GUÍA DE ESTUDIO Nº 1: GENÉTICA MOLECULAR

I. En busca del soporte físico de la herencia

Si bien el período entre principios de siglo y la Segunda Guerra Mundial (1900 a 1940) ha sido considerado la edad de oro de
la genética, los científicos aún no habían determinado que, en el ADN y no en las proteínas, se encontraba el material hereditario. Sin
embargo en esa época se realizaron muchos descubrimientos genéticos y se estableció la relación entre genética y evolución.
El ADN fue aislado por Friedrich Miescher en 1869 de esperma de salmón y de pus de heridas abiertas. Dado que la encontró
solamente en los núcleos, Miescher denominó a este compuesto nucleína. Posteriormente se lo cambió a ácido nucleico y por último a
ácido desoxirribonucleico (ADN).
Robert Feulgen, en 1914, describió un método para revelar por tinción el ADN, basado en el colorante fucsina. Se encontró,
utilizando este método, la presencia de ADN en el núcleo de todas las células eucariotas, específicamente en los cromosomas.
Durante los años 20, el bioquímico P.A. Levene analizó los componentes del ADN. Encontró que contenía cuatro bases
nitrogenadas: citosina, timina, adenina, y guanina; el azúcar desoxirribosa; y un grupo fosfato.
El concluyó que la unidad básica (nucleótido) estaba compuesta de una base pegada a un azúcar y que el fosfato también
estaba pegado al azúcar y, lamentablemente también concluyó erróneamente que las bases estaban en cantidades iguales y, que un
tetranucleótido era la unidad repetitiva de la molécula.
Sin embargo queda su idea de la estructura del nucleótido el cual es realmente la unidad fundamental (monómero) del ácido
nucleico (polímero).
Existen cuatro nucleótidos que integran el ADN: uno con citosina (C), uno con guanina (G), uno con adenina (A), y uno con
timina (T), y se muestran aquí tal como se organizan al interior de la molécula de ADN, como monofosfatos de adenosina, timina,
guanina y citosina.

Figura 1. Nucleótidos del ADN

A comienzo "del año 1900", el estudio de la genética comienza a dar frutos: la relación entre el trabajo de Mendel y el de los
biólogos celulares resultó en la teoría cromosómica de la herencia; Garrod propuso la relación entre los "errores innatos del
metabolismo" y los genes. La pregunta quedó planteada: ¿que es un gen? .

El fenómeno de la transformación bacteriana: una pista hacia el

ADN

En 1928, un bacteriólogo británico llamado Frederick

Griffith intentaba desarrollar una vacuna contra el neumococo, la
bacteria causante de la neumonía.
Este investigador trabajó con dos cepas para este
propósito: una de las cepas forma colonias lisas y cada bacteria
está encapsulada por una cubierta de naturaleza glucosídica. La
otra cepa forma colonias rugosas y las células carecen de cápsula
envolvente. La presencia o ausencia de cápsula es un rasgo
hereditario.
Lo más curioso en el trabajo de Griffith era el hecho de
que las bacterias encapsuladas causaban la muerte a las ratas a
las cuales se les inyectaba. Las bacterias de tipo "sin cápsula" no
les causaban daño.
Un resultado insólito se produjo cuando las ratas fueron
inyectadas con una mezcla de neumococo sin cápsula y con
neumococo encapsulados, estos últimos muertos por acción del
calor. Las ratas enfermaron y murieron, y lo más sorprendente de
todo fue que de las ratas muertas se recuperaron bacterias vivas
encapsuladas.
Griffith explicó el fenómeno de la "transformación
bacteriana" afirmando que "algo" de las células encapsuladas
muertas había convertido a las células inofensivas vivas, en
células encapsuladas vivas; y este algo pasaba de generación en
generación.
1
Figura 2. Experimento de Griffith
 En 1943, un grupo de científicos norteamericanos que trabajaba en el Instituto de Investigaciones Médicas Rockefeller de
Nueva York, investigó la causa de la transformación bacteriana. Los científicos Oswald T. Avery, Colin Mac Leod y Maclyn McCarty
reprodujeron los experimentos de Griffith en "tubos de ensayo", usando sólo bacterias, sin ratones.
Sus observaciones permitieron, en primer lugar, demostrar que extractos de bacterias encapsuladas muertas, agregados a
cultivos de bacterias inocuas vivas, convertían a estas últimas en la forma virulenta con la propiedad de elaborar la cápsula.
Como se podría esperar, estos extractos celulares contenían una gran variedad de sustancias como polisacáridos, proteínas,
lípidos, ácido ribonucleico (ARN) y ácido desoxirribonucleico (ADN). ¿Cuál de todos ellos era el "principio transformador" causante de la
transformación bacteriana?
Si el principio transformador es el ADN, ¿qué propiedad hay que atribuir a esta sustancia considerando el experimento de
Griffith?

El experimento de Hershey y Chase

A pesar del cuidadoso trabajo de Oswald T. Avery y colaboradores en la identificación del ADN como material genético,
muchos biólogos no aceptaron el hecho de que este ácido nucleico pudiera contener la compleja información genética. Así, hasta los
comienzos de los años cincuenta (1950) muchos todavía continuaban creyendo que las proteínas podrían ser el material génico.
En 1952, los genetistas Alfred Hershey y Martha Chase, del Instituto Carnagie, efectuaron una serie de experimentos que
demostrarían, en forma concluyente, que el material de los genes es el ADN.
Estos investigadores trabajaron con la bacteria intestinal Escherichia coli y un cierto tipo de virus denominados bacteriófagos
(fagos en forma abreviada). Estos virus infectan y destruyen a las células de E. coli.
Se sabía que los bacteriófagos tenían una forma definida, y en particular, que estaban compuestos sólo por una envoltura
proteíca y ADN. Era conocido, además, el modo como los fagos invaden a las bacterias, adhiriéndose a la célula bacteriana y luego de
alrededor de 25 minutos, la bacteria explota, liberando cientos de nuevos bacteriófagos.
Además, este equipo de investigadores tenía un dato muy interesante: conocía que el ADN contiene fósforo, mientras que las
proteínas no lo tienen. Por otra parte, las proteínas contienen azufre, en tanto que el ADN no.
Hershey y Chase "marcaron" a los virus con material radiactivo para seguir sus huellas. Los bacteriófagos cultivados en un
medio con fósforo radiactivo, incorporaron el elemento radioactiva, exclusivamente en el ADN, porque sólo éste contiene átomos de
fósforo.
Luego, cuando se permitió que bacteriófagos "radiactivos" infectaran a bacterias no radiactivas, éstas se hicieron radiactivas.
Dado que es el ADN la sustancia que penetra en la célula, es también el material genético.

II. La estructura química del ADN

Aunque los experimentos de Hershey y Chase

demostraron que el material génico es el ADN, la estructura
molecular de esta molécula todavía era un misterio.
El análisis bioquímico, sin embargo, había revelado que:
1. La molécula de ADN está compuesta por tres sustancias químicas
diferentes:
 Una pentosa (azúcar con 5 carbonos): la desoxirribosa.
 Un grupo fosfato.
 Cuatro bases nitrogenadas: adenina (A), guanina (G), citosina (C) y
timina (T).
2. Estos componentes básicos de la molécula de ADN se unen formando
unidades llamadas "nucleótidos". Cada nucleótido se forma, entonces, por
una pentosa (desoxirribosa), un grupo fosfato y una base nitrogenada. Como
hay cuatro bases nitrogenadas se pueden formar cuatro tipos de nucleótidos.
3. Estos nucleótidos pueden unirse entre sí para formar largas cadenas de
polinucleótidos.
4. Las proporciones de las cuatro bases nitrogenadas son constantes en todos los tipos
celulares en un organismo individual.
5. Las proporciones de las bases nitrogenadas también son constantes en una
determinada especie.
6. Las proporciones de adenina son iguales a las de timina, y las proporciones de guanina
son iguales a las de citosina. (A=T y G=C)

El modelo de la molécula de ADN: Watson y Crick (1953)

En 1953, James D. Watson y Francis H.C. Crick, dos científicos que trabajaban en la
Universidad de Cambridge, Inglaterra, propusieron el modelo que hoy se acepta para la estructura de la
molécula de ADN, sobre la base de todos los datos disponibles. Las principales características de la
molécula de ADN, de acuerdo con el modelo Watson - Crick, se pueden resumir en los siguientes puntos:

1. La molécula se compone de dos barras torcidas entre sí, configurando una doble hélice.
2. Cada barra se compone de una cadena de nucleótidos, las que se disponen de manera antiparalela, es decir, una cadena va
en dirección 5'  3' y la otra 3'  5'.
3. Los nucleótidos de cada barra se unen entre sí por los grupos fosfatos.
4. Las cuatro bases nitrogenadas se encuentran apareadas con sólo dos posibles combinaciones: A =T y G = C.
5. Las bases nitrogenadas están unidas entre sí por débiles enlaces de hidrógeno, los que son fáciles de romper.

