Instituto de Investigación

Interdisciplinar de Ciencias Biomédicas

USEK

NUTRICION Y CRECIMIENTO MICROBIANO

CONTROL E INHIBICIÓN DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

Clases 5 y 6
03/04/23 y 05/04/23
Escuela de Obstetricia y Neonatología
Guido Mora Longa, PhD
Soledad Henríquez, PhD
Envoltura Celular
Tipos de Flagelo

Flagelo: Salmonella
enteritidis

Flagelo: Vibrio cholerae

Flagelo:
Spirillum sp.
Flagelo: Helicobacter
pylori
Tipos de Flagelo

Flagelo perítrico
Salmonella
enteritidis

Flagelo monótrico (polar)

Vibrio cholerae

Flagelo anfítrico
Spirillum sp.
Flagelo lofótrico
Helicobacter pylori
Apéndices proteicos: Fimbrias

Pequeños apéndices o
microfibrillas de naturaleza
proteica.

Papel en adherencia específica

Fimbrias

¿participan en el movimiento?

Escherichia coli
Apéndices proteicos: Fimbrias

Pequeños apéndices o
microfibrillas de naturaleza
proteica.

Papel en adherencia específica

(a bacterias y a células Fimbrias
eucariontes).

No participan en el movimiento.

Escherichia coli
Cápsula

El poder de la cápsula
Algunos ejemplos:
 Neisseria meningitidis Tipo b
 Streptococcus pneumoniae
 Haemophilus influenzae Tipo b
 Escherichia coli K1
Salmonella Typhi
Esporas Se describen sólo en dos géneros
bacterianos, patógenos importantes para el
ser humano: Clostridium y Bacillus. Ejemplos
Clostridium tetani y Bacillus anthracis.

Las esporas se originan dentro de la célula:

(Proceso de diferenciación celular)

Estructura compuesta fundamentalmente

por DNA bacteriano muy compactado…

Función: resistencia al calor, desecación,

radiación, agentes químicos, etc.

Viable por cientos de años

División Bacteriana: Fisión Binaria
1. La bacteria duplica su
cromosoma

2. Luego la célula aumenta en

tamaño

3. Se inicia la división de la
célula y la formación del
tabique que separa las
células hijas

4. Resultado: dos células

idénticas o clonales
Factores que afectan el Crecimiento Bacteriano

Temperatura
pH
Disponibilidad de agua y nutrientes
Disponibilidad de oxígeno
Factores que afectan el Crecimiento Bacteriano: Oxígeno
Resazurina
(Indicador de presencia de oxígeno)

(a) Aeróbica
(b)
(c)
(d)
(e)
Factores que afectan el Crecimiento Bacteriano: Oxígeno
Resazurina
(Indicador de presencia de oxígeno)

(a) Aeróbica
(b) Anaeróbica
(c) Facultativa
(d) Microaerofílica
(e) Anaerobio aerotolerante
Medios de Cultivo
¿Cómo se observa desarrollo bacteriano en los medios de cultivo?

En medio líquido
• Turbidez
• Aparición de grumos
• Formación de un velo o película en la superficie

En medio sólido: formación de colonias

Colonia: Multiplicación de una bacteria que

forma una masa visible a ojo desnudo
Medios de Cultivo
Según su presentación...

En placa

En tubo
Medios de Cultivo
Según su estado físico

Medio sólido Medio semi sólido

(agar 1,5%) (agar 0,8%)
Agar tendido

Medio líquido
Medios de Cultivo
¿Cuál es la utilidad de los medios de cultivo?

Aislamiento de bacterias a partir de una muestra (agua, secreciones,

aire, alimentos, muestras clínicas)

Obtención de cultivos puros, para el estudio de propiedades fisiológicas

e identificación

Conservación de cepas

Evaluación de antibióticos

Pruebas de esterilidad

Fabricación de sueros, vacunas, etc.

 Medios de Cultivo
Condiciones de los medios de cultivo…

Esterilidad…

Tener todos los nutrientes esenciales (agua, fuente de nitrógeno,

fuente de carbono, sales minerales, micronutrientes, vitaminas, etc.)
…

Cumplir con requisitos físicos: temperatura (37ºC), pH neutro (7.0 -

7.2 ), condición atmosférica (10% CO2)…

Estar protegidos del medio ambiente (Evitar su contaminación con

microbiota ambiental y/o comensal)…
Medios de Cultivo Según su utilidad
Agar Chocolate

1.- Corriente (básicos):

Contienen sólo los elementos nutritivos esenciales. Ej. caldo Luria
(medio líquido) y Agar Corriente (medio sólido): Agar 1,5 %; NaCl 0,5%; Agua
destilada y pH 6,8. Agar Nutritivo: además contiene Peptona 0,5%; Extracto
de carne/levadura 0,3%. Temperatura 25 - 35ºC.

