LA ESPECTROFOTOMETRÍA, es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones

biológicas. El espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la radiación

absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y
una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.

Todas las sustancias pueden absorber energía radiante, aun el vidrio que parece ser
completamente transparente absorbe longitud de ondas que pertenecen al espectro visible; el
agua absorbe fuertemente en la región del infrarrojo.

La absorción de las radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas depende de la estructura de

las moléculas, y es característica para cada sustancia química.

Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energía es absorbida; la energía radiante no
puede producir ningún efecto sin ser absorbida.

El color de las sustancias se debe a que éstas absorben ciertas longitudes de onda de la luz
blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no
absorbida.

https://www.equiposylaboratorio.com/portal/articulo-ampliado/espectrofotometria

TECNICAS ESPECTROFOTOMETRICAS

INTERACCION RADIACCION-MUESTRA

TRANSMISION: se produce cuando la radiación incide sobre una sustancia y no se produce

perdida de energía ni cambios de dirección.

ABSORCIÓN: se produce cuando existe una perdida de intensidad de la radiación al atravesar la

sustancia. Las moléculas o partículas que absorben radiación ganan energía (estado excitado).

EMISION: se produce cuando las moléculas o átomos en estado excitado liberan su energía y
vuelven a su estado de reposo.

DISPERSION: se produce cuando el haz de radiación choca contra una partícula es suspensión y
cambia de dirección sin variar su energía.

REFRACCION: el hay de radiación al atravesar una solución se desvía o cambia de dirección por
la diferente naturaleza del medio de propagación.

REFLEXION: el haz de luz incide sobre una superficie y se produce un efecto de rebote y cambio
de dirección.

DIFRACCION: el haz de luz se desvía al pasar por el extremo de una superficie o al atravesar
una rendija.

https://iesjuandearejula.com/wp-content/uploads/2020/09/TECNICAS-
ESPECTROFOTOMETRICAS-1.pdf
ESPECTROFOTOMETRIA INFARROJA

La espectroscopia infrarroja se basa en la absorción de los rayos infrarrojos de luz por varias
moléculas en una muestra. Esta permite analizar todas las longitudes de onda del espectro
infrarrojo simultáneamente, siendo las que pertenecen a la región media la de mayor utilidad
práctica, cuya extensión se encuentra entre un rango de 4000 y 650 cm -1, ofreciendo un
método rápido y confiable para el análisis de compuestos orgánicos, células y tejidos entre
otras.

https://revistas.curn.edu.co/index.php/cienciaysalud/article/view/254

La espectroscopía de adsorción en el infrarrojo cercano y medio (NIR y MIR por sus siglas en
inglés), se ha empleado con éxito en la caracterización de distintas formas de materia orgánica
y sus derivados, considerándose como una herramienta adecuada en el área de geoquímica
orgánica, con la ventaja operativa de la rapidez y bajo costo de análisis.

Específicamente, a partir de espectros NIR se ha caracterizado gasolina en términos de

parámetros de calidad como octanaje, concentración de hidrocarburos saturados, olefínicos y
aromáticos, y concentración de benceno, etanol, t-butil-metil-éter y oxígeno, se ha
determinado la composición SARA de crudos desde condensados hasta pesados y se ha
establecido un modelo para predecir la gravedad específica y curvas de punto de ebullición en
petróleo.

Específicamente, a partir de espectros NIR se ha caracterizado gasolina en términos de

parámetros de calidad como octanaje, concentración de hidrocarburos saturados, olefínicos y
aromáticos, y concentración de benceno, etanol, t-butil-metil-éter y oxígeno, se ha
determinado la composición SARA de crudos desde condensados hasta pesados y se ha
establecido un modelo para predecir la gravedad específica y curvas de punto de ebullición en
petróleo.

Mientras que, a través de espectros MIR, proponen el uso de índices basados en la integración
de bandas IR para cuantificar compuestos alifáticos, aromáticos, grupos funcionales y grado de
condensación de estructuras poliaromáticas.

https://ve.scielo.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0798-40652014000200009

ULTRAVIOLETA UV/VISIBLE

son una fuente de luz, un soporte para la muestra, un dispositivo de dispersión para separar las
diferentes longitudes de onda de la luz y un detector adecuado. Dicho método permite un
análisis cualitativo y cuantitativo, el primero que permite no solo la identificación de la
sustancia(identificar grupos funcionales o confirmar la identidad de un compuesto
haciendo coincidir el espectro de absorbancia) sino más concretamente la posición de cada
uno de los compuestos dado que cada muestra tiene un espectro UV/VIS característico y único
que puede utilizarse para su identificación, a través de la comparación de la muestra con los
espectros de compuestos puros conocidos. En cuanto al análisis cuantitativo permite
determinar la concentración del analito, analizar dicho el tiempo y finalmente evaluar los
parámetros fisicoquímicos.
https://hemeroteca.unad.edu.co/index.php/wpecbti/article/view/4777

La ley de Absorción o ley de Lambert-Beer relaciona la concentración de un analito absorbente

con el espesor de muestra y con su absorbancia. Es necesario considerar una serie de
limitaciones químicas e instrumentales a la hora de aplicar esta ley.

https://riunet.upv.es/handle/10251/16360?show=full

- LEY DE LAMBERT: Esta ley establece que cuando pasa luz monocromática por un medio
homogéneo, la disminución de la intensidad del haz de luz incidente es proporcional al espesor
del medio, lo que equivale a decir que la intensidad de la luz transmitida disminuye
exponencialmente al aumentar aritméticamente el espesor del medio absorbente.

- LEY DE BEER: La intensidad de un haz de luz monocromática disminuye exponencialmente al

aumentar aritméticamente la concentración de la sustancia absorbente, cuando este haz pasa
a través de un medio homogéneo.

https://es.scribd.com/document/494181716/LEY-DE-LAMBERT-BEER

DERIVACIÓN DE LA LEY DE LAMBERT-BEER

La ley de Lambert-Beer se puede derivar considerando dos principios fundamentales: la ley de

Lambert, que establece que la disminución de la intensidad de la luz es proporcional a la
longitud del camino óptico en un medio homogéneo, y la ley de Beer, que postula que esta
disminución es proporcional a la concentración del absorbente.

Combinando ambas leyes, se obtiene una expresión que relaciona la intensidad de la luz
incidente (I0) y la intensidad de la luz transmitida (I) con la concentración y la longitud del
camino óptico:

Log(I0/I) = ε · c · l

https://abdatum.com/ciencia/ley-lambert-beer