2
6. Como la secuencia de nucleótidos es el único elemento variable en la molécula, es evidente que debe ser también la
propiedad que se utiliza para codificar las instrucciones genéticas.

A
B C
Figura 3: Modelo de la molécula de ADN de Watson y Crick; A: detalle en que se muestra la disposición de los nucleótidos formando
enlaces de hidrógeno entre los pares de bases (flecha); B: esquema más general, en que se muestra la organización general de las dos
fibras antiparalelas; C: morfología general de la molécula de ADN, la doble hélice.

III. El flujo de la información génica

En los años veinte se encontró una molécula similar al ADN,

también un ácido nucleico, que tenía unidades similares pero con
diferencias en el azúcar y en una de sus bases nitrogenadas, que se
llamó ácido ribonucleico (ARN). Esta molécula aparecía en mayor
concentración en aquellas células que mostraban una alta actividad de
síntesis de proteínas. Lo interesante del ARN era que a diferencia del
ADN exclusivamente nuclear, parecía encontrarse tanto en el núcleo
como en el citoplasma de la célula. Teniendo presente que las proteínas
se sintetizan justamente en el citoplasma, se postuló que podría servir
de mediador entre el ADN y la síntesis proteica. En base a esta
hipótesis, un grupo de investigadores ideó un experimento que
aprovecha la composición particular que tiene el ARN: en vez de la base
nitrogenada timina, posee uracilo.
En el experimento se incubaron células con uracilo marcado
radiactivamente con tritio (un isótopo del hidrógeno) durante 60 minutos,
lo que se llama "un pulso". Luego de retirar el nucleótido radiactivo, se
reemplazó con uracilo normal, incubando por dos horas más. Las
células se observaron mediante autoradiografía, una técnica que
permite localizar marcas radiactivas, en dos momentos: inmediatamente
tras el pulso Figura 4
radiactivo y luego
de las dos horas de incubación con los nucleótidos normales. En la figura 4 se
muestran los resultados.
Tal como muestran las autoradiografías, el uracilo (y por tanto el ARN)
migra desde el núcleo hacia el citoplasma. Con esto se confirma la posibilidad que
el ARN sirve de intermediario entre el gen del ADN y la síntesis de proteínas. Con
posterioridad, a esta molécula se le llamó ARN mensajero o ARN m.
De esta manera, el flujo de la información génica se podría representar
de la siguiente manera:

Figura 5. El modelo de la acción génica: el dogma central de la biología molecular:

El ADN contiene la información genética en forma de un código de cuatro letras
(A,T,G,C)
Un tipo de ácido ribonucieico llamado ARN mensajero toma esta información de la
molécula
de ADN (transcripción) y la transporta hasta los ribosomas. C. En estos organelos
el mensaje portado por el ARN mensajero es traducido expresándose en forma de
polipéptidos (traducción).

3
 El modelo de la acción génica, esquematizado en la figura 5, llamado el dogma central
de la biología molecular, contiene varias ideas importantes que es necesario subrayar.

 El ADN controla el fenotipo de cada individuo a través de la formación de proteínas que

actúan desencadenando las reacciones bioquímicas propias de la especie a la que
pertenece el ADN.
 La formación de determinada proteína implica la ordenación de los aminoácidos que la
constituyen en una secuencia determinada.
 La información codificada en la molécula de ADN se transmite al ARN mensajero
(transcripción) que la lleva al sitio de síntesis proteicas (ribosomas).
 Una vez en los ribosomas, el código es traducido fielmente, formándose la proteína ARN
indicada (traducción). m
 Observa cuidadosamente la figura 6 que seguramente te resulta familiar. Ella te permitirá
relacionar el proceso de transcripción y traducción con las estructuras celulares en que
ocurren (temas tratados en 2º medio).

Transcripción del código

Figura
Conocido el flujo de la información génica, explicaremos ahora cómo de produce el 6 proceso de transcripción
ADN  ARN y luego cómo el ARN es leído para fabricar proteínas específicas.
La formación del ARNm, a partir de la molécula de ADN, empieza cuando ésta se abre y, sobre una de las dos bandas, se va
construyendo la barra única del ARN m. Este proceso de transcripción está catalizado por una enzima, la ARN polimerasa y empieza
precisamente cuando esta enzima se
combina con una porción de la
molécula de ADN conocida como
promotor. Luego continua con el
"apareamiento" de las bases
complementarias: guanina con citosina;
adenina con timina; y uracilo frente a
adenina. El producto de la transcripción
es el ARNm que deja el núcleo y
transporta la información al citoplasma,
específicamente, a los ribosomas
donde tiene lugar a traducción del
código.
Figura 7. Transcripción

Traducción del código

En 1908, el médico inglés sir Archibald Garrod dictó una serie de conferencias en las que establecía un nuevo concepto de las
enfermedades humanas que denominó "errores innatos del metabolismo". Se adelantó en casi medio siglo al postular que ciertas
enfermedades, debido a la incapacidad del organismo para realizar determinados procesos químicos, son hereditarias.
Garrod estudió la enfermedad llamada alcaptonuria; en ella los enfermos excretan un compuesto llamado ácido homogentísico
que vuelve oscura a la orina. Este compuesto puede generar problemas visuales y artritis. Garrod supuso que las víctimas de esta
enfermedad excretaban esta sustancia debido a que la reacción enzimática necesaria para transformarla estaba bloqueada. El doctor
Garrod fue el primero en sugerir que los genes y las enzimas estaban relacionados y, por lo tanto, que los genes estaban ligados a las
reacciones químicas del organismo.
En la década 1940-1950, G.W. Beadle y E.L. Tatum de la Stanford University, en California, trataron esporas de un hongo
Neurospora con rayos X o rayos ultravioleta para ver si las esporas expuestas a la acción de estos agentes habían mutado de algún
modo. Estos investigadores mostraron particular interés por comprobar si la capacidad de sintetizar sustancias había sufrido alteración.
Sobre la base de los resultados experimentales, Beadle y Tatum
propusieron la teoría "un gen - una enzima", conocida en la actualidad como
teoría "un gen - un polipéptido". Esta postula que los genes ejercen su
acción controlando la formación de polipéptidos.
Al considerar la acción génica que controla el fenotipo de los
individuos según los descubrimientos mencionados, conviene preguntarse de
qué manera el ADN controla y regula la síntesis proteica.
Para abordar esta pregunta es necesario recordar los siguientes
hechos:
a) Las proteínas son moléculas que desempeñan múltiples y útiles
funciones en nuestro organismo. Son necesarias para el crecimiento y
reparación de tejidos dañados, incluyendo la cicatrización de heridas,
reparación de la piel y elaboración de anticuerpos. Las proteínas son
importantes componentes de todas las membranas celulares y funcionan
como moléculas transportadoras y receptoras. Otras proteínas, fuera de
la célula, como el colágeno y la elastina, proporcionan al tejido conjuntiva
su resistencia, ayudando así a soportar todo el cuerpo. Un grupo amplio e
importante de proteínas actúa como enzimas, algunas de las cuales
funcionan extracelularmente, en tanto que muchas otras actúan en el
interior de las células. Figura 8. Modelos 3D de cuatro proteínas

4
b) Las proteínas son moléculas complejas compuestas por secuencias determinadas de aminoácidos. Existe una veintena de
aminoácidos que pueden combinarse en innumerables formas, constituyendo proteínas de variada estructura (Ver figura 8)
c) Los genes controlan la síntesis de proteínas. ¿Qué es exactamente un gen? Un gen es un segmento de una molécula de ADN
que lleva la información genética codificada para la síntesis de una proteína particular.
d) Un gen debe portar un código para que se puedan unir ciertos aminoácidos en una secuencia determinada.

