CROMATOGRAFÍA

La palabra cromatografía significa gráfica de colores y fue diseñada por

Michael Tswett en el 1903. Tswett llevó a cabo una extracción de una mezcla de
pigmentos de hojas verdes y luego pasó este extracto a través de un tubo de vidrio
empacado con carbonato de calcio; de esta forma logró separar los pigmentos
presentes en las hojas.

Actualmente cromatografía es el nombre que se le da a un grupo de técnicas

utilizadas en la determinación de la identidad de sustancias, en la separación de
componentes de las mezclas y en la purificación de compuestos. Esta técnica es muy
efectiva y por lo tanto se utiliza tanto a nivel de investigación como a nivel industrial.

Este método puede variar de técnica en técnica, pero siempre se basa en el

mismo principio: Todos los sistemas de cromatografía contienen una fase estacionaria
y una fase móvil.

La fase estacionaria puede ser un sólido o un líquido que se queda fijo en la misma
posición. La fase móvil puede ser un líquido o un gas que corre a través de una
superficie y de la fase estacionaria. Las sustancias que están en un sistema de
cromatografía interaccionan tanto con la fase estacionaria como con la fase móvil. La
naturaleza de estas interacciones depende de las propiedades de las sustancias así
como también de la composición de la fase estacionaria.
La rapidez con que viaja una sustancia a través del sistema de cromatografía depende
directamente de la interacción relativa entre las sustancias y las fases móvil y
estacionaria. En el caso de una mezcla, si cada componente interacciona diferente con
la fase móvil y la fase estacionaria, cada uno de ellos se moverá diferente.

En la siguiente tabla se observan diferentes fases móviles y fases estacionarias

en diferentes técnicas de cromatografía:

Técnica Fase móvil Fase estacionaria

Cromatografía de gases Gas Sólido o líquido
Cromatografía líquida Sólido o líquido
Líquido (polar)
en fase inversa (menos polar)
Cromatografía líquida Líquido Sólido o líquido
en fase normal (menos polar) (polar)
Cromatografía líquida
Líquido (polar) Sólido
de intercambio iónico
Cromatografía líquida
Líquido Sólido
de exclusión
Cromatografía líquida
Líquido Sólido
de adsorción
Cromatografía de
Líquido Sólido
fluidos supercríticos
En la cromatografía se tiene en cuenta la velocidad del soluto y la del eluente para
poder determinar la siguiente relación.

A continuación se describirán las diferentes técnicas de cromatografía:

Cromatografía de papel: es un proceso donde el absorbente lo constituye un papel

de Filtro. Una vez corrido el disolvente se retira el papel y se deja secar, se trata con
un reactivo químico con el fin de poder revelar las manchas.

Cromatografía de capa fina: basa en el principio del reparto entre dos fases. En
general, una cromatografía se realiza permitiendo que la mezcla de moléculas que se
desea separar (muestra) interaccione con un medio que se denomina fase
estacionaria. Un segundo medio la fase móvil que es inmiscible con la fase
estacionaria se hace fluir a través de ésta para eluír a las moléculas en la muestra.
Debido a que las distintas moléculas en la muestra presentan diferente coeficiente, la
fase móvil a los distintos componentes con diferente eficiencia, de modo que aquellos
que en la fase móvil serán eluídos más rápido que los que sean preferencialmente
solubles en la fase estacionaria.

Cromatografía de columna: Los elementos básicos en la cromatografía de columna

son una son la fase estacionaria y la fase móvil. La fase estacionaria la forma un sólido
poroso, el cual queda soportado en el interior de una columna generalmente fabricada
en plástico o vidrió.

La fase móvil se encuentra formada por la solución que lentamente va atravesando la

fase estacionaria. La solución que sale al final de la columna se reemplaza
constantemente por nueva solución que se suministra desde un contenedor por la
parte superior de la columna.

La Cromatografía en columna se emplea para la separación de sustancias en escala

preparativa.

