EXPOSICIÓN DE TERCER CORTE

ESPECTROFOTOMETRÍA
Es el método de análisis óptico más usado en el área de investigación. Es la medida de la
cantidad de energía radiante absorbida por las moléculas de una muestra en función de las
longitudes de onda específicas. Los métodos espectroscópicos se basan en la capacidad de
las sustancias de ABSORBER o EMITIR radiación electromagnética, y tales métodos se
pueden emplear para determinar la concentración de un reactivo o producto durante una
reacción.
La espectrometría es la técnica espectroscópica para tasar la concentración o la cantidad de
especies determinadas a través de diferentes instrumentos tales el espectrómetro o
espectrógrafo. Por otro lado también es utilizada en física y en química analítica para la
identificación de sustancias mediante el espectro emitido o absorbido por las mismas.

espectrofotómetro

TIPOS DE ESPECTROFOTOMETRÍA
 Infrarroja
 Absorción de UV - Visible
 Resonancia magnética nuclear (RMN)
 Fluorescencia
 Emisión atómica
 Absorción atómica de masas
 Fluorescencia de Rayos X
 ¿QUÉ ES ESPECTROSCOPIA INFRARROJA?

Técnica de análisis, para obtener información acerca de los procesos de absorción y emisión
sobre las moléculas que se encuentran en la materia. Esta puede dividirse según el tipo de la
radiación que se analiza, en:
- Espectroscopia del Infrarrojo cercano.
- Espectroscopia del infrarrojo medio.
- Espectroscopia del infrarrojo lejano.

La espectroscopia infrarroja se basa en el hecho de que las moléculas tienen frecuencias a las
cuales rotan y vibran, es decir, los movimientos de rotación y vibración moleculares tienen
niveles de energía discretos (modos normales vibracionales).
Las frecuencias resonantes o frecuencias vibracionales son determinados por la forma de las
superficies de energía potencial molecular, las masas de los átomos y, eventualmente por el
acoplamiento vibrónico asociado. Para que un modo vibracional en una molécula sea activo
al IR, debe estar asociada con cambios en el dipolo permanente.
En particular, en las aproximaciones de Born-Oppenheimer y armónicas, i.e. cuando el
Hamiltoniano molecular correspondiente al estado electrónico puede ser aproximado por un
oscilador armónico en la vecindad de la geometría molecular de equilibrio, las frecuencias
resonantes son determinadas por los modos normales correspondientes a la superficie de
energía potencial del estado electrónico de la molécula. Sin embargo, las frecuencias
resonantes pueden estar en una primera aproximación relacionadas con la fuerza del enlace,
y la masa de los átomos a cada lado del mismo. Así, la frecuencia de las vibraciones puede
ser asociada con un tipo particular de enlace.

HISTORIA

 La espectroscopia infrarroja tiene casi 125 años de existencia.

 El primer espectro de vibraciones moleculares fue observado en 1881 por Abney y
Festing quienes prepararon emulsiones fotográficas sensibles al infrarrojo cercano y
fotografiaron el espectro de absorción de 48 líquidos orgánicos. Encontraron bandas
características en estos espectros, las cuales asociaron con la presencia de hidrógeno en
las moléculas estudiadas.
 En 1892, Julius obtuvo el espectro infrarrojo de 20 compuestos orgánicos, encontrando
que todos los compuestos que contienen metilo (CH3) exhiben una banda de absorción
de 3.45 μm y llegó a la conclusión de que la absorción de ‘ondas caloríficas’ se debe a
movimientos intramoleculares; en otras palabras, la estructura interna de la molécula
determina el tipo de absorción. También encontró que el efecto no es ‘aditivo’; es decir,
que no se puede predecir el espectro de absorción de un compuesto a partir del
conocimiento de los espectros de los átomos constituyentes.
 FUNCIONAMINETO
Las técnicas espectroscópicas, se fundamentan en la interacción de la materia con la
radiación. Esta interacción provoca procesos como la absorción o difusión. Cuando una
molécula absorbe o emite un fotón, su estado emergentico cambia. En general este cambio
se manifiesta como un cambio de la energía traslacional de la molécula y como un cambio
en su estado electrónico vibracional o rotacional.
Como las energías asociadas a cada uno de estos cambios son muy diferentes cada uno de
estos procesos se puede tratar de manera independiente.
Exceptuando los cambios traslacionales, los estados energéticos de las moléculas están
cuantizados, consecutivamente, los procesos de absorción y emisión solo pueden darse a
determinadas frecuencias de los fotones. Además, el conjunto de frecuencias a las que se
producen estos procesos es propio de cada molécula. Para cada molécula dada, su espectro
de absorción/emisión constituye una “huella” de la misma.

Las absorciones que se producen en la región espectral del infrarrojo involucran energías
mucho más pequeñas si las comparamos con las energías de absorción relacionadas con la
estructura electrónica de la molécula (ultravioleta y visible). Con un modelo sencillo de
molécula, se obtienen resultados buenos, como un conjunto de masas unidas por muelles.
Según este sencillo modelo mecánico, esta puede absorber energía para rotar o para vibrar,
es decir, para cambiar su estado energético rotacional o vibracional.
Sin embargo no todas las vibraciones y/o rotaciones producen una absorción de radiación
incidente. Sólo los modos vibracionales y rotacionales de moléculas con momento bipolar
diferente de cero, o bien aquellos modos que induzcan un momento diferente de cero en la
molécula, son activos al infrarrojo.
Para que exista un espectro rotacional activo en el infrarrojo se requiere que la molécula sea
polar, mientras que para tener un espectro vibracional activo en el infrarrojo basta que el
movimiento vibracional de los átomos de la molécula induzca un momento bipolar no nulo.
Por ejemplo; Las moléculas diatómicas así como la de gases nobles no presentan espectros
de absorción en el infrarrojo (2-20micras)

