Semin Cell Dev Biol . Manuscrito del autor; disponible en PMC 2010 1 de junio.

PMCID: PMC2704458
Publicado en forma editada final como: NIHMSID: NIHMS93816
Semin Cell Dev Biol. Junio de 2009; 20 (4): 387–394. PMID: 19560043
Publicado en línea el 22 de enero de 2009 doi: 10.1016 / j.semcdb.2009.01.005

Acetilación de histonas en la drogadicción

William Renthal 1 y Eric J. Nestler 2
1 Departamentos de Psiquiatría y Neurociencia, Centro Médico Southwestern de la Universidad de Texas
2 Departamento de Neurociencia Fishberg, Escuela de Medicina Mount Sinai, Nueva York, NY

Address correspondence to: Eric J. Nestler, One Gustave L. Levy Place, Box 1065, New York, NY 10029, 214-659-5656 (tele), 212-659-8510 (fax), eric.nestler@mssm.edu

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Resumen
La regulación de la estructura de la cromatina a través de modificaciones postraduccionales de las histonas (por ejemplo, la acetilación) se ha convertido en un
mecanismo importante para traducir una variedad de estímulos ambientales, incluidas las drogas de abuso, en cambios específicos en la expresión génica. Dado
que se cree que las alteraciones en la expresión génica contribuyen al desarrollo y mantenimiento del estado adicto, los esfuerzos recientes tienen como objetivo
identificar cómo las drogas de abuso alteran la estructura de la cromatina y las enzimas que la regulan. Esta revisión analiza cómo las drogas de abuso alteran la
acetilación de histonas en las regiones de recompensa cerebral, a través de qué enzimas ocurre esto y, en última instancia, qué papel juega la acetilación de histonas
en los comportamientos relacionados con la adicción.

Palabras clave: abuso de drogas, ΔFosB, histona, desacetilasa, epigenética

Introducción
La adicción a las drogas es una condición psiquiátrica crónica de búsqueda y consumo compulsivo de drogas a pesar de las graves repercusiones sociales y físicas [
1 - 4 ]. Uno de los aspectos clínicamente más desafiantes de la adicción es su persistencia incluso después de largos períodos de abstinencia de drogas, que se
destaca por las altas tasas de recaída en la mayoría de las drogas adictivas. Todas las drogas de abuso de alguna manera convergen en el sistema de dopamina
mesolímbico, un circuito cerebral clave involucrado en la recompensa [ 1 , 3 ]. Este circuito normalmente ayuda a determinar qué tan gratificantes son ciertos
estímulos ambientales y funciones para reforzar actividades evolutivamente favorables, como comer alimentos grasos o el sexo [ 5] Las células dopaminérgicas del
área tegmental ventral (VTA) se proyectan en el cerebro anterior y bañan varias estructuras límbicas clave con dopamina, incluido el núcleo accumbens (NAc). El
NAc integra entradas de la corteza prefrontal (PFC), la amígdala, el hipocampo y varias otras estructuras límbicas para sintetizar las respuestas sinápticas y
conductuales apropiadas a estímulos gratificantes, incluidas las drogas de abuso [ 1 , 3 ]. Se ha demostrado que las drogas adictivas como la cocaína inducen
cambios estructurales, electrofisiológicos y transcripcionales duraderos en la NAc, y algunos de estos cambios se han relacionado con conductas adictivas como la
autoadministración de drogas y la recaída [ 1 - 4] Uno de los ejemplos mejor estudiados es el factor de transcripción ΔFosB, un producto de empalme del gen
inmediato temprano fosB , que se acumula varias veces en la NAc después de la exposición repetida a medicamentos debido a su estabilidad proteica [ 6 - 8 ]. La
acumulación de ΔFosB inducida por drogas contribuye a los comportamientos relacionados con la adicción, ya que su sobreexpresión en el NAc sensibiliza a los
ratones a los efectos locomotores y gratificantes de la cocaína y la morfina [ 9 , 10 ], así como promueve la motivación para autoadministrarse cocaína [ 11 ].
Además de ΔFosB, se han utilizado microarrays de expresión génica para identificar otros genes desregulados en la NAc que también pueden contribuir al estado
de adicción [ 12].- 18 ]. Estos estudios de todo el genoma comienzan a ilustrar el potente control regulador que las drogas de abuso tienen sobre la actividad
genética en la NAc, ya que numerosos genes están regulados hacia arriba o hacia abajo en respuesta a la exposición crónica a las drogas. Si bien se sabe mucho
sobre los mecanismos de señalización aguas arriba iniciados por los aumentos inducidos por fármacos en la dopamina y otros neurotransmisores en la NAc [ 1 - 4
], se sabe mucho menos acerca de los mecanismos aguas abajo que integran la señalización de neurotransmisores en alteraciones duraderas de todo el genoma en
transcripción.

