CICLO DE KREBS

DETERMINACION DE ENZIMA CATALASA

DRA. MA. CECILIA PUENTE TRIGO

Objetivos
 Repasar el Ciclo de Krebs y Cadena
respiratoria.
 Identificar cualitativamente a la
enzima catalasa.
 Conocer la importancia clínica de la
catalasa en nuestro organismo.
CICLO DE KREBS
 Es una ruta metabólica o sucesión de
reacciones químicas, que forma parte de la
respiración celular en todas las células
aerobias, donde es liberada energía
almacenada a través de la oxidación de la
Acetil-Coenzima A (Acetil-CoA) derivado de
glúcidos, lípidos y proteínas en dióxido de
carbono y energía química en forma de
Adenosin Trifosfato (ATP).
 En la célula eucariota, el ciclo de Krebs se
realiza en la matriz mitocondrial.
RESPIRACION CELULAR
 Durante la respiración celular,
una molécula de glucosa se
degrada en dióxido de carbono y
agua.
 Al mismo tiempo, se produce un
poco de ATP en las reacciones
que transforman a la glucosa.
 Mas adelante se genera mucho
más ATP en un proceso llamado
fosforilación oxidativa.
 La oxidación del piruvato a
Acetil Co A , el ciclo del ácido
cítrico y la fosforilación
oxidativa necesitan de la
presencia de oxígeno para
desarrollarse.
ETAPAS DE LA RESPIRACIÓN
CELULAR
 1.- Obtención de la Acetil CoA a partir de:
 • GLUCOLISIS. La glucosa, que tiene 6
carbonos, se convierte en 2 piruvatos (de 3 carbonos
cada uno) y se obtiene ATP y NADH. . El piruvato
viaja a la matriz mitocondrial , se oxida y convierte
en una molécula de dos carbonos unida a la
coenzima A llamada acetil-CoA.
 Estas reacciones ocurren en el citosol. La glucólisis
también puede ocurrir en ausencia de oxígeno en un
proceso llamado fermentación.
 • AMINOÁCIDOS CETOGENICOS
 • BETA OXIDACIÓN DE LOS ÁCIDOS GRASOS
ETAPAS RESPIRACIÓN
CELULAR
 2.- Ciclo del ácido cítrico. El acetil-CoA se combina
con una molécula de cuatro carbonos llamada
oxalacetato y forma citrato que atraviesa un ciclo de
reacciones para finalmente regenerar la molécula
inicial de cuatro carbonos el oxalacetato.
 En el proceso se genera ATP (o GTP en algunos casos),
NAD reducido y FAD reducido y se libera dióxido de
carbono. Estas reacciones ocurren en la matriz
mitocondrial.
 3.- Cadena respiratoria . El NAD y FAD reducidos
generan electrones que pasan través de una serie de
proteínas incrustadas en la membrana interna de la
mitocondria llamada también cadena de transporte de
electrones, donde el oxígeno recibe los electrones y
recoge protones del medio para formar agua.
ETAPAS RESPIRACIÓN
CELULAR
 4.- Fosforilación oxidativa. El movimiento de los
electrones por la cadena libera energía que se
utiliza para bombear protones desde la matriz
hacia el espacio intermembranal, con lo que se
forma un gradiente.
 Los protones fluyen de regreso hacia la matriz a
través de una enzima llamada ATP sintasa, para
generar ATP.
APLICACIÓN CLÍNICA
 La utilidad de la respiración celular, esta
orientada a la clasificación de las
bacterias en aerobias y anaerobias de
acuerdo a la utilización que hacen del
oxígeno.
 La respiración aeróbica es la energía que
proporciona un proceso complejo cuando
el O2 y la glucosa se combinan dentro de
las mitocondrias celulares.
 Las bacterias aerobias usan O2 para la
respiración celular es decir utilizan el
oxígeno presente en el aire para el
intercambio de energía.
 La respiración anaeróbica significa
conversión de energía con menos
eficiencia para la producción de energía.
Las bacterias anaerobias no necesitan
oxígeno del aire para el intercambio de
energía.
PRUEBA DE CATALASA EN
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

