MEJORAMIENTO DE MICROORGANISMOS INDUSTRIALES

Optimización del
RENDIMIENTO

medio de cultivo
MEJORA DE

Optimización de las
condiciones de
operación

Mejoramiento
genético de cepas
 PROGRAMA DE
MEJORAMIENTO GENETICO

CONTROLA
PRODUCTIVIDAD
GENOMA
POTENCIAL

MODIFICACION INCREMENTA
GENETICA RENDIMIENTOS
Readaptación del medio de cultivo
Nuevas condiciones de cultivo y
requerimientos.
Mejoras en condiciones de
operación.
Mejoras en procesos extracción y
purificación.
 OBJETIVOS DEL PROGRAMA
DE MEJORAMIENTO GENETICO DE CEPAS

PROPIEDADES DE
INCREMENTOS DE
ECONÓMICO FERMENTACION
PRODUCCIÓN
MEJORADAS

BIOSINTESIS DE
PROCESO
NUEVOS
SIMPLIFICADO DE
METABOLITOS Y/O TECNICA
RECUPERACION DEL
PRODUCTOS NO
PRODUCTO
MICROBIANOS.
CEPAS CEPAS MUTANTES
SILVESTRES
Aisladas directamente de Adaptadas
la naturaleza específicamente a los
Uso: solo en pocos procesos de
procesos industriales de fermentación.
alimentos Uso: Producción de
antibióticos - Enzimas -
otras sustancias.
 1) Selección natural de
variantes

Cepas modificadas
2) Mutación inducida
genéticamente

3) Recombinación
genética
1. SELECCIÓN NATURAL División celular = pequeña probabilidad de que
ocurra un cambio genético

Problemas de rendimiento = variantes

menores niveles de producción que la
población parental
SELECCIÓN NATURAL DE VARIANTES

MUTACIONES ELEMENTO RESPONSABLE DE

LA MUTACIÓN NO CONOCIDO
EXPONTÁNEAS

MUTACIONES FACTOR MUTAGENICO

INDUCIDAS CONOCIDO

Son estables y hereditarias

Frecuencia ESTADISTICAMENTE MEDIBLE

TASA DE MUTACIÓN
SELECCIÓN
NATURAL
• PRACTICA QUE TODAVIA ES UTILIZADA
• Características morfológicas de las
colonias, que se asocian con mayor o
menor productividad, lo que permite
seleccionar los clones deseados.

• Esta práctica involucra una etapa de

crecimiento seguida por ensayos de
evaluación del producto.
SELECCIÓN NATURAL – SCREENING
 MUTACION
INDUCIDA

Tratamiento de
la población El aislamiento
con el de los mutantes
mutágeno
ELECCIÓN DEL
AGENTE
MUTAGENICO

FISICOS QUIMICOS
 AGENTES FISICOS

LUZ UV RAYOS X
(200 A 300
NM)

RAYOS
GAMMA
AGENTES QUIMICOS

Transiciones A-T
Acido nitroso --- G-C y/o
deleciones

N-metil-N'-nitro-
Alto % mutación
N- y bajo %
nitrosoguanidin mortandad.
a (NTG)
 AGENTES QUÍMICOS

Análogos de Estructurales
base.
5-bromuracilo. Proflavina o
2-aminopurina naranja acridina

Transiciones Adiciones o
deleciones
MUTANTES CON NIVELES MEJORADOS DE METABOLITOS PRIMARIOS

• Retroalimentación
MECANISMOS ("feed back).
DE CONTROL • Inhibición
• Represión
  Producto final de una vía metabólica inhibe la
actividad de una enzima (normalmente la primera) de
su vía de formación
 La primera enzima de la vía es de tipo "alostérica“. Es
un control fino y casi instantáneo.