CARACTERISTICAS
Los espectrómetros infrarrojos son una de las herramientas más importantes para observar
espectros vibracionales. Las características más relevantes de esta espectroscopia son las
siguientes:
1. Si dos moléculas están constituidas por átomos distintos, o tienen distinta distribución
isotópica, o configuración, o se encuentran en ambientes distintos, los espectros infrarrojos
serán distintos.
2. Una sustancia definida puede identificarse por su espectro infrarrojo. Estos espectros
pueden ser considerados como las huellas digitales de dicha sustancia.
3. Los espectros muestran bandas que son típicas de grupos funcionales particulares y que
tienen localizaciones e intensidades específicas dentro de los espectros infrarrojos
4. A partir de los espectros se pueden inferir las estructuras moleculares. Para ello se
requiere un modelo en el cual basar los cálculos.
5. Las intensidades en las bandas del espectro de una mezcla, son generalmente
proporcionales a las concentraciones de las componentes individuales. Por lo tanto, es
posible determinar la concentración de una sustancia y realizar análisis de muestras con
varias componentes.
6. Es posible, mediante el uso de dispositivos experimentales adecuados, obtener espectros
infrarrojos sin alteración de la muestra, lo que constituye a esta espectroscopia como una
herramienta de análisis no destructiva.
7. El tiempo necesario para obtener y almacenar un espectro infrarrojo es del orden de
minutos.

TIPOS DE ESPECTROSCOPIA INFRARROJA

INFRARROJO CERCANO
Longitud de onda: 4.000 - 14.000 cm-1 (2,5 y 0,75 µm)
Función:
 Determinación cuantitativa de rutina de agua, dióxido de carbono, azufre,
hidrocarburos de bajo peso molecular, nitrógeno amínico, y muchos otros compuestos
sencillos que tienen interés en agricultura y en industria.
 Estas determinaciones se basan, con frecuencia, en medidas de la reflectancia difusa
de muestras sólidas o liquidas sin tratamiento previo.
 Puede excitar sobre tonos o vibraciones armónicas.
Aplicación:
- Espectroscopia en el infrarrojo cercano (NIR)
 Las bandas de absorción en esta zona son sobre tonos o combinaciones de las bandas
vibracionales de tensión fundamentales que se producen en la región de 3.000 a 1.700
cm-1
 Los enlaces implicados son, por lo general, C—H, N—H y O—H
  Debido a que se trata de sobre tonos o bandas de combinación, sus absortividades
molares son pequeñas y los límites de detección son del orden del 0,1 %
 A diferencia de la espectrometría en el infrarrojo medio, el uso más importante de la
radiación en el infrarrojo cercano es en la determinación cuantitativa de rutina de
especies tales como agua, proteínas, hidrocarburos de bajo peso molecular y grasas
en productos agrícolas, alimentos, petróleo e industria química
 Se utilizan tanto las medidas de reflexión difusa como las de transmisión, aunque la
reflectancia difusa es, con mucho, la más utilizada.
 A diferencia de la espectroscopia en el infrarrojo medio, los espectros de absorción
en el infrarrojo cercano no son adecuados para la identificación de compuestos
 Son mucho más útiles para el análisis cuantitativo de compuestos que contengan
agrupaciones funcionales formadas por uniones entre:
- Hidrogeno y carbono.
- Nitrógeno y oxígeno.
INFRARROJO MEDIO
Longitud de onda: 670 - 4.000 cm-1 (14,9 y 2,5 µm)
Función:
 Es la región más utilizada para análisis cualitativos y cuantitativos, se emplean los
espectros de absorción, reflexión y emisión.
 Puede ser usado para estudiar las vibraciones fundamentales y la
estructural rotacional o vibracional.
Aplicación:
- Espectrometría de absorción en el infrarrojo medio:
 Herramienta principal para la determinación estructural de especies orgánicas y
bioquímicas.
- Espectroscopia de reflexión en el IR medio:
 La espectroscopia de reflexión en el IR ha encontrado diversas aplicaciones,
particularmente en el caso de muestras sólidas difíciles de manipular:
- películas de polímeros
- fibras
- alimentos
- gomas
- productos agrícolas
INFRARROJO LEJANO
Determinación de estructuras de especies inorgánicas y organometálicas que utilizan medidas
de absorción. Se encuentra adyacente a la región de microondas, posee una baja energía y
puede ser usado en espectroscopia rotacional.

Longitud de onda: 650 cm-1 (>15 µm)

 Se encuentra adyacente a la región de microondas, posee una baja energía y puede ser
usado en espectroscopia rotacional.
Función:
 La región del infrarrojo lejano resulta especialmente útil en el estudio de compuestos
inorgánicos, puesto que la absorción debida a las vibraciones de tensión y flexión de
los enlaces entre átomos metálicos y ligandos inorgánicos u orgánicos.
 Por ejemplo, los yoduros de metales pesados suelen absorber en la región inferior a
los 100 cm-1, mientras que los bromuros y los cloruros presentan bandas a
frecuencias superiores.
 Las frecuencias de absorción de los enlaces organometálicas dependen, tanto del
átomo metálico como de la porción orgánica de la especie.
Aplicación:
- Infrarrojo lejano y energía reticular de los cristales
 Los estudios de compuestos inorgánicos en el infrarrojo lejano proporcionan también
una información útil sobre las energías reticulares de los cristales, y de las energías
de transición de los materiales semiconductores.
 Las moléculas formadas exclusivamente por átomos ligeros, absorben en el infrarrojo
lejano si poseen modos de flexión de esqueleto que impliquen a más de dos átomos
que no sean hidrogeno.
 Los derivados del benceno sustituido son ejemplos importantes, y presentan varios
picos de absorción.
 Los espectros son, a menudo, bastante específicos y útiles para la identificación de
un compuesto particular, ya que se dispone de frecuencias de grupo características.