2.- Especiales:
• Mejorados o enriquecidos: Son medios corrientes adicionados de Agar MacConkey
sustancias de alto valor nutritivo (sangre, suero, vitaminas, extractos de
levaduras), que permiten el desarrollo de bacterias más exigentes. Ej.:
Agar sangre (medio sólido), Agar chocolate (sangre calentada a 56ºC).

• Medios selectivos: Contienen sustancias inhibidoras para

determinadas bacterias. Ej.: Agar SS para Salmonella y Shigella, Thayer
Martin para N. gonorrhoeae y N. meningitidis, Agar MacConkey para Agar Sangre
Gram (-).

• Medios diferenciales: Permiten establecer si una bacteria desarrolla

una determinada función metabólica que la diferencia de otras bacterias.
Ej.: Citrato de Simmons, TSI, MIO, LIA, Caldo urea, Agar MacConkey.
Medios de Cultivo

Selectivo y diferencial

E. coli S. Typhimurium S. aureus

Gram (-), lac+ Gram (-), lac- Gram (+)

Agar Mc Conkey
 Medios de Cultivo

Enriquecido y diferencial

-hemólisis: Parcial -hemólisis: Total

-hemólisis: No produce hemólisis

Medios de Cultivo
Enriquecidos

Streptococcus pyogenes

Bacillus subtilis
 Antimicrobianos
Agentes físicos, asepsia y esterilidad
Conceptos generales…
Esterilización: “es el proceso por el cual células vivas, esporas y virus son
destruidos o removidos de un objeto o hábitat”. Un objeto estéril está libre de
microorganismos vivos, esporas o de cualquier agente infeccioso.

Desinfección: “es el proceso de eliminar, inhibir o remover

microorganismos que puedan causar enfermedad”. Un desinfectante no
necesariamente esteriliza un objeto, ya que pueden permanecer algunos
microorganismos o esporas.

Desinfectante: “agente, generalmente químico, utilizado para llevar a

cabo la desinfección”, normalmente se utilizan sobre objetos inanimados.

Antiséptico: “agente químico utilizado sobre tejido vivo”

Sanitización: “es el proceso de reducir la población de microorganismos a
niveles considerados seguros por los estándares de salud pública”.
Agentes antimicrobianos…

Agentes Físicos (esterilizantes)

Calor: causa la denaturación de las proteínas y ácidos nucleicos,
destruye las membranas. Calor húmedo (20 min a 121ºC) y Calor seco (2
horas a 180ºC)
Radiaciones: producen daño al DNA (rayos X).

Horno
Autoclave
Agentes antimicrobianos…

Agentes Químicos (desinfectantes)

Alcoholes, fenoles: desnaturan las proteínas.

Agentes oxidantes: oxidan los grupos –SH de las proteínas.

Agentes alquilantes: sustituyen los átomos de H por radicales

alquilo.

Detergentes: se insertan en la membrana celular e interfieren

con sus funciones.
Actividad de los antimicrobianos…

La actividad de los antimicrobianos se puede ver afectada por....

1. Tamaño de la población:
... un mayor número de microorganismos demoran más en morir que un
número menor de ellos.

2. Composición de la población:
... la efectividad de un agente varía de acuerdo de acuerdo a la
naturaleza del organismo; los microorganismos varían mucho en sensibilidad
(bacteria, levadura, espora, etc.)

3. Concentración o intensidad del agente antimicrobiano:

... generalmente un agente más concentrado o más intenso elimina más
rápido a los microorganismos (no siempre...etanol 70% más efectivo que
etanol 95%)
Actividad de los antimicrobianos…

La actividad de los antimicrobianos se puede ver afectada por....

4. Duración de la exposición:
... mientras más tiempo este el microorganismo expuesto al agente,
mayor será el número de organismos eliminados.

5. Temperatura:
... un aumento de la temperatura en que se aplica el agente aumenta la
efectividad de éste.

6. Medioambiente local:
... el medioambiente que rodea al microorganismo lo puede proteger de
la acción del agente antimicrobiano, la materia orgánica de la comida
protege a las bacterias de la esterilización por calor.