Un mecanismo celular clave que integra diversos estímulos ambientales con cambios en la expresión génica es la remodelación de la cromatina [ 19 , 20 ]. Las
enzimas dependientes de la señal pueden alterar la estructura de la cromatina en loci genéticos específicos para facilitar la activación o represión de programas
transcripcionales específicos. La cromatina está compuesta de ADN y las proteínas histonas alrededor de las cuales se envuelve el ADN. Las histonas se ensamblan
en un octamero compuesto por dos copias, cada una de H2A, H2B, H3 y H4 [ 21] A través de un proceso complejo que no se comprende completamente, la
cromatina se sobreenrolla en una estructura altamente condensada que empaqueta y organiza muchos metros de ADN en el núcleo de cada célula. Esta estructura
altamente condensada proporciona un control único de la cromatina sobre la expresión génica mediante la activación del acceso de los activadores
transcripcionales al ADN [ 22 , 23 ]. La estructura de la cromatina en sí está regulada en loci genéticos específicos por numerosos mecanismos que sirven para
relajar físicamente (por ejemplo, acetilación de histonas) o remodelar (por ejemplo, remodelación de nucleosomas dependiente de SWI-SNF), o proporcionar sitios
de acoplamiento para reclutar coactivadores transcripcionales adicionales o represores [ 24] Dichas modificaciones incluyen acetilación, fosforilación y metilación
de histonas, entre otras, que juntas determinan la actividad del gen subyacente [ 19 , 24 ]. Esta revisión analiza la evidencia reciente de que los cambios en la
acetilación de histonas y las enzimas que lo controlan contribuyen a las alteraciones inducidas por fármacos en la expresión y el comportamiento de los genes. Si
bien la acetilación de histonas es la modificación mejor estudiada en el cerebro, debe enfatizarse que otras modificaciones de la cromatina generalmente ocurren en
paralelo y probablemente también participen en la plasticidad a largo plazo subyacente a la adicción a las drogas.

Acetilación de histonas
La acetilación de histonas ocurre en las histonas H2A, H2B, H3 y H4, pero se describe mejor en el cerebro en H3, donde puede ocurrir en las colas N-terminales en
las lisinas 9, 14, 18 y 23 y en H4 en las lisinas 5, 8, 12 y 16 [ 24 ]. Se cree que la acetilación de histonas afecta la actividad de un gen a través de dos mecanismos
principales. Primero, la acetilación de los residuos de lisina reduce su carga positiva y, por lo tanto, su atracción electrostática a la columna vertebral de ADN
cargada negativamente. Se cree que esta atracción electrostática reducida da como resultado una estructura de cromatina "más suelta" que permite un mayor acceso
de los activadores transcripcionales al gen subyacente. En segundo lugar, las histonas acetiladas sirven como sustrato para las proteínas que contienen
bromodominio [ 25] Un ejemplo de dicha proteína es TAFII250, que contiene dos bromodominios que reconocen la histona H4 poliacetilada [ 26 ]. TAFII250 junto
con la proteína de unión a TATA (TBP), reclutan otros componentes de la maquinaria transcripcional, incluida la ARN polimerasa, que finalmente transcribe el gen
[ 27 ]. Como se predeciría por su papel bioquímico, los análisis de promotores de todo el genoma en una variedad de células, tejidos y especies han identificado
fuertes correlaciones entre la acetilación de histonas H3 y H4 y genes altamente transcritos [ 28 , 29] Por lo tanto, la acetilación de histonas se considera casi
universalmente como una "marca" de cromatina activada. Además, la acetilación de la histona H3 en ciertos genes está acoplada a la fosforilación de un residuo de
serina vecino, la serina 10, en la histona H3 (H3S10), un proceso conocido como fosfoacetilación [ 24 ]. La fosfoacetilación de histonas se produce en concierto
porque la fosforilación de H3S10 proporciona un sitio de acoplamiento para la histona acetiltransferasa (HAT), GCN5, en la cromatina [ 30] GCN5 luego mantiene
un estado hiperacetilado, que promueve la activación de genes como se describió anteriormente. Además, la acetilación de lisina K9 en la histona H3 evita la
metilación de este mismo residuo, que es una marca de cromatina reprimida, y el posterior reclutamiento de HP1 (proteína 1 de heterocromatina). Estos efectos de
la acetilación de lisina K9 promueven aún más la transcripción activa [ 24 ].

La acetilación de histonas está altamente regulada por dos familias de enzimas: HAT, como se mencionó anteriormente, y las histona desacetilasas (HDAC). Los
HAT catalizan la transferencia de grupos acetilo de acetilCoA a un residuo de lisina específico, mientras que los HDAC catalizan la eliminación de grupos acetilo
de las histonas para producir ácido acético libre (HDAC 1-11) o nicotinamida y 2′- O -acetil-ADP-ribosa ( SIRT1-7) ( Figura 1 ).
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Figura 1
Histona acetiltransferasas y desacetilasas

Se muestra la organización de dominio de tres familias principales de histona acetiltransferasas (HAT), GCN5 / PCAF, MYST y CBP / p300. Los miembros conservados de
estas familias se encuentran en la levadura. Las familias GCN5 / PCAF y CBP / p300 comparten un dominio catalítico similar (HAT) mientras que la familia MYST utiliza el
dominio catalítico MYST distinto pero funcionalmente similar. La familia MYST es mucho más diversa y el ejemplo representado no representa a todos los miembros de la
familia. Las familias GCN5 / PCAF y CBP / p300 contienen bromodominios, que pueden unirse a residuos de lisina acetilada en proteínas histonas. La función de los
cromodominios en los miembros de la familia MYST aún no está clara, pero, en otras proteínas, estos dominios pueden reconocer histonas metiladas. Las desacetilasas de
histonas (HDAC) se dividen en cuatro clases principales, Clase I-IV, según la homología estructural con las proteínas de levadura. Las clases I y II usan zinc como cofactor y
tienen dominios catalíticos similares (DAC). Los HDAC de clase II se distinguen de la clase I por su gran región reguladora N-terminal, que reconoce los factores de
transcripción (p. Ej., MEF2) y se fosforilan para controlar la localización subcelular. El HDAC de clase IV, HDAC11, es estructuralmente similar tanto a la clase I como a la
clase II pero no ha sido bien estudiado. El dominio de desacetilasa catalítica en HDAC de clase III requiere NAD + como cofactor y, además de las proteínas desacetilantes,
también se ha informado que este dominio tiene actividad ADP ribosiltransferasa (ART). MEF2) y se fosforilan para controlar la localización subcelular. El HDAC de clase
IV, HDAC11, es estructuralmente similar tanto a la clase I como a la clase II pero no ha sido bien estudiado. El dominio de desacetilasa catalítica en HDAC de clase III
requiere NAD + como cofactor y, además de las proteínas desacetilantes, también se ha informado que este dominio tiene actividad ADP ribosiltransferasa (ART). MEF2) y
se fosforilan para controlar la localización subcelular. El HDAC de clase IV, HDAC11, es estructuralmente similar tanto a la clase I como a la clase II pero no ha sido bien
estudiado. El dominio de desacetilasa catalítica en HDAC de clase III requiere NAD + como cofactor y, además de las proteínas desacetilantes, también se ha informado que
este dominio tiene actividad ADP ribosiltransferasa (ART).