Cromatografía gaseosa: La muestra es vaporizada e introducida en un flujo de un

gas apropiado denominado de fase móvil o gas de arrastre. Este flujo de gas con la
muestra vaporizada pasa por un tubo conteniendo la fase estacionaria, donde ocurre
la separación de la mezcla. La fase estacionaria puede ser un sólido adsorbente o,
más comúnmente, una película de un líquido poco volátil, soportado sobre un sólido
inerte o sobre la propia pared del tubo. Las sustancias separadas salen de la columna
disueltas en el gas de arrastre y pasan por un detector; dispositivo que genera una
señal eléctrica proporcional a la cantidad del material eluido.

La Cromatografía Gaseosa es una técnica utilizada para la separación y análisis de

mezclas de sustancias volátiles.
Las técnicas cromatográficas son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase
móvil que consiste en un fluido (gas, líquido o fluido supercrítico) que arrastra a la
muestra a través de una fase estacionaria que se trata de un sólido o un líquido fijado
en un sólido.
Introducción
Significa "Escribir en Colores“.
Los componentes de una mezcla pueden presentar una tendencia diferente a
permanecer en cualquiera de las fases involucradas.
Es la separación de dos o más compuestos químicos en un medio

Conceptos generales

La cromatografía se basa en un conjunto de técnicas asociadas al principio de

retención selectiva.
− Permite separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo
identificar y determinar las cantidades de dichos componentes.
Posee:
− Fase móvil: consiste en un fluido (gas, líquido o fluido supercrítico).
− Fase estacionaria: se trata de un sólido o un líquido fijado en un sólido.
Los componentes de la mezcla interaccionan en forma diferente con la fase
estacionaria y con la fase móvil.
− Los componentes atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades y se
van separando.
Tipos de cromatografía

Cromatografía plana: La fase estacionaria se sitúa sobre una placa plana o sobre
un papel.
Las principales técnicas son:
− Cromatografía en papel
− Cromatografía en capa fina
Cromatografía en columna: La fase estacionaria se sitúa dentro de una columna.
Según el fluido empleado como fase móvil se distinguen:
− Cromatografía de líquidos
− Cromatografía de gases
− Cromatografía de fluidos supercríticos
Aspectos históricos de los distintos tipos de cromatografía

Cromatografía en papel

Tiene como soporte un papel de celulosa.

Es una técnica sencilla y presenta la ventaja de poder utilizar cantidades pequeñas
de muestra (miligramos y microgramos).
Cromatografía en capa fina
Lograron separar mezclas de tinturas farmacéuticas.
En este tipo de cromatografía la fase estacionaria se extiende sobre un soporte
inerte (silica).
Stahl estandarizó el método para elaborar capas finas por métodos mecánicos.
Cromatografía de columna
Consiste en la aplicación de una muestra compleja a una columna de cristal.
Contiene una matriz sólida porosa que está inmersa en el solvente.
Se bombea una gran cantidad de solvente a través de la columna.
Las diferentes mezclas se van retrasando de manera distinta según sus
interacciones con la matriz.
Se pueden separar de acuerdo a su carga, su hidrofobicidad, su tamaño o su
capacidad de unirse a grupos químicos particulares.
La pureza de las fracciones obtenidas se suele comprobar mediante la
electroforesis en geles de poliacrilamida.
.

Términos relacionados con el proceso

Matriz de la columna
Longitud de la columna
Volumen de la columna: volumen total de gel.
‘Run Throught’: volumen de muestra mas solvente.
Aspectos históricos de los distintos tipos de cromatografía
Cromatografía de intercambio iónico
Esta técnica apareció durante la II Guerra Mundial.
Tenía la finalidad de separar los elementos alcalinotérreos y los elementos de
transición.
En 1938 Taylor y Urey utilizan este método para separar isótopos de Litio y Potasio
utilizando resinas de zeolita.
Se usa en la separación de moléculas grandes (proteínas y ácidos nucleicos).
Cuando las separaciones exigen condiciones químicas fuertes se emplean
intercambiadores iónicos inorgánico

Funcionamiento
En unas condiciones determinadas serán retenidas en la columna las muestras
que tengan una carga complementaria a la de la matriz de la gel, siendo eluidas
las restantes.
Para eluir las muestras retenidas se puede variar la carga iónica del solvente o su
pH de forma que se alcance el punto isoeléctrico de la muestra de interés o el de la
matriz, neutralizando de este modo la fuerza que retiene a la muestra en la
columna.
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