UNIVERSIDAD POLITECNICA DE PUEBLA

INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA

METÁBOLOMICA

GRUPO 8B
ALUMNA: AMANDA PONCE MENDEZ

PERIODO
ENERO -ABRIL
Introducción
Las técnicas analíticas adecuadas para el análisis global de los metabolitos deben ser
sensibles, robustas y poseer la capacidad de análisis de alto rendimiento requeridos para
un gran número de muestras.

En los últimos años se han logrado avances considerables en el desarrollo de tecnologías

analíticas, para medir e interpretar perfiles de metabolitos complejos. Sin embargo, dado
el amplio rango dinámico y químico de los metabolitos de bajo peso molecular en mezclas
biológicas, no es posible analizar todos los metabolitos de bajo peso molecular con una
sola plataforma analítica (Glassbrook y Ryals, 2001 ).

Hay que tener en cuenta que las técnicas utilizadas con mayor frecuencia para los
estudios de metabolómica son espectroscopia NMR y MS (Nuclear Magnetic Resonance y
Mass Spectrometry). Los datos obtenidos por espectroscopia NMR o MS de mezclas
biológicas, producen un perfil espectral complejo que refleja el estado metabólico del
organismo (Shockcor y Holmes, 2002). Un solo espectro puede contener miles de señales.
Para interpretar las perturbaciones bioquímicas, las estrategias basadas en la
metabolómica emplean métodos potentes bioinformáticos y estadísticos.

El rápido desarrollo de una gama de plataformas analíticas, incluyendo Cromatografia de

Gases GC (Gas Chromatography), Cromatografía Líquida de Alta Resolución HPLC (High-
Performance Liquid Chromatography), Cromatografía Líquida de Ultra Performance UPLC
(Ultra Performance Liquid Chromatography), Electroforesis Capilar CE (Capillary
Electrophoresis) acoplado a MS y espectroscopia NMR, puede permitir la separación,
detección, caracterización y cuantificación de metabolitos y las rutas metabólicas
relacionadas (Zhang, et al., 2012). Debido a la complejidad de los metabolitos y de sus
diversas propiedades, ninguna plataforma analítica sola puede aplicarse para la detección
de los metabolitos en una muestra biológica. El uso combinado de enfoques analíticos
instrumentales modernos facilita encontrar los resultados ideales en metabolómica y es
beneficioso para detectar los metabolitos que no se puede encontrar mediante técnicas
de análisis individual. Se han utilizado plataformas integradas para proporcionar detección
sensible y confiable de miles de metabolitos en una muestra de biofluido, el desarrollo
continuo de estas plataformas analíticas acelerará el uso generalizado y la integración de
la metabolómica en sistemas biológicos (Zhang, et al., 2012).

Análisis de Flujos Metabólicos (MFA)

Esta técnica se emplea con el fin de describir el estado fisiológico de la célula para las
condiciones in vivo haciendo uso de mediciones de flujos externos en el medio de cultivo
(que son el resultado del intercambio de nutrientes y productos entre la célula y el medio)
En la actualidad el metabolismo microbiano ofrece la posibilidad de obtener una gran
variedad de metabolitos de interés biotecnológico esto es para el desarrollo racional de
bioprocesos destinados a la obtención de dichos metabolitos en donde es necesario
contar con herramientas de análisis global que permitan el estudio holístico del
metabolismo así mismo el análisis de flujos metabólicos basado en marcación con
sustratos que contienen 13C se ha convertido en una importante herramienta de análisis
aplicada en Ingeniería Metabólica, y permite la cuantificación de los flujos intracelulares
del metabolismo central de un microorganismo proveyendo una visión completa del
mismo.