Un código es un sistema de símbolos utilizados para transferir información de una forma a otra. El lenguaje escrito es un tipo
de código inventado por el hombre para expresar ideas y comunicarse entre sí. Nuestro abecedario consta de 28 símbolos, que son las
letras; con ellas se pueden formar muchas palabras, simplemente, combinándolas. Evidentemente, cualquier persona que desconozca el
código representado por el abecedario del idioma castellano es incapaz de interpretarlo.
La mayor parte de las palabras se forman con 2 ó más letras. Por ejemplo pala, casa, casado, ramo. Palabras diferentes se
pueden construir a partir de las mismas letras con una simple reordenación. Así tenemos: pala/lapa, casa/saca, casado/sacado,
ramo/amor.
El trabajo realizado para descifrar el código genético ha sido uno de los capítulos más interesantes en la historia de la
investigación biológica. En 1961, Marshall W. Nirenberg y J. Heinrich Matthaei que investigaban en el Instituto Nacional de Salud de
Bethesda, Mariland, realizaron exitosamente los primeros experimentos tendientes a averiguar qué secuencia de bases codifican cada
uno de los 20 aminoácidos.
El problema de fondo con la síntesis de proteínas es que se trata de construir secuencias de polímeros de 20 tipos de
aminoácidos distintos a partir de un plano entregado por el ARN m que posee secuencias de sólo 4 tipos de bases nitrogenadas.
Evidentemente no puede existir una relación uno a uno entre bases nitrogenadas y aminoácidos, sencillamente porque sólo
hay 4 bases para 20 aminoácidos. Si, por el contrario, la "traducción" se hiciera a partir de pares de bases nitrogenadas, las
combinaciones posibles serían: AA, AT, AC, AG, TT, TA, TC, TG, CC, CT, CA, CG, GG, GT, GA, GC = 16 combinaciones. Es decir,
tampoco sería posible pues aún sería necesario traducir otros 4 aminoácidos.
Finalmente, si se usan tríos o tripletes de bases nitrogenadas, como
por ejemplo, AAA, ATC, CGT, etc. las combinaciones posibles sobrepasan
ampliamente los 20 aminoácidos que debe codificarse.
En efecto, los 20 aminoácidos están representados en el código
genético por la agrupación de tres letras (triplete) de las cuatro existentes. Si
uno considera las posibilidades de arreglo de cuatro letras agrupadas de a tres
resulta que tenemos 64 posibilidades de palabras a codificar, o 64 posibles
codones (secuencias de tres bases en el ARN m que codifica para un
aminoácido específico o una secuencia de control).
El código genético se descubrió en base a experimentos como el
siguiente.
Se fabricó un ARNm construído exclusivamente con guaninas, el que Figura 9 se "puso a trabajar" en un
sistema de síntesis de proteínas in vitro. En la medida que las guaninas eran "leídas", se formaron
polímeros de aminoácidos o polipéptidos formados exclusivamente por el aminoácidos leucina. Es decir, si el codon posee tres guaninas,
el código apunta "leucina" y lee el siguiente codon. Con distintas
combinaciones de bases en ARNm sintéticos, fue posible conocer el
código completo. (figura 9)
En la tabla de la figura 10 se resume el código que permite
traducir los codones en aminoácidos.
En la traducción del código, es decir, en el proceso mismo de
la síntesis proteica, interviene una variedad de sustancias y organelos:
ribosomas, ARNm, ARN de transferencia (ARN t), nucleótidos del medio y
además, una serie de proteínas y enzimas citoplásmicas.
El ARNt es una molécula de una barra, torcida sobre su eje
como una horquilla para el pelo. Al final de la molécula se encuentra un
triplete de bases de citosina y guanina. Es aquí donde actúa una
enzima activante para enlazar el aminoácido apropiado. La energía
para la unión del aminoácido al ARN t proviene de la conversión de ATP
(adenosín-trifosfato) a AMP (adenosín-monofosfato). Es decir, es un

proceso que requiere energía.

el sitio para que se pegue
En el extremo, el ARNt tiene tres bases no apareadas
(el anticodón). Estas tres bases encajan en el triplete
complementario a lo largo del ARN m (el codón). Así, por
ejemplo, un ARNt con triplete AGU encaja en el punto del
ARNm donde se encuentra la secuencia de las bases ACU. Un
ARNt con un triplete de bases ACU se orientará en la molécula
de ARNm en el lugar donde aparece el triplete AGU (figura 11)
Los ribosomas son los organelos citoplasmáticos que
sirven de sustrato físico para la traducción, es decir, es "donde"
se produce la síntesis proteica. Cada ribosoma está formado
por una subunidad liviana y una pesada. La subunidad liviana
tiene una hebra de ARN ribosomal y 21 proteínas diferentes.
La subunidad pesada consiste en dos hebras de ARN
ribosomal y 34 proteínas diferentes. La subunidad liviana tiene
Figura 11 el ARNm. Tiene un rol crucial en la decodificación del ARN m pues monitorea el
5
 apareamiento de bases entre el codón del ARN m y el anticodón de ARN t. La subunidad pesada tiene dos sitios para el ARN t. Cataliza la
formación de la unión entre dos aminoácidos contiguos (enlace peptídico).

Figura 12. Modelos de ribosomas

Figura 13.
Los 3 tipos
de ARN

Cabe señalar que tanto el ARN t como el ARNr tienen origen en genes específicos del ADN, por lo que ambos provienen del
núcleo, al igual que el ARN m. (figura 13)
De esta manera la
Figura 14. Traducción del ARNm secuencia de bases existentes en la
molécula de ARNm, originalmente
determinada por la secuencia de
bases de la molécula de ADN,
determina el tipo de ARN t. Por
supuesto, esto representa una
selección indirecta del tipo de
aminoácido que formará parte de la
cadena proteica.
A medida que el ribosoma
se mueve a lo largo de la molécula del
ARNm, el código es leído por las
moléculas de ARNt, formándose una
cadena creciente de polipéptidos;
cuando ésta se completa, se libera.
(figura 14)

IV. Replicación del ADN

El modelo propuesto para la

estructura de la molécula de ADN no
sólo satisface las propiedades físicas
y químicas observadas de la molécula
y los procesos conducentes a la
síntesis de proteínas. También, como
modelo científico, permite explicar la
autoduplicación o replicación normal
de la molécula, es decir, la formación
de dos moléculas idénticas de ADN a
partir de una. Cabe recordar que este
proceso resulta imprescindible para
que la célula pueda realizar mitosis y
ocurre durante la etapa S de la
interfase. De no existir una duplicación
previa del ADN de la célula madre, al
momento de dividirse, cada célula hija
recibiría sólo la mitad del material
hereditario, lo que las haría inviables.
De esta manera, la perpetuación de la
vida -vía división celular- se debe a la
capacidad del ADN para
autoduplicarse.

6
 De acuerdo con el modelo de Watson
y Crick, la duplicación del ADN comienza con
la separación de la molécula en dos bandas
debido al rompimiento de los enlaces de
hidrógeno que unen las bases
complementarias. Una vez expuestas, las
bases de cada una de las mitades separadas
pueden atraer a los nucleótidos libres
existentes en el medio. Cada citosina expuesta
se unirá a un nucleótido de guanina; cada
timina a un nucleótido de adenina, etc.
De esta manera, resultan dos
moléculas hijas, cada una de las cuales está
conformada por una barra parental y otra
nueva. Este modelo de replicación o
autoduplicación de la molécula de ADN se
conoce como "replicación semiconservativa".
(figura 15)
El conocimiento bioquímico actual
sobre el proceso de replicación de la molécula
de ADN es, básicamente, el propuesto por
Watson y Crick. Al igual que en todas las
reacciones biológicas se requieren enzimas
especiales. Una de éstas, la ADN polimerasa,
une a los nucleótidos de la nueva cadena de
ADN a lo largo del molde de la cadena vieja.
Junto con estas enzimas, en el
proceso de replicación del material génico actúa todo un complejo de proteínas y otras enzimas que desempeñan variadas funciones.
Esto, sin mencionar los nucleótidos de adenina (ATP), de guanina (GTP), etc. que aportan la energía para el proceso.

