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Tema: CRECIMIENTO Y MUERTE MICROBIANA

Docente: MSc. Vania Mallqui Brito.

FARMACIA Y BIOQUÍMICA

Escuela Profesional
Crecimiento microbiano
 Aumento ordenado de los
 Constituyentes químicos de la
célula.
 Aumento del número de células
Forma acúmulos llamados
“colonias” UFC.
 Nutrientes orgánicos e
inorgánicos.
 Cultivos asincrónicos y
sincrónicos.
 Explosión crecimiento tras un
periodo de incubación.
 Cultivo axénico, para
identificarlos.
 Tiempo de generación: 1 célula
se generan aprox. 20’.
Nº Generaciones Nº Células Log 10 Nº
células
0 1 0
5 (25) 32 1,5
10 (210) 1.024 3,0
15 (215) 32,768 4,5
18 (218) 262,144 5,4
20 (220) 1048,576 6,0
Se diferencian 4 fases:
1. Fase latencia (0).
2. Fase exponencial o logarítmica.
3. Fase estacionaria.
4. Fase de muerte o deterioro
logarítmico.

Mantenimiento fase exponencial o

cultivo continuo (quimiostato).
 Muerte microbiana
 Pérdida irreversible desarrollo y división.
 «Muerte» no pueden formar colonias en un medio. Algunas pueden estar «viables» y
parecen «muertas».
 Esterilización, aniquilar todos los MO en una preparación.
 Fármacos (sustancias antimicrobianas) la concentración es directamente proporcional
al intervalo necesario para aniquilar a una población.

Esterilización por radiación ultravioleta

Esterilización por Calor:
 Calor seco.
 Calor húmedo (autoclave).
 Pasteurización.
 Cuantificación decimal para reducir 10 veces la viabilidad de
MO a un tiempo y una Tº determinada.

TDP: Tº más baja necesaria para destruir una

suspensión microbiana en 10’.
TDT: Tiempo más corto necesario para destruir una
suspensión microbiana a una Tº y condiciones
específicas.
D: Tiempo requerido para matar el 90% de
microorganismos y esporas de una muestra a una Tº
específica.
Esterilización por filtración
Esterilización por vapor
 Antimicrobianos - Definición

1. Biocida: amplio espectro, químico o físico, desactiva MO. Ej radiación, fenol.

2. Bacteriostático: biocida inhibe la multiplicación.
3. Bactericida: biocida aniquila bacterias.
4. Esterilización: eliminar MO viables, incluyendo esporas.
5. Desinfectantes: reducir el número MO viables.
6. Séptico: MO patógenos en tejidos vivos.
7. Antiséptico: destruye o inhibe MO en tejidos vivos.
8. Aséptico: libre de MO.
9. Preservación: prevención de la multiplicación MO en fármacos y alimentos.
10. Antibióticos: compuestos orgánicos naturales o sintéticos inhiben o destruyen
ciertas bacterias a una concentración reducida.
 ALGUNOS BIOCIDAS
SUSTANCIA APLICACIONES
Ac. Orgánicos
- Ac. Benzoico Preservación
- Ac. propiónico Sal de Ca o Na. Conservador.
Alcoholes Antiséptico, desinfectante,
- Etanol conservador.
Aldehidos Desinfección, esterilización,
- Glutaraldehido preservación.
Bisfenoles Antiséptico, actividad antiplaca.
- Triclosán
Comp. Amonio cuaternario Desinfectante, antiséptico,
- Cetrimida preservación.
Peroxígenos Desinfectante, esterilización.
- H2O2
- O3, ac. Paracético
CMI: CONCENTRACIÓN MÍNIMA INHIBITORIA
Antimicrobianos – Mecanismo de acción
1. Daño al ADN.
2. Desnaturalización de proteínas (estructura terciaria).
3. Desorganización de la MP o PC.
4. Sustracción de los grupos sulfhidrilo libres.
5. Antagonismo químico: interferencia entre cierta enzima y
su sustrato.
Mecanismo de acción de los antibióticos
Inversión de la acción antibacteriana
1. Eliminación del fármaco.
2. Inversión por sustrato (inhibición competitiva).
3. Desactivación del fármaco.
4. Protección contra la lisis.
 Cultivo de
microorganismos
 Actividad de agua
 Relación entre la presión de vapor del aire alrededor de un alimento (p) y la
presión de vapor del agua pura (po), ambos a una misma Tº. Normalmente se
expresa con las siglas AW (Activity Water).
 Cantidad de agua libre que hay en un alimento, la cantidad de agua disponible
para reaccionar químicamente con otras sustancias y provocar el crecimiento
microbiano.
 Factores de crecimiento
1. Nutrientes (medios de cultivo)
Macronutrientes.
Micronutrientes o elementos trazas.
Vitaminas.

