INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA

EL DESCUBRIMIENTO DEL ADN

LA HISTORIA DEL ADN

Si bien el período entre principios de siglo y la Segunda Guerra Mundial (1900 a 1940) ha sido
considerado la edad de oro de la genética, los científicos aún no habían determinado que, en el
ADN y no en las proteínas, se encontraba el material hereditario. Sin embargo en esa época se
realizaron muchos descubrimientos genéticos y se estableció la relación entre genética y evolución.

El ADN fue aislado por Friedrich Miescher en 1869 en esperma de salmón y de pus de heridas
abiertas. Dado que la encontró solamente en los núcleos, Miescher denominó a este compuesto
nucleína.("Se levantaba en pleno invierno a las 4.00h y se iba a orillas del Rhin con su ayudante
para pescar. Luego, procedía a la extracción de nucleína en un laboratorio abierto a todos los
vientos, donde la temperatura rondaba los 2 °C. Una temperatura demasiado elevada habría
impedido manipular la nucleína..." ***)

A posteriori se lo cambió a ácido nucleico y por último a ácido desoxirribonucleico (ADN).

Robert Feulgen, en 1914, describió un método para revelar por tinción el ADN, basado en el
colorante fucsina. Se encontró, utilizando este método, la presencia de ADN en el núcleo de todas
las células eucariotas, específicamente en los cromosomas.
Durante los años 20, el bioquímico P.A. Levene analizó los componentes del ADN. Encontró
que contenía cuatro bases nitrogenadas: citosina, timina, adenina, y guanina; el azúcar
desoxirribosa; y un grupo fosfato.
El concluyó:

1. que la unidad básica (nucleótido) estaba compuesta de una base pegada a un azúcar y
que el fosfato también estaba pegado al azúcar y
2. lamentablemente también concluyó erróneamente que las bases estaban en cantidades
iguales y, que un tetranucleótido era la unidad repetitiva de la molécula.

Sin embargo queda su idea de la estructura del nucleótido el cual es realmente la unidad
fundamental (monómero) del ácido nucleico (polímero).
Existen cuatro nucleótidos que integran el ADN: uno con citosina (C), uno con guanina (G), uno
con adenina (A), y uno con timina (T), y lo que se muestra es su forma "activa", como trifosfato,
antes de entrar en la molécula de ADN, recuerde que el nucleótido allí tiene un solo fosfato.

El factor de transformación

A comienzo "del año 1900", el estudio de la genética comienza a dar frutos: la relación entre el
trabajo de Mendel y el de los biólogos celulares resultó en la teoría cromosómica de la herencia;
Garrod propuso la relación entre los "errores innatos del metabolismo" y los genes. La pregunta
quedó planteada: ¿que es un gen?

La repuesta la trajo el estudio de una enfermedad infecciosa mortal la neumonía. Durante los años
20 Frederick Griffith estudió las diferencias entre una cepa de la bacteria Streptococcus
peumoniae que producía la enfermedad y otra que no la causaba. La cepa que causaba la
enfermedad estaba rodeada de una cápsula (también se la conoce como cepa S, del ingles
smooth, o sea lisa, que es el aspecto de la colonia en las placas de Petri). La otra cepa (la R, de
rugosa, que es el aspecto de la colonia en la placa de Petri) no tiene cápsula y tampoco causa
neumonía. Frederick Griffith (1928) fue capaz de inducir la transformación de una cepa no
patogénica Streptococcus pneumoniae. Griffith postuló la existencia de un factor de transformación
como responsable de este fenómeno.

Streptococcus pneumoniae (pneumococci),creciendo como colonias en la superficie de un medio

de cultivo. La presencia de una cápsula alrededor de las células dan a las colonias un aspecto de
la superficie lisa (S),como se muestra en la siguiente foto A y las bacterias pneumococci con falta
de cápsulas producen colonias con aspecto superficial rugoso (R),como se muestra en la foto B,

FOTO A FOTO B

Los neumococos forman 90 tipos diferentes ,numerados como I, II, III …,los tipos difieren en la
química de la cápsula (polisacáridos).

Griffith inyectó las diferentes cepas de la bacteria en ratones. La cepa S mataba a los ratones
mientras que la cepa R no lo hacía. Luego comprobó que la cepa S, muerta por calentamiento, no
causaba neumonía cuando se la inyectaba. Sin embargo cuando combinaba la cepa S muerta por
calentamiento, con la cepa R viva, e inyectaba la mezcla a los ratones ( recuerde que ningún
componente individual de la mezcla mata a los ratones) los ratones contraían la neumonía y
morían.
Las bacterias que se aislaban de los ratones muertos poseían cápsula y, cuando se las inyectaba,
mataban otros ratones!