- Frecuencias de grupo características en el Infrarrojo lejano

 En la región del infrarrojo lejano se observa la absorción rotacional pura de los gases,
siempre que las moléculas presenten momentos dipolares permanentes.
 Algunos ejemplos son: H 2O, O 3, HCl y AsH3.
 La absorción debida al agua es problemática; para reducir esta interferencia es
necesario la eliminación del agua presente o al menos la purga del espectrómetro.
 Los espectrómetros de transformada de Fourier son especialmente útiles en los
estudios de infrarrojo lejano.
 La ventaja en cuanto a energía del sistema interferométrico respecto al dispersivo, es
que permite, por lo general, una mejora significativa de la calidad espectral.

- Aplicaciones de la IR lejano
 Uno de los primeros ejemplos de la aplicación de la espectroscopia de emisión
infrarroja describe la utilización de un espectrómetro de transformada de Fourier para
la identificación de plaguicidas en niveles de microgramos.
  Las muestras se disuelven en un disolvente adecuado, y se evaporan en una placa de
NaCl o KBr.
 Los plaguicidas como el DDT, malation y dieldrin se identifican en cantidades tan
pequeñas como de 1 a 10 µg.

PRINCIPALES APLICACIONES DE LA ESPECTROMETRÍA EN EL

INFRARROJO

INSTRUMENTOS EN EL INFRARROJO
Existen tres tipos de instrumentos disponibles comercialmente:
1. Espectrofotómetros dispersivos de red que se utilizan principalmente para el análisis
cualitativo.
2. Instrumentos multiplex, que emplean la transformada de Fourier para medidas tanto
cualitativas como cuantitativas.
3. Fotómetros no dispersivos que se han desarrollado para la determinación cuantitativa de
diversas especies orgánicas en la atmósfera por espectroscopia de absorción, de emisión y de
reflectancia.
INSTRUMENTOS DISPERSIVOS
Principalmente se emplean instrumentos de haz doble porque son menos exigentes en las
características de la fuente y el detector. Una razón adicional es que se presenta
recurrentemente la absorción del agua y del dióxido de carbono atmosféricos en algunas
regiones espectrales importantes, lo que puede provocar serios problemas de interferencias.
Los espectrofotómetros de infrarrojo dispersivos incorporan un cortador de baja frecuencia
(de 5 a 13 ciclos por minuto) que permite al detector discriminar entre la señal de la fuente y
las señales de radiación extraña, tales como la emisión de radiación en el infrarrojo de los
distintos objetos que rodean al detector.
ESPECTROFOTÓMETRO DISPERSIVO

La radiación que procede de la fuente se divide en dos haces, una mitad pasa por el
compartimento de la cubeta de la muestra y la otra mitad por la zona de la referencia.

El haz de referencia pasa luego por el atenuador y se dirige hacia un cortador. El cortador
consta de un disco accionado por un motor que alternativamente refleja el haz de referencia
o transmite el haz que proviene de la muestra hacia el monocromador.

Después de la dispersión en la red, los haces alternativos llegan al detector y se convierten

en una señal eléctrica. La señal se amplifica y pasa al rectificador sincrónico, un dispositivo
que está acoplado mecánica o eléctricamente al cortador de forma que el interruptor del
rectificador y el haz que sale del cortador cambien simultáneamente.
Desventajas del sistema dispersivo
1. La respuesta del atenuador siempre se retrasa respecto a los cambios de transmitancia, en
especial en las regiones de barrido donde la señal cambia rápidamente.
2. En las regiones donde la transmitancia se próxima a cero, casi no llega radiación al
detector, no puede establecerse con exactitud la posición nula.
- El resultado es una respuesta poco definida del detector y unos picos redondeados.
- Espectro infrarrojo del n-hexanal ilustrando el registro fuera de escala a valores bajos de
%T.

INSTRUMENTOS NO DISPERSIVOS
Pueden ser de tres tipos principales:
1. Sencillos fotómetros de filtro o no dispersivos
2. Instrumentos que emplean filtros de cuña en lugar de un elemento dispersante para
proporcionar espectros completos.
3. Los que no emplean ningún elemento de selección de la longitud de onda.
Por lo general, estos instrumentos son menos complicados, más resistentes, más fáciles de
mantener y más baratos que los otros tipos de instrumentos.
FOTÓMETROS DE FILTRO
La figura es un esquema de un fotómetro de infrarrojo portátil de filtro diseñado para el
análisis cuantitativo de distintas sustancias orgánicas en la atmósfera.
La fuente es una varilla de cerámica rodeada de un alambre de nicromo; el detector es un
dispositivo piroeléctrico.
Los filtros de interferencia usados transmiten en el intervalo comprendido entre 3000 y 750
cm-1; cada filtro se usa para un compuesto diferente, son fácilmente intercambiables.
La muestra gaseosa se introduce dentro de la cubeta por medio de una bomba accionada por
una batería.

FOTÓMETROS SIN FILTRO

Se utilizan mucho para controlar un componente determinado en una corriente de gases

La cubeta de referencia es un recipiente sellado que contiene un gas no absorbente; la muestra

fluye a través de una segunda cubeta de igual longitud. La selectividad se logra llenando
ambos compartimentos de la celda del sensor con el gas que se desea analizar.

