Ubicación y subdivisión del espectro de UV-Vis en el rango electromagnético.

La radiación electromagnética se puede ordenar en un espectro que se extiende desde ondas

de frecuencias muy elevadas (longitudes de onda pequeñas; rayos gamma) hasta
frecuencias muy bajas (longitudes de onda altas; ondas de radio). La luz UV-visible es sólo
una pequeña parte del espectro electromagnético, visible (780-380nm); UV (380-200nm).

Esta radiación puede ser emitida por sustancias bajo condiciones de gran excitación, como,
por ejemplo, altas temperaturas o descargas eléctricas. La radiación electromagnética al
incidir sobre la materia puede sufrir los siguientes procesos:
1. Absorción
2. Transmisión
3. Reflexión
4. Refracción
5. Dispersión
 Espectroscopia UV-Visible

Para que la radiación electromagnética incidente, interaccione con la materia tiene que
tener una λ del mismo tamaño o menor que las dimensiones del cuerpo irradiado. Es por
ello que la radiación de la región del ultravioleta (≈ 1-400 nm) nos permite obtener
información de las transiciones electrónicas de las moléculas.

La espectroscopia UV-Vis se basa en el análisis de la cantidad de radiación

electromagnética (en el rango de longitudes de onda del ultravioleta y visible) que puede
absorber o transmitir una muestra en función de la cantidad de sustancia presente.

Todas las técnicas de absorción suponen que cuando una radiación incide sobre una
muestra se produce una absorción parcial de esta radiación, lo que hace que se produzca
una transición entre los niveles energéticos de la sustancia: átomo, molécula o ión, X,
pasando esta al estado excitado, X* , el resto de radiación es transmitida. Así analizando
una u otra podemos relacionar la cantidad de especie activa presente en la muestra.

∆E = Ef -E0 = hν
∆E es característico de cada sustancia, lo que nos proporciona un análisis cualitativo de un
analito en una muestra. Además, la cantidad de E absorbida o transmitida es proporcional a
la concentración de X con lo que también podemos hacer un análisis cuantitativo. La
proporcionalidad ente intensidad de luz absorbida o transmitida y la concentración de
analito viene definida por la ley de Lambert-Beer
CLASIFICACION Y REGLAS DE SELECCION DE LAS TRANSICIONES

ELECTRONICAS.
 -Transiciones permitidas:
Reglas de selección:
1) Primera regla. Las transiciones son mono electrónicas. Esto quiere decir que cada
transición implicará únicamente a un electrón
2) Segunda regla. Regla de selección de espín. No se pueden modificar las orientaciones
relativas de espín de un complejo. En otras palabras, las transiciones permitidas entre
estados implican que no haya variación de espín (∆S = 0). Esta regla es también muy
rigurosa y, en todo caso, las bandas correspondientes a transiciones que violan esta regla
son muy débiles.
3) Tercera regla. Regla de selección de Laporte. En una molécula o ion centro simétrico las
únicas transiciones permitidas son aquéllas que implican un cambio de paridad:

Esta regla prohíbe, por ejemplo, las transiciones entre orbitales del mismo subnivel (p. ej.
p-p o d-d, ya que dichos orbitales tienen la misma paridad(fig 3.4.)

Sin embargo, esta regla puede ser mitigada a través de varios mecanismos. Por ejemplo, la
centro simetría de una molécula se rompe debido a las vibraciones moleculares no centro
simétricas.
Las intensidades típicas de las bandas U-UV, clasificadas de acuerdo a su cumplimiento de
la segunda y tercera regla de selección, se recogen en la tabla 3.3.
 Definición e interpretación de términos

ESPECTRO ULTRAVIOLETA-VISIBLE

Un espectro ultravioleta-visible es esencialmente un gráfico de absorbancia de luz frente a una

longitud de onda en el rango del ultravioleta o la luz visible. Este espectro puede ser producido
directamente con los espectrofotómetros más sofisticados, o bien pueden registrarse los datos de
una sola longitud de onda con los instrumentos más simples. La longitud de onda se representa con
el símbolo λ. Del mismo modo, para una determinada sustancia, puede hacerse un gráfico estándar
del coeficiente de extinción (ε) frente a la longitud de onda (λ). Este gráfico estándar sería
efectivamente "la concentración corregida" y, por tanto, independiente de la concentración. Para
una sustancia determinada, la longitud de onda en la cual se produce el máximo de absorbancia en
el espectro se llama λ max, y se pronuncia "lambda-max".