Hipótesis

1. La cepa S, (cepa I) muerta por el calor, fue reanimada o resucitó.

2. La cepa R (cepa II) viva fue modificada por algún "factor de transformación" (transforming
factor)

A diferencia del ocasional desplazamiento de S a R, el tipo de organismo es constante, los ratones

inyectados con células S, por ejemplo del tipo neumococos II, pronto tendrán sus cuerpos
infectados con células descendiente del mismo tipo.

Sin embargo, Griffith encontró que cuando las células vivas R (que deben haber sido inofensivas)
y las células muertas S (que también deben haber sido inofensivas) fueron inyectadas juntas, el
ratón llegó a enfermar y células vivas S se podían obtener de su cuerpo. Además, el tipo de
células recuperadas del cuerpo del ratón fue determinado por el tipo de células muertas S. Este
proceso fue llamado transformación.Otros experimentos mostraron que la segunda postulación
era la correcta.

En los años 40 (19..), Oswald Avery, Colin MacLeod, y Maclyn McCarty revisaron el experimento
de Griffith y concluyeron que el factor de transformación era el ADN. Oswald Avery repitiendo el
trabajo de Griffith con el agregado de una enzima que destruía el ADN, demostró que el factor de
transformación era el ADN. Cuando Avery agregaba esta enzima, no observaba la transformación
obtenida por Griffith. El concluyó que el material hereditario era ADN y no una proteína. Su
evidencia era fuerte pero no totalmente concluyente, para esa época el "candidato principal" para
ser el material hereditario eran una proteína.

El uso de bacteriófagos

La última palabra en la cuestión de determinar cual era el material hereditario vino de los trabajos
de Max Delbruck y Salvador Luria en los 40. Los bacteriófagos son un tipo de virus que atacan a
las bacterias, Delbruck y Luria trabajaron con virus que atacan a la bacteria del intestino humano
Escherichia coli. Los bacteriófagos consisten en ADN con una cubierta de proteínas. Los
bacteriófagos infectan una célula inyectándole su ADN. Este ADN viral "desaparece" mientras toma
control de la maquinaria de la bacteria que comienza a fabricar nuevos virus. Luego de 25 minutos
de haber sido inyectado la célula hospedadora estalla, liberando cientos de nuevos bacteriófagos.
Como los fagos tienen solo ADN y proteínas, eran la herramienta ideal para resolver la naturaleza
del material hereditario.
 El experimento de Hershey-Chase ,el ADN es el material genetico.

En 1952 Alfred Hershey y Martha Chase realizaron una serie de experimentos destinados a
dilucidar si el ADN o las proteínas era el material hereditario. Marcando el ADN y las proteínas con
isótopos radiactivos en un cultivo de un virus, podrían seguir el camino de las proteínas y del ADN
en un experimento demostrando cual de ellos entraba en la bacteria. Ese seria el material
hereditario ( factor transformador de Griffith). Dado que el ADN contiene fósforo (P) pero no azufre
(S), ellos marcaron el ADN con fósforo-32 radioactivo. Por otra parte, las proteínas no contienen P
pero si S, y por lo tanto se marcaron con azufre-35. Hershey y Chase encontraron que el S-35
queda fuera de la célula mientras que el P-32 se lo encontraba en el interior, indicando que el ADN
era el soporte físico de la herencia

EXPERIMENTO DE HERSHEY - CHASE

MACROMOLÉCULA DE ADN

Es un ácido nucleico compuesto de dos cadenas polinucleotídicas que se disponen

alrededor de un eje central formando una doble hélice, capaz de autorreplicarse y codificar
la síntesis de ARN.

Lugar donde esta "depositada" la información genética.

Este ácido nucleico que funciona como soporte físico de la herencia en el 99% de las especies. La
molécula bicatenaria, esta formada por dos cadenas antiparalelas y complementarias entre si. Su
unidad básica, el nucleótido, consiste en una molécula del azúcar desoxirribosa, un grupo fosfato, y
una de estas cuatro bases nitrogenadas: adenina, timina, citosina y guanina.
Erwin Chargaff analizó las bases nitrogenadas del ADN en diferentes formas de vida, concluyendo
que, la cantidad de purinas no siempre se encontraban en proporciones iguales a las de las
pirimidinas (contrariamente a lo propuesto por Levene), la proporción era igual en todas las células
de los individuos de una especie dada, pero variaba de una especie a otra.

