Inóculo

CANTIDAD DE
MICROORGANISMOS O CÉLULAS
CAPAZ DE GARANTIZAR LAS
CONDICIONES ECONÓMICAS Y
DE FERMENTACIÓN EN UN
VOLUMEN DADO: EL MOSTO.
Preparación del inóculo

Microorganismos estado de Suspensión de

conservación microorganismos

Metabolitos Viables y
a escala aptos para
industrial reproducirse
Preparación del inóculo

Máximo de viabilidad

Pierdan características
para producir
metabolitos
CRITERIOS PARA LA OBTENCIÓN DE UN BUEN
INOCULO
Condiciones ambientales
El medio ambiente en el que crece el microorganismo
va a determinar su adecuado desarrollo. El pH, la
temperatura y la presencia de oxígeno son los
parámetros ambientales más importantes cuando se
pretende utilizar un microorganismo industrialmente
 INÓCULO

EN LA INDUSTRIA

Estado líquido
(acuosos u oleosos)

Estado sólido
Polvo o granular
 ETAPAS PARA PREPARAR EL
INÓCULO

Reactivación
de la cepa

Crecimiento en medio
sólido

Crecimiento en medio
líquido
 Etapas del desarrollo
del inóculo

1. Reactivación de
la cepa.

2. Crecimiento del 3. Crecimiento del

microorganismo en microorganismo en un
medio sólido olíquido medio de cultivoliquido
 DESARROLLO DE INÓCULO
➢ Cultivo preservado se reactiva en medio líquido o en medio
sólido.
➢ Según el método de preservación se requerirá tiempo para la
recuperación del cultivo.
➢ Sucesivamente se irá incrementando el volumen del
recipiente de cultivo, para conseguir la velocidad de
crecimiento adecuada.
 DESARROLLO DE INÓCULO
➢ Es vital ir incrementando el volumen para que a escala
industrial se alcancen los resultados óptimos.
➢ Si el número de células no es el adecuado, la producción no
será óptima Además, si crece en condiciones diferentes a
como crecerá después (industrialmente), existirá una fase de
latencia en el fermentador, reduciendo larentabilidad.
Recuperación de la cepa

LIOFILIZADO CONGELADO AGAR INCLINADO

Agua destilada baño de agua a Agua destilada

estéril 37°, estéril y raspar la
descongelación superficie con asa
rápida
Recuperación de la cepa

BOTELLA ROUX DESECADO

Agua destilada estéril + Agua destilada estéril

perlas de vidrio estériles
CRECIMIENTO EN UN MEDIO DE CULTIVO SÓLIDO

ASADA

• Muestra suspensión de
microorganismos

ESTRIADO

• Medio de cultivo sólido agar

inclinado

INCUBADO

• Temperatura y tiempo adecuados

CRECIMIENTO EN UN MEDIO DE
CULTIVO LÍQUIDO
ASADA

• Muestra suspensión de
microorganismos(MEDIO SOLIDO)

MEDIO LÍQUIDO

• Matraz erlenmeyer

INCUBADO

• Temperatura y tiempo adecuados

ASPECTOS A CONSIDERAR EN LA
PREPARACIÓN DEL INÓCULO

 CANTIDADDEL INÓCULO
 CONCENTRACIÓN DE
MICROORGANISMOS EN EL INÓCULO
CANTIDAD DEL INÓCULO
 10% DEL VOLÚMEN TOTAL DE TRABAJO
 1000mL = 100 mL de inóculo
 Volumen muy grande preparar por etapas
 A veces se requieren 6 a 7 etapas para lograr el volumen requerido
 Pruebas de pureza
CONCENTRACION DE
MICROORGANISMOS
 Suministra datos
relacionados con la curva
de crecimiento y la cantidad
de microorganismos para
iniciar el proceso.
 Cuando el producto
deseado es la biomasa la
concentración de m.o.
representa la eficiencia del
proceso
 Si el interés son metabolitos,
la concentración de m.o. es
una medida indirecta de su
producción.
Métodos para medir concentración de
microorganismos
Número de células por unidad de
área
Microorganismos unicelulares
(levaduras o bacterias)
Se realiza por conteo
Masa Celular Densidad Celular
Metodología de
Crecimiento micelial espectrofotometría
Masa celular por peso seco Se preparan diluciones y se
Filtrar un volumen determinado del determina por conteo el número
medio con el m.o. de m.o.
Medir absorbancia de cada
dilución
 Características de los
inóculos microbianos
utilizados en
bioprocesos industriales
 CARACTERÍSTICAS DE INOCULO

▪La cepa o cultivo a utilizar debe ser genéticamente estable.

