Tecnologías avanzadas de detección de compuestos fenólicos para el análisis

farmacéutico y biomédico
Abstracto
Los compuestos fenólicos son productos naturales bioactivos de considerable interés en
productos farmacéuticos y biomédicamente. Debido a sus funciones bioactivos,
compuestos fenólicos han recibido cada vez más atención en los últimos años. Por lo tanto,
es necesario desarrollar métodos analíticos nuevos y avanzados para la determinación de
compuestos fenólicos en relación con aplicaciones farmacéuticas y biomédicas. Sin
embargo, en su mayoría, su detección ha sido llevada a cabo en gran medida por
instrumentos de laboratorio sensible pero voluminoso y costoso, como la cromatografía de
gases, espectrometría de masas y la cromatografía líquida-espectrometría de masas. En
comparación con esos instrumentos a escala de laboratorio, las tecnologías de sensibilidad
avanzada son extremadamente atractivas debido a las ventajas de su bajo costo, ahorro de
tiempo, fácil de usar, pretratamiento de muestras simplificado, alta sensibilidad y
excelente selectividad. El objetivo de esta revisión es proporcionar información crítica
sobre las tecnologías avanzadas de detección para la detección de compuestos fenólicos,
con énfasis en sensores ópticos, sensores electroquímicos y biosensores. Además, se
describen la situación actual, las cuestiones críticas y las tendencias futuras de las
tecnologías de sensaje relacionadas.

1. Introducción
Compuestos fenólicos, ubicuos en las plantas, se encuentran entre los fitoquímicos más
deseables con propiedades funcionales y de promoción de la salud bien conocidas [[1], [2],
[3]]. Los compuestos fenólicos se han considerado principalmente como metabolitos
vegetales secundarios con varios miles de compuestos identificados a partir de plantas [[4],
[5], [6], [7]]. Sin duda, los compuestos fenólicos proporcionan valores adicionales y fuentes
potenciales en productos farmacéuticos y biomedicamentos, debido a su alta capacidad
antioxidante, así como a las propiedades anticancerígenas, antimicrobianas, antivirales y
antiinflamatorias [[9], [10], [11], [12], [13]]. De las últimas décadas, los estudios de
investigación centrados en compuestos fenólicos para aplicaciones farmacéuticas y
biomédicas han aumentado considerablemente, debido a sus diversos efectos beneficiosos
para la salud humana [14,15]. Además, algunos medicamentos esenciales con grupos
fenólicos, como el paracetamol (acetaminofeno) y la doxiciclina, están incluidos en la lista
modelo de la Organización Mundial de la Salud (OMS) y se utilizan comúnmente como
medicamentos antipiréticos y analgésicos [16]. Además, algunos pequeños compuestos
fenólicos moleculares (por ejemplo, timol) se han utilizado en biomedicamentos como
antiséptico debido a la toxicidad [6].
Básicamente, los compuestos fenólicos contienen un anillo aromático que lleva uno o más
grupos hidroxilo y sus estructuras podrían variar desde la de una molécula fenólica simple
hasta la de un compuesto altamente polimerizado [8]. Según su cadena de carbono, los
compuestos fenólicos se pueden dividir en diferentes clases, principalmente incluyendo
fenoles simples, ácidos fenólicos, flavonoides, lignanos, biflavonoides, taninos
(hidrolizables y condensados), estilbenos y lignanos [6,17]. Las propiedades farmacéuticas,
como la actividad antioxidante de los compuestos fenólicos, dependen en gran medida de
sus estructuras químicas [7]. El número de carbonos, esqueletos básicos y estructuras
químicas de los principales compuestos fenólicos se muestra en la Tabla 1.

Tabla 1. Diferentes clases de compuestos fenólicos basados en su cadena de carbono

benzoquinonas7C6 - C1 ácidos fenólicos8C6- C2 ácidos sifenoles fenilacetivos9C6-C3