Los HAT se dividen en tres familias principales, GNAT (N-acetiltransferasa relacionada con Gcn5), MYST (MOZ / Ybf2 / Sas2,3 / Tip60) y CBP / p300 (proteína
de unión a CREB / proteína acetiltransferasa de 300 kD). Los miembros más destacados de la familia GNAT son GCN5 y PCAF (p300 / CBP-Associated Factor),
ambos acetilato de histona H3 y H4. Si bien ambas enzimas se expresan de manera ubicua, los niveles de GCN5 son más altos en el cerebro y los testículos, y los
niveles de PCAF son más altos en el hígado [ 31 ]. La familia de HAT MYST está relacionada por la similitud de secuencia pero tiene muchas funciones diversas,
desde la regulación de la expresión génica del VIH (Tip60) hasta la leucemia (MOZ, MORF). Se ha demostrado que la mayoría de los sombreros MYST acetilan
histona H3, H4 y H2A. La familia de HAT CBP / p300 es la mejor estudiada en el cerebro y se ha implicado en el aprendizaje y la memoria y la adicción a las
drogas [32 - 35 ]. Las mutaciones en la CBP causan el síndrome de Rubinstein-Taybi, una afección autosómica dominante caracterizada por retraso mental y otras
anormalidades [ 20 ]. La CBP y la p300 son proteínas distintas, pero a menudo se las denomina indistintamente debido a su alto grado de similitud. CBP / p300
puede acetilar H2A, H2B, H3 y H4 y son reclutados a genes específicos a través de sus interacciones con varios factores de transcripción (por ejemplo, CREB, Fos
/ Jun). Es importante destacar que cada una de estas clases de HAT puede acetilar también proteínas que no son histonas, que se sabe que juegan un papel
importante en una variedad de vías de señalización celular [ 36]] Curiosamente, se ha informado que varios factores de transcripción, como Clock, poseen
actividad HAT. Se están realizando estudios para determinar la contribución de dicha acetilación a la regulación de la actividad genética [ 37 , 38 ].

Los HDAC se dividen en cuatro clases distintas en función de su homología con las proteínas de levadura rpd3 (Clase I), hda1 (Clase II), sir2 , (Clase III) y una
desacetilasa única de Clase IV que comparte características con rpd3 y hda1. En los mamíferos, los HDAC de clase I (HDAC1, 2, 3, 8) se expresan de manera
ubicua y son mucho más activos contra los sustratos de histona que los HDAC de clase II (HDAC4, 5, 6, 7, 9) [ 39 ]. Tanto las HDAC de clase I como las de clase
II comparten un dominio catalítico conservado, que requiere zinc para la actividad, pero las HDAC de clase II son proteínas mucho más grandes que contienen una
región reguladora N-terminal que controla la localización subcelular y los compañeros de interacción [ 40] Las HDAC de clase III, las sirtuinas (SIRT1-7), son
distintas de las otras clases estructural y mecánicamente; requieren NAD + como cofactor en lugar de zinc para catalizar la desacetilación de histonas ( Figura 1 ) [
41 ]. Las HDAC están altamente reguladas a través de modificaciones postraduccionales que controlan su actividad, localización subcelular o estabilidad. La
actividad catalítica de las HDAC de clase I está regulada por la fosforilación de la caseína quinasa II para las HDAC 1-3 [ 42 ], y por PKA para HDAC8 [ 43 , 44 ].
Los HDAC de clase II responden a numerosos estímulos ambientales, desde la señalización neural hasta el daño del ADN. Con señalización neural, por ejemplo,
Ca 2+La afluencia después de la despolarización da como resultado la activación de CaMKII, que a su vez fosforila los HDAC de clase II HDAC4 y HDAC5 [ 45
]. La HDAC4 / 5 fosforilada recluta proteínas 14-3-3, que facilitan su exportación nuclear y reducen su actividad en el núcleo [ 46 ]. Poco se sabe acerca de las
funciones citoplasmáticas de los HDAC de clase II, con la excepción de HDAC6, que es exclusivamente citoplasmático y participa en la desacetilación de la
tubulina y el transporte de proteínas mal plegadas al proteasoma [ 47 , 48] Dado que los HDAC de clase III requieren NAD + como cofactor, tradicionalmente se
cree que su actividad depende del estado metabólico de la célula (por ejemplo, relación NAD + / NADH). Sin embargo, un estudio reciente identificó DBC1
(eliminado en el cáncer de mama 1) como un potente inhibidor de la actividad SIRT1 [ 49 , 50 ], lo que sugiere que también existen otros mecanismos reguladores
aguas arriba.

Juntas, las grandes familias de HAT y HDAC integran una amplia gama de señales extracelulares para determinar el equilibrio apropiado de acetilación /
desacetilación en diversos sustratos proteicos. En el caso de sustratos de histona, el equilibrio de acetilación juega un papel crítico en la activación o represión de
programas genéticos específicos que finalmente median adaptaciones a largo plazo en la función y el comportamiento neural.