Las reglas de Woodward-Fieser son un conjunto de observaciones empíricas que pueden

utilizarse para predecir λ max, la longitud de onda de la absorción UV-Vis, para
compuestos orgánicos conjugados como dienos y cetonas.

Las longitudes de onda de los picos de absorción pueden correlacionarse con los tipos de
enlace en una determinada molécula, y son valiosos para determinar los grupos funcionales
dentro de la molécula. La absorción UV-Vis no es, sin embargo, una prueba específica para
ningún compuesto determinado. La naturaleza del disolvente, el pH de la solución, la
temperatura, la concentración de electrolitos, y la presencia de sustancias interferentes
pueden influir en los espectros de absorción de los compuestos, así como las variaciones en
la anchura de la hendidura (ancho de banda efectivo) en el espectrofotómetro.

Sustancias con electrones ,  y , y su importancia en el lugar de la señal

Modos de excitación electrónica
Cuando un fotón UV-Visible de energía adecuada incide en una especie absorbente, un
electrón es promovido desde su estado fundamental a un estado electrónico excitado. En
absorción UV-Visible, pueden observarse las distintas transiciones electrónicas:

Transiciones σ→σ*
λ150 nm . Este tipo de transiciones se dan sobre todo en hidrocarburos que únicamente
poseen enlaces σ C-H o C-C. La energía requerida para que tenga lugar esta transición es
relativamente grande, perteneciente a la región espectral denominada ultravioleta de vacío.
Transiciones π→σ*
λ entre 150-200 nm . Correspondientes a hidrocarburos que poseen átomos con pares de
electrones no compartidos (electrones de no enlace). La energía necesaria para que se
produzca esta transición sigue siendo alta (aunque menor que en las σ→σ* ) perteneciendo
éstas a la región espectral UV Lejano.

Transiciones n→π* y π→π*

λ entre 200-700 nm. La mayoría de las aplicaciones de espectroscopia UV-Visible están
basadas en transiciones que ocurren en esta zona. Se requiere que las especies participantes
aporten un sistema de electrones π (grupos cromóforos: compuestos con insaturaciones,
sistemas aromáticos multicíclicos, etc.). Las energías de excitación en las transiciones
π→π* son medianamente altas, correspondiendo a la región UV Lejano y Próximo,
mientras que las n→π* son considerablemente menores, correspondiendo a la región visible
del espectro.
En espectroscopia UV-Vis se irradia con luz de energía conocida suficiente como para
provocar transiciones electrónicas, es decir promover un electrón desde un orbital de baja
energía a uno vacante de alta energía.
Transiciones electrónicas posibles entre orbitales n: orbital que contiene par de electrones
no compartidos (ejemplo en : O, N, Cl)
Las transiciones más favorecidas son entre el orbital ocupado de energía más alta (HOMO)
y el orbital desocupado de energía más baja (LUMO)
el espectrómetro UV-Vis registra las longitudes de onda donde se registra absorción y
cuantifica la absorción.
El espectro se registra como absorbancia (A) Vs. longitud de onda (Å), las bandas del
espectro UV son anchas por que incluyen la estructura fina de transiciones vibracionales y
rotacionales de menor energía.

Factores que afectan el lugar de la señal en UV-Vis.