hidroxi ácidos cinnámicos fenilpropenes cumarinas isocoumarinas
Debido a los conocidos beneficios para la salud, el papel tecnológico y la comercialización
de compuestos fenólicos, existe una demanda creciente de métodos analíticos altamente
sensibles y selectivos para la determinación de esos compuestos [ [18] , [19] , [20] ]. Las
técnicas cromatográficas, que incluyen la cromatografía de gases (GC), la cromatografía
líquida (LC) y la electroforesis capilar (CE) son los métodos más comunes para la
determinación de compuestos fenólicos, que son capaces de identificar y cuantificar una
amplia variedad de compuestos fenólicos de diferentes grupos. en niveles de traza con gran
precisión [ [21] , [22] , [23] , [24]] En combinación con la detección de espectrometría de
masas (EM) altamente sensible y selectiva, las técnicas cromatográficas podrían
proporcionar la separación, identificación y cuantificación simultáneas de diferentes
compuestos fenólicos de materiales derivados de plantas, incluyendo hierbas, frutas,
verduras, vinos, bebidas, cereales y cultivos [ [ 25] , [26] , [27] , [28] ]. Aunque precisas y
sensibles, las técnicas cromatográficas generalmente requieren instrumentación
voluminosa y costosa, preparación de muestras intensiva en mano de obra y operadores
especializados.
En las últimas décadas, ha habido una tendencia a desarrollar nuevas tecnologías de
detección para simplificar la preparación de muestras y proporcionar una mayor
rentabilidad, análisis fáciles de usar y más rápidos [ 29 , 30 ]. Además de evitar el tedioso
paso de pretratamiento, los sensores son una alternativa poderosa a las técnicas analíticas
convencionales, por su especificación particularmente alta, sensibilidad, tamaño pequeño y
alto rendimiento de muestra [ [31] , [32] , [33] , [34 ] ]. Las propiedades inherentes de los
sensores llevaron a una cuantificación conveniente de sustratos fenólicos en muestras
farmacéuticas y biomédicas relevantes [ [35] , [36] , [37] , [38], [39] ].
De acuerdo con los principios de interacción con los analitos por químicos o biomoléculas,
los sensores pueden clasificarse como sensores químicos, que incluyen principalmente
sensores ópticos y sensores electroquímicos, y biosensores [ [40] , [41] , [42] ]. En las
siguientes secciones, se discutirán los últimos resultados de investigación y las propiedades
sobresalientes de diferentes sistemas de sensores aplicados para la detección de
compuestos fenólicos. En consecuencia, se describirán varias propiedades sobresalientes
de los sensores, las oportunidades de investigación y el potencial de desarrollo y las
perspectivas para el análisis farmacéutico y biomédico.

2 . Sensores químicos
Un sensor químico es un dispositivo que convierte una propiedad química o física de un
analito específico en una señal medible, en la cual la magnitud está en relación con la
concentración del analito [ 43 , 44 ]. En comparación con los biosensores, los sensores
químicos son menos informados para detectar compuestos fenólicos, lo que se debe
principalmente a su baja sensibilidad y selectividad. Para superar estas deficiencias, se han
aplicado nuevos materiales, especialmente nanomateriales para amplificar la señal en
sensores químicos. De hecho, la aparición de la nanotecnología está abriendo nuevos
campos para la fabricación de nuevos sensores basados en diferentes nanomateriales, que
incluyen carbono, metal, puntos cuánticos y dichoslcogenuros de metales de transición en
la tecnología de detección

Según los diferentes principios de transducción, los sensores químicos se pueden clasificar
principalmente en dos clases principales: sensores con transductores ópticos ( es decir,
sensores ópticos) y sensores con transductores eléctricos ( es decir, sensores
electroquímicos) [ [40] , [41] , [42] , 45 ] Los nanomateriales se han utilizado ampliamente
para la detección óptica y electroquímica y han mostrado resultados atractivos, debido a
sus ventajas únicas, como buenas propiedades ópticas, electrónicas y mecánicas, superficie
específica mucho más alta y versatilidad en la modificación de la superficie [ [46] , [47] ,
[48] , [49]] Pelle y Compagnone revisaron el ensamblaje de nanopartículas en dispositivos
de detección funcionales para la detección de compuestos fenólicos y la capacidad
antioxidante relacionada en los alimentos con un enfoque en estrategias ópticas y
electroquímicas [ 31 ].
2.1 . Sensor óptico
Los sensores ópticos se han desarrollado como potentes dispositivos analíticos portátiles
con altas especificaciones, sensibilidad y rentabilidad para la determinación de
compuestos fenólicos [ [50] , [51] , [52] , [53] , [54] ]. Los principios de los sensores ópticos
se basan en una medición de la cantidad física en las variaciones de luz en la absorción, la
reflexión del flujo de luz primario o la luminiscencia (incluida la fluorescencia) [ 50 , 51 , 55
]. Los dispositivos de detección óptica pueden clasificarse por sus principios de detección
( p . Ej.interferometría, reflectancia, quimioluminiscencia, dispersión de luz e índice de
refracción, y espectroscopía de fluorescencia). McDonagh y col. revisó exhaustivamente los
desarrollos, los principios básicos, las plataformas de detección comunes y las tendencias
futuras de los sensores químicos ópticos [ 56 ]. Rodionov y col. revisó los trabajos
publicados de sensores ópticos en 1993–2012 para determinar compuestos fenólicos con
diferentes estructuras químicas [ 50 ].
2.1.1 . Detección óptica
Los métodos de detección óptica se han utilizado ampliamente para el análisis fenólico
cuantitativo, debido a la ubicuidad de la instrumentación óptica en el laboratorio [ 52 ,
57 ]. Entre ellos, los ensayos colorimétricos se han aplicado como métodos inespecíficos
para evaluar los niveles de compuestos fenólicos en diferentes muestras [ 52 , 58 , 59 ].
Típicamente, se han desarrollado varios métodos colorimétricos para la cuantificación de
compuestos fenólicos [ [60] , [61] , [62] , [63] ]. Sobre la base de diferentes principios, esos
ensayos se han utilizado para determinar diferentes grupos estructurales presentes en los
compuestos fenólicos [ 64 ]. Entre ellos, el ensayo Folin-Ciocalteu se ha utilizado
ampliamente para determinar compuestos fenólicos totales, basado en la reducción del
complejo de fósforo-wolframato-fosfomolibdato por compuestos fenólicos a un producto
de reacción azul [ 57 , 65 , 66 ]. El ensayo Folin-Ciocalteu se ha aplicado con éxito para la
determinación de compuestos fenólicos en hierbas, tés y café [[67] , [68] , [69] , [70] ].
Además, la cuantificación de los compuestos fenólicos totales también se puede lograr
mediante métodos espectrofotométricos con 4-aminoantipirina o ferricianuro / azul de
Prusia [ 60 , 62 , [61] , [62] , [63] ]. Además, se ha aplicado un método colorimétrico
basado en la complejación de los compuestos fenólicos con aluminio para determinar el
contenido total de flavonoides [ 71 ]. Sin embargo, la principal desventaja de los ensayos
colorimétricos es que solo pueden estimar el contenido fenólico total sin una medición
cuantitativa de los compuestos individuales.
Los métodos espectrofotométricos ultravioleta-visibles (UV-vis) permiten distinguir las
diferentes clases de compuestos fenólicos ( p . Ej. , Monofenoles, flavonoides, antocianinas
y ácidos hidroxicinámicos) con sus espectros de UV-vis característicos [ 72 , 73 ].
Aleixandre-Tudo y col. publicó revisiones relevantes de los principales métodos utilizados
en la caracterización y cuantificación de compuestos fenólicos por métodos
espectrofotométricos UV-vis [ 74 , 75] Los métodos espectrofotométricos proporcionan
información cualitativa y cuantitativa muy útil. De hecho, la espectrofotometría es la
técnica principal utilizada para la cuantificación de diferentes clases de polifenoles debido
a su simplicidad y bajo costo. Sin embargo, los métodos espectrofotométricos solos no
pueden diferenciar varios compuestos fenólicos individuales. Para superar este problema,
las estrategias basadas en el acoplamiento de la detección espectrofotométrica UV-vis con
separación LC o CE permiten el análisis de diferentes compuestos fenólicos
simultáneamente [ 76 , 77 ].