(todo el material quirúrgico debe ser lavado antes de esterilizar)

Generalidades sobre antimicrobianos…

“Sustancia o Agente capaz de actuar sobre los

microorganismos, ya sea inhibiendo su
crecimiento o causando su muerte”

ANTIMICROBIANOS

(a) Bacteriostáticos…
Inhiben el crecimiento del microorganismo

(b) Bactericidas…
Matan a los microorganismos sin necesidad de
destruirlos o lisarlos

(c) Bacteriolíticos…
Matan a los microorganismos por lisis
Requerimientos para un Antimicrobiano (Quimioterápico)…

1.- Especificidad:

Se refiere al espectro de la actividad antimicrobiana, definida por su

capacidad de unión a un sitio específico de la bacteria.

2.- Eficacia “in vivo”:

Debe ser bacteriostático o bactericida in vivo, es decir, su acción no debe ser

revertida en el interior del organismo.

3.- Toxicidad selectiva:

Debe ser tóxico para el microorganismo, pero ser inocuo para el hospedero.
Esto es indispensable para la utilización del antimicrobiano en clínica.
Antecedentes históricos…

Paul Ehrlich (1908):

Creó el primer compuesto químico Estructura química del Salvarsan
sintético (Salvarsan) que podía curar (“La bala mágica”)
una infección, la sífilis (Treponema
pallidum).
 Antecedentes históricos. Descubrimiento de los antibióticos…

Alexander Fleming (1928): Penicillium notatum

Observó que el hongo Penicillium notatum
impedía el crecimiento de Staphylococcus aureus

Florey y Chain (1939): aislaron Penicilina G

Antecedentes históricos: Descubrimiento de los antibióticos…

Foto original tomada por Fleming Foto actual

El hongo Penicillium notatum impide el

crecimiento de Staphylococcus aureus...
Antibióticos…

Antibióticos:

Según su origen, los antibióticos pueden ser:

Biológicos (naturales): sintetizados por organismos vivos, ej.

Penicilina, Cloranfenicol.

Semisintéticos: obtenidos por modificación química de

antibióticos naturales, ej. Ampicilina.

Sintéticos: generados mediante síntesis química, ej. Sulfas.

Clasificación de los Antibióticos
Clasificación de los antibióticos…
Según su mecanismo de acción...

Que alteran o inhiben la síntesis de la pared celular

Que inhiben la síntesis de ácidos nucleicos

Que inhiben la síntesis de proteínas a nivel del ribosoma

Que afectan la función de la membrana citoplasmática

Que inhiben la síntesis de metabolitos esenciales

Evaluación de la susceptibilidad a un antibiótico…

En el laboratorio se puede estudiar la susceptibilidad a

antimicrobianos que presentan bacterias aisladas desde
una muestra biológica...

La susceptibilidad a antimicrobianos, junto con la

identidad de la bacteria aislada y ciertos factores del
hospedero constituyen las bases para la elección de una
terapia antimicrobiana adecuada…

Pruebas de susceptibilidad antimicrobiana in vitro:

Test por dilución
Test por difusión

Se realizan según ciertas normas previamente estandarizadas (CLSI)

Instituto de Estándares Clínicos
Antibiograma por dilución…
Técnica de referencia en la mayoría de los estudios clínicos de
susceptibilidad a antimicrobianos.
Entrega un resultado cuantitativo, ya que permite determinar la
concentración inhibitoria mínima (CIM).
Se puede realizar en medio líquido (dilución en caldo) o en medio
sólido (dilución en agar).
Método complejo y de alto costo.

Lectura del CIM

Dilución seriada en caldo CIM

Definiciones…

Concentración inhibitoria mínima (CIM)

Corresponde a la menor concentración de antimicrobiano que
inhibe el crecimiento bacteriano luego de 18 a 24 horas de
incubación.

