MÉTODOS

ESPECTROSCÓPICOS
UV/VIS Y
FLUOROMÉTRICOS
UNIDAD 2

Química Analítica III

2019-1
2.1 IDENTIFICACIÓN DE LAS TEORÍAS Y LEYES
QUE RELACIONAN LA INTERACCIÓN ENERGÍA
RADIANTE –MATERIA
Cuando la radiación
interacciona con la materia,
pueden
ocurrir varios procesos como:
• reflexión
• dispersión
• absorbancia
• fluorescencia/fosforescencia
(absorción y reemisión)
• una reacción fotoquímica
(absorbancia y ruptura de
enlaces)

En general, cuando se miden

espectros UV-visible, sólo es
deseable que ocurra
absorbancia.
Como la luz es una forma de energía, la absorción de
la luz por la materia causa que aumente el contenido
de energía de las moléculas (o átomos).
En algunas moléculas y átomos, los fotones de luz UV
y visible tienen suficiente energía para causar
transiciones entre los diferentes niveles.
En las moléculas, los niveles de energía vibracional y
rotacional están superpuestos sobre los niveles de
energía electrónica. Como pueden ocurrir muchas
transiciones con diferentes energías, las bandas se
ensanchan.
Transmitancia y absorbancia
Transmitancia y absorbancia
donde c es la
concentración de las
especies absorbentes
(normalmente
expresada en gramos
por litro o miligramos
por litro).
Esta ecuación puede transformarse en una
expresión lineal tomando el logaritmo,
normalmente, se expresa en base 10:

donde e es la absorción molar o coeficiente de

extinción.
El coeficiente de extinción (e) es característico de una
sustancia en condiciones definidas de longitud de onda,
disolvente y temperatura. Tiene unidades de M-1 cm-1.

En la práctica, el coeficiente de extinción medido también

depende de las características del instrumento utilizado. Por esta
razón, normalmente no se utilizan valores predeterminados del
coeficiente de extinción para análisis cuantitativo. En su lugar, se
construye una curva de calibración o curva de trabajo para la
sustancia a analizar, utilizando una o dos disoluciones patrón con
concentraciones conocidas del analito.
Considerar una
celda de longitud
= 1 cm
 Análisis cualitativo
Identificación: espectros y
estructuralos espectros UV-visible
Generalmente, muestran algunas bandas
anchas. Comparada con técnicas como infrarrojo, que produce muchas
bandas estrechas, la espectroscopía UV-visible proporciona información
cualitativa limitada.
Espectros de Infra-rojo
Análisis cualitativo
Identificación: espectros y
estructura
CROMÓFORO:
Grupo funcional el cual generalmente es insaturado y que es
capaz de absorber radiación electromagnética en el intervalo
de UV/Vis.

-I
 Clorofila a

Carmín

Crocetina

Índigo (añil)
La presencia de una banda de absorbancia a una
determinada longitud de onda es una buena indicación de la
presencia de un cromóforo.

Sin embargo, la posición del máximo no es fija sino que

depende, en parte, del entorno molecular del cromóforo y
del disolvente en el que pueda disolverse la muestra.

Otros parámetros, como pH y temperatura, también pueden

causar cambios tanto en la intensidad como en la longitud
de onda de los máximos de absorbancia.
Aunque los espectros UV-visible no permiten una identificación
absoluta, se usan frecuentemente para confirmar la identidad de una
sustancia mediante la comparación del espectro medido con uno de
referencia.
Cuando los espectros
son muy similares,
pueden utilizarse
espectros derivados.
Espectro total formado por la
mezcla de dos compuestos

Máximos de absorción de
los dos compuestos