La hoja del cortador está dispuesta de tal manera, que los haces que provienen de fuentes
idénticas se cortan simultáneamente a una velocidad de unas cinco veces por segundo.
Las dos cámaras del detector se separan por un diafragma metálico delgado y flexible que
funciona como la placa de un condensador; la segunda placa está en el compartimento del
sensor, a la izquierda.

Cuando no hay monóxido de carbono dentro de la cubeta de muestra, las dos cámaras del
sensor se calientan por igual con la radiación en el infrarrojo que proviene de las dos fuentes.
Sin embargo, si la muestra contiene monóxido de carbono, el haz del lado derecho resulta
algo atenuado y la cámara del sensor correspondiente se enfría algo más que la cámara de
referencia; en consecuencia, se produce un movimiento del diafragma hacia la derecha y un
cambio en la capacidad del condensador.

Este cambio se detecta mediante el sistema amplificador, cuya señal de salida actúa sobre un
servomotor que mueve el atenuador del haz de referencia hasta que ambos compartimentos
estén nuevamente a la misma temperatura.

El instrumento es muy selectivo debido a que el calentamiento del gas del sensor sólo se
produce en la estrecha porción del espectro absorbida por el monóxido de carbono de la
muestra. Es evidente que este dispositivo se puede adaptar al análisis de cualquier gas que
absorba radiación en el infrarrojo.
ESPECTROFOTÓMETRO INFRARROJO CON TRANSFORMADAS DE
FOURIER
Ventajas de la FT-IR
 1. El rendimiento, que se obtiene porque estos instrumentos tienen pocos elementos ópticos
y carecen de rendijas que atenúen la radiación. Por tanto, la potencia de la radiación que
alcanza el detector es mucho mayor que en los instrumentos dispersivos y se observa una
relación señal/ruido muy superior.
 2. Elevadísimo poder de resolución y reproducibilidad en la longitud de onda que posibilita
el análisis de espectros complejos en los que el número total de líneas y el solapamiento
espectral dificultan la determinación de las características espectrales individuales.
La figura representa un fragmento del espectro de emisión de un acero. El espectro, abarca
sólo de 299,85 nm a 300,75 nm, contiene 13 líneas bien separadas de tres elementos.
3. todas las radiaciones de la fuente llegan al detector a la vez. Esta característica permite
obtener un espectro completo en un segundo o menos.
ESPECTROSCOPIA DE DOMINIO DEL TIEMPO
La espectroscopia convencional se puede denominar espectroscopia de dominio de la
frecuencia, en la que los datos de la potencia radiante se registran en función de la frecuencia
o de la longitud de onda, En contraposición, la espectroscopia en el dominio del tiempo, que
se puede conseguir por medio de la transformada de Fourier, relaciona las variaciones de la
potencia radiante con el tiempo.
Considérese el caso de dos fuentes monocromátricas que poseen ambas una frecuencia
diferente, en comparación con otra que las posee ambas.
En cada caso, se representa alguna medida de la potencia radiante, P (v), respecto a la
frecuencia en Hertz.
Primero, se representa alguna medida de la potencia radiante, P (v), respecto a la frecuencia
en Hertz.

Ahora, se representa la potencia en función del tiempo (espectro en el tiempo), P (t).

Básicamente la transformada de Fourier pasa del dominio del tiempo al dominio de la
frecuencia mediante una conversión matemática, calculando las frecuencias y la magnitud de
la oscilación a partir de los datos en el tiempo.
 Espectroscopia de dominio del tiempo.

La espectroscopia convencional se puede denominar espectroscopia de dominio de la

frecuencia, en la que los datos de la potencia radiante se registran en función de la frecuencia
o de la longitud de onda. La espectroscopia en el dominio del tiempo, se puede conseguir por
medio de la transformada de Fourier, que relaciona las variaciones de la potencia radiante
con el tiempo

COMPONENTES DE LOS INSTRUMENTOS DE TRANSFORMADA DE FOURIER

La mayoría de los instrumentos de infrarrojo de transformada de Fourier disponibles
comercialmente se basan en el interferómetro de Michelson, aunque también se encuentran
otros tipos de sistemas ópticos.
Para obtener señales en el dominio del tiempo hace falta un método que convierta (o module)
una señal de alta frecuencia en una de frecuencia medible sin distorsionar las relaciones de
tiempo transportadas en la señal; esto es, las frecuencias de la señal modulada deben ser
directamente proporcionales a las de la señal original.
El dispositivo utilizado para modular la radiación óptica es un interferómetro de Michelson,
es un dispositivo que divide un haz de radiación en dos haces de similar potencia radiante y
posteriormente los recombina de tal forma que las variaciones de intensidad del haz
recombinado se pueden medir en función de las diferencias de longitud de los caminos de los
dos haces.
INTERFERÓMETRO DE MICHELSON
Un haz de radiación de una fuente es colimado e incide en un divisor de haz, que transmite
aproximadamente la mitad de la radiación y refleja la otra mitad. Los haces gemelos
resultantes se reflejan en espejos, uno de los cuales es fijo y el otro móvil.

A continuación, los haces se vuelven a encontrar en el divisor de haz, con una mitad de cada
uno dirigiéndose hacia la muestra y el detector y las otras dos mitades regresando hacia la
fuente.

El movimiento horizontal del espejo móvil hace fluctuar de manera predecible la potencia de
la radiación que llega al detector. Cuando los dos espejos están equidistantes del divisor
(posición 0), las dos partes del haz recombinado están precisamente en fase y la potencia
radiante es máxima. A una distancia exactamente igual a un cuarto de longitud de onda
(posición B) la interferencia destructiva reduce a cero la potencia radiante de los haces
recombinados.

Una representación gráfica de la potencia radiante de salida del detector frente a δ se

denomina interferograma; para la radiación monocromática, el interferograma toma la forma
de una curva coseno.