Los experimentos de Hershey-Chase probaron que el ADN era el material genético pero, no como
el ADN conformaba los genes. El ADN debía transferir información de la célula de origen a la célula
hija. Debía también contener información para replicarse a si mismo, ser químicamente estable y
tener pocos cambios. Sin embargo debía ser capaz de cambios mutacionales. Sin mutaciones no
existiría el proceso evolutivo.

Muchos científicos se interesaron en descifrar la estructura del ADN, entre ellos, Francis Crick,
James Watson, Rosalind Franklin, y Maurice Wilkins.

Rosalind Franklin

A finales de la primavera de 1952, la cristalógrafa británica Rosalind Franklin (1920-1958) obtuvo

una fotografía de difracción de rayos X que reveló, de manera inconfundible, la estructura helicoidal
de la molécula del ADN.

El modelo de Watson y Crick

Para entender la molécula de ADN los científicos intentaban hacer un modelo del comportamiento
del mismo. En los años 1940 Erwin Chargaff describió un modelo con las cuatro bases: adenina,
guanina, citosina, y timina. Tomó muestras de ADN de células diferentes y encontró que la cantidad
de adenina era casi igual a la de timina, y que la cantidad de guanina era casi igual al de citosina:
A=T, y G=C, este descubrimiento más tarde se conoció como la Regla de Chargaff.

Watson y Crick eran investigadores teóricos que integraron todos los datos disponibles en su
intento de desarrollar un modelo de la estructura del ADN. Los datos que se conocían por ese
tiempo eran :

1. que el ADN era una molécula grande también muy larga y delgada.
2. los datos de las bases proporcionados por Chargaff (A=T y C=G; purinas/pirimidinas=k
para una misma especie).

3. los datos de la difracción de los rayos-x de Franklin y Wilkins (King's College de Londres).

4. Los trabajos de Linus Pauling sobre proteínas (forma de hélice mantenida por puentes
hidrógeno), quién sugirió para el ADN una estructura semejante.
 El ADN es una doble hélice, con las bases dirigidas hacia el centro, perpendiculares al eje de la
molécula (como los peldaños de una escalera caracol) y las unidades azúcar-fosfato a lo largo
de los lados de la hélice (como las barandas de una escalera caracol).

Las hebras que la conforman son complementarias (deducción realizada por Watson y Crick a
partir de los datos de Chargaff, A se aparea con T y C con G, el apareamiento se mantiene debido
a la acción de los puentes hidrogeno entre ambas bases). Tome nota que una purina con doble
anillo siempre se aparea con una pirimidina con un solo anillo en su molécula.

Las purinas son la Adenina (A) y la Guanina (G). Las Pirimidinas son la Citosina (C) y la Timina
(T).

Las bases son complementarias, con A en un lado de la molécula únicamente encontramos T del
otro lado, lo mismo ocurre con G y C. Si conocemos la secuencia de bases de una de las
hebras, conocemos su complementaria.
 ÁCIDOS NUCLEICOS

Hay dos tipos de ácidos nucleicos (AN): el ácido desoxirribonucleico (ADN) y el ácido
ribonucleico (ARN), y están presentes en todas las células. Su función biológica no quedó
plenamente demostrada hasta que Avery y sus colaboradores demostraron en 1944 que el ADN
era la molécula portadora de la información genética.

Los ácidos nucleicos son polímeros lineales de un monómero llamado nucleótido (figura de
abajo), cada nucleótido está formado, mediante un enlace éster, por un ácido fosfórico y un
nucleósido (zona sombreada de la figura), este último se constituye por la unión de una pentosa
y una base nitrogenada (purina o pirimidina).

Las bases nitrogenadas pueden ser purinas: ADENINA y GUANINA, las bases pirimídicas son:
CITOCINA, TIMINA y URACILO. La timina solo puede formar ADN y el uracilo solo está presente
en el ARN
 Los Nucleótidos del ADN

Los nucleótidos se enlazan para formar los ácidos nucleicos o polinucleótidos.