La enzima catalasa está presente en la mayoría de las bacterias

aerobias y anaerobias facultativas, con la excepción importante
de los estreptococos y enterococos.
Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas sp. dan
positivo en la prueba de catalasa.
 QUE ES UNA ENZIMA?
 Son biomoléculas especializadas en la catálisis de las
reacciones químicas que tienen lugar en la célula. Son muy
eficaces como catalizadores ya que son capaces de
aumentar la velocidad de las reacciones químicas y además
son altamente específicas ya que cada una de ellas induce
la transformación de un sólo tipo de sustancia y no de otras
que se puedan encontrar en el medio de reacción.
CLASIFICACION DE LAS ENZIMAS
Ej. Oxidoreductasas catalizan reacciones de oxido reducción.
ENZIMAS- BARRERAS FISIOLOGICAS
COTRA LOS RADICALES LIBRES: CATALASA
 Durante los procesos biológicos y en el constante intercambio
con el medio, se generan especies químicas conocidas como
radicales libres, que se caracterizan por presentar un electrón
desapareado y por ser muy reactivas. De todos los radicales
resultan de gran interés las especies reactivas derivadas del
oxígeno (EROS).
 Las principales EROS son: el anión superóxido (O2), el radical
hidroxilo (OH+), el oxígeno singlete (O-O)y el peróxido de
hidrógeno (H2O2).
 Estas especies radicálicas están implicadas en el daño celular
de forma tal que las agresiones oxidantes pueden generar
carcinogénesis, enfermedades inflamatorias, senectud celular
y enfermedades neurodegenerativas, entre otros procesos
patológicos.
CATALASA – Importancia Clínica
 En el organismo existe un sistema de
protección antioxidante formado por enzimas
y compuestos de bajo peso molecular.
 Una de estas enzimas que interviene en la
protección y en el mantenimiento del
balance oxidante/antioxidante es la catalasa
(CAT) o peróxido de hidrógeno
oxidorreductasa.
 La Catalasa es de las enzimas más
abundantes en la naturaleza y se encuentra
ampliamente distribuida en el organismo
humano, aunque su actividad varía de
acuerdo al tipo de tejido.
CATALASA – Importancia Clínica
 La catalasa resulta más elevada en el hígado
y los riñones, más baja en el tejido conectivo
y los epitelios, y prácticamente nula en el
tejido nervioso.
 A nivel celular Catalasa se localiza en las
mitocondrias y los peroxisomas, excepto en
los eritrocitos, donde se encuentra en el
citosol.
 El peróxido de hidrógeno es un residuo del
metabolismo celular de muchos organismos
vivos, si bien tiene función protectora contra
microorganismos patógenos (anaerobios),
pero dada su toxicidad debe transformarse
rápidamente en compuestos menos
peligrosos.
CATALASA – Importancia Clínica

 La Catalasa efectúa la descomposición del H2O2 en

agua y oxígeno, dos sustancias que no dañan al
organismo.
 Al realizar la descomposición, la catalasa
neutraliza la acción tóxica del peróxido de
hidrógeno y equilibra su producción en el
organismo.
 La catalasa cataliza la descomposición del peróxido
de hidrógeno (agua oxigenada) en oxígeno y agua,
según la siguiente reacción química:

 2 H2O2 + CATALASA → 2 H2O + O2

CATALASA – Importancia Clínica
 La catalasa se considera una de las enzimas más
eficaces que se encuentran en las células. Esto es
porque una única molécula de catalasa puede
descomponer millones de moléculas de peróxido
de hidrógeno.
 La ausencia congénita de catalasa es causante de
una acatalasemia (o acatalasia), la enfermedad de
Takahara que se manifiesta por la ausencia de
actividad de la catalasa en los glóbulos rojos, se
forman severas úlceras e infecciones gangrenosas
de la boca, causando la pérdida de los dientes y
graves destrucciones de los maxilares y regiones
blandas que los cubre. Es una enfermedad
congénita del Japón.
MATERIALES
 2 TUBOS DE ENSAYO
 MECHERO O ESTUFA ELECTRICA
 AGUA DESTILADA
 PEROXIDO DE HIDROGENO (AGUA OXIGENADA)
 PEDAZO DE HIGADO FRESCO DE VACA

 PICAR EL HIGADO Y COLOCAR SEA EN TUBOS DE ENSAYO O CAJA

PETRI.
 HACER GOTEAR EL AGUA OXIGENADA SOBRE EL HIGADO, OBSERVAR.
 EN UN TUBO CALENTAR EL HIGADO EN EL MECHERO CON UN POCO
DE AGUA HASTA QUE HIERVA, O USAR UN VASO DE PRECIPITADO Y
UNA HORNALLA, HACER HERVIR POR 5 MIN, DEJAR ENFRIAR Y
LUEGO COLOCAR UN CHORRITO DE AGUA OXIGENADA, OBSERVAR.
 INTERPRETAR LA PRUEBA.
Prueba de Enzima Catalasa
Actividad enzimática de la catalasa
https://www.youtube.com/watch?v=eF3JsOYeN-k
GRACIAS POR SU ATENCIÓN!!!