V. Alteraciones en la lectura

Tal como se señaló, el modelo de ADN de

Watson y Crick sugiere que se forma una copia exacta de
esta molécula cada vez que se autoduplica. Sin embargo,
debido a "accidentes moleculares" se producen "errores"
en el mensaje genético con su correspondiente expresión
anormal en el fenotipo.
Las variaciones en el mensaje hereditario
llevado por el ADN reciben el nombre de mutaciones;
éstas pueden aparecer debido a cambios en un gen
-segmento de la molécula de ADN- o a cambios en el
número o en la estructura de los cromosomas. Se habla
entonces de mutación génica y mutación cromosómica.
Un gen puede resultar alterado por una
reordenación accidental de las bases nitrogenadas que
constituyen el mensaje. Una analogía puede explicar
esto: la palabra 'tren" tiene un significado claro para todo
el mundo de habla hispana. Cuando tú vez esta palabra
la interpretas correctamente. Supón ahora que se
produce una reordenación de letras que conforman esta
palabra de modo que resulta "en rt". Claramente, esto no
tiene ningún significado y no podemos interpretarlo. La
mutación génica también puede resultar por sustracción o
adición de una base del código. Volviendo a nuestro
ejemplo, si a la palabra "tren" se quita la letra "t" o se le
agrega la letra "a" resultan palabras carentes de
significado.
Lo mismo sucede con el código genético; la
reordenación de las bases nitrogenadas, la pérdida o
ganancia de un nucleótidos, la pérdida o ganancia de un
triplete de bases alteran el código genético y la célula es
incapaz de interpretar el mensaje alterado. Esto significa
que no se producirá la o las proteínas de acción
enzimática correspondientes, por lo cual la secuencia de
reacciones bioquímicas no se producirá, resultando un
individuo anormal.
Una cadena "mutante" del ADN puede
diferenciarse de la cadena normal por un sólo nucleótido. Sin embargo, este pequeño cambio en el mensaje hereditario tiene un efecto en la
célula. Podría causar sólo una pequeña variación en la estructura de una teína como una enzima. Como resultado de este cambio podría verse
afectada la actividad o la eficacia de esta enzima en la reacción que cataliza.

7
VI. Biotecnología

1. Generalidades y usos

A menudo se le equipara con la ingeniería genética, como sinónimo de una modificación dirigida de la sustancia
genética de las células vivas. Pero la biotecnología es muchísimo más. La ingeniería genética tan sólo representa uno de sus
muchos sectores.
La biotecnología significa tres cosas: en primer lugar, el aislamiento de células vivas de microorganismos, o a partir
de tejidos animales o vegetales.
En segundo lugar, la obtención de productos metabólicos partiendo de estas células vivas que han sido aisladas.
Este punto corresponde también a la ingeniería genética, puesto que su labor principal consiste en sintetizar productos
valiosos para el ser humano, como la hormona del crecimiento o los interferones, a partir de células que han sido
manipuladas genéticamente.
En tercer lugar, reacciones bioquímicas con células vivas o con sustancias que éstas contienen, principalmente con
enzimas.
Como recordaremos más adelante, las enzimas con proteínas producidas por el organismo, que trabajan como
máquina del metabolismo celular, pues facilitan reacciones de unión o de disociación de otras moléculas, que sin su acción se
efectuarían muy lentamente. De este modo, desempeñan el papel de catalizadores, haciendo posibles ciertas reacciones
químicas a niveles eficientes, sin sufrir en sí cambio alguno.
Así definida, la biotecnología no es ninguna invención reciente, sino que forma parte del repertorio de la civilización
humana, desde hace ya muchos miles de años. Por citar un ejemplo, en la producción de alimentos para el ser humano y los
animales intervienen procesos de fermentación microbiana:
 El hongo de las levaduras ( Saccharomyces) y las familias de lactobacilos hacen "subir" las masas en la producción
del pan
 Las levaduras convierten, por fermentación, los cocimientos de cereales en cerveza, los jugos de manzana en
chicha y el jugo de uvas, en vino
 Los estreptococos y algunas especies de lactobacilos convierten leche en yogurt o en queso
 Las acetobacterias y bacterias de la especie Erwinia dissolvens hacen fermentar a los granos de café o a las hojas
de té
 Los lactobacilos convierten durante el ensilado plantas verdes y frescas en forraje para animales

Así también, desde comienzos del siglo XX, se obtienen de las bacterias y levaduras (que son hongos unicelulares,
no bacterias), un sinnúmero de elementos orgánicos. Por ejemplo:
 Disolventes orgánicos, como el etanol o la acetona
 Ácidos orgánicos, como el ácido cítrico o el ácido láctico
 Polisacáridos como el dextrano
 Aminoácidos, como el ácido L-glutámico o la L-lisina
 Nucleósidos, como el 5'-IMP y nucleótidos como el 5'-GMP
 Vitaminas, como la B-12 o la vitamina C
 Antibióticos, como los betalactámicos o la tetraciclina
 Alcaloides de uso clínico
 Enzimas para la industria química, como las lipasas (usadas en detergentes) y para la industria alimenticia, como las
amilasas
 Hormonas peptídicas y esteroides, como la 1-hidroxiprogesterona o como la insulina humana, producida mediante
ingeniería genética
Además, se hace uso de varias especies de bacterias en lixiviación de minerales, esto es, minerales de baja calidad
se enriquecen tras ser procesados metabólicamente por bacterias.
Parte importante del trabajo realizado por biotecnólogos especialistas en genética molecular, utiliza técnicas
relativamente recientes, entre las que destaca la recombinación del ADN.

2. La técnica del ADN recombinante

Una revolución en el campo de la biología, que comenzó a mediados del decenio de 1970 con el desarrollo de la
tecnología del ADN recombinante, llevó a métodos de investigación por completo novedosos. Esta tecnología se ha aplicado
no sólo a estudios genéticos, sino también ha tenido un efecto importante en áreas que van desde el desarrollo hasta la
evolución.
Las técnicas del ADN recombinante se desarrollaron inicialmente como herramientas que permitirían a los científicos
obtener una gran cantidad de copias de cualquier segmento de ADN específico, de manera que éste pudiera estudiarse
desde el punto de vista bioquímico. Ello puede hacerse ahora de varias maneras, pero la mayor parte de los métodos
irnplican la introducción de ADN ajeno en las células de microorganismos. En las condiciones apropiadas, este ADN se
duplica y transmite a las células hijas cuando la célula original se divide. De esta manera, una secuencia específica puede ser
amplificada, o clonada, para producir millones de copias idénticas que pueden aislarse en forma pura. También se han
desarrollado métodos para clonar ADN in vitro.