2.1.2 . Sensores ópticos

Aprovechando la capacidad de las detecciones ópticas, se han desarrollado una variedad de
sensores ópticos para la detección de compuestos fenólicos. Por ejemplo, el contenido total
de polifenoles en las bebidas de té verde se determinó mediante un sensor óptico, basado
en metaperiodato de sodio (NaIO 4 ) junto con 3-metil-2-benzotiazolinona hidrazona
(MBTH) como agente colorante [ 78 ].
Sin embargo, la sensibilidad y la selectividad de los sensores ópticos no siempre son
suficientes para resolver múltiples desafíos de aplicaciones reales. Recientemente, los
enfoques basados en nanomateriales se han convertido en una estrategia valiosa para
desarrollar tecnologías de detección novedosas y mejoradas para la detección de
compuestos fenólicos [ 31 , 46 , 49 , 52 , 53 ]. Vilela y col. revisó la aplicación de
nanopartículas como herramientas analíticas para la evaluación in vitro de la capacidad
antioxidante con enfoque en la detección de nanopartículas ópticas para alimentos y
muestras biológicas [ 79 ].
Para demostrar que los polifenoles endógenos en muestras reales conducen selectivamente
el proceso de formación de nanopartículas de oro (AuNP), Vilela et al. exploraron muestras
representativas de alimentos ( p . ej. , mieles, frutas, vino, té y extractos de soja) con
diferentes polifenoles endógenos cualitativos y cuantitativos como fuentes naturales de
compuestos reductores [ 80 ]. Los resultados obtenidos mostraron que los AuNP formados
a partir de muestras de alimentos seleccionados proporcionaron excelentes curvas
sigmoidales en línea con su capacidad antioxidante. Aunque los polifenoles son solo un
componente menor de las muestras de miel, el color rojo (indicativo de AuNP) se
intensificó cuanto mayor era el contenido de polifenoles en la miel, como se muestra en la
Fig. 1A. Los espectros superpuestos obtenidos de diferentes muestras de miel mostraron
una absorción máxima bien definida a λ = 540 nm ( Fig. 1 B). Además, la caracterización de
la microscopía electrónica de transmisión (TEM) permitió confirmar que las mieles
proporcionaron nanoesferas de oro con una forma excelente y tamaños muy bien definidos
con un diámetro de 13 ± 5 nm.