Concentración bactericida mínima (CBM )

Corresponde a la menor concentración capaz de matar un 99,9%
la población bacteriana.
Factores que afectan la actividad antibacteriana “in vivo”…

Estado de actividad metabólica de los m.o. en el hospedero, puede ser

muy diferente, generalmente menor, que en el laboratorio.
Distribución del medicamento en los diferentes tejidos y órganos: es
muy variable, ej. algunos medicamentos no penetran al SNC.
Localización de los microorganismos: pueden ser parásitos
intracelulares, lo que dificulta la acción antimicrobiana.
Sustancias que interfieren con el medicamento: el medicamento puede
ser inactivado por condiciones ambientales dentro del hospedero (ej.
pH) o fijado por proteínas sanguíneas o tisulares.
Antibiograma por difusión…

“(Técnica de Kirby-Bauer)”

Análisis de Resistente Sensible

varios antibióticos en un (No hay halo de (Presencia de halos
mismo ensayo inhibición) de inhibición)
Inhibidores de la síntesis de la pared
celular
Antibióticos que inhiben la síntesis de pared celular…
-lactámicos... Toxicidad

“La toxicidad selectiva” de estos antibióticos se basa en que las

células animales no poseen pared celular, así como tampoco
las enzimas de su biosíntesis

Los efectos adversos más relevantes son:

• Alergia – Diarrea - Convulsiones - Disfunción plaquetaria (a
dosis altas)
Antibióticos que inhiben la síntesis de pared celular…

-lactámicos...Estructura

Penicillium........ Penicilina
Cephalosporium... Cefalosporina
Antibióticos que inhiben la síntesis de pared celular…
-lactámicos...Mecanismo de acción
Transpeptidasas, y Transglucosidasas. Inhibición de la reacción de transpeptidación (del
entrecruzamiento del peptidoglicán). Inhibición de la reacción de polimerización de N-acetil-
glucosamina y N-acetil murámico. Debilitamiento de la pared celular (Liberación de enzimas
autolíticas de la pared)
PLP Proteínas Ligantes de Penicilina.
 Resistencia Bacteriana contra Antibióticos
-lactámicos.
Inactivación de los -lactámicos por -lactamasas:
modificación de la estructura del antibiótico
O
R C NH S
CH3
N CH3
O
COOH
Activa
O
R C NH S
CH3
O C N C H3

H COOH
Inactiva
 Cefalosporinas
Conforman un grupo de antibióticos de amplio espectro derivados de hongos
del género Cephalosporium (Acremonium) y están relacionadas con las
penicilinas en su estructura y modo de acción

Características
• Son de baja toxicidad para el hospedero
• Son bactericidas y poseen un amplio rango de acción
• Poseen un anillo -lactámico en sus estructuras, pero son resistentes a -
lactamasas, no así a Cefalosporinasas.
• Inhiben la síntesis de la pared celular
• Los distintos tipos de cefalosporinas se agrupan en generaciones según su
actividad anti-microbiana
Antibióticos que inhiben la síntesis de pared celular…
-lactámicos... Espectro de acción antibacteriana

Cefalosporinas de 1ª generación: ej. Cefazolina, Cefalexina. Espectro

reducido a Gram positivos.
Cefalosporinas de 2ª generación: ej. Cefuroxima, Cefoxitina. Aumento
de la actividad frente a Gram negativos (Enterobacterias, Haemophilus)
y anaerobios; menor frente a cocos Gram positivos.
Cefalosporinas de 3ª y 4ª generación: ej. Cefotaxima, Cefpiramida
Mayor actividad frente a bacilos Gram negativos, incluso Pseudomonas
y Haemophylus. Penetran bien el SNC.

Inhibidores de -lactamasas: Ácido Clavulánico, Sulbactam.

 Resistencia Bacteriana contra Antibióticos
-lactámicos.

-lactamasas
i) Existe un gran número de enzimas diferentes (TEM, SHV, OXA)

ii) Se agrupan por familias de acuerdo al gen que las codifica (blaTEM,
blaSHV)

iii) Pueden estar codificadas en plasmidios o en el cromosoma.

Antibióticos que inhiben la biosíntesis de peptidoglican o
Pared celular
NO -lactámicos
Que se combinan con sustratos de la pared (Glicopéptidos):
Vancomicina, Teicoplanina: forma un complejo con los residuos de D-alanina,
impide la transferencia de los precursores desde el carrier lipídico.
Inhibidor del Peptidoglican, no β-lactámico

vancomicina
Inhibidores de la síntesis de
Proteínas
Ribosomas…

Ribosomas: Síntesis proteica

Polisoma
(Collar de perlas)
Resumen de los sitios blanco de acción para los antimicrobianos…
Antibióticos que inhiben la síntesis de proteínas...