8
 Los estudios con secuencias de ADN clonadas han sido de inmenso valor para comprender la organización de los
genes y la relación entre los genes y sus productos. De hecho, la mayor parte de nuestro conocimiento sobre las
complejidades de la estructura y el control de los genes eucarióticos proviene de la aplicación de estos métodos.
La tecnología de ADN recombinante también tiene muchas aplicaciones prácticas. Una de las áreas de estudio que
avanzan con mayor rapidez en la actualidad es la ingeniería genética, o sea la modificación del ADN de un organismo para
producir nuevos genes con nuevas características. Como ya citábamoses gracias a esta disciplina científica que se han
logrado avances sin precedente en campos como farmacia, medicina y genética humana, así como en agricultura.
La tecnología del ADN recombinante comenzó con los primeros estudios sobre la genética de algunas bacterias y los
virus que las infectan, los bacteriófagos. Sólo después de decenios de investigación básica y de la acumulación de amplios
conocimientos se hizo factible la tecnología actual, y quedó disponible para los muchos científicos que ahora utilizan estos
métodos.
Entre otras cosas, las
bacterias han proporcionado a los
investigadores enzimas especiales,
conocidas como enzimas de
restricción, las cuales cortan las
moléculas de ADN sólo en lugares
específicos (Figura 17). Además, las
moléculas de ADN recombinante se
introducen con mayor frecuencia en
células bacterianas o bacteriófagos
para que sean amplificadas (o
clonadas), y algunos aspectos de sus
sistemas genéticos facilitan este
proceso.
Una enzima de restricción Figura 17. Mecanismo de acción de las enzimas de
puede reconocer y cortar una molécula de restricción ADN en la secuencia de bases 5'-AAGCTT-3', en tanto que
otras sólo cortan la secuencia 5'-ATC-3'. Normalmente, las bacterias sólo utilizan estas enzimas como mecanismo de
defensa, para atacar ADN de bacteriófagos que entran en la célula. La bacteria protege su propio ADN contra el ataque
modificándolo de alguna manera después de su síntesis. La purificación de dichas enzimás permitió a los científicos cortar
ADN cromosómico en fragmentos más cortos de manera controlada.
Muchas de las enzimas de restricción utilizadas para estudios con ADN recombinante cortan secuencias
palindrómicas, lo cual significa que la secuencia de bases de una cadena se lee igual que su complemento pero en sentido
opuesto. (Figura 18) (Así, el complemento de
nuestro ejemplo, 5'-AAGCTT-3' se lee 3'-
TTCGAA-5'.) Al cortar del ADN ambas cadenas
de manera asimétrica, estas enzimas dejan
fragmentos con extremos de cadena sencilla
complementarios, que se les denomina extremos
adhesivos o pegajosos, porque pueden
aparearse (por enlaces de hidrógeno) con los
extremos monocatenarios (de una sóla cadena)
complementarios de otras moléculas de ADN
que han sido cortados por la misma enzima.
Una vez que dos moléculas se han unido entre sí
de esta manera, pueden tratarse con ADN
ligasa, una enzima que une en forma covalente
los dos fragmentos para formar una molécula de
ADN recombinante estable.
Figura 18. Tipos de cortes de enzimas de
Las enzimas de restricción varían
restricción
sobremanera respecto al número de bases en las secuencias de ADN que reconocen, que va desde
apenas 4 hasta 23 bases. Sólo por cálculo de probabilidades se espera que en promedio la secuencia de restricción de un
"cortador de cuatro bases" se presente en una molécula de ADN una vez cada 4 4 = 256 bases, en tanto que una enzima que
reconoce seis bases cortará fragmentos con un promedio de 4 6 = 4.096 bases. Las enzimas de restricción que reconocen
secuencias con un número grande de bases son en particular adecuadas para estudiar moléculas de ADN muy largas como
las que constituyen cromosomas enteros.

9
 La mayor parte de las moléculas de ADN recombinante se aislan y amplifican introduciéndolas en células de la
bacteria Escherichia coli. Para aislar un fragmento específico de ADN (después de que ha sido cortado por una enzima de
restricción), ese fragmento debe ser incorporado antes en un portador adecuado, o molécula vectora. Como vector suele
emplearse el ADN de bacteriófagos o moléculas
de ADN especiales llamadas plásmidos, que Figura 19. Incorporación de un gen a
consisten en una pequeña molécula de ADN un plásmido
circular que puede duplicarse dentro de una
célula bacteriana (Figura 19). Estos plásmidos
pueden aislarse de células bacterianas en forma
pura, y después introducirse en otras células por
un método denominado transformación, lo cual
implica modificar la pared celular bacteriana para
hacerla permeable a las moléculas de ADN del
plásmidio. Después de que un plásmido entra en
una célula, se duplica y distribuye entre las
células hijas durante la división celular. Los
plásmidos no portan genes esenciales para las
células de E. coli, pero a menudo llevan usos
que son útiles en determinadas condiciones
ambientales como los que confieren resistencia a
antibióticos específicos.
Los plásmidos que se utilizan en la
actualidad en el trabajo con ADN recombinante
han sido "manipulados" extensamente para que
incluyan varias características útiles en el
aislamiento y el análisis del ADN clonado (Figura
20). Sin embargo, una propiedad limitante de
cualquier plásmido es el tamaño del fragmento
de ADN que en efecto puede transportar. La
longitud de un segmento de ADN a menudo se
expresa en kilobases. Una kilobase (kb) es igual
a 1.000 bases. De manera análoga a la
capacidad de un disquete, se pueden insertar fragmentos de menos de 10 kb en los plásmidos para su empleo en E. coli. Sin
embargo, fragmentos mayores requieren el uso de bacteriófagos como vectores; éstos pueden manejar hasta 15 kb de ADN.
También se puede introducir ADN recombinante en células de organismos superiores. Por ejemplo, en células de mamífero se utilizan virus
reconstruidos como vectores. Estos virus han sido incapacitados (atenuados) y por ende ya no matan a las células que infectan; su ADN, y cualquier
ADN ajeno que porten, se incorpora en los cromosomas de la célula por el proceso de infección normal.
Actualmente se han desarrollado otros métodos que no requieren un vector biológico. En ellos, el ADN
se inyecta directo en el núcleo celular, o se permite que las células incorporen ADN que se ha adsorbido
en la superficie de cristales de fosfato cálcico.
En el esquema de la Figura 21 - visto en clases - se pueden apreciar las etapas mediante las
cuales es posible conseguir insulina humana haciendo uso de ADN recombinante en la bacteria E. coli .
En la tabla se mencionan otros usos que tiene la técnica del ADN recombinante en la medicina.
Figura 20. Ejemplo de
plásmido
Productos Ejemplos y usos
Activador de plasminógenos de tejido (TPA), activa a la plasmina, una enzima involucrada en ..disolver
Anticoagulantes
coágulos, efectivo tratamiento en víctimas de ataques cardíacos.
Factor VIII promueve coagulaciones y es deficiente en hemofílicos. El uso del factor VIII ..producido por
Factores sanguíneos
tecnología de DNA recombinante elimina riesgos de infección asociados con ..transfusiones sanguineas.
Factores estimuladores de Factores de crecimiento del Sistema Inmune que estimulan la producción de leucocitos, ..usados para tratar
colonias deficiencias inmunes y para combatir infecciones.
Eritropoyetina Estimula la producción de eritrocitos; usado para tratar anemia en pacientes con ..enfermedades al riñón.
Factores de crecimiento Estimula la diferenciación y crecimiento de varios tipos celulares. Se utiliza para promover la cicatrización.
Hormona de crecimiento
Usada para el tratamiento del enanismo.
humana
Insulina humana Usada para el tratamiento de la diabetes.
Interferones Interfieren con la producción viral; usados para tratar algunos cánceres.
Activan y estimulan diferentes clases de leucocitos; posibles usos en cicatrización de ..heridas, infección con
Interleuquinas
VIH, cáncer, y deficiencias inmunes.
Extraordinaria especificidad de unión que es usada en: test de diagnósticos; transporte ..dirigido (drogas,
Anticuerpos monoclonales
toxinas, o compuestos radiactivos para tumores como una terapia para ..cáncer); muchas otras aplicaciones.
Extraordinaria especificidad de unión que es usada en: test de diagnósticos; transporte ..dirigido (drogas,
Superoxido dismutasa
toxinas, o compuestos radiactivos para tumores como una terapia para ..cáncer); muchas otras aplicaciones.
.Las proteínas derivadas de cubiertas virales son tan eficientes para iniciar una respuesta inmune como los
Vacunas
virus muertos, pero son más seguros; la primera vacuna desarrollada fue ..para la hepatitis B.