Fig.1 . (A) Formación y caracterización de AuNP utilizando polifenoles endógenos de

muestras de miel: soluciones coloidales AuNP formadas por 10 mieles diferentes (1-10),
solución en blanco (control C) y glucosa de mezcla: fructosa 60:40 w / w (control S) . (B)
Espectros de AuNP formados por mieles 1, 3, 5, 8 y 10 y caracterización TEM de AuNP
(recuadro). {Reimpreso con permiso de

Además, los puntos cuánticos (QD) de CdTe se han aplicado con éxito al ensayo
fluorescente de compuestos fenólicos totales en bebidas comunes, como té verde, té negro,
té Pu-Erh, bálsamo de limón, menta, lima, manzanilla e infusiones de café [ 81 ]. Se
informó que esta técnica podría lograr casi un orden de magnitud más sensible que el
ensayo Folin-Ciocalteu.
2.2 . Sensor electroquímico
Los sensores electroquímicos ofrecen propiedades únicas como herramientas confiables
para el análisis rápido y de bajo costo de compuestos fenólicos [ 82 , 83 ]. Debido a las
propiedades únicas, que incluyen una respuesta rápida, fácil de usar, alta sensibilidad,
bajos costos instrumentales, volúmenes de muestra mínimos y portabilidad, los sensores
electroquímicos han atraído una atención creciente en el campo de la química analítica
[ 82 , 84 ]. En la literatura, numerosos artículos de investigación se han dedicado al
desarrollo y la aplicación de sensores electroquímicos para el análisis farmacéutico y
biomédico [ 85 , 86] En las últimas décadas, se ha logrado un progreso considerable en la
química electroanalítica con el desarrollo de ultra-microelectrodos, electrodos económicos
y desechables, dispositivos moleculares y sensores electroquímicos inteligentes.
Dependiendo de sus principios de funcionamiento, los sensores electroquímicos se pueden
dividir principalmente en sensores conductométricos, potenciométricos y
voltamperométricos / amperométricos [ [87] , [88] , [89] ]. Dobes y col. revisó los métodos
electroquímicos como una herramienta para determinar compuestos fenólicos en plantas
[ 82 ].
2.2.1 . Mecanismo de oxidación de compuestos fenólicos.
Con base en la estructura química, podríamos ver que el fenol puede oxidarse a radical
fenoxi con un solo electrón y un paso de protón, que es termodinámicamente inestable y
coexiste en tres formas isoméricas. La oxidación de los monofenoles es siempre irreversible
en todo el rango de pH [ [90] , [91] , [92] ]. Debido a su alta sensibilidad, los métodos
voltamétricos se han utilizado con éxito para estudiar el comportamiento redox de los
compuestos fenólicos. Los perfiles voltamétricos típicos de pulso cíclico y diferencial (DP)
del monofenol se muestran en la figura 2 .

