Análisis de Coliformes NMP con CVVB, SIM, para determinar

contaminación en la fuente de agua de San Antonio

Boris Zamorano 4-789-684, Yovany Arcia 9-751-43, Profesor: José Him

Centro Regional Universitario de Veraguas, Universidad de Panamá

Resumen: Las pruebas para la determinación de contaminantes en agua son variados, sin embargo el más eficaz hasta ahora ha
sido el de NMP con el cual usando bacterias E.coli como indicador de presencia de contaminación se logra comprender el estado de
una afluente de agua ya sea rio o lago subterráneo, etc. Se trabajara con una muestra de agua de la fuente de San Antonio una
comunidad que usa este ojo de agua para el consumo diario. Las pruebas que se realizaran serán 3 en total las cuales se inicia con
NMP para saber si existe presencia de Coliformes, luego la prueba de sim que se utiliza para diferenciación de microorganismos
como Enterobacterias, por último la prueba de Indol la cual tiene como objetivo el verificar la presencia de microorganismos como
E.coli.

Palabras claves: Afluente, Coliformes, Entero bacterias.

Abstract: The tests for the determination of pollutants in water are varied, however the most effective until now has been the NMP
with which using E. Coli bacteria as an indicator of the presence of contamination, it is possible to understand the state of a tributary
of water either river or underground lake, etc. We will work with a sample of water from the San Antonio source, a community that
uses this water hole for daily consumption. The tests that will be done will be 3 in total which starts with NMP to know if there is a
presence of Coliforms, then the sim test that is used to differentiate microorganisms such as Enterobacteriaceae, finally the indole
test which has the objective of verify the presence of microorganisms such as E.coli.

Keywords Affluent, Coliforms, Enterobacteria.

1. Introducción crecimiento en tres diluciones sucesivas, suelen denominarse

Los Coliformes fecales son un grupo importante de
microorganismos indicadores de inocuidad en alimentos,
constituido principalmente por Escherichia coli, el cual es
considerado como indicador de contaminación reciente de
origen fecal, por ello la importancia de investigar su presencia
y determinar rápidamente el nivel poblacional en alimentos. (1)
La ubicación de la muestra es una fuente de agua de consumo
de la comunidad de san Antonio que la utiliza a diario para el
consumo y sus necesidades básicas. La contaminación fecal ha
sido y sigue siendo el principal riesgo sanitario en el agua, ya
que supone la incorporación de microorganismos patógenos
que pueden provocar enfermedades en la salud humana. Por
ello, el control sanitario de riesgos microbiológicos es tan
importante, y constituye una medida sanitaria básica para
mantener un grado de salud adecuado en la población (2) Para
la época de mayores precipitaciones se encontraron altos
valores de Coliformes totales y fecales (3) NMP Este número
es calculado a partir de la observación del crecimiento respecto
a la aparición de turbidez, en cultivos en caldo duplicados,
inoculados con porciones de un ml de diluciones decimales de
la muestra. Las cifras que representan resultados positivos con
número significativo (4) El método de NMP consiste
principalmente en determinar la presencia o ausencia sea
positiva o negativa de atributos específicos de
microorganismos en copias obtenidas por diluciones
consecutivas a partir de muestras de lácteos. Se basa en el
principio de que una única célula viva puede desarrollarse y
producir un cultivo turbio. (5)
2. Metodología
La muestra de agua fue obtenida previamente de la fuente
de san Antonio, La determinación de microorganismos
Coliformes totales por el método del Número más Probable
(NMP), se fundamenta en la capacidad de este grupo
microbiano de fermentar la lactosa con producción de ácido y
gas al incubarlos a 35°C  1C durante 48 h., utilizando un
medio de cultivo que contenga sales biliares. (6) El grupo de
bacterias Coliformes incluye bacilos aeróbicos y anaeróbicos
facultativos, Gram-negativos, no esporíferos que fermentan
lactosa y forman ácido y gas a 35°C dentro de 48 horas. Los
miembros de Enterobacteriacae abarcan la mayoría de este
grupo, pero organismos tales como Aeromonas spp. También
pueden ser incluidos. Los procedimientos para detectar y
confirmar Coliformes se utilizan en las pruebas de agua,
alimentos, productos lácteos y otros materiales. El caldo de
bilis verde brillante al 2% se utiliza para confirmar un resultado
de prueba presuntivo positivo. (7) En el medio de cultivo, la
peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado
desarrollo bacteriano, la bilis y el verde brillante son los
agentes selectivos que inhiben el desarrollo de bacterias Gram
Positivas y Gram negativas a excepción de Coliformes, y la
lactosa es el hidrato de carbono fermentable. Es una propiedad
del grupo Coliformes, la fermentación de la lactosa con
producción de ácido y gas. (8) Luego se utiliza el medio de sim
el cual, Este medio se utiliza para comprobar la motilidad,
formación de sulfuros de hidrógeno y la producción de indol
por parte de la bacteria. Y por ultimo Se usa el reactivo de
Kobacs, que manifiesta la degradación del triptofano por la
Figura 3. Prueba NMP con CVVB tubo negativo
enzima triptofanasa en indol, que se combina con el
aldehído(dimetil benzaldehído) presente en el reactivo de
Kobacs, para producir un color rojo.