Cambios inducidos por fármacos en la acetilación de histonas

Cocaína / Anfetamina
La cocaína y la anfetamina elevan sustancialmente los niveles de dopamina en varias regiones del prosencéfalo involucradas en el procesamiento de recompensas,
como el NAc y el PFC [ 1 , 51] Los cambios moleculares inducidos por la cocaína y la anfetamina en las regiones de recompensa cerebral se estudian típicamente
en roedores usando paradigmas de drogas administrados por el investigador o autoadministrados. La administración del investigador es un método de rendimiento
relativamente alto que se utiliza para examinar las diferencias causadas por la exposición aguda o crónica a medicamentos en diferentes momentos después del
tratamiento. Los paradigmas de autoadministración, aunque requieren mucho trabajo, son mejores modelos de adicción y permiten el estudio de roedores que,
como los humanos, eligen tomar cocaína u otra droga de abuso. Además, la autoadministración permite el estudio de los mecanismos moleculares implicados en la
recaída del fármaco. Ambos paradigmas se han utilizado para identificar cambios transitorios y duraderos en la acetilación de histonas después de la exposición a
cocaína o anfetaminas [ 52 - 54]

La exposición aguda a la cocaína o anfetamina, por ejemplo, que se sabe que inducen rápidamente los genes tempranos inmediatos c-fos y fosb en la NAc, aumenta
la acetilación de la histona H4 y la fosfoacetilación de H3 en sus promotores genéticos proximales ( Figura 1 ) [ 53 , 54 ]. El análisis del curso de tiempo después
de la cocaína reveló que esta modificación ocurre dentro de los 30 minutos y desaparece a las 3 horas, de acuerdo con la cinética de inducción de estos genes
tempranos inmediatos [ 53 ]. Al menos para fosb , este aumento en la acetilación de histonas depende del HAT, CBP [ 34 ]. Mientras que el HAT específico
responsable de acetilar c-fosdespués de que queda por identificar la cocaína, hay evidencia de que la proteína quinasa activada por mitógeno, MSK1, es
responsable de los aumentos inducidos por la cocaína en la fosforilación de H3S10 ( Figura 1 ) [ 55 ]. Un estudio reciente también ha implicado la acumulación
nuclear de DARPP32, un inhibidor de la proteína fosfatasa 1 (PP1), en la mediación de la inducción de la fosforilación de H3S10 por la cocaína [ 56 ].
Curiosamente, a pesar de varios promotores de genes de control donde la cocaína aguda no afecta la acetilación de histonas (β-tubulina, tirosina hidroxilasa,
histona H4) [ 53 ], la cocaína aguda aumenta los niveles globales de acetilación de histona H4 y la fosfoacetilación de histona H3, pero no H3 acetilación sola en
30 minutos [ 53 , 55] Por lo tanto, los cambios globales en las modificaciones de histonas, que se han observado en modelos de aprendizaje y en respuesta al
enriquecimiento ambiental [ 57 , 58 ], pueden explicarse por la acetilación alterada en un subconjunto específico de genes.

La inducción de genes tempranos inmediatos como c-fos por cocaína o anfetamina después de la exposición repetida a drogas se ve fuertemente atenuada, un punto
en el que la histona H4 en el promotor c-fos está hipoacetilada [ 53 , 59 ]. Además de desensibilizar los genes tempranos inmediatos, también se sabe que la
exposición repetida a la cocaína (ya sea forzada o autoadministrada) induce un conjunto distinto de genes en la NAc (por ejemplo, cdk5 y bdnf ), algunos de los
cuales permanecen elevados durante días o semanas [ 13 , 16 , 60 , 61] Consistente con tales cambios estables en la expresión génica, se observó un aumento de la
acetilación de histona H3 en los promotores génicos de cdk5 y bdnf durante 1–7 días después de la dosis final de cocaína [ 53 ]. Se han observado cambios estables
en la acetilación de histonas y la expresión génica durante casi dos semanas después de la retirada de la autoadministración de cocaína en la corteza prefrontal [ 52
]. Por ejemplo, se descubrió que la expresión de npy (neuropéptido Y) estaba regulada al alza y que su promotor génico estaba hiperacetilado, mientras que egr-1
(respuesta de crecimiento temprana 1) estaba regulado a la baja e hipoacetilado después de la abstinencia de cocaína [ 52] Juntos, estos hallazgos correlacionan
estrechamente la actividad genética en el cerebro in vivo con los niveles de acetilación de histonas, un hallazgo que es consistente con el papel de la acetilación de
histonas en el cultivo celular y la levadura.

Etanol y otras drogas de abuso.

El etanol, un depresor del sistema nervioso central, es una de las drogas más ampliamente disponibles y de abuso común. Los mecanismos de señalización precisos
por los cuales el etanol altera la cognición todavía están bajo investigación, pero se cree que su unión y modulación de los receptores GABA contribuyen [ 62 ].
Las vías de señalización aguas arriba activadas por etanol parecen converger en la cromatina en el núcleo, ya que el dicronismo circular de los lisados cerebrales de
ratas tratadas con etanol sugiere una estructura de cromatina más relajada que sus controles [ 63] Estudios más recientes se han centrado en regiones cerebrales
específicas involucradas en respuestas conductuales reguladas por etanol en ratas. La ansiedad inducida por la abstinencia de etanol es un importante factor de
refuerzo negativo en los adictos, y se cree que está mediada en parte por la amígdala. De hecho, un estudio reciente encontró que la abstinencia de etanol altera la
actividad HDAC, la expresión génica y la estructura de la cromatina en esta región del cerebro, y que estos cambios contribuyen a aumentar la ansiedad [ 64 ].
Específicamente, la retirada de la exposición crónica al etanol aumentó la actividad de HDAC y redujo la acetilación de histonas en la amígdala, y cuando este
aumento de la actividad de HDAC se bloqueó con un inhibidor de HDAC, las ratas no pudieron desarrollar ansiedad inducida por la retirada ( Figura 1 ) [ 64 ].