Ciertos tipos de detectores del visible y del infrarrojo son capaces de seguir las fluctuaciones
en la potencia radiante de la señal, así es posible registrar una señal modulada en el dominio
del tiempo que refleje con exactitud el aspecto de la señal de elevada frecuencia en el dominio
del tiempo de una fuente visible o infrarroja.
Se utiliza la transformada de Fourier para extraer matemáticamente la información del
espectro.
MECANISMO DE TRACCIÓN
Para la obtención de interferogramas satisfactorios, es necesario que la velocidad del espejo
móvil sea constante y que su posición se conozca exactamente en cualquier instante. También
debe permanecer constante la verticalidad del espejo respecto a la trayectoria del haz a lo
largo de todo el recorrido de 10 cm o más.
Para que el sistema del espejo funcione satisfactoriamente se requieren dos características:
1. que el sistema pueda muestrear el interferograma a intervalos de desfase exactamente
definidos.
2. La segunda es que se pueda determinar con exactitud el punto de desfase cero para hacer
posible el promediado de las señales. Si no se conoce con exactitud este punto, las señales de
los barridos repetidos no estarán en fase.
El problema del muestreo preciso de la señal y de su promediado puede lograrse mediante el
uso de tres interferómetros en vez de uno y con un único montaje de espejos que contiene a
los tres espejos móviles.

DIVISORES DEL HAZ

Los divisores del haz están construidos con materiales transparentes con índices de refracción
tales que aproximadamente el 50 por 100 de la radiación se refleja, y el 50 por 100 se
transmite.
 Infrarrojo lejano: delgada película de Mylar que se coloca entre dos placas de un sólido
de bajo índice de refracción.
 Infrarrojo medio: películas delgadas de germanio o silicio, depositados sobre bromuro o
yoduro de cesio, cloruro de sodio o bromuro de potasio.
 Infrarrojo cercano: se utiliza una película de óxido de hierro (III) que se deposita sobre
fluoruro de calcio.
FUENTES Y DETECTORES
 Fuentes: las descritas anteriormente

 Detectores: los piroeléctricos de sulfato de triglicina se utilizan ampliamente para la región

del infrarrojo medio. Cuando se necesitan mejores sensibilidades o tiempos de respuesta más
rápidos se emplean los detectores fotoconductores de telururo de cadmio/mercurio o de
antimoniuro de indio enfriados con nitrógeno líquido.
DISEÑO DE LOS INSTRUMENTOS

Los espectrómetros de infrarrojo de transformada de Fourier son, por lo general, instrumentos

de un sólo haz Espejo móvil del interferómetro de Michelson Espejo fijo Divisor del haz
Láser de He/Ne Espectro Muestra Interferograma Detector Transformada de Fourier Fuente
Detector de la franja láser El procedimiento típico para determinar la transmitancia o la
absorbancia consiste, en primer lugar, en la obtención de un interferograma de referencia
mediante barridos de una referencia (generalmente aire) 20 o 30 veces.
 Luego se coloca la muestra en la trayectoria de la radiación y se repite el proceso. Se
calcula la relación entre los datos espectrales de la muestra y la referencia, y se obtiene la
transmitancia a distintas frecuencias.
CARACTERÍSTICAS Y VENTAJAS DE UN ESPECTROFOTÓMETRO IR-FT
 En un espectrofotómetro dispersivo las muestras complejas, con gran número de líneas y
probabilidad de solapamiento, dificultan la evaluación de las características espectrales
individuales.
 El elevado poder de resolución y la incomparable reproducibilidad, de los equipos de
infrarrojo con transformadas de Fourier hace posible la interpretación de espectros de
muestras complejas.
 En el espectro se muestra el resultado de 20 o 30 pulsos acumulados en la memoria de la
computadora.
 Aunque generalmente estos espectrofotómetros son de un sólo haz, en el espectro se exhibe
la absorción de la muestra, a la que se le ha sustraído el barrido de la referencia (aire) para
pastilla, película o emulsión y (solvente) para solución.
VENTAJAS DE LA ESPECTROFOTOMETRÍA CON TRANSFORMADAS DE
FOURIER
 Incomparable reproducibilidad y exactitud en el número de onda.

 Rapidez, el tiempo de emisión de un pulso es menor de un segundo. En cada pulso se cubre

toda la región espectral.
 Alta sensibilidad a través de acumulación de pulsos.
 Mejor relación señal/ruido que con los equipos dispersivos.
 Alta resolución, fácilmente se logra 0.1 – 0.01 cm-1.
 Ausencia de radiación parásita, porque la frecuencia es modulada.
 Competitivo en precio y mantenimiento con los equipos dispersivos.
 Debido a que llega mayor potencia radiante al detector del espectrofotómetro IR-FT, se
compensa la baja sensibilidad de los detectores usados en este tipo de instrumentos.
APLICACIONES CUANTITATIVAS
 Desviaciones de la ley de Beer:
La absorbancia de una sustancia o especie, está directamente relacionada a su concentración.
 Medida de la absorbancia
La Absorbancia se define como la relación entre la intensidad de la luz que incide sobre una
muestra y la intensidad de esa misma luz que es transmitida a través de esa muestra.
APLICACIONES CUALITATIVAS
  Frecuencias de grupo
La frecuencia aproximada (o el número de onda) a la que un grupo funcional, como C=O,
C=C, C—H, C=C, o O—H, absorbe radiación en el IR.
Se puede calcular a partir de las masas de los átomos y de la constante de fuerza del enlace
entre ellos.
 La región de la huella dactilar
Entre 1.200 cm-1 y 600 cm-1
Pequeñas diferencias en la estructura de una molécula provocan cambios en esta región
EJEMPLO

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¿QUÉ ES ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA?