INHIBICIÓN
INHIBICIÓN
REPRESIÓN
 Como se ve, el conocimiento de la vía metabólica y su
control facilita la construcción del mutante deseado.

a) el mutante no
reconoce la presencia del
inhibidoro represor

b) no se produce
producto final, que es el
que controlala enzima
clave de la vía metabólica;

c) el producto final es
eliminado de la célula
debidoa una modificación
en la permeabilidad de la
membranacelular.
EN ESTE CASO LOS MUTANTES SON AUXOTRÓFICOS PARA UNO O MÁS
PRODUCTOS FINALES
 SELECCIÓN DE AUXÓTROFOS

 Separación mecánica de esporos auxótrofos y

prototróficos por "enriquecimiento por filtración".

 Ej: Aspergillus

 Procedimiento:
 Incubación de una suspensión de esporos mutada, en
un medio líquido mínimo
 Los protótrofos desarrollan los auxótrofos no.
 La suspensión se filtra
 Filtrado de auxótrofos
Ejemplo: Gradiente en placa usando estreptomicina en el medio de agar nutritivo. E.coli que
normalmente es sensible a este antibiótico será inhibido. Cualquier colonia que se desarrolle en el
área de concentración alta procederá de una bacteria mutante resistente al antibiótico.
PERMEABILIDAD DE LA FERMENTACIÓN DE ÁCIDO GLUTÁMICO.

Mutante aislado: Corynebacterium glutamicum

Modificación: permeabilidad por el nivel de

biotina.
MUTANTES PRODUCTORES DE ENZIMAS DE
INTERÉS INDUSTRIAL

 Solamente se tendrán en cuenta las enzimas degradativas,

cuya producción puede ser controlada por inducción,
represión "feed back" y/o represión catabólica.
 ¿Cómo funciona?

Caracterización
Screening Fermentación Purificación
estructural.

Aislamiento,
Obtención del
clonación y Caracterización
biocatalizador de Inmovilización
secuenciación del gen funcional
aplicación industrial.
que codifica la enzima

Condiciones óptimas
del biocatalizador
(pH T°, cinética)
 MUTANTES CON PRODUCCIÓN MEJORADA DE
METABOLITOS SECUNDARIOS

Productos de interés industrial

Factores de
Antibióticos Alcaloides crecimiento Toxinas
vegetal

Acido
Penicilina Bacitracina Nistatina Giberelinas Micotoxinas
lisérgico
 RELACION
ENTRE
TROFOFASE
E IDIOFASE
EFECTO DE LOS
PRECURSORES DETERMINADAS MOLÉCULAS
INCREMENTABAN LA PRODUCCIÓN
DE METABOLITOS SECUNDARIOS

PENICILINAS SE AÑADE UN RADICAL

COMO LA D- VALINA Y SE OBTIENE
UNA MAYOR PRODUCCIÓN DE
ACTINOMICINA C1
Mecanismos de control Producción de
metabolitos secundarios
• Naturaleza del sustrato limitante
• Regulación "feed back" (acumulación de
metabolitos secundarios limita su
síntesis)
• "feed back" con PO4 inorgánico (regula
la actividad de fosfatasas)
• Metabolismo rápido de Glucosa y la
fuente de nitrógeno (en especial amonio)
 Un ejemplo es la
producción de
cefalosporinas
por Streptomyces
clavuligerus, la
cual es
suprimida por
amonio
 INICIOS DE MUTANTES EN LA INDUSTRIA
DE ANTIBIOTICOS

 Mutaciones sobre células o esporos mediante

el empleo de agentes físicos y químicos.

 Ejemplo: penicilina

 produce alrededor de 2 miligramos de

penicilina por litro. Gracias a la mutación el
hongo es capaz de producir 60 gramos por
litro en tanques de fermentación hoy en día.
 ESQUEMA DE
MEJORAMIENTO
POR MUTACIÓN Y
SELECCIÓN DE
CEPAS
PRODUCTORAS DE
METABOLITOS DE
INTERES
INDUSTRIAL
  Composición del medio =
capacidad productora.

En algunos casos las condiciones de

limitaciones de nutrientes, que favorecen el
comienzo de la producción de antibióticos en
medio líquido no son alcanzadas en medio
sólido.