En las hebras enfrentadas A se complementa con T, y G se complementa con C. A menudo los
pares de bases son mencionados como A-T o G-C, adenina a timina y guanina a citosina.
Los nucleótidos se forman por la unión del C 5' de la pentosa con el grupo fosfato formando un
nucleótido monosfato. La cadena se va formando al enlazar los fosfatos al C 3' de otro
nucleótido. Así la cadena tiene un extremo 5´y un extremo 3´.

DIRECCIONALIDAD DE LOS POLÍMEROS DE NUCLEÓTIDOS

ESTRUCTURA DEL ADN

Algunos autores definen estructuras que denominan primarias, secundarias, etc. en orden de
complejidad creciente, similar a las de las proteínas.

Las cuatro bases nitrogenadas del ADN se encuentran distribuidas a lo largo de la "columna
vertebral" que conforman los azúcares con el ácido fosfórico en un orden particular, (la secuencia
del ADN). La adenina (A) se empareja con la timina (T) mientras que la citosina (C) lo hace con la
guanina.
La estructura primaria del ADN está determinada por esta secuencia de bases ordenadas sobre
la "columna" formada por los nucleósidos: azucar + fosfato. Este orden es en realidad lo que se
transmite de generación en generación (herencia).

Estructura secundaria: es el modelo postulado por Watson y Crick: la doble hélice, las dos
hebras de ADN se mantienen unidas por los puentes hidrógenos entre las bases. Los pares de
bases están formados siempre por una purina y una pirimidina, de forma que ambas cadenas están
siempre equidistantes, a unos 11 Å una de la otra. Los pares de bases adoptan una disposición
helicoidal en el núcleo central de la molécula, ya que presentan una rotación de 36º con respecto al
par adyacente, de forma que hay 10 pares de bases por cada vuelta de la hélice. La A se
empareja siempre con la T mediante dos puentes de hidrógeno, mientras que la C se empareja
siempre con la G por medio de 3 puentes de hidrógeno

En cada extremo de una doble hélice lineal de ADN, el extremo 3'-OH de una de las hebras es
adyacente al extremo 5'-P (fosfato) de la otra. En otras palabras, las dos hebras son
antiparalelas (Figura superior), es decir, tienen una orientación diferente. Por convención, la
secuencia de bases de una hebra sencilla se escribe con el extremo 5'-P a la izquierda.

DIAGRAMA SIMPLIFICADO DEL MODELO DE WATSON Y CRICK

Estructura terciaria: es la forma en que se organiza esta doble hélice:

ADN EN PROCARIOTAS

En procariotas (así como en las mitocondrias y

cloroplastos eucariotas) el ADN se presenta
como una doble cadena (de cerca de 1 mm de
longitud), circular y cerrada, que toma el
nombre de cromosoma bacteriano. Esta
"gigantesca" molécula circular tiene un peso
de 3 X 10 9d (daltons). No posee las histonas
del cromosoma eucariota, pero se ha
comprobado la existencia de proteínas y poliaminas de bajo peso molecular y de iones magnesio
que cumplirían su función. El cromosoma bacteriano se encuentra altamente condensado y
ordenado ("supercoiled" o superenrrollado).
En virus, el ADN puede presentarse como una doble hélice cerrada, como una doble hélice abierta
o simplemente como una única hebra lineal.

ADN EN EUCARIOTAS

En los eucariotas el ADN se encuentra localizado principalmente en el núcleo, apareciendo el

superenrrollamiento (trenzamiento de la trenza) y la asociación con proteínas histónicas y no
histónicas.
El ADN se enrolla (dos vueltas) alrededor de un octeto de proteínas histónicas formando un
nucleosoma, estos quedan separados por una secuencia de ADN de hasta 80 pares de bases,
formando un "collar de perlas" o más correctamente denominado fibra de cromatina, siendo la
estructura propia del núcleo interfásico, que no ha entrado en división. Este collar de nucleosomas
vuelve a enrollarse y cada 6 nucleosomas constituyen un "paso de rosca" por medio de histona H1
formando estructuras del tipo solenoide.

En el ciclo mitótico de las células eucariotas la cromatina se enrolla formando cromosomas, que
son complejas asociaciones de ADN y proteínas.