Es una técnica analítica que permite determinar la concentración de un compuesto en
solución. Se basa en que las moléculas absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez
que la cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la concentración. Para hacer este
tipo de medidas se emplea un espectrofotómetro, en el que se puede seleccionar la longitud
de onda de la luz que pasa por una solución y medir la cantidad de luz absorbida por la misma.
La espectroscopia ultravioleta-visible o espectrofotometría ultravioleta visible (UV/VIS) es
una espectroscopia y espectrofotometría de fotones. Utiliza radiación electromagnética (luz)
de las regiones visible, ultravioleta cercana (UV) e infrarroja cercana (NIR) del espectro
electromagnético. La radiación absorbida por las moléculas desde esta región del espectro
provoca transiciones electrónicas que pueden ser cuantificadas.
La espectroscopia UV-visible se utiliza para identificar algunos grupos funcionales de
moléculas, y además, para determinar el contenido y fuerza de una sustancia.
Se utiliza de manera general en la determinación cuantitativa de los componentes de
soluciones de iones de metales de transición y compuestos orgánicos altamente conjugados.

HISTORIA
 Isaac Newton en 1665. Los colores no eran cualidades de la luz, derivadas de
reflexiones o refracciones de cuerpos naturales, sino propiedades originales o innatas.
 En 1752 Thomas Melvill hizo pasar por un prisma la luz que emitía una llama
producida por sodio y observó un espectro continuo, surcado por una serie de líneas
brillantes. Hasta el momento es la primera observación de un espectro de emisión.
 En 1800 para Sir Frederick William, los colores pueden filtrar distintas cantidades de
calor y cada uno tiene una temperatura mayor que aumenta del violeta al rojo. Lo
crucial en su experimentación fue medir la temperatura en una zona ubicada un poco
más allá de la luz roja del espectro y descubrió que esta región tenía la temperatura
más alta de todas.
 La radiación ultravioleta fue descubierta en 1801 por el físico alemán Johann
Wilhelm Ritter quién descubrió que unos rayos invisibles situados justo detrás del
extremo violeta del espectro visible podían oscurecer un papel impregnado con
cloruro de plata.
CARACTERISTICAS
 Las muestras en solución se ponen en una pequeña celda de Si.
  Se utilizan dos lámparas: una de H o deuterio para la región UV, y una de W /
halógeno para la región visible
 Se utiliza también una celda de referencia que contiene sólo solvente.
 La luz pasa simultáneamente por la celda de muestra y la celda de referencia.
 El espectrómetro compara la luz que pasa por la muestra con la que pasa por la celda
de referencia.
 La radiación transmitida es detectada y el espectrómetro obtiene el espectro de
absorción al barrer la longitud de onda de la luz que pasa por las celdas.

FUNCIONAMIENTO
Debemos tener en cuenta que la obtención de un espectro UV supone en primer lugar disolver
la sustancia en un disolvente adecuado, que también absorbería en el UV, por lo que en la
practica la espectroscopia UV se ve limitada a longitudes de onda superiores a 200-220 nm.
Debido a ello, como podemos imaginar, no son muchos los grupos funcionales que podremos
determinar con la espectroscopia UV, siendo de destacar que todos ellos deben poseer al
menos un enlace doble.
La existencia de un segundo doble enlace conjugado con el anterior o la presencia de un
grupo auxocromo hace que aumente la λmax de la absorción (efecto batocrómico) (también
la absorbancia y ε, (efecto hipocrómico).En caso de producirse por cualquier circunstancia
una disminución de la λmax sería un efecto ipsocrómico, o una disminución de la absorbancia
(efecto hipocrómico).
PRINCIPIO FISICO

El principio de la espectroscopia ultravioleta-visible involucra la absorción de radiación

ultravioleta – visible por una molécula, causando la promoción de un electrón de un estado
basal a un estado excitado, liberándose el exceso de energía en forma de calor. La longitud
de onda (λ) comprende entre 190 y 800 nm.
La luz visible o UV es absorbida por los electrones de valencia, éstos son promovidos a
estados excitados (de energía mayor). Al absorber radiación electromagnética de una
frecuencia correcta, ocurre una transición desde uno de estos orbitales a un orbital vacío. Las
diferencias entre energías varían entre los diversos orbitales. Algunos enlaces, como los
dobles, provocan coloración en las moléculas ya que absorben energía en el visible así como
en el UV, como es el caso del β-caroteno

MODOS DE EXCITACIÓN ELECTRÓNICA

Cuando un fotón UV-Visible de energía adecuada incide en una especie absorbente, un
electrón es promovido desde su estado fundamental a un estado electrónico excitado. En
absorción UV-Visible, pueden observarse las distintas transiciones electrónicas:

Transiciones σ σ*
λ<150 nm. Este tipo de transiciones se dan sobre todo en hidrocarburos que únicamente
poseen enlaces σ C-H o C-C. La energía requerida para que tenga lugar esta transición es
relativamente grande, perteneciente a la región espectral denominada ultravioleta de vacío.

Transiciones n σ*
λ entre 150-200 nm. Correspondientes a hidrocarburos que poseen átomos con pares de
electrones no compartidos (electrones de no enlace). La energía necesaria para que se
produzca esta transición sigue siendo alta (aunque menor que en las σ σ *) perteneciendo
éstas a la región espectral UV Lejano.