Fig.2 . (UNA). Voltammogramas cíclicos (CV) con la línea de base restada en pH 7.0 0.1 M
buffer fosfato 30 μM fenol: (-) primer escaneo y (⋯) segundo escaneo, ν = 50 mV s −1 .
(SI). Voltammogramas DP de (-) electrolito de soporte pH 7.0 0.2 m buffer de fosfato y
fenol 25 μM: (-) primer y (-) segundo escaneo, y voltammogramas DP corregidos en la
línea base, (⋯) primero y (⋯) segundo escaneo. {Reimpreso con permiso de [ 90 ]}.
Como se muestra en la Fig. 2 , el fenol sufre oxidación en un solo paso, pico 1 a , que
siempre es irreversible. Si bien, los dos productos de oxidación de fenol, orto -quinone y
para -quinone se oxidan de forma reversible en un mecanismo dependiente de pH. El
comportamiento redox del fenol indicó que los sensores voltamperométricos /
amperométricos podrían usarse para detectar los compuestos fenólicos.
Los potenciales de oxidación de diferentes compuestos fenólicos se han determinado por
voltametría cíclica (CV) [ [92] , [93] , [94] , [95] ]. Los mecanismos de oxidación de los
polifenoles son a menudo mucho más complicados que los monofenoles simples [ 96 ].
Pero todos los compuestos fenólicos tienen el potencial de sufrir reacciones redox, que
proporcionaron información valiosa para las detecciones electroquímicas. Además, los CV
también proporcionan información valiosa sobre la cantidad de grupos principales de
fenólicos, como catequinas, galatos, antocianinas y monofenólicos en mezclas complejas
[ 97 ].
2.2.2 . Sensores electroquímicos
Como se mencionó anteriormente, el comportamiento redox de los compuestos fenólicos
indicó que los sensores voltamperométricos / amperométricos podrían usarse para
detectar los compuestos fenólicos. Hasta ahora, las técnicas voltamétricas son los métodos
electroquímicos más utilizados para el análisis de compuestos fenólicos [ [98] , [99] , [100]
]. Debido a su alta sensibilidad, los métodos voltamétricos, como CV, voltamperometría de
pulso diferencial (DPV), voltamperometría de onda cuadrada (SWV) y voltametría de
separación por adsorción (ASV) se han aplicado con éxito tanto para el análisis cualitativo
como para la cuantificación de compuestos fenólicos, incluso en pequeñas cantidades [ 99 ,
[101] , [102] , [103]] Como las propiedades antioxidantes de los compuestos fenólicos están
relacionadas con su capacidad para donar electrones, los métodos voltamperométricos
permiten el estudio de las propiedades antioxidantes, y la detección de polifenoles podría
lograrse a bajos potenciales [ 98 , 104 , 105 ].
Vishnu y Kumar desarrollaron un nuevo sensor electroquímico al introducir un grafito de
lápiz de grado 6B de costo ultra bajo (6B-PGE *) para la detección de fenoles (meta-cresol
y fenol) en formulaciones de insulina [ 36 ]. Como se muestra en la Fig. 3 A-D, 6B-PGE *
fue preparado por polarización potenciostática del grafito lápiz (PGE) a un potencial
aplicado de 2 V vs . Ag / AgCl durante 180 s en solución tampón de fosfato de pH 7 (PBS).
Con el novedoso sensor electroquímico, se logró una detección eficaz de DPV del contenido
total de fenol (meta-cresol y fenol) para tres inyecciones de insulina disponibles
comercialmente ( Fig. 3 E-G). Los valores del contenido fenólico total detectado coincidían
estrechamente con los valores etiquetados respectivos de las muestras reales.
Fig.3 . (A) Fotografía de un grafito de lápiz 6B (PGE); (B) esquema de un 6B-PGE
preparado usando parafilm envolviendo en la porción de superficie cilíndrica del grafito de
lápiz; (C) un 2 V-180 s / pH 7 PBS preanodizado 6B-PGE (6B-PGE *); (D) esquema
selectivo fenol oxidación reacción en 6B-PGE * a 0,55 V vs . Ag / AgCl en pH 7 PBS; y (E –
G) Respuestas típicas de DPV de 6B-PGE * para la detección del contenido fenólico total
(meta-cresol y fenol) en tres muestras diferentes de insulina farmacéutica real (A – C)
mediante un enfoque de adición estándar. {Reimpreso con permiso de [ 36 ]}.
Entre los muchos sistemas electroquímicos que se pueden aplicar con fines analíticos, la
combinación de detección voltamétrica con electrodos serigrafiados (SPE) puede agregar
capacidades de producción en masa y, por lo tanto, representa una de las alternativas más
convenientes para el análisis de compuestos fenólicos [ [106] , [107] , [108] ]. Como la
mayoría de los sensores electroquímicos, los sensores electroquímicos impresos en
pantalla desechables generalmente consisten en un electrodo de trabajo, un
contraelectrodo y un electrodo de referencia en una sola plataforma, que puede producir
una señal distinguible bajo medición.
Es importante señalar que hubo algunos métodos electroquímicos desarrollados para la
determinación de compuestos fenólicos en muestras reales [ [109] , [110] , [111] ]. Kang y
col. desarrolló un método electroquímico para la determinación de la rutina en tres
muestras de medicina china con un electrodo de carbono vidrioso [ 109 ]. Franzoi y col.
desarrolló un electrodo de pasta de carbono modificado con poli (vinilpirrolidona) para la
determinación de rutina en formulaciones farmacéuticas [ 110 ]. Sochr y col. desarrolló un