En Drosophila , los cambios en la acetilación de histonas también se han implicado en las respuestas moleculares y de comportamiento al disolvente orgánico
volátil, el alcohol bencílico [ 65 ]. Muchos solventes orgánicos son abusados como inhalantes, lo que a menudo induce una rápida tolerancia a los medicamentos,
aumentando así la cantidad de medicamentos necesarios para lograr un efecto conductual equivalente. En última instancia, la tolerancia a los inhalantes puede
provocar adicción y neurotoxicidad severa. En Drosophila , un mecanismo clave implicado en la tolerancia al alcohol bencílico es la regulación positiva de slo , un
canal de K + activado por Ca2 + [ 66 ]. Inducción de sloestá asociado con aumentos en la acetilación de histona H4 en su promotor, lo que probablemente es
importante para la activación de genes porque la inhibición farmacológica de la actividad de HDAC aumentó tanto la acetilación de genes slo como la expresión de
ARNm [ 65 ]. Además, la inhibición de HDAC potenciaba la tolerancia al alcohol bencílico, lo que implica aún más la acetilación de histonas en las respuestas
conductuales a las drogas de abuso.

Análisis de genoma completo de acetilación de histonas en la NAc

El análisis de los cambios en la acetilación de histonas en promotores genéticos específicos mediante ChIP cuantitativa (qChIP) ha demostrado un papel clave de
esta modificación en la regulación de la expresión génica en respuesta a las drogas de abuso [ 34 , 52 - 54 ]. Sin embargo, qChIP tiene un rendimiento
relativamente bajo y generalmente se usa para estudiar genes candidatos cuidadosamente seleccionados. Por lo tanto, el acoplamiento de ChIP a microarrays de
genoma completo (ChIP-chip) o secuenciación masiva paralela (ChIP-seq) proporciona la tecnología necesaria para identificar simultáneamente los cambios
inducidos por fármacos en la acetilación de histonas en todo el genoma, y ahora se han realizado dichos análisis para evaluar acción de la cocaína sobre la
estructura de la cromatina en la NAc [ 67 ].

El análisis de chips de chip de acetilación de histonas en la NAc de ratones tratados con cocaína ha proporcionado una nueva visión de los mecanismos
transcripcionales básicos que ocurren in vivo y de nuevas vías involucradas en la acción de la cocaína. Una de estas ideas se deriva directamente de un informe
anterior que usa qChIP para analizar la acetilación de histonas en algunos genes que ya se sabe que están involucrados en las respuestas de cocaína. En el pequeño
número de genes estudiados, surgió un patrón por el cual los genes que son inducidos por la cocaína aguda (p. Ej., C-fos , fosb ) también se hiperacetilaron en la
histona H4, mientras que los genes inducidos por la cocaína crónica (p. Ej. , Cdk5 , bdnf ) se hiperacetilaron en histona H3 [ 53] Se observaron hallazgos similares
en los modelos de crisis aguda y crónica [ 68 ]. Además, se observó un cambio entre la acetilación H4 y H3 en el promotor de fosb , un gen temprano inmediato
que se induce después de la cocaína aguda y crónica [ 53 ]. El análisis del chip ChIP de todo el genoma revela que si bien hay más genes acetilados H3 en la NAc
de ratones expuestos a cocaína crónica, también hay un conjunto significativo de genes previamente inducidos crónicamente no reconocidos que están
hiperacetilados solo en H4 ( Figura 2D ) [ 67] También hubo un subconjunto aún más pequeño de genes que se acetilaron en las histonas H3 y H4. Los mecanismos
que determinan si un gen está hiperacetilado en H3 o H4 siguen sin estar claros, pero estos nuevos datos sugieren que después de la cocaína crónica, puede haber
dos vías distintas para activar la expresión génica, una a través de la acetilación de H3 y la otra a través de H4. Además, estos datos también sugieren que el
cambio de H4 a H3 observado tanto en los modelos de cocaína como de convulsiones puede estar reservado para ciertos tipos de genes, como los genes tempranos
inmediatos.

Figura 2
Regulación de la estructura de la cromatina por drogas de abuso.

Los eventos de señalización inducidos por drogas se representan para cocaína / anfetamina, etanol y un inhalante, alcohol bencílico. La cocaína y la anfetamina pueden
aumentar los niveles de AMPc en el cuerpo estriado, lo que activa la proteína quinasa A (PKA) y conduce a la fosforilación de sus objetivos. Esto incluye la proteína de
unión al elemento de respuesta AMPc (CREB), cuya fosforilación induce su asociación con la histona acetiltransferasa, la proteína de unión a CREB (CBP) para acetilar
histonas y facilitar la activación génica. Se sabe que esto ocurre en muchos genes, incluidos fosB y c-fos, en respuesta a la exposición psicoestimulante. ΔFosB también está
regulado por tratamientos psicoestimulantes crónicos, y se sabe que activa ciertos genes (por ejemplo, cdk5) donde recluta la enzima de remodelación de cromatina SWI-
SNF, BRG1, y reprime a otros (p. ej., c-fos ) donde recluta HDAC1. Esta represión de c-fostambién implica un aumento de la metilación represiva de histonas, que se cree
que ocurre a través de la inducción de histonas metiltransferasas específicas. Todavía no se sabe cómo la cocaína regula las histona desmetilasas (HDM) o las
metiltransferasas de ADN (DNMT). La cocaína también activa la cascada de la proteína quinasa activada por mitógeno (MAPK), que a través de MSK1 puede fosforilar
CREB e histona H3 en la serina 10. La cocaína promueve la fosforilación de H3 a través de una vía distinta, por lo que PKA activa la proteína fosfatasa 2A, lo que conduce a
la desfosforilación de la serina 97 de DARPP32. Esto hace que DARPP32 se acumule en el núcleo e inhiba la proteína fosfatasa 1 (PP1) que normalmente desfosforila H3.
También se sabe que la exposición crónica a los psicoestimulantes aumenta la estimulación glutamatérgica desde la corteza prefrontal hasta la NAc. La señalización
glutamatérgica eleva el Ca2+ niveles en NAc sinapsis y activa la señalización de CaMK (calcio / calmodulina proteína quinasas), que, además de CREB fosforilante, también
fosforila HDAC5. Esto da como resultado la exportación nuclear de HDAC5 y un aumento de la acetilación de histonas en sus genes diana (p. Ej., NK1R [NK1 o receptor de
la sustancia P). Se ha demostrado que el etanol agudo reduce la acetilación de histonas al aumentar la actividad de HDAC, mientras que la retirada del etanol crónico
aumenta la acetilación de histonas al reducir la actividad de HDAC. El disolvente orgánico, el alcohol bencílico, que se utiliza para estudiar los efectos de tolerancia de los
inhalantes, induce rápidamente la acetilación de histonas en el canal de K + activado por Ca 2+ , slo , para facilitar la transcripción dependiente de CREB. La figura fue
modificada con permiso de [ 20]

