líquido se puede eliminar con una pipeta limpia (o el líquido
se vierte y empezar de nuevo). Sin embargo, tenga en cuenta que esto no se puede hacer al preparar
un reactivo para el que los solutos se midieron con exactitud en el matraz y se está agregando líquido
para compensar el volumen. En este caso, debe empezar de nuevo.
Por esta razón, la mejor práctica es agregar líquido lentamente, y luego usar una pipeta para agregar
líquido por gotas al acercarse al volumen deseado. Para una pipeta volumétrica, la técnica adecuada
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para lograr el volumen correcto es extraer líquido en la pipeta hasta que el menisco esté por encima
de la línea, y luego retirar la pipeta del líquido y dispensar el exceso de líquido de la pipeta hasta que la
parte inferior del menisco esté en la línea. Es fundamental que la pipeta se retire de la solución para
este paso. Si el nivel del líquido va por debajo de la línea, se elabora líquido adicional y se repite el
proceso. Las mediciones volumétricas adecuadas requieren práctica y deben repetirse hasta que se
realicen correctamente. Las mediciones volumétricas incorrectas pueden dar lugar a errores
significativos en la medición. Las tolerancias típicas para la cristalería de laboratorio se presentan en las
Tablas 1.6 y 1.7. Las referencias para las especificaciones ASTM se encuentran en
http://www.astm.org/.
Convenciones y Terminología
Una frase común en las diluciones y concentraciones es "diluida a" o "diluida a un volumen final de."
Esto significa que la muestra o solución se coloca en un matraz volumétrico y el volumen final se ajusta
al valor especificado. Por el contrario, la frase "diluido con" significa que la cantidad especificada se
añade a la muestra o solución. En este último caso, la masa/volumen final debe calcularse añadiendo
la masa/volumen de la muestra y la cantidad de líquido añadido. Por ejemplo, supongamos que toma
un volumen de 1,7 ml y (1) diluye a 5 ml con metanol o (2) diluye con 5 ml de metanol. En el primer
caso, esto significa que la muestra (1,7 ml) se coloca en un matraz volumétrico y se añade metanol (3,3
ml) para que el volumen final sea de 5 ml en total. En el segundo caso, la muestra (1,7 ml) se combina
con 5 ml de metanol, y el volumen final es de 6,7 ml. Como puede ver, estos son valores muy diferentes.
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Este siempre será el caso excepto cuando uno de los volúmenes es mucho más grande que el otro. Por
ejemplo, si estuviera trabajando con una muestra de 10 µL, diluirla "a 1L" o "con 1 L" daría como
resultado volúmenes finales de 1 L y 1.00001 L, respectivamente. Es importante comprender las
diferencias entre estas dos convenciones para realizar procedimientos correctamente e interpretar los
datos con precisión.
Una "dilución de X-fold" significa que la concentración de una muestra disminuye (y normalmente el
volumen aumenta) en un factor dado. Por ejemplo, si 5 ml de una solución de NaCl al 18,9 % se diluye
diez veces con agua, se añade 45 ml de agua para que el volumen final sea de 50 ml y la concentración
final sería del 1,89 % de NaCl. Por el contrario, una "concentración de X-fold" significa que la
concentración de una muestra aumenta por el factor indicado. Por ejemplo, si 90 ml de una solución
salina de 0,31 ppm se concentra diez veces, el volumen se reduce a 9 ml (ya sea reduciendo a 9 ml o
secándose completamente y reconstituyendo a 9 ml), y la concentración final es de 3,1 ppm de sal.
El último sistema terminológico para diluciones y concentraciones implica ratios. Este sistema es algo
ambiguo, eeste sistema se refiere a las diluciones como "X:Y", donde X e Y son las masas o volúmenes
de las soluciones/muestras iniciales y finales. Por ejemplo, se puede afirmar que "la solución se diluyó
1:8." Este sistema es ambiguo por las siguientes razones:
1. El primer y último número se refieren típicamente a las muestras inicial y final, respectivamente
(por lo tanto, una dilución 1:8 significaría 1 parte de la muestra inicial y 8 partes de la muestra
final). Sin embargo, no hay una convención estándar. Por lo tanto, una dilución "X:Y" podría
interpretarse de cualquier manera.
2. No existe una convención estándar en cuanto a si este sistema describe el enfoque "diluido a" o
"diluido con" (como se describió anteriormente). Por lo tanto, diluir una muestra 1:5 podría
interpretarse como (1) diluir 1 ml de muestra con 4 ml para un volumen final de 5 ml ("diluido a")
o (2) diluir 1 ml de muestra con 5 ml para un volumen final de 6 ml ("diluido con").