10
 Figura 21. Obtención de insulina
3. Organismos transgénicos mediante ADN recombinante

Los organismos
superiores que han
incorporado genes extraños
se denominan transgénicos;
este término suele
reservarse para plantas y
animales. Se están utilizando
diversos métodos para
insertar genes extraños o
ajenos en células vegetales o
animales. Con frecuencia se
utilizan virus como vectores,
aunque también se han
empleado otros métodos,
como inyección directa de
ADN en las células
Una manera de
reconstruir genéticamente
las proteínas animales
consiste en utilizar animales
vivos que han incorporado
un gen extraño para producir la
proteína recombinante. Estos
animales transgénicos
suelen obtenerse por
microinyección del ADN de
un gen específico en el
núcleo de un óvulo
fecundado. Los óvulos se
implantan después en el
útero de una hembra y se
permite que se desarrollen.
En un estudio de
este tipo, el gen para la
hormona del crecimiento se
aisló de una biblioteca de
ADN genómico de rata y se
combinó con la región
promotora de un gen de
ratón que en general
produce metalotioneína, una proteína cuya síntesis es estimulada por la presencia de metales pesados como zinc. Se
utilizaron las secuencias reguladoras para la metalotioneína, como un interruptor que permitiera activar y desactivar a
voluntad la hormona del crecimiento de la rata. Después de que se inyectó el gen manipulado en óvulos de ratón fecundados,
éstos se implantaron en el útero de una hembra de ratón y se permitió que se desarrollaran hasta embriones. Los embriones
en los cuales el trasplante de genes fue exitoso crecieron con rapidez cuando se expusieron a pequeñas cantidades de zinc.
Un ratón que se desarrolló a partir de un óvulo que había recibido dos copias del gen para la hormona del crecimiento alcanzó
una talla de más del doble de la normal. Como podría esperarse, tales ratones a menudo son capaces de transmitir a la
descendencia su mayor capacidad de crecimiento.
Ya se ha demostrado que la descendencia transgénica tiene valiosas aplicaciones de investigación en una amplia
gama de estudios. Entre éstos se incluyen regulación de la expresión génica, funcionamiento del sistema inmunitario,
enfermedades genéticas y virales, y genes causantes del desarrollo de cáncer.
Se han utilizado animales transgénicos para desarrollar cepas que secreten proteínas importantes en la leche. Por
ejemplo, se ha introducido en ratones transgénicos el gen para el activador del plasminógeno tisular, una proteína que
disuelve los coágulos que causan los ataques cardiacos, y en forma semejante el gen para un factor de la coagulación
sanguínea humana, en ovejas. Estos genes recombinantes se han fusionado en las
secuencias reguladores de los genes para las proteínas lácteas y, por lo tanto, sólo
se activan en tejidos mamarios que tienen relación con la producción de leche. La
ventaja de producir la proteína en la leche es que se obtiene en grandes cantidades y
puede obtenerse sirnplemente al ordeñar al animal. La proteína se purifica después
de la leche.
Los animales no son dañados por la introducción del gen y, dado que la
progenie del animal transgénico suele producir también la proteína recombinante, es
posible establecer cepas transgénicas simplemente criando a los animales.
11

Figura 22. Estructura de un

 Recordemos que también se utilizan virus como vectores para ADN recombinante. Los virus de ARN, llamados
retrovirus, hacen copias en ADN de sí mismos por transcripción inversa (Figura 22). Algunas veces tales copias en ADN se
integran a los cromosomas del huésped, donde se duplican junto con el ADN de éste. Por ejemplo, los virus de la leucemia
murina genéticamente alterados son retrovirus que pueden utilizarse como vectores para incorporar genes recombinantes en
células cultivadas.
En determinadas condiciones, genes portados por los virus modificados por ingeniería genética pueden expresarse
en las células animales para producir proteínas reconstruidas en forma genética.
Una desventaja importante de introducir genes en células animales cultivadas es que el rendimiento de las proteínas
codificadas por el ADN ajeno portado por los virus suele ser bajo. Sin embargo, estos tipos de vectores son promisorios
como medios de terapia génica de algunos trastornos hereditarios del ser humano.

4. Plantas transgénicas en la agricultura

Las plantas han sido cruzadas en forma selectiva durante miles de años. El éxito de tales trabajos depende de la
presencia de rasgos deseables en la variedad de planta que se selecciona o en plantas silvestres o domésticas
estrechamente relacionadas cuyos rasgos pueden ser transferidos por cruzamiento. Las variedades primitivas, o especies
estrechamente relacionadas, de plantas cultivadas a menudo tienen rasgos, como la resistencia a enfermedades, que pueden
introducirse de manera ventajosa en variedades más adecuadas para las necesidades modernas.
Si en una planta se introducen genes de cepas o especies con las que ordinariamente no se cruza, las posibilidades
de mejoramiento se elevan en gran medida. Los genetistas de vegetales ahora disponen de fondos de investigación debido al
potencial económico de los rendimientos mejorados. Además, es posible que estos especialistas tengan mayor libertad de
experimentar con nuevas técnicas que quienes trabajan con animales, debido a que la manipulación de genes vegetales no
suele implicar el mismo tipo de consideraciones éticas.
Por desgracia, ha sido muy difícil encontrar un vector adecuado Figura
para introducir genes recombinantes en muchos tipos de células 23
vegetales. En el sistema vector más utilizado se recurre a la bacteria
formadora de agallas Agrobacterium tumefaciens. Esta bacteria por lo
general produce tumores o "agallas" en los vegetales al introducir un
plásmido especial, llamado plásmido inductor de tumores o Ti (por su
nombre en inglés: tumor-inducing), en las células de su huésped. El
plásmido induce crecimiento anormal forzando a las células de la planta a
producir grandes concentraciones de una hormona de crecimiento
vegetal, la citocinina; también desvía el metabolismo de las células del
huésped a producir sustancias conocidas como opinas, derivados
sencillos de aminoácidos y cetoácidos que son nutrimentos preferidos por
la bacteria.
Es posible "desarmar" al plásmido Ti de manera que no induzca
la formación de tumores y utilizarlo como vector para insertar genes en
células vegetales (Figura 23). Las células en las que se introduce el
plásmido alterado de hecho son normales, excepto por los genes que se
han insertado. Los genes colocados en el genoma de la planta de esta
manera pueden transmitiese en forma sexual por semillas a la siguiente
generación, pero también pueden propagarse asexualmente si se desea.
Un problema importante con el vector Ti es que, con pocas
excepciones, sólo plantas dicotiledóneas pueden ser infectadas por A.
tumefaciens. Por desgracia, las gramíneas, que constituyen la principal
fuente de alimento para el ser humano, son monocotiledóneas y por ello
salen de la gama de huéspedes de la bacteria. Se está realizando intensa
investigación encaminada a desarrollar sistemas vectores para
monocotiledóneas. Un método ha sido el desarrollo de una "escopeta"
genética. Fragmentos microscópicos de metal se cubren de ADN y se
disparan contra células vegetales para que atraviesen las paredes
celulares. Algunas de las células retienen el ADN y son transformadas
por éste. Tales células pueden cultivarse y utilizarse para regenerar una
planta completa
Una complicación más de la ingeniería genética de plantas es
que varios genes vegetales importantes se localizan en el ADN de los
cloroplastos; estos últimos son esenciales en la fotosíntesis, que es la base de la productividad de las plantas. Es obvio que
sería útil desarrollar métodos para modificar la porción del ADN vegetal que reside dentro del cloroplasto. En la actualidad, los
métodos de ingeniería del cloroplasto son el centro de intensa investigación.

Problemas:

1. ¿Por qué la técnica se llama se "ADN recombinante"?

2. ¿Por qué se llaman "extremos pegajosos" si la unión que permite reconstituir al plasmidio se basa en los mismos puentes
de hidrógeno que forman el resto de la doble hebra de ADN?
12
3. Las células de E. coli que se usan en ingeniería genética son "deficientes". Es decir, no pueden sintetizar componentes
escenciales de su pared celular, por ejemplo o cierta base nuclear como la timina. Por lo tanto, sólo pueden sobrevivir en
medios enriquecidos con estas sustancias. ¿Por qué crees que los biólogos moleculares han tomado estas precauciones?
4. Completa el siguiente cuadro acerca de enzimas utilizadas en recombinación del ADN:

Origen Función original Uso en ingeniería genética

Enzimas de restricción
Ligasas
Transcriptasa inversa

5. Si fueses agricultor, ¿qué genes te interesaría insertar en un plásmido Ti?

6. ¿Qué situaciones estaría limitando el uso de recombinación génica en especies vegetales?