Otro resultado importante de estos primeros estudios del genoma de la acetilación de histonas en las respuestas de cocaína es el nuevo conjunto de dianas genéticas
y vías de señalización reveladas. Además de identificar varios genes previamente implicados en las respuestas de cocaína (por ejemplo, los genes para CDK5
[quinasa dependiente de ciclina 5], AGS3 [activador de la señalización de la proteína G 3], PER2 [período 2], DYN [dinorfina], etc.) , también se encontró que una
nueva clase de histona desacetilasas, las sirtuinas, está regulada por la cocaína en la NAc [ 67 ]. Tanto sirt1 como sirt2están hiperacetilados en la histona H3 y
tienen niveles más altos de ARNm en respuesta a la exposición crónica a la cocaína. ΔFosB parece contribuir a estos cambios transcripcionales. Además, la
manipulación farmacológica de estas enzimas regula de manera potente la recompensa de la cocaína, ilustrando cómo los análisis de chips ChIP en todo el genoma
pueden revelar objetivos genéticos novedosos involucrados en las respuestas conductuales a las drogas de abuso.

Papel de los HAT y HDAC en el abuso de drogas

Histona acetiltransferasas
Como se discutió anteriormente, los HAT son enzimas que catalizan la adición de grupos acetilo en las proteínas histonas. Uno de los HAT mejor estudiados es
CBP, que se sabe que se asocia con CREB fosforilada y ayuda en la activación del gen objetivo [ 36 , 69 ]. Mientras que la cocaína aumenta la acetilación de H4 en
el promotor fosb en el cuerpo estriado de ratones de tipo salvaje, esto no ocurre en ratones con deficiencia de CBP [ 34 ]. Además, este evento de acetilación
inducido por cocaína en fosby quizás otros genes pueden ser importantes desde el punto de vista del comportamiento, ya que los ratones con deficiencia de CBP
también son menos sensibles a los efectos de la cocaína que activan el aparato locomotor. Estos hallazgos sugieren que la CBP es un HAT importante en la
mediación de al menos algunos de los aumentos inducidos por la cocaína en la acetilación de histonas y, en última instancia, las respuestas conductuales posteriores
[ 34 ]. La sensibilidad reducida de los ratones con deficiencia de CBP a la cocaína puede ser independiente de CREB, ya que otras manipulaciones que reducen la
actividad de CREB en el cuerpo estriado generalmente mejoran las respuestas conductuales a la cocaína [ 70 , 71] Sin embargo, dado que los ratones con
deficiencia de CBP han reducido los niveles de CBP en todas las regiones del cerebro durante el desarrollo, será importante determinar qué regiones específicas en
el cerebro adulto son importantes para los efectos conductuales de la CBP. Además, estos estudios también pueden proporcionar información sobre el papel que
desempeña CREB en la mediación de las funciones posteriores de CBP en las respuestas de cocaína. Los ratones que expresan formas mutantes de CREB que no
pueden interactuar con CBP [ 72 ] también pueden ayudar a abordar esta pregunta.

Histona desacetilasas
Los inhibidores de moléculas pequeñas de HDAC se han utilizado en muchos sistemas desde que se identificaron por primera vez en 1978 [ 73 ], pero solo
recientemente se han utilizado para estudiar el comportamiento. El butirato de sodio, un inhibidor de HDAC altamente inespecífico, fue el primero descubierto [ 73
], seguido de inhibidores más específicos y potentes, tricostatina A (TSA) [ 74 ], un antibiótico fúngico y ácido hidroxámico suberoilanilida (SAHA) [ 75]], que
actualmente está aprobado por la FDA para el tratamiento del linfoma cutáneo de células T. Estudios recientes han demostrado que cada uno de estos inhibidores
de HDAC potencia los efectos activadores locomotores de los psicoestimulantes, medidos por el número de roturas horizontales del haz infrarrojo, así como los
psicoestimulantes de efectos gratificantes, medidos por la preferencia de lugar condicionado [ 53 , 54 , 76 ] Es importante destacar que la administración sistémica
de butirato de sodio o TSA, o la infusión directa de SAHA en el NAc, es suficiente para potenciar los efectos locomotores activadores o gratificantes de la cocaína,
la anfetamina y los agonistas D1 [ 53 , 54 , 76 , 77] Por el contrario, la sobreexpresión de los HDAC de Clase II, HDAC4 o HDAC5 (pero no HDAC9), en el NAc,
atenúa significativamente la recompensa de cocaína [ 53 , 54 ], pero aún no se sabe si la sobreexpresión de HDAC4 / 5 también reduce los efectos de activación
locomotora de cocaína. Los efectos conductuales de la sobreexpresión de HDAC en la NAc probablemente requieren desacetilación de histonas, ya que la
eliminación del dominio catalítico de desacetilasa de HDAC5 previene sus efectos inhibitorios sobre la recompensa de la cocaína [ 54 ]. Sin embargo, dado que
HDAC5 también interactúa con HDAC3 en este mismo dominio [ 78 ], no está claro si los efectos de HDAC5 en la recompensa de la cocaína se deben a su propia
actividad catalítica o su interacción con HDAC3.