Doble hélice y fibra de Enrollamiento Núcleo de célula

Cromosoma
cromatina de la cromatina eucariota

Resumen de datos básicos del ADN

1. Unidades químicas básicas
a. un azúcar de 5 carbonos : desoxirribosa
b. fosfato : uniones covalentes entre los azúcares
c. bases : purinas = adenina y guanina
pirimidinas = timina y citosina
d. base + azúcar : nucleósido
e. base + azúcar + fosfato : nucleótido
 2. Una hebra
Cada hebra esta hecha de un azúcar unido covalentemente a un fosfato que a su vez se
une a otro azúcar y así sucesivamente. Cada hebra de ADN puede contener miles o
millones de estas uniones azúcar-fosfato.
Cada azúcar tiene también, una purina o pirimidina unida a él covalentemente.
3. La doble hélice
Una molécula de ADN consiste en dos hebras que se encuentran enrolladas una alrededor
de la otra formando una doble hélice. Las bases de las dos hebras se disponen de manera
tal, que cuando en una de ellas hay una adenina en la enfrentada hay timina y, cuando
hay guanina en la otra hay citosina. Esto satisface la regla de Chargaff en manera tal que:

la cantidad de adenina = a la cantidad de timina (A = T)

la cantidad de guanina = a la cantidad de citosina (G = C

Direccionalidad:

La cadena de uniones azúcar-fosfato (la "columna vertebral", backbone en inglés) está construida
en manera tal que posee una polaridad, esto es, que el fosfato en el carbono 5' de la desoxirribosa
se une al 3' de la siguiente desoxirribosa. En este caso se dice que tiene una dirección 5' a 3'. Las
dos hebras del ADN están dispuesta en manera tal que su disposición se conoce como
antiparalela, donde una de ellas va de 5'- 3' y la complementaria de 3'- 5'.

ANTIPARALELISMO DE LAS HEBRAS DEL ADN

 ÁCIDO RIBONUCLEICO: ARN

Una célula típica contiene 10 veces más ARN que ADN. El azúcar presente en el ARN es la ribosa.
Esto indica que en la posición 2' del anillo del azúcar hay un grupo hidroxilo (OH) libre. Por este
motivo, el ARN es químicamente inestable, de forma que en una disolución acuosa se hidroliza
fácilmente. En el ARN la base que se aparea con la A es U, a diferencia del ADN, en el cual la A
se aparea con T.

Según las modernas teorías sobre el origen de la vida, parece bastante probable que el ARN fuese
el primer biopolímero que apareció en la corteza terrestre durante el transcurso de la evolución. Se
distinguen varios tipos de RNA en función, sobre todo, de sus pesos moleculares. Los más
importantes en la síntesis de proteínas son:

RNA MENSAJERO (RNAm)

Se sintetiza sobre un molde de ADN por el proceso de transcripción por el cual se copia el ARN
simple hebra a partir del molde del ADN, pasa al citoplasma y sirve de pauta para la síntesis de
proteínas (traducción).

RNA RIBOSÓMICO (RNAr)

El RNA ribosómico (RNAr) está presente en los ribosomas, orgánulos intracelulares implicados en
la síntesis de proteínas. Su función es leer los RNAm y formar la proteína correspondiente.

RNA de transferencia (RNAt)

Son cadenas cortas de una estructura básica, que pueden unirse específicamente a determinados
aminoácidos.

RESPONDE LAS SIGUIENTES PREGUNTAS:

1.- ¿Por qué los candidatos para ser considerados como la información genética eran ADN y
proteínas?

2.- ¿Por qué se pensó que las proteínas eran el material hereditario y no el ADN?
3.- Compara la molécula de ADN y de ARNm considerando por lo menos tres aspectos.

4.- Anota tres hechos que demuestren o sugieran que el ADN es el material hereditario.

5.- Nombra cada una de las moléculas constituyentes de la doble hélice de ADN, además de
especificar los enlaces formados entre la misma hebra y las hebras complementarias.

6.- Con respecto al experimento de Griffith,¿Por qué se utilizaron células muertas de la cepa “S”
en el experimento?¿ A que se habría debido la muerte del ratón si se hubiese empleado células “S”
vivas? , ¿Qué transformación experimenta la cepa “R” al estar en medio de cultivo con células “S”
muertas?

7.- ¿Cuál es la secuencia completaría de una hebra cuya secuencia es : TTAGCTTTACCCGGA.

8.- ¿Qué sucederá con la estructura de la molécula de ADN si se cambia una purina por una
pirimidina en una de las hebras, sin cambiar su base complementaria?.

9.-¿A qué crees que se debe el hecho de que los puentes de hidrogeno son uniones fáciles de
romper?