En esta sección se muestran los factores que influyen en el uso de la espectrofotometría de
absorción molecular. Usualmente la concentración de un analito en una solución analizada
es evaluada de la absorbancia de la muestra y una curva de calibración. La curva de
calibración se obtiene generalmente de la absorción medida de un estándar externo.
Tratamiento de la muestra
El tratamiento de la muestra varía considerablemente dependiendo de cada aplicación. La
mayoría de las mediciones son determinadas en solución o sólidos que son disueltos. En
algunas ocasiones el análisis se puede realizar directamente de la absorbancia de la forma
química original, pero comúnmente es necesario derivatizar el compuesto por que las
bandas de absorción del analito en la forma química original poseen una inadecuada
absorción o absorben a longitudes inusuales.
Condiciones en solución
En procedimientos analíticos primero se debe determinar la forma absorbente del analito
que se va a utilizar. La naturaleza de las especies absorbidas influye en gran medida en la
determinación de la concentración, la sensibilidad de la calibración, el límite de detección,
la precisión, la exactitud y la linealidad. En el análisis, la absorbancia de algunas especies
puede ser muy grande para obtener una buena detección y precisión. El solvente y algunas
condiciones de la solución como el pH, la fuerza iónica y la temperatura deben ser
optimizados y controlados para minimizar las interferencias y mantener la linealidad (para
prevenir la descomposición por oxidación, foto descomposición u otros mecanismos). Por
otro lado se debe de mantener el equilibrio y maximizar el tiempo de estabilidad de la
forma absorbente.
Opciones de instrumentación Existen varios espectrofotómetros, el tipo de instrumento
que se va a utilizar depende del costo, simplicidad, precisión, exactitud y detectabilidad.
Para una rutina analítica estable, los procedimientos involucran la determinación de la
misma especie en un gran número de muestras, un fotómetro simple de bajo costo es
muchas veces adecuado para estos análisis. Los espectrofotómetros con un ancho de banda
espectral fijo de bajo costo son convenientes para mucho procedimientos rutinarios. Los
espectrofotómetros más caros y de alta calidad proveen un amplio rango de longitudes y
mejores límites de detección Instrumentos espectrales de un solo rayo son poco complejos
y de bajo costo, proveen alta radiación y poco ruido de fondo por que tienen menos
componentes ópticos. La elección entre un espectrofotómetro de doble rayo y un
espectrofotómetro de un solo rayo no es tan clara como en el pasado. Los parámetros
reportados son obtenidos aplicando procesos estandarizados de prueba. El rango de
longitud es usado particularmente para decidir si tiene capacidad de radiar luz UV o NIR
dependiendo de lo que se requiera. La exactitud de la longitud es evaluada por la
comparación de la longitud de un monocromador a una longitud conocida a una línea
máxima de emisión de una fuente de Hg a baja presión o una lámpara de D2 en el
espectrofotómetro. La repetibilidad de la longitud es una medida de la precisión de una
medida anterior.

No obstante, hay una gran cantidad de factores que originan variaciones en los valores
de λmax y εM, entre los que se incluye el pH, la polaridad del solvente o moléculas vecinas
y la orientación de los cromóforos vecinos; y cada uno afecta de forma particular. Por
ejemplo, variaciones originadas por cambios de pH son debidas al efecto de éste sobre la
ionización del compuesto. A continuación, se muestran como ejemplo los espectros de
absorción de HNTS (un reactivo empleado para la determinación de especies oxidantes) y
comprobándose que por espectrometría se puede seguir el efecto que ejercen el pH y los
oxidantes.

Componentes fundamentales del equipo de UV-Vis.

