EXAMEN PARCIAL DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL

APELLIDOS Y NOMBRES: IGNACIO APAZA, HEYFFER KELVIN

CODIGO UNIVERSITARIO: N00095025 FECHA: 26/05/2020

1.- Revisar atentamente la lista de materiales y clasificarlos:

• Agar nutritivo
• Ácido sulfúrico
• Indicadores de pH (sustancia química)

Equipos Equipos Complejos Instrumentos Instrumentos No

Simples Volumétricos Volumétricos
Mecheros Agitadores Balón volumétrico Dispensadores
Espectrofotómetro Pipetas Vaso precipitado
Autoclave
Termómetro digital
Cámara de flujo
laminar

2.- Visualizar el siguiente video y reconocer sobre que tipo de laboratorio de bioseguridad se
esta hablando y sus principales características: equipos, estructura del laboratorio,
señalización, etc. (no solo las mencionadas en el video, también las que usted ha aprendido
como parte del curso).
Enlace: https://youtu.be/jsZ1NvP_xhg
Enlace: https://youtu.be/z2Dka1VC2PE

En los videos Podemos apreciar los dos niveles de laboratorio (Bioseguridad 3 y 4), siendo el
tratamiento o la producción de pruebas rápidas para el ébola de las cuales hablaremos a
continuación.

Laboratorio de Nivel de Bioseguridad III.

Las prácticas de bioseguridad del nivel 3 son aplicables a laboratorios clínicos, diagnósticos,
docentes, de investigación y/o de producción de biológicos, en los cuales se manipulan agentes
exóticos que puedan causar infecciones serias o potencialmente letales, como resultados de la
exposición por inhalación del microorganismo. El personal de laboratorio que labora en estas
áreas debe poseer el entrenamiento específico para el manejo de dichos agentes, siendo
supervisados por científicos altamente preparados para este fin.

Todo procedimiento que envuelve la manipulación de estos agentes infecciosos debe ser
conducido en cabinas de bioseguridad u otro tipo de contenedor físico o por equipo personal
protector. Este tipo de laboratorio debe tener estructuras arquitectónicas especiales.
Laboratorio de Nivel de Bioseguridad IV:
Es en el que se requiere para la manipulación de microorganismos exóticos de alta peligrosidad,
capaces de provocar en el individuo contaminado en el laboratorio, una incapacidad de por vida,
o inclusive su muerte. Es recomendable que ciertos agentes que presentan estrecha o
incluso idéntica relación antigénica con los miembros de este nivel, sean manipulados bajo estos
criterios, al menos mientras se logra suficiente información taxonómica como para ubicarlo en
su nivel correspondiente. Los miembros del equipo de laboratorio que prestan sus servicios en
este tipo de dependencia, deben recibir un estricto y específico entrenamiento para el manejo
de agentes infecciosos de altísimo riesgo de contaminación. Este tipo de personal debe
familiarizarse con los métodos de contención tanto primarios como secundarios de las prácticas
tanto estándar como especiales, así como del equipo de contención y las características
estructurales del local. Todo este equipo humano debe ser supervisado por científicos
competentes, altamente entrenados y con muchos años de experiencia en el manejo de este
grupo de microorganismos.

El acceso a este tipo de laboratorio debe ser estrictamente autorizado y controlado por el
director del mismo, también será su responsabilidad la adopción de un manual de
procedimientos y operaciones, especial para este nivel 4. Su ubicación física debe estar aislada
del resto de las otras dependencias de la Institución. En todas las áreas de trabajo de este tipo
de laboratorio, deben realizarse las actividades en cabinas de bioseguridad clase III o
eventualmente en las de clase II siempre y cuando el operador vista una indumentaria de una
sola pieza, equipado con un dispositivo con presión positiva, y con un sistema de respiración.

La arquitectura de estas estructuras está diseñada para prevenir que los microorganismos
manipulados en su interior, sean expulsados al medio ambiente.

3.- Colocar las partes del microscopio según la siguiente imagen:

Tubo
Ocular

Revolver

Objetivo Brazo

Platina Enfoque grosero

Pinza
Enfoque fino
Condensador

Base
Lámpara
 4.- Explicar de forma detallada el procedimiento de Tinción Gram, con la ayuda de gráficos,
dibujos, esquemas, etc.

1.) Se procede a extender la muestra

que se desea teñir, se deja secar
durante 20 minutos aproximadamente.

1 2.)Fijar la muestra

3.) Aplicar el cristal violeta, durante 1

2 minuto.
Lavar con abundante agua.

4.) Aplicar lugol, durante 1 minuto.

Lavar con abundante agua.