El análisis de flujos metabólicos (AFM) se ha convertido en las últimas décadas en una de

las herramientas más relevantes en Ingeniería Metabólica. El principal objetivo del AFM es
la cuantificación detallada de todos los flujos metabólicos; el resultado final de un estudio
de este tipo es, por lo tanto, un mapa de reacciones bioquímicas que muestra la
distribución de flujos anabólicos y catabólicos en el contexto de una red de reacciones
bioquímicas. Además de tratarse de una herramienta de gran importancia para el análisis
fisiológico (41), surge en forma evidente la posibilidad de identificar (y modificar)
reacciones para la obtención de uno o varios metabolitos a través de AFM.

Se debe tener en cuenta que este tipo de análisis y de acuerdo con la metodología antes
ya consultada nos va a permitir estimar el máximo rendimiento teórico de un producto y
a partir de las distribuciones de flujo determinar los nodos principales de la red
metabólica mediante la simulación del funcionamiento de la red con el modelo
matemático que la describe

Espectrometría de Resonancia Magnética Nuclear en dos dimensiones (2DR-MN)

La espectrometría de resonancia magnética nuclear (RMN) es una técnica basada en la

medición de absorción y radicación de radiofrecuencia en un núcleo en un campo
magnético fuerte; la absorción de la radiación hace que el spin nuclear se alinee o gire en
dirección de mayor energía. Cabe mencionar que los expertos encargados de la técnica de
RMN mencionan que los resultados obtenidos pueden ser en dimensión (1D) o
multidimensionales (2D,3D etc..).

La espectrofotometría de RMN de acuerdo con fuentes bibliográficas consultadas y con

opiniones de algunos químicos llegaron a la conclusión de que esta espectroscopia de
resonancia magnética puede ser utilizada para determinar las estructuras de los
compuestos orgánicos, cabe mencionar que este técnica aparte de ser utilizada para los
fines mencionados anteriormente también se puede utilizar para estudiar núcleos
atómicos con un número impar de protones o neutrones.

Espectrometría de masas
La espectrometría de masas en tándem (en sus siglas inglesas MS/MS), es la herramienta
más poderosa y versátil que ha aparecido en los últimos 30 años en el campo del
diagnóstico neonatal de los ECM. Aunque presenta como principales inconvenientes cierta
complejidad de manejo e interpretación, la introducción de una etapa de ionización
mediante electro nebulización como método de enlace entre la cromatografía líquida y la
espectrometría de masas, ha facilitado enormemente la incorporación de esta tecnología
al laboratorio clínico se sabe también entonces que este tipo de espectrometría de masas
es aquella técnica en la cual los espectros de masas se obtienen convirtiendo los ,
componentes de la muestra deseada en iones gaseosos, que se mueven rápidamente en
presencia de un campo magnético y este se separa en función de su masa / carga; cabe
mencionar que un espectro de masa es aquel que se va a encargar de representar la
abundancia relativa de los iones en función con la relación de su masa, la espectrometría
de masas nos ayuda como una herramienta analítica muy poderosa y para una gran
aplicación de sin fin de pruebas, no hay que dejar de lado que este tipo de espectro nos
da información sobre la estructura de especies moleculares complejas.
Para este tipo de técnica es importante saber cuáles son las etapas para su realización
correcta y estas son:
a) Generación de moléculas y fragmentos moleculares en fase gaseosa
b) Ionización de los mismos fragmentos moleculares
c) Separación de función de su relación m/z
d) Detección de los iones

La Espectrometría de Masas es una técnica de vital importancia en sus comienzos y en la

actualidad, donde disponemos del Espectrómetro de Masas como un instrumento
altamente especializado y aplicable en multitud de campos.
El Espectrómetro de Masas es de los instrumentos más utilizados a la hora de analizar
todo tipo de muestras con gran versatilidad y facilidad, pudiendo realizar análisis
cualitativos y cuantitativos de forma simultánea.
Hoy en día se siguen realizando investigaciones en mejoras dentro de la Espectrometría de
Masas, ya que cada día se exigen resultados con mayor precisión y se analizan muestras
que requieren mayor especialización