VII. Enzimas1

1. Generalidades
Todas las reacciones químicas, tanto las endergónicas como las exergónicas, requieren, para iniciarse, que los
reactantes superen una cierta barrera de energía. Esta barrera se denomina energía de activación, y se define como la
energía cinética mínima requerida por una sistema de partículas para que se produzca una reacción química.
El nivel energético de los reactantes determina la velocidad con que éstos se mueven y chocan entre sí para
reaccionar. Este movimiento está directamente relacionado con la temperatura, de modo que, a temperaturas bajas, es ínfimo
el numero de moléculas reactantes que tienen suficiente energía como para pasar al estado activado. Al aumentar la
temperatura, los movimientos se, incrementan y la velocidad de la reacción se hace apreciable.
Pero, por otro lado, la mayor
parte de las reacciones celulares, si bien
requieren una energía de activación
considerable, debe realizarse a las
temperaturas moderadas y estables
propias del medio celular. Por lo tanto,
la célula debe utilizar una solución
diferente para el problema de la barrera
energética. Está solución consiste en el
uso de ciertas sustancias denominadas
catalizadores. Estas sustancias tienen
un gran espectro de accion: digestiva,
circulatoria, excretora, regulación de
presión arterial, reproducción, etc.
Un catalizador es una
sustancia que reduce la energía
de activación que requiere una

reacción, acelerando así la misma. Esto sucede porque aumenta

la probabilidad de que las moléculas de reactantes, puedan llegar
al nivel de energía mínimo necesario para la reacción, con lo cual
se aumenta su velocidad.
La disminución de la barrera de energía se observa en
los gráficos comparativos de la Figura, que se refieren a la misma
reacción, sin catalizar y catalizada.
Observa que el valor de la energía liberada en el cambio
neto reactantes a productos es el mismo, tanto en la reacción no
catalizada como la catalizada.
La célula presenta catalizadores especiales sintetizados
por ella misma, llamados enzimas. Estas sustancias afectan la
velocidad de las reacciones químicas dentro de las células o en
los espacios intercelulares

2. Propiedades de las enzimas

1
La mayor parte de las descripciones acerca de las enzimas, de una u otra manera, ya se han visto en años anteriores. La idea es
recordar, ordenar y recontextualizar en el nuevo ámbito de la genética molecular.
13
 Las enzimas presentan las mismas propiedades que los catalizadores no biológicos (utilizados en los laboratorios y en
la industria, por ejemplo Mn02 ). Estas son:
a) Son eficientes en cantidades muy pequeñas
b) No son alterados químicamente por la reacción, es decir, se recuperan por completo al finalizar ésta (con el consiguiente
ahorro de energía)
c) No afectan las concentraciones de equilibrio de la reacción; sólo hacen que este equilibrio se alcance más rápidamente
d) Además, a diferencia de los catalizadores no biólógicos:
e) Más eficientes que los catalizadores no biológicos..Esto se puede medir por el número de recambio (cantidad de sustrato
transformado por unidad de sustancia) Ej: Catalizador Origen Nº de recambio
f) Presentan una especificidad muy alta para una reacción en particular Hierro Inorgánico 10-5
g) Pueden estar sujetas a regulación de su actividad Catalasa Orgánico 1010
h) Tienen una composición química específica (son proteínas)
3. Composición química de las enzimas
Sin excepción, las enzimas son proteínas.
En algunas enzimas, la acción catalítica depende exclusivamente de su estructura proteica. En otros casos, en
cambio, se necesitan además otras sustancias para que la enzima actúe. La enzima activa recibe el nombre de holoenzima,
y está constituida por una proteína sin actividad (apoenzima) y un factor
adicional - que nunca es una proteína - llamado cofactor enzimático. Los cofactores enzimáticos pueden ser:
a) Iones inorgánicos: Mg2+, Mn2+, Cu2+, Zn2+, Cl-, Na-, K-, y otros
b) Moléculas orgánicas no proteicas, denominadas coenzimas, que frecuentemente derivan de vitaminas hidrosolubles. Por
ejemplo: FMN, FAD, NAD, NADP, CoA
c) Coenzimas unidas muy estrechamente a la proteína, denominadas grupos prostáticos. Por ejemplo, el grupo hem (un
conjunto de cuatro heterociclos con un ión Fe 3+ central), es el grupo prostético de la enzima catalasa (este grupo es muy
semejante a la proteína hemoglobina de los glóbulos rojos)

4. Nomenclatura de enzimas
La forma de nombrarlas se basa en la adición del morfema "asa" al nombre del sustrato sobre el cual actúa. Por
ejemplo, la sacarosa (sustrato) se degrada (disminuir gradualmente) mediante la enzima sacarasa, para formar sustancias
más simples: glucosa y fructosa; las lipasas actúan sobre los lípidos; las proteinasas o proteasas rompen los enlaces
peptídícos de las proteínas y, las amilasas actúan sobre los almidones.

5. Trabajo en equipo de las enzimas

Las enzimas trabajan generalmente en equipo; por ejemplo el producto de una reacción enzimáticamente regulada
sirve de sustrato para la siguiente. Así, el interior de la célula puede representarse cómo una fábrica, con muchas líneas
distintas de ensamblaje (y
desensamblaje) en función simultánea.
Cada una de estas líneas se compone
de diversas enzimas, y cada una realiza
una acción sobre una molécula,
convirtiendo la molécula A en molécula
B, para después pasarla a una nueva
enzima que se convierte la molécula B
en molécula C, y así sucesivamente.
Por ejemplo, dos enzimas pueden
extraerse de las semillas germinadas
de cebada, las cuales convierten el almidón en glucosa. La primera la amilasa, hidroliza el almidón en, maltosa; la segunda,
maltasa, separa la maltosa en glucosa. Para convertir la glucosa en ácido láctico se requiere la acción consecutiva de 11
enzimas. La misma serie de estas 11 enzimas se encuentran en el ser humano, hojas verdes y en las bacterias.

6. Teorías sobre actividad enzimática

El primer paso en el desarrollo de la actividad enzimática es la unión de la enzima al reactante, que también es
llamado sustrato.
En toda enzima existe un área, denominada sitio activo, que está determinado por un pequeño número de
aminoácidos, con un ordenamiento particular en el espacio. Este es el lugar específico de unión del sustrato. La interacción
del sitio activo y el sustrato podría deberse a un complementariedad entre la forma de ambos. Esta es la base de la teoría de
"llave y cerradura", una de las primeras propuestas para explicar la actividad enzimática.
Más recientemente, se ha sugerido que la interacción no es tan rígida como sugiere el nombre de la teoría, sino que la enzima
es relativamente flexible, con capacidad para moverse de una conformación a otra diferente, acomodando de manera perfecta
al sustrato en el sitio activo. Esta teoría se denomina de "ajuste inducido"
Los mecanismos por los cuales se produce la catálisis enzimática, es decir, la transformación de sustrato en producto, se
explican por:
 que hay una mayor eficiencia de los choques entre las sustancias que reaccionan, resultado de la proximidad y de la orientación óptima
para la.interacción de los sustratos;

14
 que se produzcan
cambios en la
conformación de la
enzima,
ocasionados al
unirse al sustrato,
creándose
tensiones que
rompan al sustrato
para dar las
moléculas de
producto o que se
debiliten algunos
enlaces
favoreciendo la
formación de otros
Ciertas reacciones
se explican
satisfactoriamente por
algunos de los
mecanismos expuestos,
solos o combinados, y otras reacciones aún permanecen sin aclaración.

7. Inhibidores
Muchas cadenas metabólicas
mediadas por enzimas poseen
mecanismos regulatorios de
retroalimentación - análogos a los
mecanismos de regulación hormonal -
en que las enzimas pueden ser
inhibidas temporalmente por moléculas
inorgánicas u otras de naturaleza
también enzimática.
Ciertos inhibidores entran en el sitio
activo de la enzima impidiendo que se
unan los sustratos. Son llamados
inhibidores competitivos. Otros, en
tanto, se unen en regiones de la enzima
que provocan una distorsión en la forma
del sitio activo, lo cual repercute también
en un impedimento para la unión de
sustratos o para que ocurra la catálisis:
son los inhibidores alostéricos.
Muchas toxinas son inhibidores de enzimas. Existen inhibidores que tienen utilidad médica en el tratamiento del cáncer y
de infecciones virales y bacterianas.

8. Factores que afectan a las enzimas

Factores importantes para la función de las enzimas son:
 la temperatura
 el pH
 la concentración de los sustratos

15
 Las enzimas tienen una temperatura y un pH óptimos. Generalmente se desnaturalizan sobre 40º C y pierden
abruptamente su actividad.

