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IDENTIFICACION CINETICA Y PROPIEDADES DE LA CATALASA

WILMER MORENO, LINA ANDREA GMEZ


*Estudiante de Qumica Universidad Pedaggica y Tecnolgica de Colombia
Escuela de Ciencias Bsicas, Laboratorio de bioqumica I
Docente: Anglica Mara Garca
Practica N12
RESUMEN: Se identific la presencia de la enzima catalasa en tres diferentes alimentos
como los son la papa el tomate y el hgado de res, igualmente se desnaturalizo dicha
enzima, en el hgado se extrajo dicha enzima con ayuda de solucin buffer de fosfato y con
ayuda de la centrifugacin para llevarla a un mtodo de actividad cintica enzimtica
llevando as los anlisis a una graficas propuestas por michaelis menten y adems de
Lineweaver-Burk.
PALABRAS CLAVE: actividad cintica, desnaturalizacin, enzima.
ABSTRACT: The presence of catalase enzyme in three different foods like potatoes are
tomatoes and beef liver was identified, also said enzyme, said enzyme in the liver was
extracted using phosphate buffer solution and using the denatured centrifugation to carry it
to a method of enzyme Kinetic activity thus leading to a graphical analysis proposed by
Michaelis-Menten and Lineweaver-Burk addition.

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1. INTRODUCCIN
cintica enzimtica

Estudia la velocidad de las reacciones


qumicas que
son catalizadas por
las enzimas. El estudio de la cintica y de
la dinmica qumica de una enzima
permite explicar los detalles de su
mecanismo cataltico, su papel en el
metabolismo, cmo es controlada su
actividad en la clula y cmo puede ser
inhibida
su
actividad
por frmacos o venenos o potenciada por
otro tipo de molculas.
Las
enzimas,
en
su
mayora, protenas con la capacidad de
manipular
otras
molculas,
denominadas sustratos. Un sustrato es
capaz de unirse al centro cataltico de la
enzima que lo reconozca y transformarse
en un producto a lo largo de una serie de
pasos
denominados
mecanismo
enzimtico. Algunas enzimas pueden unir
varios sustratos diferentes y/o liberar
diversos productos, como es el caso de
las proteasas al romper una protena en
dos poli pptidos. En otros casos, se
produce la unin simultnea de dos
sustratos, como en el caso de la ADN
polimerasa, que es capaz de incorporar
un nucletido (sustrato 1) a una hebra
de ADN(sustrato 2). Aunque todos estos
mecanismos suelen seguir una compleja
serie de pasos, tambin suelen presentar
una etapa limitante que determina la
velocidad final de toda la reaccin. Esta
etapa limitante puede consistir en una
reaccin qumica o en un cambio
conformacional de la enzima o del
sustrato.
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Los mecanismos enzimticos pueden ser


divididos en mecanismo de nico sustrato
o mecanismo de mltiples sustratos. Los
estudios cinticos llevados a cabo en
enzimas que solo unen un sustrato, como
la triosa fosfato ismeras, pretenden
medir la afinidad con la que se une el
sustrato y la velocidad con la que lo
transforma en producto. Por otro lado, al
estudiar una enzima que une varios
sustratos, como ladihidrofolato redactase,
la cintica enzimtica puede mostrar
tambin el orden en el que se unen los
sustratos y el orden en el que los
productos son liberados1.
Las enzimas son protenas con capacidad
de catalizar reacciones biolgicas. Igual
que los catalizadores inorgnicos,
aumentan la velocidad para alcanzar el
equilibrio de la reaccin. El mecanismo
por el cual las enzimas incrementan la
velocidad de la reaccin es reduciendo la
energa libre de activacin requerida para
la transformar un sustrato al producto
correspondiente, sin afectar la constante
de equilibrio. La actividad de una enzima
se evala en funcin de la velocidad de la
reaccin. La cintica enzimtica estudia
la velocidad de la reaccin, los factores
que la modifican y el mecanismo de la
misma. Los factores fisicoqumicos que
modifican la actividad de la enzima son:
concentracin del sustrato, concentracin
de la enzima, pH, temperatura, fuerza
inica, inhibidores. Leonor Michaelis y
Maud Menten en 1913, propusieron un
modelo clsico para el estudio de la
1 Cintica
enzimticahttp://es.wikipedia.org/wiki/Cin
%C3%A9tica_enzim%C3%A1tica

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cintica enzimtica. Este modelo consiste


en graficar la velocidad de la actividad
enzimtica y la concentracin del
sustrato. Esta representacin grfica
permite determinar la constante de
Michaelis-Menten (KM) al interpolar la
mitad de la velocidad mxima (Vmx).
En esta prctica se emplear la enzima
catalasa para analizar algunos aspectos de
la cintica enzimtica. La catalasa utiliza
una molcula de perxido de hidrgeno
(H2O2) como sustrato donador de
electrones y otra molcula de H2O2 como
oxidante o aceptor de electrones.
Dnde:
A y B = Sustratos
C y D = Productos
v1 = Velocidad de reaccin para formar
productos
v2 = Velocidad de reaccin para formar
reactivos
CATALASA
2 H2O2 2 H2O + O2
La catalasa est contenida en los
peroxisomas de eritrocitos, mdula sea,
mucosas, rin e
hgado. Su funcin es la descomposicin
del H2O2 formado por accin de las
oxidasas2.
2 determinacin de la actividad enzimtica de
peroxidasas
(catalasa)http://www.uaq.mx/investigacion/difusio
n/veranos/memorias2010/12%20Verano
%20Ciencia%20Region%20Centro/UAQ
%20Cedillo%20Jimenez.pdf