Debido a estas ambigüedades, el sistema de ratios se desaconseja en favor de la terminología "X-fold".
Otro factor a tener en cuenta es que los volúmenes de líquidos a menudo no son estrictamente aditivos.
Por ejemplo, 500 ml v/v etanol aq. 95 % añadido a 500 ml de agua destilada no será igual a 1000 ml; de
hecho, el nuevo volumen estará más cerca de 970 ml. ¿Adónde fueron los 30 ml desaparecidos? Las
moléculas polares como el agua se someten a una unión intermolecular tridimensional diferente en
una solución pura frente a una mezcla con otros solutos o productos químicos como el etanol. La
diferencia en la unión causa una contracción aparente en este caso. Además, la adición de soluto a un
volumen exacto de agua cambiará el volumen después de disolverse.
Buretas
Las buretas se utilizan para entregar volúmenes definidos. Los tipos más comunes son generalmente
de 25 o 50 ml de capacidad, graduados a décimas de mililitro, y se proporcionan con llaves. Para
métodos analíticos precisos en microquímica, también se utilizan microburetas. Las microburetas
generalmente son de 5 o 10 mL de capacidad, graduados en centésimas de una división de mililitros.
Las normas generales relativas a la manipulación de un buret son las siguientes:
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1. No intente secar una bureta que haya sido limpiada después de su uso, sino enjuáguelo dos o
tres veces con un pequeño volumen de la solución con la que debe rellenarse.
2. No permita que las soluciones alcalinas se pongan en mucho contacto con la bureta, porque el
vidrio será atacado, y el tapón, a menos que esté hecho de teflón, tenderá a soldarse.
3. Una bureta de 50 ml no debe vaciarse a una velocidad mayor que 0,7 ml por segundo, dando
una lectura falsa alta. Cabe destacar que el uso indebido y/o la lectura de buretas puede dar
lugar a graves errores de cálculo.
El vidrio debe estar absolutamente limpio. El método de limpieza debe adaptarse tanto a las sustancias
que se van a eliminar como a la determinación que debe realizarse.
Las sustancias solubles en agua simplemente se lavan con agua caliente o fría, y el recipiente finalmente
se enjuaga con pequeñas cantidades sucesivas de agua destilada. Otras sustancias más difíciles de
eliminar, como los residuos de lípidos o el material quemado, pueden requerir el uso de detergente,
disolvente orgánico, ácido nítrico o agua regia (25 % v/v conc. HNO3 en conc. HCl). En todos los casos
es una buena práctica enjuagar un recipiente con agua del grifo tan pronto como sea posible después
de su uso y luego se debe dejar secar.
5. REACTIVOS
Los reactivos químicos, disolventes y gases están disponibles en una variedad de grados de pureza,
incluyendo grado técnico, grado de reactivo analítico y varios grados "ultrapuros". La pureza de estos
materiales requeridos en la química analítica varía según el tipo de análisis. El parámetro que se mide
y la sensibilidad y especificidad del sistema de detección son factores importantes para determinar la
pureza de los reactivos requeridos.
El grado técnico es útil para la fabricación de soluciones de limpieza, como el ácido nítrico y las
soluciones de hidróxido de potasio alcohólico mencionados anteriormente.
Otros análisis, por ejemplo, trazas orgánicas y HPLC, requieren con frecuencia reactivos y disolventes
"ultrapur" especiales.
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En los métodos para los que no se especifica la pureza de los reactivos, se pretende utilizar el grado de
reactivo analítico. No deben utilizarse reactivos de menor pureza que los especificados por el método.
Ácidos
Agua destilada
El agua destilada ordinaria no suele ser pura. Puede estar contaminada por gases disueltos y por
materiales lixiviados del recipiente en el que se ha almacenado. Pueden estar presentes productos
orgánicos volátiles destilados a partir del agua de alimentación de origen original, y ocasionalmente las
impurezas no volátiles pueden ser transportadas por el vapor, en forma de aerosol. La concentración
de estos contaminantes suele ser bastante pequeña, y el agua destilada se utiliza para muchos análisis
sin purificación adicional. Existen una variedad de métodos para purificar el agua, como la destilación,
la filtración y el intercambio iónico. La destilación emplea la ebullición del agua y la condensación del
vapor resultante, para eliminar las impurezas no volátiles (como los minerales). El intercambio de iones
emplea cartuchos embalados con residuos iónicos (normalmente cargados negativamente) para
eliminar los contaminantes cargados (normalmente minerales cargados positivamente) cuando el agua
se pasa a través del cartucho. Por último, la filtración y la ósmosis inversa eliminan las partículas
insolubles por encima de un tamaño específico.