3. Resultados
La primera prueba al realizar fue la de NMP

Figura 4. Tubos con prueba de sim el cual 2 dieron negativos

Figura 1. Los resultados en la tabla fueron 3/3/2

Los cual indica la presencia de 240bacterias por ml. En la
prueba de NMP.
Figura 2. Prueba de nmp con cvvb tubo positivo
4. Discusión
Para la prueba de número más probable los tubos de 1ml
dieron todos positivos, los tubos de 0.1 ml dieron positivos, y
por último los tubos de 0.01ml solo 2 de ellos dieron positivo
y uno negativo, esto da a entender que la muestra posee alto
grado de contaminación por Enterobacterias. Mediante la tabla
para NMP se da conoce que existe 24 bacterias por ml en los
tubos de la muestra. Las pruebas de sim en las muestras luego
de la incubación dieron que los 9 tubos hubo movimiento, sin
embargo al realizar la prueba de Indol 2 de ellos dieron
negativo. Se a de recordar que la prueba de Indol sirve para
comprobar la presencia de organismos capaces de fermentar
los hidratos de carbono.
En otro estudio sobre la calidad bacteriológica del agua,
señalaron que la especie bacteriana aceptado por todos los
organismos internacionales como indicador de contaminación
fecal, es E. coli, debido a su capacidad de sobrevivir por
mayor tiempo en el agua que otros microorganismos
patógenos; esta especie ha sido reportada como el agente
causal de diversos cuadros infecciosos (9). La vigilancia
continua de la calidad del agua de embalses y ríos, es una
herramienta fundamental para
El manejo adecuado del recurso hídrico. En el tratamiento y
análisis de los resultados de los diferentes parámetros de
calidad de agua se utiliza el índice de calidad de agua. De este
modo tener un control del estado de los recursos hídricos de un
lugar. (10)
5. Conclusiones
la ciudad de Saltillo, Coahuila. [Internet]. 2012. Available from:
http://www.bvsde.paho.org/bvsaidis/mexico13/034.pdf
5. Ben-David A, Davidson CE. Estimation method for serial
dilution experiments. J Microbiol Methods [Internet]. Elsevier B.V.;
2014;107:214–21. Available from:
http://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0167701214002577

6. Kornacki J.L. & Johnson J.L. (2001) “Enterobacteriaceae,

 Este trabajo está enfocado en detectar la presencia o Coliforms, and Escherichia coli as Quality and Safety Indicators”. In:
ausencia de Enterobaterias en lugares de importancia Compendium of Methods for the Microbiological Examination of
para la población. Los resultados obtenidos dieron Foods. 4th ed. Downs F.P. & Ito K. (Eds.) APHA. Washington. 69-
positivos a E.coli en el ojo de agua de la comunidad de 82.
san Antonio, el cual es preocupante que sus ciudadanos 7. Neogen. (n.d.). Caldo de bilis verde brillante al 2%. at:
no estén al tanto del peligro de salud en el que se http://foodsafety.neogen.com/sp/brilliant-green-bile-broth-2-
encuentran. percent [Accessed 15 Nov. 2018].
 La muestra de agua fue recogida días antes de lloviera
y no se tiene conocimiento de que días anteriores haya 8. Corry, J.E.L., Curtos, G.D.W., Baird, R.M. 2003.
afectado la afluente por causa de precipitaciones. Handbook of Culture Media for Food Microbiology, Volumen
 Diferentes artículos explican con claridad la gran 37, Elsevier Science.
ventaja que es la bacteria E.coli al detectar
contaminaciones. 9. Coutiño M., Rodriguez,E., Perez, R., De Igartua E. &
 Un muestro más adecuado nos puede indicar la Lopez F. (2008). Bacterias transmitidas por aguas y alimentos
veracidad de los resultados ya que por mínimo 30 datos
que producen enfermedades. Ciencia y hombre. 21: 31-36.
es lo recomendad.
 Los métodos para la determinación de contaminantes en
10. INFORME DE CALIDAD DE AGUA DE LA CUENCA
afluentes hídricas son de vital importancia para la
protección de la población en general. DEL CANAL. (2010). [ebook] Panamá: Departamento de
Ambiente, Agua y Energía, pp.56-64. Available at:
https://micanaldepanama.com/wpcontent/uploads/2012/06/20
10.pdf [Accessed 20 Nov. 2018].
REFERENCIAS
1. Ortiz L, Miriam C, & Ríos de S, Manuela. (2006). Comparación
de los métodos PetrifilmTM coliformes y Número Más Probable
(NMP) para la determinación de coliformes fecales en muestras de
queso blanco. Revista del Instituto Nacional de Higiene Rafael
Rangel, 37(2), 15-18. Recuperado en 23 de noviembre de 2018, de
http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S07980
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2. MARÍN B, GARAY JA, RAMÍREZ G, BETANCOURT J,

TRONCOSO W, GÓMEZ ML, et al. Diagnóstico y evaluación de la
calidad ambiental marina en el Caribe y Pacífico colombiano red de
vigilancia para la conservación y protección de las aguas marinas y
costeras de Colombia. Diagnóstico Nacional y Regional 2004.
INVEMAR; 2004b.

3. LINA MARÍA RAMOS-ORTEGA1, LUÍS A. VIDAL1,

SANDRA VILARDY Q1 , LINA SAAVEDRA-DÍAZ11 Instituto de
Investigaciones Tropicales, Universidad del Magdalena, Santa Marta,
Colombia. Lina María Ramos Ortega, Villa del Mar, Manzana K Casa
1; Santa Marta, gfitoplancton@unimagdalena.edu.co Presentado 4 de
septiembre de 2007, aceptado 11 de junio de 2008, correcciones 14 de
agosto de 2008.

4. Chacón Garza LE, Villarreal Sánchez JA, Villarreal López JL.

Comparación de dos modos de número más probable (NMP) con la
cuenta viable en placa (CVP) y evaluación de la calidad del agua de