▪La cepa o cultivo debe estar libre de contaminantes.
▪El microorganismo a usar debe ser de fácil conservación sin pérdida de sus características.
▪El inoculo puede ser un consorcio de diversas especies microbianas, como las que se encuentran en lodos
aerobios (aguas residuales).
▪Un inoculo debe tener la capacidad de crecer e invadir rápidamente el sustrato (velocidad de crecimiento
alta).
▪El inoculo implica obtener una suspensión de microorganismos viables y aptos para reproducirse y producir
metabolitos a escala industrial.
▪Siel objetivo es obtener un producto, este debe ser obtenido en altas concentraciones.
 LA CANTIDAD DEL INÓCULO REQUERIDA PARA
ELPROCESO DE FERMENTACIÓN:

la cantidad del inóculo que se

prepara y se agrega, en la
mayoría de los casos, es el
10% del volumen total del
trabajo en hongos y 1% en
bacterias
Tipos de
inóculos
 Laboratorio
(para
investigación
temprana de la
escalaindustrial)
 Producción
industrial
IMPORTANCIA DEL DESARROLLO
DE INÓCULOS
IMPORTANCIA DEL DESARROLLO DE
INÓCULOS
➢Para la elaboración de procesos
fermentativos .
➢En la industria de los alimentos,
panadería, lácteos y otros.
➢Para la optimización de los resultados en
los procesos biotecnológicos.
➢En la Comercialización como cultivos
liofilizados.
➢Desarrollo de inóculos microbianos
empleando lodos activados para la remoción
de acido sulfhídrico (H2S) mediante
biofiltración

➢Desarrollo de inóculos para la determinación

de la DBO:

➢Desarrollo de inóculos de microorganismos

lácticos y levaduras para la nutrición y
alimentación animal
 DESARROLLO DE
INÓCULO DE A. niger
PARA LAPRODUCCIÓN
DE ÁCIDO CÍTRICO
Fuente de inóculo:
• La conservación de esporas de Aspergillus niger se
lleva a cabo mediante:
-Congelación (-18°C ó -196°C en Nitrog.
líquido),
- Secado en suelo estéril o
- Liofilización.

Estas técnicas de conservación, se usan con éxito

para pequeñas cantidades de esporas, pero el
elevado costo del equipo y funcionamiento, las
hacen de uso limitado para escalas mayores.
Método de conservación con aceite
mineral
• Método usado cuando la criopreservación y la
liofilización no resultan económicas.

• Consiste en recubrir con aceite mineral estéril un

cultivo que se encuentre en condiciones optimas
de crecimiento, generalmente de usa aceite
mineral de alta calidad de grado medicinal.
Desarrollo del inóculo:
A) ACTIVACIÓN DELINÓCULO:

Se usa de preferencia caldo de papa dextrosa (PD),

sembrando una cantidad de microorganismo
liofilizado en 50 ml de PD (5 días a 30°C ) en un
shaker orbital con 150 rpm.

Después de activada la cepa, se siembra

nuevamente el microorganismo en medio sólido
(PDA), manteniéndolo a 30°C por 5 días hasta que
se formen las esporas.
Al cabo del tiempo de incubación y
habiendo esporulado el
microorganismo, se guarda para su
conservación a 4 ºC.

De las cajas de Petri refrigeradas se

preparan suspensiones de esporas con
una concentración aproximada de 2 x
107 esporas/mL con el fin de favorecer
la formación de pellets.
Conservación del cultivo
Activación del inóculo
Preparación del inóculo.

Conservación

Microorganismos
viables
Métodos de conservación.

Resiembra:
 La
Desecación

 Consiste en remover el agua celular e impedir la rehidratación de las células de los

microorganismos.
 La congelación:

• Temperaturas entre -5 y -20 ºC.

Ordinaria

• Temperaturas entre -50 y -80 ºC.

Ultrafría

Nitrógeno
• Temperaturas entre -150 y -196 ºC.
líquido
 La liofilización

Esla remoción de agua de células congeladas

a presión reducida (sublimación).
Fase de laboratório Fase industrial

Fases de produccion deinóculo.

DESARROLLO DE INÓCULO
Actividad de refuerzo

 https://www.youtube.com/watch?v=5eKdZ0dVCCo