UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

FACULTAD DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE FISIOLOGÍA Y BIOQUÍMICA

MANUAL DE LABORATORIO
HEMOSTASIA

NORMAS PARA EL INGRESO AL LABORATORIO:

Leer la guía de laboratorio, siempre habrá quiz antes de empezar.

Elementos de protección personal (bata limpia y planchada, guantes).
Cabello recogido tanto para hombres como mujeres.
Calzado cubierto y ropa cubierta (no usar faldas ni pantalón corto).
No es permitido, comer, tomar agua, ni fumar en del laboratorio.
Las maletas deben colocarse en la parte trasera del laboratorio.
No realice procedimientos que no le hayan sido autorizados por el
profesor a cargo.
Recuerde que el material contaminado debe ser depositado en las
canecas rojas.
El material cortopunzante debe ser depositado en el guardián dispuesto
en la parte de atrás.

LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA II (HEMOSTASIA)

El mecanismo hemostático está diseñado para detener la hemorragia en vasos

que presentan daño en su integridad. El proceso es rápido y localizado y no
afecta la fluidez de la sangre en circulación. La hemostasia comprende una
interacción integrada compleja de: 1) vasos sanguíneos, 2) plaquetas y 3)
factores de la coagulación y 4) la fibrinólisis.

Para las pruebas de coagulación, el anticoagulante utilizado es el Citrato de

sodio al 3.25%, el cual tiene como principio la precipitación del calcio.

TIEMPO DE SANGRÍA

OBJETIVO

Evaluar la hemostasia primaria, involucrando el recuento de plaquetas y su

función. Esta prueba es utilizada como:

▪ Prueba prequirúrgica para evaluar los trastornos hemorrágicos relacionados

con las plaquetas y su valor predictivo positivo es bueno.
▪ Prueba de tamizaje de las diferentes trombopatías: Enfermedad de von
Willebrand, Trombastenia de Glanzmann y Síndrome de Bernard Soulier.
▪ Control de los medicamentos antiagregantes.

FUNDAMENTO

Al lesionar pequeños vasos la hemorragia provocada es determinada por la

liberación sustancias vasoconstrictoras y por la agregación plaquetaria que
tapona la lesión.
MATERIALES
▪ Lanceta desechable
▪ Papel filtro
▪ Cronómetro
▪ Algodón
▪ Alcohol
▪ Portaobjetos

METODOLOGÍA

▪ Selección del sitio de punción: Se selecciona la parte anterior,

aproximadamente 5 cm por debajo del pliegue antecubital. del brazo, este no
debe estar paralizado ni con edema. Debe evitarse lesionar grandes vasos, así
como las áreas callosas y cicatrizadas. Si es necesario, se debe afeitar el lugar
de incisión seleccionado.
▪ Colocar el tensiómetro sobre la porción superior del brazo del paciente.
▪ Desinfectar el lugar de la incisión
▪ Subir el tensiómetro a 40 mmHg durante 30 segundos antes de hacer la
incisión
▪ Colocar la lanceta en la zona elegida, asegurándose de que esté en contacto
con la piel.
▪ Si la prueba se realiza con lanceta, se deben hacer tres punciones y los
extremos de la lanceta deben quedar marcados en la piel, para garantizar que
penetró completamente.
▪ Cada 30 segundos absorba la sangre que fluye, con papel de filtro #1
(rasgado), sin tocar el tapón que se está formando.
▪ En caso de que la sangre que fluya sea muy abundante, puede absorber con
mayor frecuencia.
▪ Detenga el cronómetro una vez que el sangrado de haya detenido
completamente. Si después de 15 minutos continúa la hemorragia se hace un
vendaje con gasa estéril y seca, el resultado se reporta mayor de 15 minutos.
▪ Retire el tensiómetro y limpie el área de incisión.

VALOR DE REFERENCIA: El valor normal es de 3 a 6 minutos.

▪ Interpretación: La prueba se encuentra alterada en:

➢ Trombocitopenia: Hay una correlación inversa entre el número de plaquetas

y la prolongación del tiempo. El tiempo de sangría se encuentra alterado cuando
el número de plaquetas está por debajo de 100.000/ mm 3

➢ Trombopatías: Por lo general, el tiempo es de más de 15 minutos en:

Enfermedad de Von Willebrand, Trombastenia de Glanzmann, Síndrome de
Bernard Soulier etc.

➢ Está alterado en desórdenes vasculares primarios: vasculitis, Sindrome de

Cushing, Amiloidosis, desórdenes del tejido conectivo y Ehlers Danlos.

➢ En algunas ocasiones con el uso de medicamentos antiagregantes (aspirina)

se puede alterar.
 PRUEBA DE TORNIQUETE: METODO DE RUMPEL – LEEDE

OBJETIVO
Determinar la fragilidad capilar del paciente.