Constituyentes habituales:
Agentes gelificantes: agar (agarosa, agaropectina, galactosa y
ác. Urónico).
Extractos: levadura, carne, hígado, semilla, etc.
Peptonas: soya, carne, caseína, gelatina.
Sistemas amortiguadores: fosfatos.
Indicadores de pH: rojo neutro, cristal violeta, rojo de fenol.
Agentes reductores: microaerofilia o anaerofilia.
Agentes selectivos: sales biliares, antibióticos, etc.
TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO
 Composición: naturales, sintéticos y
semisintéticos.
 Consistencia: líquidos, sólidos y semisólidos.
 Aplicación: básicos, enriquecidos, selectivos,
diferenciales, de enriquecimiento (líquido),
transporte.
 Concentración de iones hidrógeno pH

 Cada MO rango de pH en cual puede crecer

y un pH óptimo.
 MO acidófilos, neutrófilos y alcalófilos.
 Mayoría bacterias de interés médico, pH
óptimo 7,2 - 7,6 M. tuberculosis resisten
valores muy bajos de pH.
 MO al multiplicarse y realizar sus funciones
metabólicas, modifican pH del medio, al
prepararse con buffers lo mantienen.
 pH ácido efecto letal, conservación
alimentos (ácido acético).
 Temperatura

 Cada bacteria tiene Tº mínima no puede proliferar, Tº óptima en la cual el

crecimiento es más rápido y Tº máxima por encima de la cual no puede
multiplicarse.
 A Tº muy bajas, falta de crecimiento por reducción velocidad de reacción y al
cambio de estado lípidos MC (cristalizan) «Choque de enfriamiento rápido».
 A Tº altas, desnaturalización proteínas (muerte). Proteínas del golpe de calor.
 Psicrótrofos son mesófilos (psicrófilos facultativos).
 MO interés médico son mesófilos y algunos psicrótrofos.
 MO hipertermófilos (Tº ebullición).
Tipo MO Tº mínima Tº óptima Tº máxima
Psicrófilo -5 +5 12 – 15 15 – 20
Psicrótrofo -5 +5 25 – 30 30 – 35
Mesófilo 5 - 15 30 – 35 35 – 47
Termófilo 40 -45 60 - 90 60 - 90
 Aireación

 MO aerobios obligados necesitan O2 como aceptor de hidrógeno.

 El metabolismo aerobio produce compuestos reactivos H2O2, O2-, en
presencia Fe, genera (OH) dañan cualquier molécula.
 Algunos MO superóxido dismutasa, catalasa.
 Anaerobios estrictos carecen de superóxido dismutasa y catalasa.
 Anaerobios obligados debe eliminar el O2, el tioglicolato actúa como agente
reductor que disminuye el potencial redox del medio, generando un gradiente
de concentración de oxígeno a lo largo del tubo (medios líquidos), en sólidos
se sellan con parafina.
 Concentración iónica y presión osmótica
 MO marinos y adaptados crecer en soluciones hipertónicas.
 MO requieren concentraciones elevadas de sales: halófilos.
 MO presión osmótica elevada: osmófilos.
Aislamiento de MO en cultivos puros
Estudio sus propiedades, aislarlo de otros MO.
1. Cultivo en placa
2. Dilución

1. Cultivo en placa
 Medio de cultivo estéril a 50ºC es líquido, por debajo se gelifica.
a. Método de Vertido en placa:
Se mezcla una suspensión de células con agar líquido y se
vierte en placa petri.
b. Técnica de estriado en placa:
Crear estrias de la suspensión original sobre placa de agar con
asa de siembra.
c. Técnica de extensión en placa:
Un pequeño volumen se extiende uniforme sobre la placa con
varilla de vidrio.
Estriado en placa
Estriado en placa
2. Dilución
 Diluciones seriadas y se cultivan en placa.

RECUENTO
DE VIABLES
 Recuento microscópico directo
Cámara de Petroff-Hauser

Area Volumen Factor

Tipo de cuadro
[cm2] [ml] [1/Volumen]
Cuadrado total 1.00 x 10-2 2.00 x 10-5 5.00 x 104
Cuadrado grande 4.00 x 10-4 8.00 x 10-7 1.25 x 106
Cuadrado pequeño 2.50 x 10-5 5.00 x 10-8 2.00 x 107
TURBIDIMETRÍA
MUESTRAS CLÍNICAS
ANTIBIOGRAMA

 Método de Kirby Bauer.

 Identificar al
microorganismo.
 Halos de inhibición.
 Comparar con el patrón.
 Determinar sensibilidad o
resistencia al antibiótico.
¡Gracias!