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Tinción de Gram

NOMBRES: Valeria Castillo – Paula Molina

CARRERA: Tecnología en Análisis Químico
ASIGNATURA: Microbiología
PROFESOR: Marcos Rojas
FECHA: 05/11
 Introducción

La tinción de Gram es una técnica de laboratorio que permite identificar distintos tipos de bacterias según
se coloree su superficie, aportando información muy útil para orientar el tratamiento antibiótico.

Fue diseñada por Christian Gram, un científico danés, en el año 1884. El objetivo de Gram era conseguir
una prueba con la que fuera posible diferenciar diferentes grupos de bacterias para así poder estudiarlas
y clasificarlas.

La técnica se basa en aplicar colorantes a una muestra que supuestamente tiene bacterias no
identificadas. Los colorantes tiñen la pared de las bacterias de color morado y, tras unos minutos, se
realiza un lavado del colorante. Después de eso puede que el colorante permanezca en la pared
bacteriana o que se haya ido. En el primer caso permanecería el color morado, y se trataría de
bacterias Gram positivas y, en el segundo, la pared tendría un color rosado, y serían Gram negativas.

A continuación se dará a conocer el proceso para realizar la tinción Gram y observar las bacterias por el
microscopio. Los objetivos de este informe son explicar este proceso de tinción de Gram.
 Procedimiento

Antes de empezar con la tinción se toma el portaobjetos y se lleva al mechero, luego se toma la muestra
con el asa de siembra de la placa de Petri elegida (se realiza el procedimiento con 3 muestras), y se
deposita sobre el portaobjetos siempre tomándolo con unas pinzas.

Primero se aplica el tinte de violeta de genciana, también conocido como cristal violeta, al portaobjetos y
se deja reposar un minuto. Este colorante puede atravesar cualquier tipo de pared bacteriana por lo que
tiñe tanto bacterias Gram positivas como Gram negativas.

Luego se enjuaga la muestra con agua y se aplica lugol, de forma que cubra toda la muestra y se espera
durante un minuto. El lugol es un compuesto formado principalmente por yodo que en este caso lo que
hace es fijar el colorante violeta de genciana aún más a la muestra. El yodo del lugol y el violeta de
genciana forman un complejo insoluble en agua capaz de penetrar en la pared de las células bacterianas.
Posteriormente el portaobjetos debe lavarse con una mezcla de alcohol y acetona durante 1 minuto, en
este momento, es cuando finaliza realmente la tinción de Gram, ya que esta mezcla de alcohol y acetona
lo que hace es disolver los complejos de lugol y violeta de genciana.

Y el último paso consiste en someter a las bacterias a una última tinción para teñir aquellas que son gram
negativas de color rosa o rojo. Se hace aplicando durante un minuto el colorante safranina o fucsina y
luego lavamos con agua.

Una vez terminada la tinción se procede a analizar las muestras bajo el microscopio, estas se analizaran
bajo un objetivo de magnificación de 4 a 100 y apertura numérica de 0,10 a 1,25. Se analizan 3 muestras.
 1) Muestra de suelo, correspondiente a bacilos.

Numero de aumento: 4

Numero de aumento: 10

Numero de aumento: 40
Numero de aumento: 100

2) Muestra de basurero

Numero de aumento: 4

Numero de aumento: 10
 Numero de aumento: 40

3) Muestra de pasamanos
Numero de acercamiento: 4

Numero de acercamiento: 10