Aplicaciones de la cromatografía

Química Analítica III

Emmanuel Manzo Rosas
Drogas de Abuso Preparación de la muestra
Anfetaminas 1) Preparación de la muestra: Se colocaron 3,2 mL de orina en un tubo, se agregaron
(Orina) 32 µL de HCl 5N y estándar interno
2) Siembra: Se cargaron 3,0 mL de muestra en la columna a una velocidad de 2
mL/min.
3) Lavado de la columna: Se lavó la columna de extracción con 2,0 mL de NaOH 0,1 N
a una velocidad de 2 mL/min, 2,0 mL de agua desionizada a una velocidad de 8
mL/min, se purgó con cánula con 6 mL de agua a una velocidad de 30 mL/min y con
4,0 mL de n-hexano a una velocidad de 8 mL/min.
4) Elución: Se eluyó con 3 mL de 2-propanol/cloruro de metileno (75:25), a una
velocidad de 2 mL/min.
5) Acidificación: Se agregaron 100 µL de HCl 1% en metanol a cada tubo antes de
evaporar.
6) Evaporación: Se evaporó el eluyente bajo nitrógeno a 50 °C.
7) Derivatización: Se agregaron 50 µL de acetato de etilo y 40 µL de PFPA (anhídrido
pentafluorpropiónico), se tapó y se mezcló. Se hizo reaccionar a 75 °C durante 15
min y luego se evaporó a sequedad a 50 °C. Se reconstituyó en 50 µL de acetato de
etilo.
8) Cuantificación: Iones monitores: Anfetamina,
Cocaína 1) Preparación de la muestra: Se colocaron 3,2 mL de orina en un tubo, se agregaron
(Orina) 32 µL de HCl 5N y estándar interno (
2) Siembra: Se cargaron 3,0 mL de muestra en la columna a una velocidad de 2
mL/min.
3) Lavado de la columna: Se lavó la columna de extracción con 2,0 mL de NaOH 0,1 N
a una velocidad de 2 mL/min, 2,0 mL de agua desionizada a una velocidad de 8
mL/min, se purgó con cánula con 6 mL de agua a una velocidad de 30 mL/min y con
4,0 mL de n-hexano a una velocidad de 8 mL/min.
4) Elución: Se eluyó con 3 mL de 2-propanol/cloruro de metileno (75:25), a una
velocidad de 2 mL/min.
5) Evaporación: Se evaporó el eluyente bajo nitrógeno a 50 °C.
6) Derivatización: Se agregaron 50 µL de acetato de etilo y 40 µL de PFPA (anhídrido
pentafluorpropiónico), se tapó y se mezcló. Se agregaron 20 µL de PFP
(pentafluorpropanol), se tapó y se mezcló. Se hizo reaccionar a 75 °C durante 15 min
y luego se evaporó a sequedad a 50 °C. Se reconstituyó en 50 µL de acetato de etilo.
7) Cuantificación: Iones monitores: Benzoílecgonina,
Codeína 1) Hidrólisis enzimática: Se colocaron 3,0 mL de orina en un tubo, y se agregó el
(Orina) estándar interno. Se agregaron 500 µL de buffer acetato de sodio y 100 µL de beta-
glucuronidasa, se tapó, se mezcló y se dejó incubar a 55 °C durante 1 hora.
2) Preparación de la muestra: Se dejó enfriar la muestra, se agregó 1 mL de agua
desionizada a cada muestra, luego 100 µL de NaOH 12 M y 300 µL de buffer
carbonato 1,5 M. Se mezcló la muestra y se centrifugó. Se transfirió el sobrenadante
a un tubo limpio.
3) Siembra: Se cargaron 3,0 mL de muestra en la columna a una velocidad de 2
mL/min.
4) Lavado de la columna: Se lavó la columna de extracción con 2,0 mL de buffer
carbonato 0,15 M (pH 9,5) a una velocidad de 2 mL/min, 2,0 mL de agua desionizada
a una velocidad de 8 mL/ min, se purgó con cánula con 6 mL de agua a una velocidad
 Aplicaciones de la cromatografía
Química Analítica III
Emmanuel Manzo Rosas
de 30 mL/min (Rapid Trace), y con 4,0 mL de n-hexano a una velocidad de 8 mL/min.
5) Elución: Se eluyó con 3 mL de 2-propanol/cloruro de metileno (75:25), a una
velocidad de 2 mL/min.
6) Evaporación: Se evaporó el eluyente bajo nitrógeno a 50 °C.
7) Derivatización: Se agregaron 200 µL de anhídrido propiónico y 200 µL de piridina,
se tapó y se mezcló. Se hizo reaccionar a 75 °C durante 30 min y luego se evaporó a
sequedad a 50 °C. Se reconstituyó en 50 µL de acetato de etilo.
8) Cuantificación: Iones monitores: Codeína
Morfina 1) Preparación de la muestra: Se colocaron 3,2 mL de orina en un tubo apropiado. Se
(Orina) agregaron 32 µL de HCl 5N y estándar interno
2) Siembra: Se cargaron 3,0 mL de muestra en la columna a una velocidad de 2
mL/min.
3) Lavado de la columna: Se lavó la columna de extracción con 2,0 mL de buffer
carbonato 1,5 M (pH 9,3) a una velocidad de 2 mL/min, 2,0 mL de agua desionizada a
una velocidad de 8 mL/min, se purgó con cánula con 6 mL de agua a una velocidad