método electroquímico para la determinación de adrenalina en orina humana con un
electrodo de película de diamante dopado con boro sin modificar [ 111 ].
Sin embargo, es un gran desafío detectar simultáneamente compuestos fenólicos con
estructuras similares en los electrodos no modificados o desnudos, porque sus potenciales
redox están demasiado cerca uno del otro y se superponen seriamente en muchos casos
[ 112 , 113 ]. Por lo tanto, es de gran importancia encontrar materiales apropiados y
eficientes para modificar el electrodo para superar este problema.
Con mucho, se han dedicado grandes esfuerzos al desarrollo de electrodos modificados con
materiales funcionales para lograr una detección más sensible y selectiva de compuestos
fenólicos. Los diferentes materiales funcionales con propiedades electrocatalíticas, como el
grafeno [ 114 ], el negro de humo [ 107 ], el oro nanoporoso [ 115 ], las nanohojas de ZnO
[ 116 ], la película delgada de ZnO [ 117 ] y el compuesto reducido de óxido de grafeno-ZnO
[ 118 ] tienen se aplicó para modificar electrodos, lo que mostró resultados prometedores
para la detección rápida de compuestos fenólicos. Además, las estrategias de chips
microfluídicos junto con la detección electroquímica se han evaluado e integrado para la
determinación de antioxidantes naturales complejos [ 119]
3 . Biosensores
Un desafío principal para todos los sensores químicos, incluidos los sensores ópticos y
electroquímicos, es la interferencia de una matriz de muestra compleja. En los últimos
años, los biosensores han despertado un gran interés por su aplicación en la industria
alimentaria y farmacéutica [ [120] , [121] , [122] , [123] ]. De hecho, los biosensores pueden
crear sistemas de detección ideales para detectar y detectar eficientemente compuestos
fenólicos, debido a su base de componentes biológicos, capacidad para operar en matrices
complejas, tiempo de respuesta corto y tamaño miniaturizado [ 32 , 33 , 124 ]. Por lo tanto,
los biosensores han demostrado ser herramientas muy útiles para el análisis de
compuestos fenólicos [[125] , [126] , [127] , [128] ].
Por definición, un biosensor es un dispositivo analítico que consta de al menos un
componente biológico ( p . Ej. , Enzima, anticuerpo, ADN, célula, membrana artificial y
tejido animal completo) y un transductor físico ( p . Ej. , Dispositivo óptico o
electroquímico) [ 129 , 130 ] Se han informado muchos biosensores para la detección de
compuestos fenólicos basados en una serie de componentes biológicos, que incluyen
enzimas, microorganismos, anticuerpos, antígenos y ácidos nucleicos [ 32 , 33 , 124 , 131]
La inmovilización de componentes biológicos en el biosensor puede cambiar las
propiedades ópticas, electroquímicas o estructurales de la capa para la medición de
analitos, lo que puede proporcionar una medición más específica y sensible [ 130 , 132 ].
Karim y Fakhruddin resumieron los posibles biosensores para la detección de compuestos
fenólicos en muestras ambientales y presentaron aspectos prospectivos considerables de
este campo de investigación [ 32 ].
Entre los diferentes biosensores, los biosensores basados en enzimas se han aplicado más
ampliamente para la determinación de compuestos fenólicos en el análisis farmacéutico,
biomédico, clínico, ambiental e industrial. Básicamente, las enzimas se han considerado
versátiles, altamente eficientes y específicas para catalizar reacciones en condiciones leves [
133 ]. Se han realizado algunas investigaciones de biosensores sobre la detección de
compuestos fenólicos basados en enzimas puras o extractos crudos como fuentes de
enzimas, como lacasa [ 33 , 126 , 128 , 134 ], tirosinasa [ [135] , [136] , [137] , [138] , [139] ,
[140] ], peroxidasa de rábano picante [ 141 , 142 ] y polifenol oxidasa [ 143 ].
Además, los microorganismos también se utilizaron ampliamente para la construcción de
biosensores para detectar compuestos fenólicos. Los microorganismos utilizados
comúnmente incluyen Pseudomonas [ [144] , [145] , [146] , [147] ], Escherichia [ [148] ,
[149] , [150] , [151] ], Arthrobacter [ 152 , 153 ], Lactobacillus [ 154 ], Moraxella [ 155 ],
Rhodococcus [ 156 ] y Trichosporon[ 157 ]
3.1 . Métodos de inmovilización
Los biosensores normalmente pueden funcionar bastante bien cuando el biorreceptor está
inmovilizado adecuadamente [ 32 , 33 , 124] Sin embargo, la inmovilización de
biorreceptores en diferentes portadores es un gran desafío en biotecnología. La selección
del método de inmovilización de los biorreceptores, por lo tanto, es un paso crítico para la
fabricación de biosensores. El objetivo principal de la inmovilización es obtener
biorreceptores con excelente estabilidad a largo plazo y alta actividad. Se deben tener en
cuenta los diversos criterios principales para las técnicas de inmovilización, que incluyen
principalmente el tipo de transductor utilizado, las propiedades fisicoquímicas del analito y
las condiciones de funcionamiento. En general, se ha encontrado que algunos métodos
comunes de inmovilización se usan como unión covalente, adsorción, reticulación,
encapsulación y atrapamiento ( Fig. 4 ).