FUNDAMENTO
Determina la fragilidad capilar, al aumentar la presión sanguínea. La obstrucción
del flujo venoso por el aumento de la presión puede producir la ruptura de
pequeños vasos y la aparición de petequias.

MATERIALES

▪ Tensiómetro.
▪ Cronómetro.

METODOLOGIA

▪ Antes de iniciar la prueba se debe observar cuidadosamente el antebrazo,

para comprobar si hay petequias, de haberlas, se deber encerrar en un círculo,
y determinar si aparecieron nuevas o aumentaron de tamaño.
▪ Se coloca el Tensiómetro en el brazo del paciente y se lleva a 80mmHg
manteniéndolo así por 5 minutos.
▪ Transcurrido este tiempo se retira, se esperan otros 5 minutos y se observa
la aparición de petequias en el antebrazo y en la mano.
▪ El resultado se da por cruces de 1 – 4 dependiendo del número de petequias:

➢ + Mas de 10 petequias en el antebrazo.

➢ ++ Mas de 20 petequias en el antebrazo.
➢ +++ Mas de 40 petequias en el antebrazo y el dorso de la mano.
➢ ++++ Incontables petequias.

No se deben contar las que aparecieron en el sitio donde se colocó el

Tensiómetro, ni en el pliegue del brazo, ya que estas se presentan por
continuidad.

VALOR DE REFERENCIA: Hasta 10 petequias en el antebrazo.

FRAGILIDAD CAPILAR AUMENTADA: Se asocia a deficiencia de vitamina C,

trombocitopenia, púrpura de Schelein Henoc, púrpura senil, diabetes, sepsis,
hiperesplenismo.
 TIEMPO DE COAGULACIÓN SANGRE TOTAL

UTILIDAD

Evaluar el sistema intrínseco de coagulación

FUNDAMENTO
El contacto de la sangre venosa con una superficie extraña (vidrio) produce la
activación del factor XII que a su vez activa el factor XI así sucesivamente hasta
la formación del coágulo de fibrina.

MATERIALES
• Jeringa
• Tubo de sangría sin anticoaugulante
• Baño maría a 37ºC
• Cronómetro
• Sangre
• Algodón
• Alcohol
• Torniquete

PROCEDIMIENTO
Inmediatamente después del sangrado se activa el cronometro, se mantendrá
en la mano para mantener la temperatura corporal, posterior a ello se gira el
tubo a 90 grados suavemente cada 30 segundos y se debe observar
detenidamente hasta que se forme completamente el coágulo.

El valor normal es de 6 a 15 minutos. Un resultado menor indica, una técnica

defectuosa. Un valor mayor de 15 minutos indica un defecto severo en alguno
de los factores, exceptuando el factor VII o XII. Puede indicar también
presencia de un anticoagulante circulante.

RETRACCIÓN DEL COÁGULO

UTILIDAD

Evaluar la función plaquetaria y la estructura de la fibrina en la inducción de la

retracción del coágulo.
.

FUNDAMENTO
El coágulo formado en un tubo de vidrio se retrae por acción de las plaquetas
y la fibrina.

PROCEDIMIENTO
La sangre utilizada en el procedimiento anterior la dejamos en el baño maría y
observamos el tubo cada 15 minutos sin agitarla. Transcurrida una hora, se
observa la separación del coágulo de las paredes del tubo, con la presencia de
suero alrededor del coágulo. La retracción o separación debe ser total en 12
horas, el coágulo formado debe persistir por 72 horas. El resultado se reporta.
 Normal: Si hay retracción.
Negativa: Si no se observa retracción.

La retracción depende del número de plaquetas y su función. Es negativo en

las trombocitopenias y trombopatía.

DESFIBRINACIÓN DE LA SANGRE

OBJETIVO

Promover la coagulación de la sangre total, dando como resultado la formación

de fibrina

FUNDAMENTO

La sangre total es un conjunto de células y plasma. En el plasma encontramos

los factores de la coagulación, los cuales al ser activados dan como resultado
la formación de fibrina que será atrapada en los palillos.

MATERIALES

• Jeringa
• Agujas
• Alcohol
• Algodón
• Cápsula de porcelana.
• Palillos.

PROCEDIMIENTO

▪ Tomar 2 cm de sangre venosa en una cápsula de porcelana

▪ Agitar con los palillos juntos impidiendo que se coagule la sangre, se obtendrá
un coágulo adherido a los palillos el cual debe lavarse y observar
cuidadosamente su forma y contextura. Examinar la sangre que queda en el
recipiente.