Fuentes:
La fuente ideal de luz sería aquella que generara una intensidad constante a todas las
longitudes de onda, con bajo ruido y gran estabilidad. Sin embargo, estas fuentes no
existen. Dos son las fuentes utilizadas, comúnmente, en los espectrofotómetros UV-visible.
La primera fuente, la lámpara de arco de deuterio, producen buen continuo de intensidad en
la región UV y ofrece una intensidad útil en la región visible (Figura 16). Aunque las
modernas lámparas de arco de deuterio tienen bajo ruido, éste, a menudo, es un factor
limitante en el ruido general del instrumento. Con el tiempo, la intensidad de luz de una
lámpara de arco de deuterio disminuye de modo homogéneo. Estas lámparas tienen una
vida media (el tiempo requerido para que la intensidad caiga a la mitad de su valor inicial)
de, aproximadamente, 1000 horas.
La segunda fuente, la lámpara halógena de wolframio ofrece buena intensidad en parte
del espectro y sobre el rango visible completo. Este tipo de lámpara tiene muy bajo ruido y
poca deriva y tiene, típicamente, una vida útil de 10000h.La mayoría de los
espectrofotómetros utilizados para medir el rango UV-visible contienen ambos tipos de
lámparas. En estos instrumentos, se utiliza un selector de fuente para cambiar de lámpara
según corresponda, o se mezcla la luz procedente de las dos fuentes para dar lugar a una
sola banda ancha.
La mayoría de los espectrofotómetros utilizados para medir el rango UV-visible contienen
ambos tipos de lámparas. En estos instrumentos, se utiliza un selector de fuente para
cambiar de lámpara según corresponda, o se mezcla la luz procedente de las dos fuentes
para dar lugar a una sola banda ancha.
Una fuente alternativa de luz es la lámpara de xenón, que produce un buen continuo en las
regiones completas UV y visible. Sin embargo, debido a que el ruido de las lámparas
actuales de xenón es significativamente peor que el de las lámparas de deuterio o
wolframio, las lámparas de xenon se utilizan sólo para aplicaciones como medidas de
reflectancia difusa, en las que el factor principal en una intensidad elevada.
Estos dispositivos causan que diferentes longitudes de onda de luz sean dispersadas con
ángulos distintos. Cuando se combinan con una rendija adecuada de salida, pueden
utilizarse para seleccionar una longitud de onda (o, más exactamente, una estrecha banda de
onda) de luz de una fuente continua. Comúnmente, se utilizan dos dispositivos de
dispersión, prismas y redes holográficas de difracción, en los espectrofotómetros UV-
visible.
Cuando la luz solar incide sobre un prisma, se genera un arcoíris. Este principio se utiliza
en los espectrofotómetros. Los prismas son simples y baratos, pero la dispersión resultante
es angularmente no lineal, Además, él ángulo de dispersión depende de la temperatura.
Por esto, la mayoría de los espectrofotómetros modernos contienen redes holográficas en
lugar de prismas. Estos dispositivos son de cristal, en los que se realizan hendiduras muy
estrechas. Tradicionalmente esto se realizaba mecánicamente, pero actualmente se utiliza
un proceso óptico holográfico. Las dimensiones de las hendiduras son del mismo orden que
las longitudes de onda de la luz que se va dispersar. Finalmente, se aplica un recubrimiento
de aluminio para crear una superficie reflectante. La luz que incide sobre la red se refleja
con diferentes ángulos, dependiendo de Las redes holográficas producen una dispersión
angular lineal con la longitud de onda y son insensibles a la temperatura. Sin embargo,
reflejan luz de diferentes órdenes, que se solapan (Figura 19b). Como resultado, deben
utilizarse filtros para asegurar que sólo la luz del orden deseado alcanza el detector. Una red
cóncava dispersa y enfoca la luz, simultáneamente.
Un monocromador consta de una rendija de entrada, un dispositivo de dispersión y una
rendija de salida. Idealmente, lo que sale es luz monocromática. En la práctica, sin
embargo, es una banda, óptimamente, simétrica. La anchura de la banda a la mitad de su
altura, es la anchura de banda instrumental (IBW).
Detectores:
Un detector convierte una señal de luz en una señal eléctrica. Idealmente, debe ofrecer una
respuesta lineal en un amplio rango, con bajo ruido y alta sensibilidad. Normalmente, los
espectrofotómetros contienen un tubo fotomultiplicador o un tubo fotodiodo, como
detector.
El tubo fotomultiplicador combina la conversión de la señal con varias etapas de
amplificación, dentro del cuerpo del tubo. El material del cátodo determina la sensibilidad
espectral. Un solo fotomultiplicador da lugar a una buena sensibilidad en el rango UV-
visible completo. Este tipo de detector ofrece alta sensibilidad a bajos niveles de luz. Sin
embargo, en aplicaciones analíticas espectroscópicas, una alta sensibilidad está asociada
con bajas concentraciones, lo que resulta en bajas absorbancias, lo que al final da lugar a
altos niveles de intensidad. Para detectar con exactitud pequeñas diferencias entre las
medidas de blanco y de muestra, el detector debe tener bajo ruido a altos niveles de
intensidad.
Cada vez más, los fotodiodos se utilizan como detectores en espectrofotómetros (Figura
21). Tienen un rango dinámico más ancho y son más robustos que los fotomultiplicadores.
En un fotodiodo, la luz que incide sobre el material semiconductor permite que los
electrones fluyan a su través, reduciendo la carga en un condensador conectado a él. La
carga necesaria para recargar el condensador, a intervalos regulares, es proporcional a la
intensidad de la luz. Los primeros fotodiodos tenían baja sensibilidad en el rango UV, pero
este problema se ha corregido en los detectores modernos. Los límites de detección son,
aproximadamente, 170–1100nm para detectores de silicio.
El detector de fotodiodos:

Algunos espectrofotómetros modernos contienen una matriz de fotodiodos. Esta consiste en

una serie de fotodiodos colocados a los lados de un cristal de silicio. Cada diodo tiene un
condensador dedicado y está conectado, por un interruptor, a una línea común de salida.
Los interruptores se controlan por un registro de cambio Inicialmente, los condensadores
están cargados. Cuando los fotones penetran el silicio, se generan portadores de carga
eléctrica libres que descargan los condensadores. Estos se recargan a intervalos regulares,
que representan el periodo de medida para cada ciclo de barrido.

Diagrama esquemático de una matriz de fotodiodos:

La cantidad de carga necesaria para recargar los condensa-dores es proporcional al número
de fotones detectados porcada diodo, lo que al final es proporcional a la intensidad de luz.
El espectro de intensidad se obtiene midiendo la variación de intensidad de luz sobre el
rango completo de longitud de onda. La matriz, típicamente, comprende entre200 y 1000
elementos, dependiendo del instrumento y de la aplicación. Por ejemplo, la matriz de
diodos del espectrofotómetro Agilent 8453 consta de 1024 elementos y el área fotosensible
mide, aproximadamente 25×0.5mm. El ciclo de lectura, que corresponde al tiempo de
iluminación, es100ms.La tecnología de matriz de fotodiodos es similar a la del
microprocesador. Las matrices son dispositivos complejos, pero, debido a su estado sólido,
tienen mayor fiabilidad.
Óptica:
Para transmitir y enfocar la luz por el instrumento, se utilizan lentes o espejos cóncavos.
Las lentes son baratas, pero sufren de aberración cromática, es decir, luz de diferentes
longitudes de onda no se enfoca en exactamente el mismo punto del espacio. Sin embargo,
con un diseño cuidadoso, la aberración cromática de las lentes individuales de un sistema
óptico, puede utilizarse para cancelarse mutuamente, y puede construirse un sistema óptico
eficaz con estos componentes simples y baratos. Las lentes acromáticas combinan múltiples
lentes de diferentes cristales con distintos índices de refracción, en una lente bastante libre
de aberración cromática. Estas lentes se utilizan en las cámaras. Ofrecen un buen
rendimiento, pero a un coste relativamente alto. Los espejos cóncavos son menos costosos
de fabricar que las lentes acromáticas, completamente libres de aberración. Sin embargo, la
superficie de aluminio se corroe fácilmente, resultando en una pérdida de eficacia. En cada
superficie óptica, incluyendo las interfases entre los componentes de una lente acromática,
el 5–10% de la luz se pierde por absorbancia o reflexión. Por lo tanto, idealmente, los
espectrofotómetros deberían estar diseñados con un mínimo número de superficies ópticas.

Bibliografía

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