Que actúan sobre la subunidad 30S del ribosoma:

Aminoglicósidos: ej. Estreptomicina y Gentamicina
Tetraciclinas: ej. Doxiciclina, Tetraciclina

Que actúan sobre la unidad 50S del ribosoma:

Cloranfenicol
Macrólidos: ej. Eritromicina, Claritromicina
Lincosamidas: ej. Clindamicina
 Mecanismos de Resistencia Bacterianos contra Antibióticos
que inhiben la síntesis de proteínas (30S)

1.- Inactivación de Aminoglicósidos

Hay 3 tipos de enzimas

modificacdoras: NH2 Ac
N-acetil transferasas (AcCoA) NH2
CH2NH2
Gen aac OH O
O-adeniltransferasas (ATP) O
Gen ant CH2OH O OH
O-fosfotransferasa (ATP) OH
O
Gen aph OH
Ac: acetilación NH2
OH P
Ade: adenilación Ade
OH
P: fosforilación
 Mecanismos de Resistencia contra Antibióticos
que inhiben la síntesis de proteínas (50S)
 Mecanismos de Resistencia
Modificación del antibiótico: acetilación
catalizada por la enzima cloranfenicol acetil
NH CO CHCl2
transferasa (gen cat)
O2N CH CH CH2
OH OH
 Espectro de acción del Cloranfenicol. AcCoA

a) Activo frente a Gram positivos y NH CO CHCl2

Negativos. Además, es activo ante O2N CH CH CH2
OH O CO CH3
patógenos intracelulares.
AcCoA
b) Atraviesa rápidamente la barrera
hematoencefálica. NH CO CHCl2
O2N CH CH CH2
O O CO CH3
CO CH3
 Mecanismos de Resistencia Bacterianos contra Antibióticos

Disminución de la disponibilidad intracelular, ej. Tetraciclina

Mediante un mecanismo de transporte activo expulsando al antibiótico.
Bombas de expulsión inducibles, dependientes de energía.
Presentes en Gram (+) y Gram (-)…

Antibiótico

Poro Porina

ME

Periplasma

MI

Citoplasma
Transportador
Inhibidores de la replicación y
reparación del DNA
Antibióticos que actúan a nivel del material genético

 Inhibidores de la transcripción
Rifamicinas

 Inhibidores de la replicación
Quinolonas

 Que dañan el DNA

5-nitroimidazoles
Antibióticos a nivel del material genético: Transcripción.

Rifamicinas: Rifampin (Rifampicina).

 Mecanismo de Acción
i) Se une a la a la subunidad b de la enzima ARN polimerasa
dependiente de ADN
ii) Inicio de la transcripción es abortada
iii) Son bactericidas.
 Espectro de acción
Se utilizan en la terapia combinada de la tuberculosis producida
por Mycobacterium tuberculosis.

 Mecanismos de Resistencia Bacteriana

Modificación de la molécula blanco: mutación en gen de la
subunidad b de la ARN polimerasa (mutación en el gen rpoB)
Antibióticos a nivel del material genético: Replicación.
Quinolonas: Inhibidores de la DNA girasa y Topoisomeras IV
 1º Generación
Ácido nalidíxico: uso limitado por efectos adversos. Sólo algunas infecciones
urinarias.

 2º Generación (Fluoroquinolonas)
Ciprofloxacina

 3º Generación (Fluoroquinolonas)
Gatifloxacina

¡¡¡¡No se produce la Replicación!!!!

 Antibióticos a nivel del material genético: Daño al DNA.
5-nitroimidazoles: Metronidazol
 Mecanismo de Acción

i) Inhiben la separación de la doble hebra y desenrollamiento

ii) Son bactericidas.

 Espectro de acción
Potente inhibidor de protozoos y bacterias anaerobias
estrictas:
Inhibidores del metabolismo del ácido
fólico
Quimioterapéuticos que interfieren con el metabolismo…
Sulfonamidas y Trimetoprim: interfieren con el metabolismo del ácido fólico,
que es un precursor de la síntesis de purinas, pirimidinas y aminoácidos. Se
bloquea la síntesis de ácidos nucleicos y pared celular.

Se usan generalmente combinados, ya que producen un efecto sinérgico, en

infecciones respiratorias, urinarias y gastroenteritis.
Efectos adversos de algunos antimicrobianos

-lactámicos:
Hipersensibilidad, gastrointestinales, nefritis
intersticial, disfunción plaquetaria, convulsiones

Quinolonas:
Gastrointestinales, impiden el desarrollo óseo normal

Cloranfenicol:
Gastrointestinales, Sindrome del niño gris, depleción
medular

Macrólidos:
Gastrointestinales, hipersensibilidad, hepatotoxicidad,
ototoxicidad
Espectro de acción de varios antimicrobianos
FIN