Fig.4 . Métodos comunes de inmovilización utilizados en biosensores: (A) unión covalente;

(B) adsorción; (C) reticulación; (D) encapsulación; y, (E) atrapamiento. {Reimpreso con
permiso de [ 33 ]}.
Además, también es fundamental encontrar materiales adecuados como matrices de
inmovilización eficaces para diseñar biosensores fenólicos con un excelente rendimiento
analítico. Las matrices comunes utilizadas para la inmovilización incluyeron
principalmente gel de sílice, quitosano, alcohol polivinílico, complejo de osmio y silicato de
nafión / sol-gel [ 32 , 33 , 124 ]. También se ha informado que la formación de conjuntos de
nanomateriales y biomoléculas podría proporcionar una buena biocompatibilidad y mejora
de la señal para la detección [ 31 , 37 , 41 , 46 , 135 , 137 , 139 , 142] Al igual que los sensores
químicos, los biosensores también podrían integrarse con diferentes técnicas de detección,
como las técnicas ópticas y electroquímicas.
3.2 . Biosensores ópticos
Los biosensores ópticos normalmente emplean un reactivo de color, que puede interactuar
con los productos de oxidación y / o radicales libres de fenoles producidos por los
biorreceptores ( por ejemplo, enzimas) para formar productos ópticamente detectables [ 51
, 126 , 138 ]. Por lo tanto, las enzimas se inmovilizan comúnmente en combinación con un
reactivo de color para una detección óptica de compuestos fenólicos. La matriz para la
inmovilización enzimática para la mayoría de las detecciones ópticas debe ser transparente
en las regiones UV y visibles, así como inerte y biocompatible [ 51] En particular, los
biosensores ópticos pueden intermediar con diferentes compuestos fenólicos para que
aparezcan propiedades espectroscópicas / de color que pueden detectarse con un
espectrómetro portátil simple o incluso distinguirse a simple vista.
Setti y col. estudió la capacidad de la lacasa para oxidar metoxifenoles en presencia de 3-
metil-2 benzotiazolinonahidrazona (MBTH) para producir compuestos azo-colorantes de
color rojo [ 158 ]. Sobre la base de este principio, se podría desarrollar un biosensor óptico
para la detección de diferentes compuestos fenólicos, como el catecol, el guaiacol, el
ortocresol y el metacresol [ 159 ].
Huang y col. diseñó y fabricó un biosensor de fibra óptica basado en catálisis de lacasa
inmovilizada y enfriamiento de fluorescencia para la determinación de adrenalina [ 160 ].
La lacasa se inmovilizó en el compuesto de nanopartículas CuTAPc-Fe3O4 para catalizar la
oxidación de adrenalina, y se detectó el consumo de oxígeno con la membrana fluorescente
sensora de oxígeno. Sanz y col. optimizó la reacción enzimática de lacasa con fenol por
fluorescencia y absorción molecular utilizando un biosensores ópticos basados en lacasa-
poliacrilamida [ 161 ]. El método desarrollado permitió la determinación efectiva de fenol
en muestras ambientales.
Sin embargo, todavía es un desafío aplicar los biosensores ópticos para la determinación de
compuestos fenólicos en muestras biológicas reales. Por lo tanto, los biosensores ópticos se
acoplaron a la separación cromatográfica para seleccionar los compuestos fenólicos en
muestras clínicas ( es decir , plasma y orina) [ 162 , 163 ].
Silva y col. desarrolló un biosensor óptico para la detección de tres catecolaminas basado
en un revestimiento sensible de lacasa [ 162 ]. Como se muestra en la Fig. 5 , el biosensor
óptico estaba compuesto por una columna miniaturizada para la separación de
catecolaminas, un revestimiento enzimático biocomponente de lacasa y una fibra óptica
con componentes electrónicos asociados. El biosensor óptico se aplicó con éxito al análisis
de orina y plasma humanos.
Fig.5 . (a) Configuración esquemática de todo el sistema de detección del biosensor óptico
(AT - tubo analítico; GT - tubo de vidrio; IC - celda de inyección; L - láser; OC - acoplador
óptico; OF - fibra óptica; P - fotodetector; PC - computadora portátil para adquisición y
procesamiento de datos; PS / DVB F - fibra de estireno / divinilbenceno) y (b) esquemas de
la reacción enzimática que ocurre en la superficie OF recubierta con lacasa. {Reimpreso
con permiso de [ 162 ]}.
Ferreira y col. También combinó la técnica de HPLC con una fibra óptica recubierta con
una enzima (lacasa) como sistema de detección para la cuantificación de las tres
catecolaminas en muestras de plasma y orina [ 163 ].
3.3 . Biosensores electroquímicos
Los biosensores electroquímicos, especialmente los biosensores electroquímicos basados
en enzimas, se han desarrollado ampliamente para la determinación de compuestos
fenólicos [ [31] , [32] , [33] , 49 , 121 , 130 , 140 ]. Los biosensores electroquímicos
normalmente miden los compuestos fenólicos como base de la producción de electrones
por catálisis enzimática. Entre las enzimas, lacasa, tirosinasa, peroxidasa de rábano picante
y polifenol oxidasa hay grupos de enzimas que catalizan la transformación de una gran
cantidad de compuestos fenólicos [ [31] , [32] , [33]] Los mecanismos de lacasa, tirosinasa
y peroxidasa en los biosensores electroquímicos son diferentes. Para la lacasa y la
tirosinasa, las enzimas se vuelven a reducir mediante compuestos fenólicos, después de ser
oxidados por el oxígeno en biosensores electroquímicos [ 32 , 32 , 33 ]. Los biosensores
electroquímicos basados en lacasa pueden detectar compuestos fenólicos con posición para
y meta posición libre incluso con un ciclo catalítico complicado. Mientras que los
biosensores de tirosinasa pueden detectar compuestos fenólicos con al menos una posición
orto libre [ 33 ]. Por otro lado, para la peroxidasa, compuestos fenólicos son oxidados por
la enzima con peróxido de hidrógeno (H 2 O 2) como co-sustrato, y luego puede reducirse
electroquímicamente en la superficie del electrodo. Los biosensores electroquímicos a base
de peroxidasa de rábano picante son sensibles a muchos compuestos fenólicos, ya que una
gran cantidad de fenoles pueden actuar como donantes de electrones para la peroxidasa
[ 164 ].
Se realizó un estudio exhaustivo sobre la inmovilización de enzimas en electrodos tanto
simples como complejos para la detección electroquímica de una gran cantidad de
compuestos fenólicos [ 121 , 130 , 140 , 165 , 166 ]. Curiosamente, da Silva et al. polifenol
oxidasa inmovilizada en un soporte basado en β-ciclodextrina [ 166 ]. Como se muestra en
la Fig. 6 , se construyó un biosensor basado en el procedimiento de inmovilización para la
detección de compuestos fenólicos.