Transiciones n π*yπ π*
λ entre 200-700 nm. La mayoría de las aplicaciones de espectroscopia UV-Visible están
basadas en transiciones que ocurren en esta zona. Se requiere que las especies participantes
aporten un sistema de electrones π (grupos cromóforos: compuestos con insaturaciones,
sistemas aromáticos multicíclicos, etc.). Las energías de excitación en las transiciones π π
* son medianamente altas, correspondiendo a la región UV Lejano y Próximo, mientras que
las n π * son considerablemente menores, correspondiendo a la región visible del espectro.
En espectroscopia UV-Vis se irradia con luz de energía conocida suficiente como para
provocar transiciones electrónicas, es decir promover un electrón desde un orbital de baja
energía a uno vacante de alta energía.

Transiciones electrónicas posibles entre orbitales n: orbital que contiene par de electrones
no compartidos (ejemplo en: O, N, Cl)

Las transiciones más favorecidas son entre el orbital ocupado de energía más alta (HOMO)
y el orbital desocupado de energía más baja (LUMO)

El espectrómetro UV-Vis registra las longitudes de onda donde se registra absorción y

cuantifica la absorción.

El espectro se registra como absorbancia (A) Vs. longitud de onda (Å), las bandas del
espectro UV son anchas por que incluyen la estructura fina de transiciones vibracionales y
rotacionales de menor energía.
 APLICACIONES
 Determinación de grupos funcionales en moléculas orgánicas
 Análisis de muestras bioquímicas
 Determinación de metales en compuestos de coordinación
 Análisis de semiconductores
 Medidas de color
 Determinación cuantitativa
 Seguimiento de la cinética de procesos químicos y bioquímicos

INSTRUMENTOS

ESPECTOFOTÓMETRO
Es el equipo que utilizamos para medir la absorción o transmisión de luz por parte de una
muestra.
Consta de los siguientes partes:
 Fuente de luz: suele ser una lámpara que emite una luz (por incandescencia de un
filamento) policromática, es decir que contiene distintas longitudes de onda con
distintas intensidades, I0.
 Sistema óptico: a través de filtros, lentes y redes de difracción se focaliza el haz de
luz y se selecciona una longitud de onda fija.
 Compartimiento muestra: es donde se coloca la muestra, con un espesor conocido,
normalmente disuelta y en una cubeta de 1cm de paso óptico, sobre la que se hace
incidir el haz de luz monocromática.
 Sistema óptico: recibe la luz transmitida por la muestra, la focaliza y selecciona por
longitudes de onda.
 Detector: recibe la señal de la intensidad de la luz transmitida a cada longitud de onda
y la transforma en señal eléctrica que un ordenador pueda procesar.
 INSTRUMENTOS DE UN SOLO HAZ PARA LA REGIÓN ULTRAVIOLETA / VISIBLE

Existen distintos instrumentos de un solo haz sin registrador, que se pueden usar para mediciones
tanto en el ultravioleta como en el visible.

Para estos instrumentos la longitud de onda varía desde 190 - 210 nm a 800 -1000 nm. Todos ellos
provistos de lámparas intercambiables de tungsteno e hidrógeno. La mayoría emplea tubos
fotomultiplicadores como detectores y redes para la dispersión. Algunos con dispositivos de lectura
digital.

En la figura se muestra un espectrofotómetro sencillo y barato, el Spectronic 20. Apareciendo en el

mercado en los años 50, aún se utiliza principalmente con fines de enseñanza, por su bajo costo
económico y sus adecuadas características de funcionamiento.

El Spectronic 20 emplea una fuente de luz de filamento de tungsteno, la cual funciona mediante una
fuente de alimentación estabilizada que proporciona una radiación de intensidad constante.

Después de la difracción, en una sencilla red de reflexión, la radiación pasa a través de la cubeta de
muestra o de referencia hacia el fototubo. La señal eléctrica del detector amplificada, acciona un
medidor con una escala de 14 cm, calibrada en transmitancia y absorbancia.

El instrumento está dotado de un obturador consistente en una placa que se coloca de forma
automática entre el haz y el detector, siempre que la cubeta se retira del porta cubetas, entonces
se realiza el ajuste del 0% de T. El dispositivo de control de la luz mostrado en la figura parte (b),
consiste en una ranura en forma de V que puede moverse hacia dentro y hacia fuera del haz, para
así colocar el medidor al 100% de T.

El intervalo del Spectornic 20 va de 340 a 625 nm, un fototubo auxiliar amplia este intervalo hasta
950 nm.
 INSTRUMENTOS DE DOBLE HAZ
En la figura se muestra algunos detalles de la estructura de un espectrofotómetro de
ultravioleta/visible manual de doble haz y bastante barato. La radiación se dispersa con una
red cóncava, que a su vez enfoca el haz en un espejo rotatorio sectorizado. El instrumento
tiene un intervalo de longitudes de onda de 195 a 850 nm. Dichos instrumentos son muy
adecuados para trabajos cuantitativos donde no se necesita obtener un espectro completo.

Figura: Espectrofotómetro manual de doble haz para la región Ultravioleta/ visible, modelo
Hitachi 100-60
Los espectrofotómetros de infrarrojo que se encuentran en el comercio son por lo general
instrumentos de doble haz con registrador, que utilizan redes de reflexión para la dispersión
de la radiación.
En general, los diseños ópticos de los instrumentos dispersivos no difieren demasiado de los
espectrofotómetros ultravioleta/visible de doble haz, excepto que en los instrumentos de
infrarrojo el compartimiento de la muestra y de referencia siempre se colocan entre la fuente
y el monocromador. Esta disposición es posible debido a que la radiación infrarroja, a
diferencia de la radiación ultravioleta/visible no es suficientemente energética para provocar
la descomposición química de la muestra. No obstante, colocar la muestra y la referencia
delante del monocromador tiene la ventaja de que la mayor parte de la radiación dispersada,
que se genera dentro del compartimiento de cubetas, se elimina por el monocromador y así
no alcanza el detector.