Problemas:

1. Las siguientes imágenes corresponden a una enzima activa (1) y a un

mutante de la misma enzima, pero inactiva (2). Abajo están sus
correspondientes secuencias aminoacídicas ¿Cuál de las alternativas
a continuación es incorrecta?
a) la proteína 2 tiene una alteración en su estructura que
afecta la función de su sitio activo
b) La
proteína 2
presenta cambios
estructurales
debido a
mutaciones que
hicieron cambiar
la.secuencia de
uno de los codones mientras otro codón se perdió (deleción) en su gen
c) Las mutaciones que afectan a la proteína 2 podrían ser hereditarias
d) El cambio de estructura se debe a mutaciones que cambiaron el marco de lectura de la secuencia del gen

2. Selecciona la sentencia incorrecta sobre las proteínas:

a) Son moléculas que ejecutan la información gánica
b) Realizan las reacciones químicas que ocurren en el organismo
c) Constituyen estructuras que dan forma a las células
d) Tienen todas formas semejantes debido a que su secuencia es parecida
e) La forma y función de las proteínas está determinada por la secuencia de aminoácidos que se especifica en los genes

3. Con respecto a las enzimas, es incorrecto decir que:

a) Son una categoría especial de proteínas que aumentan la velocidad de las reacciones químicas en los organismos
b) Operan en un rango de temperatura compatible con la vida
c) Son catalizadores biológicos de baja especificidad en sus acciones y substratos
d) Su actividad contribuye fundamentalmente a la realización del fenotipo
e) Su forma y función está determinada por la secuencia de aminoácidos especificada en el ADN

4. En el hombre, la hormona de crecimiento es una proteína producida por la hipófisis. Para el tratamiento del retardo del crecimiento
en los niños que carecen de esta hormona sólo se puede utilizar hormona de crecimiento humana. ¿De qué manera se podría
obtener la hormona si actualmente se dispone del ADN que la codifica?

5. Un enzimólogo (biólogo molecular especialista en enzimas) ha intervenido genéticamente la enzima G. La enzima G es una enzima
relacionada con el metabolismo respiratorio y su secuencia genética es ampliamente conocida. Esta enzima trabaja en rangos de
acidez muy estrictos, lo que ha impedido que cierto tipo de cultivo vegetal sobreviva en ambiente levemente ácido del sur de Chile.
De esta manera, se han diseñando dos nuevos tipos de enzima G: G 1 y G2, que poseen mejor rendimiento en ambientes de mayor
acidez. La única diferencia entre G 1 y G2, es que ésta última funciona mejor a bajas temperaturas. Respecto a lo anterior, resuelve:
a) ¿Cómo podría modificarse teóricamente la eficiencia de una enzima, en general?
b) ¿Cómo podría modificarse teóricamente la eficiencia de una enzima a un ambiente más ácido?
c) ¿Cómo podría medirse la eficiencia de la enzima G para saber si posee mayor o menor rendimiento?
d) Dibuja un gráfico de rendimiento v/s pH en que aparezcan las curvas de las enzima G, G 1 y G2

16
Trabajo práctico 1: Síntesis de un péptido - la insulina

A partir de las instrucciones entregadas por el profesor acerca del plegamiento de proteínas tras la síntesis de la cadena
aminoacídica y considerando la información contenida en esta guía, deberás obtener la estructura de una molécula de INSULINA
(hormona relacionada con la regulación de la glicemia) a partir de la secuencia simplificada de su gen.

Datos:

I. Gen de la insulina (ubicado en el cromosoma nº 11)

 Se han omitido las bases que originan tripletes de inicio y final
 Los espacios disponibles bajo la secuencia son para anotar el código del ARN m correspondiente (línea superior), así como el
orden de los aminoácidos (línea inferior)

AAGCAGTTGGTTGTGGATACGCCGAGCGTGGATCAGCTCCGTGATATGGATCAGACGCCGCTCGCCCCG
________________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________________

AAGAAGATGTGTGGTTTCCGTTGTGCCGCCCTCCGTCTCCTGGATGTTCAGCCGGTTCAGCTCGATCCG
________________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________________

CCGCCGGGTCGTCCGAGCGATGTTGGTGATCGTGATCTCCCGAGCGATGTTTTCGCCCCGTATCAGCTC
________________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________________

GTTACGACGTGTAGCTAGACGAGCGATATGGTTGATC TCTTGATGACGTTG
________________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________________

II. Especificaciones de terminación y plegamiento:

a) Número de cadenas peptídicas independientes = 3, de las cuales sólo dos terminan formando la insulina.
 Cadena B: Fenilalanina 1 hasta Alanina 30
 Cadena C: Treonina 1 hasta Arginina 35 (cadena que es cortada y perdida)
 Cadena A: Glicina 1 hasta Asparagina 21

b) Puentes disúlfuro (entre cisteínas):

 Cys6 - Cys11 en la cadena A
 Cys7 cadena A con Cys7 cadena B
 Cys20 cadena A con Cys19 cadena B

c) Número de segmentos que forman alfa-hélice = 3

 Dos segmentos en la cadena A entre lo aminoácidos Gly1 - Ile10, Ser12 - Glu17
 Un segmento en la cadena B entre los aminoácidos Ser 9 - Gly20
 Tener presente que los aas hidrofóbicos (Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Trp, Pro, Met, Phe) se orientan hacia el interior de la proteína,
mientras que los hidrofílicos (Asn, Gln, Tyr, Cys, Ser, Thr) lo hacen hacia fuera

III. Especificaciones de diseño:

 Los aminoácidos pueden representarse como círculos u otro dibujo simple.

 Cada cadena (A y B) debe representarse de un color distinto
 Los 3 puentes disúlfuro deben quedar destacados y las secuencias que forman hélices alfa pueden representarse como un espiral
simple
 Es preferible realizar varios borradores hasta diseñar un modelo que cumpla con todas las especificaciones.
 Basándose en el diseño REVISADO Y APROBADO por el profesor, construir un modelo 3D de la insulina, utilizando alambre,
plasticina y/o pelotitas de plumavit.

Anexo: Clasificación y abreviaturas de los 20 aminoácidos:

Polares Asparagina: Asn Glutamina: Gln Tirosina: Tyr Serina: Ser Treonina: Thr
Con carga eléctrica Ácido aspártico: Asp Ácido glutámico: Glu Arginina: Arg Lisina: Lys Histidina: His
Glicina: Gly Alanina: Ala Valina: Val Leucina: Leu Isoleucina: Ile
No polares
Triptófano: Trp Prolina: Pro Cisteína: Cys Metionina: Met Fenilalanina: Phe

Trabajo Práctico 2: Extracción de ADN desde tejidos vegetales

17
Materiales:
 Cebollas, coliflor, arvejas, etc.  Termómetro  Hielo
 Tubos de centrífuga  Pipetas graduadas  Sal
 Embudo de vidrio  Espátula  Etanol al 95%
 2 Vasos precipitados de 500 ml  Papel filtro  Detergente líquido
 Pipeta Pasteur  Soporte universal  Ablandador de carne
 Licuadora (proteasas)

Método:
1. Preparar una pipeta Pasteur como un gancho o protuberancia, haciendo uso del calor de un mechero.
2. Preparar un baño María a 65°C
3. Moler 100 g de coliflor (u otro organismo) usando la licuadora con unos 100 ml de agua. Se pretende que la solución tenga
pedazos finos de tejido sin alcanzar la consistencia de puré.
4. Verter unos 5 ml de la solución anterior en un tubo de centrífuga. Agregar 2 g de sal y 1 ml de detergente líquido. Revolver.
5. Colocar el tubo con la mezcla anterior en el baño con agua a 65°C durante 10 minutos.
6. Colocar el tubo con la mezcla en hielo. Este proceso debe ser rápido, para conseguir un enfriamiento brusco. Dejar durante 5
minutos.
7. Filtrar la solución y recoger el filtrado en otro tubo de centrífuga, hasta completar 4 ml.
8. Agregar 1 g de ablandador de carne a los 4 ml de filtrado.
9. Inclinar el tubo y cuidadosamente, verter el etanol frío (ojalá 0°C), escurriéndolo por la pared. No agitar el tubo, pues la idea es
permitir la formación de fases de distinta densidad.
10. Las fibras de ADN aparecerán en la interfase alcohol-filtrado.
11. Revolver el ADN con la pipeta Pasteur previamente preparada para tal efecto, levantando las fibras, como si se tratara de un
bocado de tallarines.
12. El ADN rápidamente comenzará a desintegrarse. Botar las soluciones, lavar y limpiar.
13. Anotar los resultados comparativos de otras parejas de trabajo, evaluando el efecto que tuvo utilizar distintas concentraciones o
cantidades de detergente, ablandador, etc.

Trabajo práctico 3: Noticia biotecnológica:

Fuentes actualizadas al 15 de agosto de 2007

http://www.biotecnologica.com/

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