En la NAc, el HDAC5 endógeno también juega un papel clave en la regulación de la expresión génica en respuesta a la exposición crónica, pero no aguda, a la
cocaína. Solo la exposición repetida a la cocaína induce la fosforilación y la exportación nuclear de HDAC5, lo que reduce la desacetilación de histonas y aumenta
la expresión génica de ciertos genes objetivo de HDAC5 [ 54 ]. De acuerdo con su regulación solo por la exposición crónica a la cocaína, los ratones inactivos
HDAC5 sin drogas muestran una recompensa normal de cocaína. Sin embargo, después de una exposición previa a la cocaína, los ratones knockout HDAC5 se
hipersensibilizan a los efectos gratificantes de la cocaína [ 54] Estos hallazgos plantean la posibilidad de que HDAC5 esté involucrado en las transiciones de
comportamiento que ocurren entre la exposición aguda y crónica a la cocaína (por ejemplo, uso experimental de drogas a uso compulsivo de drogas). El receptor
de la sustancia P, NK1, es un gen diana relevante para HDAC5: su expresión es inducida en mayor medida por la cocaína crónica en ratones inactivados con
HDAC5 y esta inducción parece contribuir a mejorar las respuestas conductuales a la droga [ 45 ].

El HDAC de Clase I, HDAC1 también está involucrado en las respuestas celulares a la exposición crónica a los psicoestimulantes: se une a Δ FosB y facilita la
represión de los genes objetivo aguas abajo [ 59 ]. Un ejemplo de esto ocurre en el promotor c-fos , donde ΔFosB se acumula después de un ciclo crónico de
psicoestimulantes para desensibilizar su activación a la exposición posterior a medicamentos. La administración previa del inhibidor de HDAC, el butirato de
sodio, o la eliminación genética local del gen HDAC1 del NAc, aumenta la inducción de c-fos a pesar del tratamiento previo con psicoestimulantes crónicos [ 59 ].
Esta desensibilización mediada por ΔFosB / HDAC1 de c-foses parte del "interruptor molecular" por el cual las proteínas agudas de la familia Fos se reemplazan
gradualmente por ΔFosB durante un curso de exposición crónica a medicamentos. Se necesitan más estudios para identificar otros genes que son reprimidos a
través de este mecanismo único.

Funciones de acetilación de histonas in vivo

Estos estudios sobre el abuso de drogas, junto con los hallazgos en modelos de inclinación y memoria, depresión y dolor crónico, sugieren que la acetilación de
histonas controla la prominencia de una amplia variedad de estímulos ambientales [ 20 , 34 , 53 , 54 , 57 , 58 , 79 , 80 ]. En el condicionamiento por miedo, una
prueba de comportamiento de aprendizaje y memoria comúnmente utilizada, los inhibidores de HDAC mejoran significativamente la formación de la memoria a
largo plazo [ 57 , 58 ]. En el estrés de la derrota social, un modelo de comportamiento que provoca un síndrome similar a la depresión en ratones [ 81 , 82], los
ratones que carecen de HDAC5 desarrollan un síndrome depresivo más fuerte que los ratones de tipo salvaje [ 54 ]. Después de una lesión del nervio espinal, que
provoca un síndrome de dolor crónico, los ratones inactivos HDAC5 también se vuelven hiperalgésicos a estímulos mecánicos [ 79 ]. Si bien la actividad reducida
de HDAC hipersensibiliza a los ratones al estrés o al dolor, también potencia significativamente la eficacia de varios antidepresivos [ 79 , 83 , 84 ]. Finalmente,
como se discutió anteriormente, la inhibición de las HDAC en la NAc potencia el efecto gratificante de los psicoestimulantes, mientras que la sobreexpresión de las
HDAC en esta región del cerebro atenúa este comportamiento [ 53 , 54] Por lo tanto, las manipulaciones farmacológicas y genéticas que resultan en una elevada
acetilación de histonas parecen potenciar la prominencia de muchos tipos de estímulos ambientales.

A pesar del progreso sustancial en la identificación de los genes en los que las drogas de abuso alteran la acetilación de histonas, quedan muchas preguntas. Por
ejemplo, todavía no sabemos si la acetilación de histonas en el cerebro es una causa principal de cambios en la expresión génica o si es simplemente un reflejo de
tales cambios. Esto se complica por el hecho de que en la mayoría de los genes identificados hasta la fecha, la expresión génica y la acetilación de histonas son
elevadas y vuelven a la línea de base con un marco de tiempo similar. Sin embargo, la regulación de bdnf inducida por cocaína proporciona una visión única de la
posible interacción entre la acetilación y la transcripción in vivo . Las ratas en retirada de la autoadministración de cocaína muestran un marcado aumento en la
acetilación de histonas en el NAc y el estriado dorsal en el bdnfpromotor dentro de las 24 horas posteriores a la exposición final al fármaco [ 53 ]. Sin embargo, no
se observan aumentos detectables en la proteína BDNF durante casi una semana de abstinencia de drogas [ 61 ]. Este es un ejemplo en el que la acetilación de
histonas en un promotor genético precede a la inducción de la expresión génica, y sugiere que, además de marcar un gen transcrito activamente, la acetilación de
histonas también puede cebar un gen para una transcripción más rápida o robusta en respuesta a un estímulo posterior sin alterar su nivel basal de actividad
genética. Un mejor conocimiento de los genes en los que la cocaína regula la acetilación de histonas puede dar como resultado la identificación de nuevos objetivos
genéticos y vías de señalización involucradas en comportamientos relacionados con la adicción que previamente no fueron apreciados por los estudios de niveles
de ARNm en estado estacionario.