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2. RESULTADOS
RESULTADOS

Y ANALISIS DE

DEMOSTRACIN DE LA PRESENCIA DE
LA ENZIMA CATALASA

Tubo con tomate y agua oxigenada: se


observa un desprendimiento de burbujas
suavemente.
Tubo con papa y agua oxigenada: se
observa un desprendimiento de burbujas
fuertemente.
Tubo con hgado y agua oxigenada: se
observa un desprendimiento de burbujas
fuertemente.
Anlisis: se observ que con ayuda del
desprendimiento de esas burbujas la
enzima de catalasa se observ con mayor
presencia en el hgado y que se observa
en menores proporciones en el tomate.
DESNATURALIZACIN
CATALASA

DE

LA

Tubo con hgado y agua destilada: se


observa un desprendimiento de burbujas y
un cambio de color fuertemente.
Tubo con tomate y agua destilada: se
observa la precipitacin del tomate en
forma aguada sin cambiar de color.
Tubo con la papa y agua destilada: se
observa un desprendimiento de burbujas
muy suavemente.

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Anlisis: se observ que con el cambio de


color y la reaccin fuerte del hgado la
enzima catalasa presente en este alimento
se desnaturalizo con mayor fuerza
mientras que en la papa y el tomate no se
alcanz a desnaturalizar completamente.
Actividad y cintica enzimtica

Tubo
KMnO4
utilizado
(mL)
H2O2
No
descompu
esto
en
5
minutos
H2O2
descompu
esto
por 1.0
mL de
enzima en
5
minutos
(moles)
Actividad
especfica
de
la enzima
catalasa

1.8

2.5

2.6

2.8

2.9

5x1
0-4

1x1
0-4

1.5x
10-4

2x10

5x
10-6

3.75
x10-

8.5x
10-5

1.3x
10-4

-4

2.5x1
0-4

2.5x1
0-4

1.75x
10-4

1.75x
10-4

n1=0.1 mol/L x 1.8x10-3 L = 1.8x10-5 mol


4.5x10-5mol (H2O2 )
n2=0.1 mol/L x 2.5x10-3 L = 2.6x10-5 mol
6.25x10-5 mol (H2O2 )
n3=0.1 mol/L x 2.6x10-3 L = 6.5x10-5 mol
4.5x10-5(H2O2 )
n4=0.1 mol/L x2.8 x10-3 L = 2.8x10-5 mol
7x10-5 mol (H2O2)
n5=0.1 mol/L x 3x10-3 L = 3x10-5 mol
7.5x10-5 mol (H2O2)
n6=0.1 mol/L x2.9 x10-3 L = 2.9x10-5 mol
7.25x10-5 mol (H2O2)

Moles de H2O2 que reaccionan

Tabla:
n1 = 0.1 mol/L x 5x10-4 L = 5x10-4 mol
n2 = 0.1mol/L x 1x10-4 L = 1x10-4 mol
n3 = 0.1mol/L x 1.5x10-3L = 1.5x10-4 mol
n4 = 0.1mol/L x 2x10-3L = 2x10-4 mol
n5 = 0.1mol/L x 2.5x10-3L = 2.5x10-4 mol
n6 = 0.1mol/L x 2.5x10-3L = 2.5x10-4 mol

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titulacin KMnO4 0.01 M

5x10-5 - 4.5x10-5 = 5x10-6 moles


1x10-4 6.25x10-5 = 3.75x10-5 moles
1.5x10-4 - 6.5x10-5 = 8.5x10-5 moles
2x10-4 - 7x10-5 = 1.3x10-4 moles
2.5x10-4 - 7.5x10-5 = 1.75x10-4 moles
2.5x10-4 - 7.25x10-5 = 1.75x10-4 moles

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tiempo(m concentracin
in)
(10-4)
0
0,25
0,5
1
1
1,5

1,5

2,5

2,5

2,5

0-4)

0,25
1
1,5
2
2,5
2,6

Grafica del tiempo de reaccin vs


concentracin

0,9286
3,71
5,57
7,42
9,28
9,28

concentracion vs velocidad
1.2

tiempo vs concentracion
3

1
0.8
0.6

f(x) = 0.93x + 0.46

2.5

0.4
0.2

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5

1.5
1
0.5
0
0

0.5

1.5

2.5

Donde observamos que la velocidad


mxima es igual a 9.28.
v =(Vmax )/2

Por medio de la ecuacin de la curva de


calibracin podemos hallar la pendiente la
cual representa la velocidad de reaccin
inicial de la enzima catalasa.

grfica de Michaelis-Menten

concentracin(1 Velocidad
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v =(9.26)/2

v =4.63
Donde extrapolando al eje de las abscisas
nos da el valor de km, el valor de la
constante es igual a 1.20.
-

grfica de Lineweaver-Burk

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1/concentracin(104)

4
1
0,66
0,5
0,4
0,38

1/V
1,07
0,26
0,17
0,13
0,1
0,1

menten debido a sus resultados se


acercan a la linealidad dndonos
mejores valores.
INFOGRAFA
-

Se puede encontrar diferencia entre


los dos graficos debido a q uno es
logartmico y el otro es lineal pero los
datos mas confiables se dan en el
lineal, siendo este el de michaelis
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Cintica enzimtica
http://es.wikipedia.org/wiki/Cin
%C3%A9tica_enzim
%C3%A1tica
determinacin de la actividad
enzimtica de peroxidasas
(catalasa)
http://www.uaq.mx/investigacion/
difusion/veranos/memorias2010/1
2%20Verano%20Ciencia
%20Region%20Centro/UAQ
%20Cedillo%20Jimenez.pdf
cintica enzimtica

http://es.slideshare.net/tmedi
causs/clase-7-cineticaenzimatica

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