Electroforesis Capilar - Espectrometría de Masas

Esta técnica o por sus siglas CE ha surgido como una técnica de separación muy eficiente
y se utiliza en varias formas de separación, como la zona de Electroforesis Capilar
(Capillary Zone Electrophoresis CZE), normalmente conocido como “CE”,
Electrocromatografía Capilar,es una técnica de química analítica formada por la
combinación de los procesos de separación de líquidos de CE con MS; esta técnica
combina las ventajas de ambas técnicas para proveer alta eficiencia de separación e
información de la masa molecular en un análisis simple, cabe mencionar que esta técnica
tiene un elevado nivel de resolución y de sensibilidad se tiene en cuenta que esta técnica
como requisito fundamental es que va a requerir de un volumen mínimo y al tener este
volumen su eficacia para analizar dicho volumen es muy alta y efectiva este análisis lo
hace a una velocidad considerablemente rápida ; como técnica de separación es potente
y promisoria para metabolitos cargados y que ofrecen una alta resolución de analitos de
manera que estas van a proporcionar información principalmente de compuestos polares
o iónicos en fluidos biológicos.
Finalmente como dato importante y que se tiene que saber es que su análisis es realizado
en un tiempo corto y requerimiento de muestras muy pequeñas con volúmenes de
inyección que van desde 1 hasta 20 nL. Se ha utilizado para el análisis específicos y no
específicos de metabolitos, incluyendo análisis de iones inorgánicos, ácidos orgánicos,
aminoácidos, nucleótidos y nucleósidos, vitaminas, tioles, hidratos de carbono y péptidos.
Bibliografía
Bibliografía 1. M.A. López-Bascón, M. Calderón-Santiago, F. Priego-Capote. Confirmatory and
quantitative analysis of fatty acid esters of hydroxy fatty acids in serum by solid phase extraction
coupled to liquid chromatography tandem mass spectrometry. Anal. Chim. Acta 943 (2016) 82−88

Bibliografía 2. M. Calderón-Santiago, M.A. López-Bascón, A. Peralbo-Molina, F. Priego-Capote.

MetaboQC: A tool for correcting untargeted metabolomics data with mass spectrometry detection
using quality controls. Talanta 174 (2017) 29−37.

Bibliografía 3. Jean Flogrent. 1986. Vitamins in Biotechnology Vol. 4 pp116-158. edited by H.-J.
Rehm and G. Keed, VCH Verlagsgesellschaft mbU, D6940 (Federal Republic of Germany).

Bibliografía 4. Rose, M. A., P. Novick, J. M. Thomas, D. Botstein and G. Fink. 1987.

"A Saccharomyces cerevisiae genomic plasmid bank based on a centromere-.containg shuttle
vector". Gene 60:23 7.

Bibliografía 5. Santos, M. A., E. A. Iturriaga andA. P. Eslava. 1988. "Mapping of the RIB5 gene in
Saccharomyces cerevisiae using UV light as an enhancer of rad52-mediated chromosoma loss".
Curr. Genet. 14.419.

Bibliografía 6. Aharoni, A.; Ric de Vos, C.H.; Verhoeven, H.A.; Maliepaard, C.A.; Kruppa, G.; Bino,
R.; Goodenowe, D.B. 2002. Non-targeted metabolome analysis by use of Fourier transform ion
cyclotron mass spectrometry. OMICS 6: 217- 234.

Bibliografía 7. Alomirah, H.F.; Alli, I; Konishi, Y. 2000. Applications of mass spectrometry to food
proteins and peptides. Journal of Chromatography A 893: 1-21. Agilent Technologies. Innovating
HP Way. Basics of LC/MS. 2001. Disponible en: http://ccc.chem.pitt.edu/wipf/Agilent%20LCMS
%20primer.pdf

Bibliografía 8. W. Saavedra et al. / Agroind Sci 5 (2015) Técnicas analíticas empleadas en

metabólomica de alimentos Analytical techniques used in food metabolomics