Fig.6 . (A) Procedimiento de inmovilización utilizando soporte modificado con β-

ciclodextrina, (B) composición del biosensor propuesto y (C) oxidación catalizada de la
rutina con polifenol oxidasa con su posterior reducción electroquímica en la superficie del
biosensor. {Reimpreso con permiso de [ 166 ]}.
Recientemente se ha informado de una gran cantidad de nuevos biosensores
electroquímicos que combinan las ventajas de los sensores enzimáticos (amplificación a
través del ciclo redox electrocatalítico) con la detección electroquímica de compuestos
fenólicos [ [31] , [32] , [33] , [167] , [168 ] , [169] , [170] ]. Leite y col. desarrolló un
biosensor bi-enzimático lacasa-peroxidasa para la detección voltamétrica de varias
catecolaminas [ 168] Rawal y col. fabricó un biosensor de polifenol al inmovilizar
covalentemente la lacasa en nanopartículas de plata (AgNP) / nanotubos de carbono
carboxilados (cMWCNT) / polianilina (PANI) depositados electroquímicamente en la
superficie del electrodo de oro (Au). Zhao y col. fabricó tres tipos de biosensores
electroquímicos inmovilizando diferentes morfologías de sílice nanoestructurada-ácido
fítico (SiO 2 -PA) y lacasa en la superficie del electrodo de carbono vítreo [ 169 ]. El
biosensor electroquímico con los mejores rendimientos electroquímicos se aplicó para la
determinación de la concentración de dopamina en muestras de inyección farmacéutica y
sueros de sangre de conejo [ 170 ].
Se han informado muchos biosensores electroquímicos para la detección de compuestos
fenólicos en aplicaciones farmacéuticas y biomédicas [ 165 , 168 , [170] , [171] , [172] ,
[173] , [174] , [175] , [176] , [177] , [178] , [179] , [180] , [181] , [182] , [183]] Sin embargo, la
mayoría de las aplicaciones solo se centran en formulaciones farmacéuticas o muestras
sintéticas sin matrices de muestras complejas. Khoobi y col. utilizó una resolución de curva
multivariada alternando mínimos cuadrados para biosensores electroquímicos para
determinar la dopamina en presencia de interferencia inesperada [ 111 ]. El método
propuesto se ha utilizado para el análisis confiable de dopamina en muestras de suero
sanguíneo humano real.
4 . Conclusiones
Como las estrategias analíticas actuales, como los métodos de espectrometría y
cromatografía para detectar y monitorear compuestos fenólicos, son tediosas, requieren
mucho tiempo, no son portátiles y necesitan una cantidad relativamente grande de
muestra, no son adecuadas para aplicaciones rápidas en el sitio. En comparación con esas
estrategias analíticas convencionales, los sensores químicos y los biosensores son
atractivos debido a las ventajas de una operación simple, ahorro de tiempo, bajo costo, sin
pretratamiento de muestras complicado, alta sensibilidad y excelente selectividad. Por lo
tanto, estas técnicas de detección avanzadas han despertado enormes intereses para el
análisis de compuestos fenólicos en muestras farmacéuticas y biomédicas.
Los nuevos materiales, como los nanomateriales, ofrecían muchas perspectivas
prometedoras para fabricar nuevos sensores con sensibilidad y selectividad mejoradas.
Vale la pena mencionar que los ensayos colorimétricos se han aplicado como métodos no
específicos para evaluar los niveles de compuestos fenólicos en diferentes muestras.
Basado en principios de detección similares, se han desarrollado sensores ópticos para
detectar los compuestos fenólicos totales. Basado en el comportamiento redox de los
fenólicos, los sensores electroquímicos se han desarrollado para la detección de
compuestos fenólicos. Debido al comportamiento redox de los compuestos fenólicos, los
métodos voltamperométricos o amperométricos se usan comúnmente en el análisis
electroquímico de compuestos fenólicos.
En comparación con los biosensores, los sensores químicos son menos reportados para
detectar compuestos fenólicos. Sin embargo, el desarrollo de sensores químicos sin utilizar
los biorreceptores también es importante para la detección fenólica. En comparación con
los sensores químicos, los biosensores generalmente ofrecen una menor estabilidad a
temperatura ambiente y, como consecuencia, no son apropiados para la aplicación en el
campo.
En los biosensores, un biorreceptor generalmente se inmoviliza en la superficie de los
biosensores. El desarrollo de técnicas de inmovilización adecuadas sigue siendo un desafío
para la construcción de dispositivos útiles de biodetección. Entre los diferentes sensores,
los biosensores electroquímicos han sido ampliamente estudiados y ampliamente
aplicados para la detección de compuestos fenólicos en muestras farmacéuticas y
biomédicas.
Sin embargo, todavía es muy difícil para los sensores detectar simultáneamente
compuestos fenólicos con estructuras similares, ya que sus longitudes de onda de
absorción y / o potenciales redox están demasiado cerca uno del otro y en la mayoría de los
casos se superponen. La separación cromatográfica y las estrategias de chip microfluídico
junto con la detección de detección son una solución prometedora para este problema.
A pesar de una gran cantidad de investigaciones, la aplicación de sensores a muestras
farmacéuticas y biomédicas reales sigue siendo limitada con pocos ejemplos disponibles.
Sin embargo, los trabajos reportados en la actualidad han obtenido muy buenos resultados
utilizando análisis de tiempo corto y bajo consumo de muestra que destacan el claro
potencial de los sensores como método cuantitativo conveniente de sustratos fenólicos. Se
espera que los dispositivos sensores fabricados puedan ser útiles en el desarrollo de
análisis farmacéuticos y biomédicos.