FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y DEL AMBIENTE

DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA BIOTECNOLOGICA

CUANTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS EN
MUESTRAS BIOLOGICAS

Profesor: Nelson vega

Objetivo:

Cuantificar aminoácidos en muestras biológicas mediante la utilización de nihidrina

MATERIALES:

 Muestras biológicas ( suero , orina, tejidos)

 Aminoácidos patrón (glicina o alanina, leucina, tirosina, acido glutámico). 1mM
 Ninhidrina ( 0.8g Ninhidrina en 30 ml de etanol y 10 ml de buffer acetato de pH= 5.5)
 N- propanol

PROCEMIENTOS

Realización de extractos

Tome 2gramos de tejidos y realice la extracción de los aminoácidos macerando o licuando el

tejido o producto en un volumen conocido de agua (ejemplo 50 ml), filtre y conserve el filtrado
para la cuantificación de aminoácidos.

Luego para el caso de suero orina, extractos de los tejidos tome 1 o 2 ml de cada extracto,
agréguele igual volumen de acetona, agite y centrifugue y conserve el líquido para el análisis de
los aminoácidos.

Cuantificación de los aminoácidos

Tome un tubo de ensayo como blanco y agregue 1.0 ml agua, luego tome cuatro tubos de
ensayo que contengan 1.0, 0.5, 0.25, 0.125 micromoles de glicina o del aminoácido que utilice
como patrón (tubos 2- 5) y el número de tubos de acuerdo a sus muestras a analizar a los que se
le adiciona 1.0 ml de sus extractos, cad a extracto en un tubo diferente. Agregue a cada tubo 3
ml de ninhidrina, agite bien y deje los tubos en un baño María a temperatura de ebullición
durante 20 minutos.

REACTIVOS tubos
1 2 3 4 5 6 7
agua 1.0
aminoácido patrón 1.0 0.5 0.25 0.125
(µmol)
Extracto 1 (ml) 1.0
Extracto 2 (ml) 1.0
Ninhidrina (ml) 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
Enfrié agua, agregue a cada tubo 8 ml de n- propanol y agita inmediatamente de manera que se
logre una mezcla homogénea. Deje los tubos a temperatura ambiente durante 10 minutos y lea
su absorbancia cero. En caso de que se forme precipitado, antes de leer sus absorbancias.

Con los patrones realice su curva de calibración, colocando absorbancias en las ordenadas y
concentraciones en las abscisas. Luego determine la concentración de aminoácidos en cada una
de sus muestras problemas llevando las absorbancias a las ordenadas de su cuerva y
extrapolando, a la curva.

Calcule la concentración de aminoácidos en el volumen total de extracto ( ejemplo 50 ml) y en

tanto porciento del peso de su muestra.