PRACTICA N 6°

DETECTAR LA PRESENCIA DE ENZIMAS CATALASAS EN

CELULAS PROCARIOTAS (BACTERIAS) Y EUCARIOTAS

(GLOBULOS ROJOS)

I. OBJETIVOS :

 Reconocer la presencia de enzimas catalasas en células

bacterianas y glóbulos rojos
 Reconocer la reacción química de las enzimas catalasas

II. INTRODUCCION :
La catalasa es una enzima perteneciente a la categoría de las oxidorreductasas
que cataliza la descomposición del peróxido de hidrogeno (H2O2) en oxígeno y
agua .Esta enzima utiliza como cofactor al grupo hemo y al manganeso. El
peróxido de hidrogeno es un residuo del metabolismo celular de muchos
organismos vivos y tiene entre otras una función protectora contra
microorganismos patógenos, principalmente anaerobios, pero dada su toxicidad
debe transformarse rápidamente en compuestos menos peligrosos. Esta función
la efectúa esta enzima que cataliza su descomposición en agua y oxígeno.
Además la catalasa se usa en la industria textil para la eliminación del peróxido
de hidrogeno, así como en menor medida se emplea en la limpieza de lentes de
contacto que se esterilizado en una solución de peróxido de hidrogeno. La
ausencia congénita de catalasa es causante de una acatalasemia (o
acatalasia),la enfermedad de Takahara que se manifiesta por la ausencia de
actividad de la catalasa en los glóbulos rojos y con severas infecciones
gangrenosas de la boca, pudiendo producir la perdida de los dientes y graves
destrucciones de los maxilares y regiones blandas que los cubre. Enfermedad
congénitas del Japón (2 de 100.000 habitantes sufren de este trastorno).(Biólogo
Cabrejos Montalvo )

La catalasa es una de las enzimas más abundantes en la naturaleza y se

encuentra ampliamente distribuida en el organismo humano, aunque su
actividad varía en dependencia del tejido; ésta resulta más elevada en el hígado
y los riñones, más baja en el tejido conectivo y los epitelios, y prácticamente nula
en el tejido nervioso. A nivel celular se localiza en las mitocondrias y los
peroxisomas, excepto en los eritrocitos, donde se encuentra en el citosol. Esta
enzima es una metaloproteína tetramérica, cuyo peso molecular se encuentra en
el rango de 210-280 kD. Consta de 4 subunidades idénticas que se mantienen
unidas por interacciones no covalentes. Cada subunidad contiene un grupo
prostético de protoporfirina IX y el contenido protohémico y el de hierro
representan un 1,1 % y 0,09 % respectivamente del peso molecular total de la
enzima.(Aguirre.2005)

En algunas especies la CAT contiene moléculas de nicotinamín adenín

dinucleótido fosfatado en su forma reducida (NADPH) ligadas estrechamente a la
enzima; así se ha demostrado que la CAT humana y la de res están ligadas a 4
moléculas de NADPH, 1 en cada subunidad y que no existe interacción directa
entre el presente grupo hemo y por supuesto el infaltable NADPH.
El NADPH unido a la enzima no está involucrado en su actividad catalítica o
peroxidativa. Esta molécula puede intervenir en la prevención y reversión parcial
de la inactivación de la CAT por su propio sustrato tóxico y estabiliza a la enzima
por tener un efecto alostérico sobre su conformación. Además, la CAT constituye
un reservorio de NADPH, lo cual juega un importante papel durante el estrés
oxidativo. (Oliver, R. 2001)
III. MARERIALES :

 Cepa bacteriana de
Escherichia coli  Lamina porta objetos
 Serratia spp
 Agua oxigenada
 Pseudomonas spp
 Sangre  Goteros

IV. PROCEDIMIENTO :

 Colocar en cada cepa bacteriana unas gotas de peróxido de

hidrogeno y observar. En una lámina portaobjetos colocar una
gota de sangre de humano y colocar una gota de agua oxigenada
y observar.(ANEXO N 1°)
 Reacción positiva: si se observa burbujeo. Bacterias catalasas
positivas: Staphylococcus spp, Serratia spp y Pseudomonas
spp.Bacterias catalasas negativas: Streptococcus spp (ANEXO N 2°)

 REACCION QUIMICA :

H2O2 BACTERIA H2O + O2

CATALASAS

REACCION QUIMICA DE LAS ENZIMAS BURBUJEO

CATALASAS
V. CONCLUSION :

 Se puede concluir que existen dos tipos de catalasa las cuales son
positiva y negativa es una de las más abundantes en nuestra
naturaleza y en el organismo humano

 Bueno en esta práctica hemos podido identificar la presencia de

enzimas Catalasa y es positiva ya que podemos observar el burbujeo
en la muestra propiamente trabajada y esto se debe al agua y oxigeno
presentes en dicha muestra. (C.ANEXO N 3°)

VI. REFERENCIAS :

 Aguirre, J., Rios-Momberg, M., Hewitt, D., and Hansberg, W. 2005.

Reactive oxygen species and development in microbial eukaryotes.
Trends in Microbiology 13:111-118.
Recuperado de :
http://www.redalyc.org/pdf/612/61224108.pdf

 Oliver, R. 2001 Identification of two highly divergent catalase genes in

the fungal tomato pathogen, Cladosporium fulvum. European Journal
of Biochemistry 268:15-24.
Recuperado de :
http://www.redalyc.org/pdf/612/61224108.pdf
VII. ANEXOS :
PROCEDIMIENTO ANEXO N 1°

PROCEDIMIENTO ANEXO N 2°
 CONCLUSIONES ANEXO N 3°

Podemos observar el burbujeo presente en dicha

Muestra .
 CUESTIONARIO:

1. Explica en que consiste la desnaturalización de las proteínas

En bioquímica, la desnaturalización es un cambio estructural de

las proteínas o ácidos nucleicos, donde pierden su estructura nativa, y de
esta forma su óptimo funcionamiento y a veces también cambian sus

propiedades físico-químicas.

Las proteínas se desnaturalizan cuando pierden su estructura tridimensional

(conformación espacial) y así el característico plegamiento de su estructura.

Las proteínas son filamentos largos de aminoácidos unidos en una secuencia

específica. Son creadas por los ribosomas que "leen" codones de los genes y
ensamblan la combinación requerida de aminoácidos por la instrucción
genética, en un proceso conocido como transcripción genética. Las proteínas
recién creadas experimentan una modificación pos modificación en la que se
agregan átomos o moléculas adicionales, como el cobre, zinc y hierro. Una
vez que finaliza este proceso, la proteína comienza a plegarse sin alterar su
secuencia (espontáneamente, y a veces con asistencia de enzimas) de forma
tal que los residuos hidrófobos de la proteína quedan encerrados dentro de su
estructura y los elementos hidrófilos quedan expuestos al exterior. La forma
final de la proteína determina cómo interaccionará con el entorno.

Si la forma de la proteína es alterada por algún factor externo (por ejemplo,

aplicándole calor, ácidos o álcalis), no es capaz de cumplir su función celular.
Éste es el proceso llamado desnaturalización.
 2. Menciona cual es la temperatura máxima de una enzima
bacteriana

En primer lugar debemos saber que las enzimas son proteínas, moléculas
frágiles, sensibles y que a altas temperaturas sufren lo que conocemos como
como su desnaturalización. En general la temperatura crítica de las enzimas
oscila entre los 55 y 60 °c aunque las enzimas de algunas bacterias, que
viven en aguas termales, llegan a tener temperaturas de 80 a 88°c