Capacitación y Evaluación

Espermática
Semen Sexado, Semen Reverso y
Fecundación In Vitro

Prof. Hugo Hernández Fonseca, Ph.D.

Laboratorio de Fecundación In Vitro
Unidad de Investigación en
Biotecnología Animal
UNIBIO
Maracaibo, Octubre, 2017.
Preparacion del Semen para FIV
Complejo Cumulus Oocito (CCO)
Oocito en Metafase II (Maduro)
FECUNDACIÓN in vitro (FIV)

24 hs pós
início de MIV
 FECUNDACIÓN in vitro (FIV)

PREPARADO DE SÊMEN CONGELADO

 Lavage

 Gradiente de percoll

PHE

CAPACITACION ESPERMÁTICA

 Heparina

 Solução con alta fuerza ionica

 Calcio ionophoro a 23187

 Fluido e monocamada de oviducto

FECUNDACIÓN in vitro (FIV)

25x106 Concentración
sptz Motilidad
vivos/mL Volumen
 FECUNDACIÓN in vitro (FIV)

Taurina
Cafeína e glutation

HEPARINA
BASES DEL SEMEN SEXADO POR
CITOMETRIA DE FLUJO

 X MAS DNA
 TINCIÓN DEL DNA CON
 HOECHST
 LUZ UV
 SEÑAL AMPLIFICADA
 SEÑAL INTERPRETADA: X, Y , AMBIGUO
 SEXAJE DE SEMEN
Proceso de diferenciación espermática se
basa:

 ADN espermático se tiñe con tinte UV-

excitable.

 Existe mayor cantidad de ADN contenido

en los espermatozoides x (2-4 %).

 La cantidad de tinción detectada es

proporcional a la cantidad de ADN
presente.
FGHGJHJHKJ
 TECNOLOGIA DISPONIBLE

APLICACIÓN COMERCIAL: Disponible desde 2006.

EFICIENCIA: 25% Aprox.

PRECISION: 90%

DURACION: 1 - 2 horas

EQUIPO: Flow Cytometer/Cell Sorter

RETO: Incrementar tasa de preñez

EFECTO DE DIFERENTES TASAS DE SEPARACIÓN
SOBRE LA PUREZA DE X

# Spz sexados por hora con respecto al grado de pureza de X

9 x 106 12 x 106 16 x 106 18 x 106

84 % 81 % 78 % 73 %
AVANCES Y PROBLEMAS

 Orientación  Precapacitados
 1000 spz/sec Deteriorados
 Muertos
 Bajo número
 SEMEN SEXADO CONGELADO
Vaquillas Angus, Wyoming, USA (1998)

Tratamiento # Spz # Vaquillas # Preñadas # Becerras

Sexado (CU) 1 x 106 35 18 (51%) 14 (78%)

No Sexado 40 x 106 37 27 (73%) 16 (59%)

Seidel et al., 1999

 PRIMEROS RESULTADOS DE CRIAS NACIDAS
PRODUCTO DE SEMEN SEXADO HEMBRA (X)

FINCA NACIMIENTOS RELACION DE SEXO

HEMBRAS MACHOS
n % n %
Mompox 9 9 100 - -

Los Claros 9 8 88,8 1 11,1

Santa Rita 11 10 90,9 1 9,09

Total 29 27 93,1 2 6,9

SEMEN CONVENCIONAL VS. SEMEN SEXADO

Carvalho y col., 2010. Therio 74..1521-1530

Proporción de Embriones Bovinos de 4-células que
Progresaron al Estadio de Blastocitos 192 hpf

35% Hernández-Fonseca y col., 2002

30%

25%

20% Y
15% X
10%

5%

0%
CONTROL HEPARIN db-cAMP
PRODUCCIÓN DE EMBRIONES CON SEMEN SEXADO

Larson y col., 2010. Therio 73..698-703