La pureza del agua se ha definido de muchas maneras diferentes, pero una definición generalmente
aceptada indica que el agua de alta pureza es el agua que ha sido destilada y/o desionizada de modo
que tendrá una resistencia específica de 500,000 Ω (2.0 µΩ/cm de conductividad) o superior. Esta
definición es satisfactoria como base para trabajar, pero para requisitos más críticos, se ha sugerido
que el desglose que se muestra en el Cuadro 1.9 expresa grados de pureza. El agua destilada se produce
generalmente en un alambique de metal calentado al vapor. El agua de alimentación se (o debe)
ablandarse para eliminar el calcio y el magnesio para evitar la formación de escamas (carbonato de Ca
o Mg) Varias empresas producen sistemas de intercambio iónico que utilizan cartuchos de resina
envasadas para producir "agua destilada". La vida útil de un cartucho de intercambio iónico es en gran
medida una función del contenido mineral del agua de alimentación.
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El dióxido de carbono (CO2) disuelto en el agua puede interferir con muchas mediciones químicas. Por
lo tanto, es posible que sea necesario producir agua libre de CO2. El agua libre de CO2 se puede preparar
hirviendo agua destilada durante 15 minutos y enfriando a temperatura ambiente. Como alternativa,
el agua destilada puede airearse vigorosamente con una corriente de gas inerte (por ejemplo, N2 o He2)
durante un período suficiente para lograr la eliminación de CO2. El pH final del agua debe estar
comprendido entre 6.2 y 7.2. Para garantizar que el agua libre de CO2 permanezca así, se debe instalar
una trampa de ascarite en el recipiente de modo que el aire que entra en el recipiente esté libre de
CO2. Ascarite es sílice recubierta con NaOH, y elimina el CO2 por la siguiente reacción:
La preparación exacta y reproducible de reactivos de laboratorio es esencial para una buena práctica
de laboratorio.
Los reactivos líquidos se preparan utilizando cristalería volumétrica (pipetas y matraces) según
corresponda. Para preparar soluciones a partir de reactivos sólidos (como hidróxido de sodio):
Además, si se utiliza una barra de agitación, asegúrese de quitar esto después de que la solución se
disuelva, pero antes de diluir al volumen. Tenga en cuenta que se prefiere la sonicación al uso de una
barra de agitación en un matraz volumétrico.
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Los siguientes procedimientos similares se utilizan para preparar reactivos a partir de dos o más
líquidos:
Cifras significativas
El término cifra significativa se utiliza bastante vagamente para describir algún juicio del número de
dígitos reportables en un resultado. A menudo el juicio no está basado sólidamente y se pierden dígitos
significativos o se aceptan dígitos sin sentido. El uso adecuado de cifras significativas da una indicación
de la fiabilidad del método analítico utilizado. Por lo tanto, los valores notificados deben contener sólo
cifras significativas. Un valor se compone de cifras significativas cuando contiene todos los dígitos que
se sabe que son verdaderos y un último dígito en duda. Por ejemplo, si un valor se notifica en 18.8 mg/l,
el "18" debe ser un valor firme, mientras que el "0.8" es algo incierto y puede estar entre "0.7" o "0.9."
El número cero puede o no ser una cifra significativa:
1. Los ceros finales después de un punto decimal son siempre cifras significativas. Por ejemplo,
9,8 g al mg más cercano se notifica como 9.800 g.
2. Los ceros antes de un punto decimal con otros dígitos anteriores son significativos. Sin ningún
dígito anterior, un cero antes del punto decimal no es significativo.
3. Si no hay dígitos que preceden a un punto decimal, los ceros después del punto decimal pero
anteriores a otros dígitos no son significativos. Estos ceros solo indican la posición del punto
decimal.
4. Los ceros finales en un número entero pueden o no ser significativos. En una medición de
conductividad de 1000 µΩ/cm, no hay implicación de que la conductividad sea de 1000 ±
1µΩ/cm. Más bien, los ceros sólo indican la magnitud del número.
Una buena medida de la importancia de uno o más ceros antes o después de otro dígito es determinar
si los ceros se pueden quitar expresando el número en forma exponencial. Si pueden, los ceros no son
significativos. Por ejemplo, no se puede descartar ningún cero al expresar un peso de 100.08 g en forma
exponencial; por lo tanto, los ceros son significativos. Sin embargo, un peso de 0.0008 g se puede
expresar en forma exponencial como 8 x 10 4 g, y los ceros no son significativos.
Cifras significativas reflejan los límites del método de análisis en particular. Si se necesitan cifras más
significativas, se requerirá la selección de otro método para producir un aumento de las cifras
significativas.