Esquema de un espectrofotómetro de doble haz

 APLICACIONES CUANTITATIVAS
TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA
Cuando un rayo de luz de una determinada longitud de onda de intensidad Io incide
perpendicularmente sobre una disolución de un compuesto químico que absorbe luz o
cromóforo, el compuesto absorberá una parte de la radiación incidente (Ia) y dejará pasar el
resto (It), de forma que se cumple: Io = Ia + It
La transmitancia (T) de una sustancia en solución es la relación entre la cantidad de luz
transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado la muestra, It, y la cantidad de
luz que incidió sobre ella, Io, y se representa normalmente en tanto por ciento: % T = It/Io x
100
La transmitancia nos da una medida física de la relación de intensidad incidente y transmitida
al pasar por la muestra. La relación entre %T y la concentración no es lineal, pero asume una
relación logarítmica inversa.
La absorbancia (A) es un concepto más relacionado con la muestra puesto que nos indica
la cantidad de luz absorbida por la misma, y se define como el logaritmo de 1/T, en
consecuencia: A = log 1/T = -log T = -log It/ Io.
Cuando la intensidad incidente y transmitida son iguales (Io = It), la transmitancia es del
100% e indica que la muestra no absorbe a una determinada longitud de onda, y entonces A
vale log 1 = 0.
La cantidad de luz absorbida dependerá de la distancia que atraviesa la luz a través de la
solución del cromóforo y de la concentración de éste.

LEY DE LAMBERT-BEER
Esta ley expresa la relación entre absorbancia de luz monocromática (de longitud de onda
fija) y concentración de un cromóforo en solución:
A = log I/Io = ε·c·l
La absorbancia de una solución es directamente proporcional a su concentración –a mayor
número de moléculas mayor interacción de la luz con ellas-; también depende de la distancia
que recorre la luz por la solución –a igual concentración, cuanto mayor distancia recorre la
luz por la muestra más moléculas se encontrará-; y por último, depende de ε, una constante
de proporcionalidad -denominada coeficiente de extinción- que es específica de cada
cromóforo. Como A es adimensional, las dimensiones de ε dependen de las de c y l. La
segunda magnitud (l) se expresa siempre en cm mientras que la primera (c) se hace, siempre
que sea posible, en M, con lo que las dimensiones de ε resultan ser M-1·cm-1. Este
coeficiente así expresado, en términos de unidades de concentración molar (o un submúltiplo
apropiado), se denomina coeficiente de extinción molar (εM). Cuando, por desconocerse el
peso molecular del soluto, la concentración de la disolución se expresa en otras unidades
distintas de M, por ejemplo g·L-1, las dimensiones de ε resultan ser distintas, por ejemplo g-
1·L·cm-1, y al coeficiente así expresado se denomina coeficiente de extinción específico (εs).
La ley de Lambert-Beer se cumple para soluciones diluidas; para valores de c altos, ε varía
con la concentración, debido a fenómenos de dispersión de la luz, agregación de moléculas,
cambios del medio, etc.

APLICACIONES CUALITATIVAS
La radiación electromagnética se puede ordenar en un espectro que se extiende desde ondas de
frecuencias muy elevadas (longitudes de onda pequeñas; rayos gamma) hasta frecuencias muy bajas
(longitudes de onda altas; ondas de radio). La luz UV-visible es sólo una pequeña parte del espectro
electromagnético, visible (780-380nm); UV (380-200nm).

Esta radiación puede ser emitida por sustancias bajo condiciones de gran excitación, como por
ejemplo, altas temperaturas o descargas eléctricas. La radiación electromagnética al incidir sobre la
materia puede sufrir los siguientes procesos:
 EJEMPLO

GRUPO FUNCIONAL max (nm) 

Acetilenos 170-175 4500
Diacetilenos 225-235 200
Eninos 220-225 10000
Alenos 175-185 10000
Cumulenos (Butatrieno) 241 20300
Nitrilos 340 120
Nitroderivados 210 16000

270-280 200
Nitratos 260-270 150
Nitritos 350 150
Azo derivados 350 bajo
Diazo derivados 400 3
Sulfóxidos 210-215 1600
Sulfonas   208
Vinilsulfonas 210 300

GRUPO FUNCIONAL max (nm) 

Acetilenos 170-175 4500
Diacetilenos 225-235 200
Eninos 220-225 10000
Alenos 175-185 10000
Cumulenos (Butatrieno) 241 20300
Nitrilos 340 120
Nitroderivados 210 16000

270-280 200
Nitratos 260-270 150
Nitritos 350 150
Azo derivados 350 bajo
Diazo derivados 400 3
Sulfóxidos 210-215 1600
Sulfonas   208
Vinilsulfonas 210 300
 BIBLIOGRAFÍA
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2. http://proyectodecalibracion.blogspot.com.co/ (OBSIONAL – Definición del
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7. http://www.uhv.es/sites/pecas/doc/poster_ultravioleta.pdf
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9. http://ocw.uc3m.es/ingenieria-quimica/quimica-ii/practicas-1/PR-F-Anexos.pdf
10. https://sstti.ua.es/es/instrumentacion-cientifica/unidad-de-rayos-x-de-
monocristal-y-espectroscopias-vibracional-y-optica/espectroscopia-
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11. http://campus.fca.uncu.edu.ar/pluginfile.php/24633/mod_resource/content/1/C
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12. http://www.uhu.es/tamara.garcia/quimI/apuntes/TEMA%203.pdf
13. http://ocw.uc3m.es/ingenieria-quimica/quimica-ii/practicas-1/PR-F-Anexos.pdf
14. http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
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15. http://www.ugr.es/~quiored/espec/uv.htm