Futuros estudios y desafíos

Si bien las alteraciones inducidas por drogas en la acetilación de histonas hasta la fecha se han implicado en las respuestas conductuales a las drogas de abuso en
modelos simples como preferencia de lugar condicionada y ensayos locomotores, se necesita investigación futura para traducir estos hallazgos a modelos más
sofisticados de adicción humana, como como paradigmas de autoadministración y recaída. Estos modelos conductuales preclínicos pueden evaluar directamente el
papel de la acetilación de histonas en la patogénesis y el mantenimiento del estado de adicción al estudiar cómo los animales adquieren la autoadministración de
drogas y cómo recaen después de períodos de abstinencia de drogas.

El estudio de la expresión génica y la remodelación de la cromatina en el cerebro adulto se dificulta debido a dos desafíos técnicos importantes. El primer desafío
es inherente a la estructura del cerebro: es altamente heterogéneo y contiene muchos subtipos de neuronas y glía, cada uno de los cuales se distingue aún más en
función de la conectividad y la función. Por lo tanto, las respuestas celulares y moleculares a la cocaína pueden variar enormemente incluso dentro de una
subregión pequeña de la NAc. En respuesta a la cocaína, por ejemplo, las neuronas que expresan los receptores D1 de dopamina acoplados a G en el NAc muestran
niveles más altos de AMPc y sus consecuencias posteriores, mientras que las neuronas que expresan los receptores D2 acoplados a Gi responden de manera
opuesta. Incluso hay una pequeña población de neuronas estriatales que expresan los receptores D1 y D2,85 ], lo que complica aún más las respuestas celulares a la
cocaína. El resultado final del estudio de los lisados tisulares de una estructura tan heterogénea es que la mayoría de los efectos observados serán muy pequeños, ya
que se promedian junto con varios otros tipos de células que responden de manera diferente. Esto es particularmente problemático para los análisis de microarrays,
que dependen de fuertes efectos para la significación estadística. Una solución que se está desarrollando actualmente es la clasificación de células activadas por
fluorescencia (FACS) junto con ratones transgénicos BAC que expresan GFP en tipos celulares específicos (por ejemplo, neuronas D1 vs. D2 de dopamina) [ 86 ].
Esta nueva tecnología permitirá el estudio de cómo la cocaína altera la expresión génica y las modificaciones de histonas en poblaciones celulares aisladas.

El segundo gran desafío es determinar la causalidad a partir de la correlación. ¿Cómo se determina si la acetilación de histonas en el promotor bdnf causa una
respuesta transcripcional o conductual in vivo ? Para abordar esta pregunta, uno debe inducir o prevenir la acetilación de histonas en el gen bdnf específicamente.
Simplemente sobreexpresar un HAT o inhibir los HDAC probablemente hiperacetilaría muchos otros genes diana además de bndf, confundiendo así las
interpretaciones transcripcionales y conductuales. Recientemente, un avance emocionante usando proteínas de dedos de zinc puede permitirnos abordar
directamente esta pregunta tan desafiante. Los péptidos de dedos de zinc pueden diseñarse o seleccionarse para propiedades de unión a ADN altamente específicas
de secuencia. Estos péptidos con dedos de zinc pueden fusionarse con una enzima de remodelación de la cromatina, que efectivamente dirigirá esa enzima al
promotor de un gen específico. Esto se logró por primera vez usando una metiltransferasa de ADN en cultivo celular [ 87 , 88 ], y ahora puede permitir que los
neurocientíficos conductuales, usando la transferencia de genes mediada por virus, pregunten si las modificaciones de histonas en genes específicos están de hecho
causalmente relacionadas con la transcripción y fenotipos conductuales observados.

Conclusiones
Se ha demostrado que la acetilación de histonas participa en la modulación de la prominencia de muchos estímulos ambientales. Las condiciones que aumentan los
niveles de acetilación de histonas parecen sensibilizar a los ratones a la cocaína, el estrés, el dolor, etc., mientras que las condiciones que reducen la acetilación de
histonas disminuyen la sensibilidad a estos estímulos. Esto tiene implicaciones importantes en la patogénesis de la drogadicción, la depresión, el dolor crónico y los
trastornos de la memoria. En última instancia, la función clave de la acetilación de histonas es aumentar la transcripción o el potencial transcripcional de los genes
que eventualmente alteran la función neural [ 53] Por lo tanto, cualquier estudio de modificaciones de cromatina está, en teoría, inexorablemente relacionado con el
estudio de la actividad genética subyacente, y puede revelar nuevas vías de señalización no identificadas previamente a partir de estudios de niveles de ARNm y
proteínas en estado estacionario. La regulación de la estructura de la cromatina también ofrece un enfoque fundamentalmente nuevo para el desarrollo de
tratamientos más efectivos para la drogadicción y otros trastornos neuropsiquiátricos.

Expresiones de gratitud
La preparación de esta revisión fue apoyada por subvenciones de NIDA (EJN) y el Programa de Capacitación de Científicos Médicos (WR) de UT Southwestern.
Notas al pie
Descargo de responsabilidad del editor: Este es un archivo PDF de un manuscrito no editado que ha sido aceptado para su publicación. Como servicio a nuestros clientes,
proporcionamos esta versión temprana del manuscrito. El manuscrito se someterá a edición, composición tipográfica y revisión de la prueba resultante antes de que se
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