de 30 mL/min (Rapid Trace) y con 4,0 mL de n-hexano a una velocidad de 8 mL/min.
4) Elución: Se eluyó con 3 mL de 2-propanol/ cloruro de metileno (75:25) a una
velocidad de 2 mL/min.
5) Evaporación: Se evaporó el eluyente bajo nitrógeno a 50 °C.
6) Derivatización: Se agregaron 30 µL de acetato de etilo, 15 µL de MSTFA [N-metil-
N-(trimetilsilil)trifluoracetamida] y se usó vortex. Se transfirió a viales de
automuestreo.
7) Cuantificación: Iones monitores: 6-monoacetil-morfina
Fenciclidina 1) Preparación de la muestra: Se colocaron 3,2 mL de orina en un tubo apropiado. Se
(Orina) agregaron 32 µL de HCl 5N y estándar interno
2) Siembra: Se cargaron 3,0 mL de muestra en la columna a una velocidad de 2
mL/min.
3) Lavado de la columna: Se lavó la columna de extracción con 2,0 mL de NaOH 0,1 N
a una velocidad de 2 mL/min, 2,0 mL de agua desionizada a una velocidad de 8
mL/min, se purgó con cánula con 6 mL de agua a una velocidad de 30 mL/min y 4,0
mL de n-hexano a una velocidad de 8 mL/min.
4) Elución: Se eluyó con 3 mL de 2-propanol/cloruro de metileno (75:25), a una
velocidad de 2 mL/min.
5) Evaporación: Se evaporó a sequedad bajo nitrógeno a 50 °C.
6) Reconstitución: Se agregaron 50 µL de acetato de etilo y se usó vortex.
7) Cuantificación: Iones monitores: Fenciclidina
Marihuana Se usó un cartucho de extracción de 1 mL/30mg o de 3 mL/60 mg. Se acondicionó
(Sangre) con: 1 mL metanol/1mL de agua. Se cargó: 1 mL de sangre humana entera. Se lavó
con: 1 mL de metanol al 5% en agua. Se eluyó con: 1 mL de metanol. Se evaporó y se
reconstituyó: se llevó a 1 mL con metanol; se filtró con una membrana de 0,45 µm.
Oxicodona Se usó un cartucho de extracción de 1 mL/30 mg. Se acondicionó con: 1 mL
(Sangre) metanol/1 mL de agua. Se cargó: 1 mL de suero porcino con 0,2 µg de naloxona (EI).
Se lavó con: 1 mL de metanol al 5% en agua. Se eluyó con: 1 mL de metanol. Se
evaporó y se reconstituyó: a 40 °C bajo corriente de nitrógeno; 200 µL de fase móvil.
Morfina Se usó un cartucho de extracción de 1 mL/30 mg. Se acondicionó con: 1 mL metanol.
(Sangre) Se equilibró con: 1 mL de agua. Se cargó: 1 mL de suero porcino con EI. Se lavó con: 1
mL de agua. Se eluyó con: 0,5 mL de trietilamina 3% metanol. No se requirió
 Aplicaciones de la cromatografía
Química Analítica III
Emmanuel Manzo Rosas
evaporación: se inyectó la muestra directamente.
Clordiazepóxido Se usó un cartucho de extracción de 1 mL/30 mg. Se acondicionó con: 1 mL
(Sangre) metanol/1mL de agua. Se cargó: 1mL de suero porcino con 1,5 µg/mL de
demoxepam (EI). Se lavó con: 1 mL de metanol al 5% en agua. Se eluyó con: 1mL de
metanol. Se evaporó y se reconstituyó: a 40 °C bajo corriente de nitrógeno; 200 µL
de fosfato de potasio 20 mM (pH 7)/metanol 8:2 (v/v).
Naltrexona Se usó un cartucho de extracción de 1 mL/30 mg. Se acondicionó con: 1 mL
(Sangre) metanol/1mL de agua. Se cargó: 1 mL de plasma porcino con EI. Se lavó con: 1 mL de
metanol 5%/NH4OH 2%. Se eluyó con: 0,5 mL de metanol 25%/AcOH 1%. Se diluyó
con: 0,5 mL de agua.
1-Explica en qué consiste la microextracción en fase sólida (solid phase microextraction: SPME).

Es una técnica de preparación de muestras versátil y sin disolvente. Actúa según el principio de
adsorción/absorción y desorción y utiliza una fibra recubierta con una fase extractiva para
concentrar los analitos de una muestra.

2-Explica en que consiste la extracción en fase sólida (SPE).

Es una técnica diseñada para la preparación y la purificación rápidas y selectivas de la muestra

antes del análisis cromatográfico (p. ej. HPLC, GC, TLC).
3. Explica en qué consiste la derivatización.

Consiste en modificar mediante reacción química la estructura de un compuesto con el fin de

aumentar su volatilidad. La reacción química más empleada en el análisis de la fracción orgánica
del aerosol atmosférico mediante cromatografía de gases es la silanización.
4. ¿Qué es el screening de drogas de abuso?

prueba para detectar sistemáticamente la presunta presencia o ausencia de un fármaco o una

sustancia.
5. ¿Qué método y técnica se usó para la determinación de efedrina en orina?

Cromatografía liquida