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Una vez establecido el número de cifras significativas para un tipo de análisis, los datos resultantes de
dichos análisis se reducen de acuerdo con las reglas establecidas para el redondeo.
Redondear números es una operación necesaria en todas las áreas analíticas. Sin embargo, a menudo
se aplica incorrectamente en los cálculos químicos por regla ciega o prematuramente y, en estos casos,
puede afectar seriamente a los resultados finales. Normalmente, el redondeo debe aplicarse de la
siguiente manera:
1. Si la cifra siguiente a las que se deben conservar es inferior a 5, la cifra se elimina y las cifras
retenidas se mantienen sin cambios. Por ejemplo, 11.443 se redondea a 11.44.
2. Si la cifra siguiente a conservar es mayor que 5, la cifra se elimina y la última cifra retenida se
eleva en 1. Por ejemplo, 11.446 se redondea a 11.45.
3. Cuando la cifra siguiente a los que se deben conservar es 5 y no hay cifras que no sean ceros
más allá de la 5, la cifra se elimina, y la última cifra de lugar retenida se incrementa en 1 si es
un número impar, o se mantiene sin cambios si es un número par. Por ejemplo, 11.435 se
redondea a 11.44, mientras que 11.425 se redondea a 11.42.
Adición de operaciones: Al agregar una serie de números, la suma debe redondearse al mismo número
de decimales que se añaden al final con el menor número de lugares. Sin embargo, la operación se
completa con todos los decimales intactos y el redondeo se realiza después.
Como ejemplo:
Multiplicación: Cuando se van a multiplicar dos números de dígitos desiguales, todos los dígitos se
llevan a través de la operación y, a continuación, el producto se redondea al número de dígitos
significativos del número menos preciso.
División: Cuando se van a dividir dos números de dígitos desiguales, la división se lleva a cabo en los
dos números utilizando todos los dígitos. A continuación, el cociente se redondea al número inferior de
dígitos significativos entre los dos valores.
Potencias y raíces: Cuando un número contiene n dígitos significativos, su raíz se puede confiar en n
dígitos, pero su potencia rara vez se puede confiar en n dígitos.
Las reglas para redondear son razonables para cálculos simples. Sin embargo, cuando se trata de dos
números casi iguales, existe el peligro de pérdida de datos importantes cuando se aplica a una serie de
cálculos que se basan en una diferencia relativamente pequeña en dos valores.
Información Varia:
1. Cuando combine ácido y agua, agregue siempre el ácido al agua (en lugar de añadir agua al
ácido). Cuando el ácido se disuelve en agua, se libera calor. Esto puede causar salpicaduras de la
solución. Al agregar el ácido al agua, el calor se disipa, y la salpicadura se reduce o elimina.
2. Tenga en cuenta que la disolución de hidróxido de sodio en el agua genera calor. Hacer altas
concentraciones de hidróxido sódico acuoso puede conducir a soluciones muy calientes que
pueden quemar las manos desnudas. Deje que estas soluciones se enfríen o manipule con
guantes resistentes al calor.
3. Los vidrios rotos y otros objetos punzantes (cuchillas de afeitar, cuchillas de bisturí, agujas, etc.)
deben desecharse en recipientes resistentes a los pinchazos.
4. No vierta residuos ni productos químicos por el drenaje. Esta práctica puede dañar las tuberías
del edificio y dañar el medio ambiente. Deseche los desechos líquidos, sólidos, clorados,
radiactivos y de riesgo biológico en los recipientes apropiados proporcionados por el instructor
de laboratorio. Si no está seguro de cómo eliminar correctamente los residuos, pregunte a su
instructor o asistente de enseñanza.
5. Manipule compuestos volátiles, nocivos o corrosivos en la campana con el EPP adecuado.
MATERIALES Y METODOS
Videos.
Libro de Laboratorio de análisis de los alimentos de Nielsen.
Ejercicios.
RESULTADOS Y DISCUSION
PREGUNTAS
REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA
Analytical Quality Control Laboratory. 2010. Handbook for analytical quality control in water and
wastewater laboratories.U.S. Environmental Protection Agency,Technology Transfer.
Anonymous. 2010. Instructions for Gilson Pipetman. Rainin Instrument Co., Inc., Washburn, MA.
Applebaum, S.B. and Crits, G.J. 1964. “Producing High Purity Water”. Industrial Water Engineering.
Smith JS. 2017. Evaluation of analytical data, Ch. 4, In: Nielsen SS (ed.) Food analysis, 5th edn. Springer,
New York.
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Willare, H.H. and Furman, W.H. 1947. Elementary Quantitative Analysis – Theory and Practice. Van
Norstrand Co., Inc., New York.