3 5.) Aplicar alcohol/acetona hasta que

deje de decolorar.

6.) Aplicar safranina, durante 1 minuto

4 5 6

Al observar al microscopio con el lente de inmersión, las bacterias Gram positivas se observarán
de color violeta y las Gram negativas de color rosado.

RESULTADOS
5.- Revisar atentamente la lista de medios de cultivo y clasificarlos:

Aplicación
Naturaleza Estado Físico
(Subclasificar)
Agar leche Caldo nutritivo Agar nutritivo
Suero animal Agar Sangre
Agar MacConkey Agar Citrato
LIA
TSI
Müller Hilton

6.- Mencionar ¿Cuál es la diferencia entre Cultivo puro y Cultivo mixto?, ¿Qué es cultivo?, ¿Qué
es cepa? Y mencione 08 ejemplos de cepas.

Cultivo puro y Cultivo mixto

• Cultivo Puro, contiene un solo tipo de microorganismos, y el método de cultivar es de

colonias aisladas, que provengan de una sola célula.
• Cultivo mixto, cultiva diversas variedades, y tiene como objetivo que las cualidades
naturales se completen entre diferentes especies.

Cultivo
• Aislamiento o purificación de una muestra formada por muchos tipos de bacterias. Si
esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecerá como cultivo puro
de un solo tipo de bacteria.

Qué es cepa

• Es una población de microorganismos de una sola especie descendientes de una única

célula o que provienen de una determinada muestra en particular, la que usualmente
es propagada clonalmente, debido al interés en la conservación de sus cualidades
definitorias. De una manera más básica puede definirse como un conjunto de
especímenes bacterianos o virales que comparten, al menos, una característica o
variante genética.

Ejemplo de cepas:

 Rhizobium sp.
 Giberella fujikuroi
 Bacillus thuringiensis
 Verticillium lecanii
 Metarhizium anisopliae
 Candida utilis
 Clostridium
 Paseurella multocida
 Salmonella typhimurium
 Brucella abortus
 7.- Realizar un mapa conceptual sobre las técnicas de siembra tanto en medio liquido como
en medio sólido.

MÉTODOS DE INOCULACIÓN O SIEMBRA

El paso de una muestra microbiana a un medio de cultivo, ya sea líquido o sólido, se

denomina siembra o inoculación. El paso de una muestra microbiana de un medio de
cultivo a otro se denomina resiembra. Toda siembra, inoculación, o incluso resiembra, se
puede realizar de diferentes formas según las características de la muestra, del medio
en el que se van a sembrar o resembrar, del tipo de material que se utilice, etc. A
continuación, se explican los métodos más importantes de siembra o inoculación.

SIEMBRA DEL INOCULO EN SIEMBRA DEL INOCULO EN

MEDIO LÍQUIDO MEDIO SOLIDO

Si se realiza con asa de Estas siembras pueden darse

siembra, ésta se carga con la en placa o en tubo.
muestra problema sólida o a 1. Siembra del inoculo en
veces líquida en condiciones placa
de esterilidad y se adiciona al Estas siembras pueden darse
medio líquido agitándola. en placa o en tubo.
Si se realiza con pipeta se A. Técnica de Barry
toma un volumen de muestra B. Asa de Digrasky
problema y se vierte al medio C. Agotamiento por estría
de cultivo líquido agitándose D. Técnica de los cuatro
hasta su homogeneización. cuadrantes
Si se realiza con escobillón o E. Técnica de los tres giros
hisopo el método es igual que
con el asa de siembra.

Técnica de Barry Asa de Digrasky

Siembra previa al vertido del medio en la placa. Para
ello en el medio de cultivo previamente fundido (de 20
a 25 mililitros de medio a una temperatura de 45 a 50
°C) en tubo, se adicionará la cantidad de inóculo que
oscila entre 0,1 a 0,4 y se homogeniza la muestra en
el tubo mediante el vibrador. Una vez, constituida la
muestra, se vierte ésta en la placa Petri estéril y se
dejará solidificar. La mezcla también se podría realizar
en la misma placa Petri, aunque la homogenización
en este caso es más difícil. Esta técnica es utilizada,
por ejemplo, para la determinación del CMI
(concentración mínima inhibitoria) de un antibiótico
frente a determinados microorganismos.
Siembra de muestra líquida en placa
con asa de Digrasky. Consiste en
adicionar al medio sólido un inoculo que
puede oscilar entre 0,2 y 1 mililitro
según los casos con pipeta graduada
estéril, y posteriormente se extiende
con el asa de Digrasky también estéril.
Esta técnica se suele utilizar para el
recuento de viables, antibiogramas,
etc.