TIEMPO DE PROTROMBINA (TP)

OBJETIVO

Medir el tiempo requerido para la formación del coágulo de fibrina, después de

agregar tromboplastina tisular y cloruro de calcio a un plasma citratado pobre
en plaquetas.
Los factores que evalúa el TP son:
▪ El FVII (que es el que se activa con la tromboplastina tisular)
▪ Los factores comunes (FX, FV, FII y Fibrinógeno)
▪ Es la prueba ideal para el control de la anticoagulación con anticoagulantes
orales, en este caso se debe reportar con el INR.
FUNDAMENTO

Un exceso del extracto tisular y calcio, agregados al plasma reaccionan con los
otros factores (V, VII, X y fibrinogeno) para formar un compuesto activo, que
convierte la protrombina en trombina y el fibrinógeno en fibrina.

MATERIALES

▪ Alcohol
▪ Algodón
▪ Agujas
▪ Tubos tapa azul (citrato al 3.25%)
▪ Tubos de ensayo
▪ Pipetas pasteur de 0.2 y 0.1 ml
▪ Baño de maría a 37°C
▪ Cronómetro
▪ Tromboplastina tisular que contiene calcio

PROCEDIMIENTO

▪ Extraer 4.7 ml de sangre en un tubo de tapa azul o hasta que se agote

completamente el vacio. Esto permite mantener la relación 9:1 (Sangre:
anticoagulante).
▪ Centrifugar 10 minutos a 3.000 r.p.m. para obtener plasma pobre en
plaquetas y separar el plasma.
▪ En un tubo se colocar 0.2 ml de tromboplastina tisular e incubar a 37 °C
durante 60 segundos
▪ Adicionar 0.1 ml de plasma y poner en marcha el cronómetro.
▪ Se inclina el tubo hasta la mitad para poder observar los hilos de fibrina y la
formación del coágulo, cuando se inicia formación de los hilos, se detiene el
cronómetro y se lee el tiempo.

INTERPRETACIÓN

La tromboplastina tisular que se utiliza para las pruebas de laboratorio es un

extracto de pulmón o cerebro más calcio. La prueba se debe realizar por
duplicado, el valor normal es de 10 a 15 segundos aproximadamente, pero cada
laboratorio tendrá sus propios valores de referencia.

El tiempo de protrombina mide principalmente la actividad del complejo

protrombinico. La vía extrínseca recibe éste nombre porque requiere la
presencia del factor tisular presente en los tejidos extravasculares. El
factor tisular en presencia del calcio activa al factor VII, pero también puede ser
estimulada, por células endoteliales y los leucocitos.

TIEMPO TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (TTPa)

OBJETIVO
Medir el tiempo requerido para la formación del coágulo de fibrina, después de
agregar un activador de contacto (sílica coloidal) a un plasma citratado pobre
en plaquetas.
Los factores que evalúa el TTP son:
Factores XII, XI, IX y VIII
Los factores comunes (FX, FV, FII y Fibrinógeno)
Es la prueba para la monitorización de pacientes bajo terapia anticoagulante
con heparina

FUNDAMENTO

Medir el tiempo de coagulación del plasma en presencia de una tromboplastina

parcial activada, la cual sustituye la acción del factor 3 plaquetario, necesario
para la formación del coagulo de fibrina.
.
MATERIALES

▪ Alcohol
▪ Algodón
▪ Agujas
▪ Tubos tapa azul (citrato al 3.25%)
▪ Tubos de ensayo
▪ Pipetas pasteur de 0.2 y 0.1 ml
▪ Baño de maría a 37°C
▪ Cronómetro
▪ Reactivo para medir tiempo parcial de tromboplastina (cefalina)
▪ Calcio 0.025 M

PROCEDIMIENTO

▪ Extraer 4.7 ml de sangre en un tubo de tapa azul o hasta que se agote

completamente el vacio. Esto permite mantener la relación 9:1 (Sangre:
anticoagulante).
▪ Centrifugar 10 minutos a 3.000 r.p.m. para obtener plasma pobre en
plaquetas y separar el plasma.
▪ Tomar 0.1 ml de plasma y adicionar 0.1 ml de tromboplastina parcial e incubar
por 5 minutos exactos a 37°C
▪ Agregar 0.1 ml de cloruro de calcio 0.025 M previamente incubado y poner
en marcha el cronómetro.
▪ Inclinar el tubo hasta que aparezcan los hilos de fibrina y se forme el coágulo.
Se detiene el cronómetro en el momento que aparezcan los hilos de fibrina y se
anota el tiempo.

INTERPRETACIÓN

La prueba se debe realizar por duplicado, el valor normal es de 28-32 segundos

aproximadamente, pero cada laboratorio tendrá sus propios valores de
referencia.

El TTPa evalúa la vía intrínseca, esta vía es más lenta que la extrínseca, se inicia
con la activación del factor XII en el momento en que la sangre entra en contacto
con el endotelio lesionado y esta activación participan la precalicreína, e
cininógeno de alto peso molecular, el colágeno y el F3P.