PRACTICA N°1:

TITULACIÓN DE VIRUS
I. Introducción:

Las técnicas de titulación viral son un paso previo y necesario para desarrollar otros tipos de
estudios. La cantidad de virus presente en una muestra se calcula por diversos métodos: los métodos
donde no se mide la capacidad infecciosa de las partículas virales y los métodos donde se mide
capacidad infecciosa

II. Objetivo:

• Determinar el número de partículas víricas de una suspensión conteniendo fago ante

Pseudomonas sp. (esta fue la cepa con la que se pudo aislar fagos).

III. Materiales:
• M. Biológico Suspensión vírica,
Cepa problema.
• M. de Laboratorio
• Agar Triptosa
• Caldo Triptosa
• Agar Agua
• Pipetas
• Placas de Petri
• Tubos de ensayo
• Asas bacteriológicas
• Gradilla.

IV. Procedimiento:
A. Método sobre Capa de Agar
1. Preparar 9 tubos de dilución (marcar 1 al 8 y el tubo 9 control).
2. Luego, a cada tubo agregamos 2.7 ml. de caldo triptosa.
3. Con una pipeta estéril agregamos al tubo 1, 0.3 ml. del filtrado (el fago).
4. Luego, mezclar y otra vez retiramos 0.3 ml para el tubo 2 y así repetir hasta el tubo
8 (diluciones hasta 10-8); al tubo control no se le agrega nada.
5. A cada tubo, corresponder un tubo con Agar Agua (1 ml) diluido. Esto a baño
María (45ºC) y hacer corresponder una placa por tubo (agar triptosa para las
placas).
6. De cada tubo de dilución (ejm. 10 -1) se coloca 0.1 ml al tubo con agar agua y se le
agrega de 3 a 4 gotas de la cepa problema (con 3 a 4 h de desarrollo), así debe
hacerse en todos los tubos hasta el tubo 10-8
7. Verter el contenido de los tubos 10 -1 a 10-8 en las placas de Agar Nutritivo,
previamente marcados a 10-1 hasta 10-8
8. Luego incubar a 37° C por 18 a 24 horas.
9. Luego se anota el número de calvas o placas (espacios libres de bacteria
por dilución), se observa también la morfología de las calvas.
10. Luego se calcula el título:

TÍTULO= Nº de calvas de última dilución en que aparecen calvas

Dilución x Inóculo
 0.3 ml 0.3 ml 0.3 ml 0.3 ml 0.3 ml 0.3 ml 0.3 ml 0.3 ml
Muestra=X 3 Control
(fago) 6
AGAR AGUA
1 2 3 4 5 6 7 8 9
4 AGREGAR A CADA
2.7ml de TUBO Y 3 o 4
Agar Agua (1 caldo 2 GOTAS DE CEPA
ml) diluido a 1 PROBLEMA
triptosa
cada tubo
5 1 1 1 1 1 1 1 1 1 C1=1ml
Baño María (45ºC) 10−1
102 3
10 104 105 106 107 108 109
Verter el contenido de los tubos a las placas Petri
Incubar a 37° C
por 18 a 24
37 2
7 horas.
Número de 8
calvas o placas C1*V1=C2*V2 1∗0.3 ml
V2=2.7+0.3 C2 = C2 =
3 ml
FORMULA DE DILUCIONES
9 V2=3ml 1
10
V. Resultados:
- Ejemplo: Al realizar la titulación se obtuvo los siguientes resultados:
10-1 Incontables Luego, haciendo los cálculos se obtiene:
10-2 Incontables
10-3 Incontables
10-4 37 calvas 2 2 32
10-5 2 calvas =¿
_______2_____ = 10 ∗1 = 10 ∗10−1
−5 −5
10−6
10.6 No calvas 10
10-7 No calvas 10-5 x 0.1
10-8 No calvas = 2 * 106 UFP
Control No calvas
37 37 37
_ _____37____ = −4
=
10 ∗1 10 ∗10−1
−4 = 10−5
10
10-4 x 0.1
= = 37 * 105UFP

-Entonces el título del fago e:2 x 106 Unidades Formadoras de Placas

-Entonces el título del fago e:37 x 105 Unidades Formadoras de Placas

VI. Conclusiones:

 El número de partículas de la suspensión vírica corresponde a 2 x 10-6 UFP que corresponde al

bacteriófago específico. La cantidad de unidades formadoras de placa (UFP), como la pureza en que
 encuentren los bacteriófagos, están directamente relacionadas con el tipo de bacteriófago que se
utilice en la prueba control.
 Entre los métodos que se utilizan para la titulación de partículas virales los más usados son el
Método sobre capa de Agar y el Método del Tubo pero en esta oportunidad utilizamos el primer
método.