Microtúbulos y Citoesqueleto

Dr. Alejandro Claude

d e
lau
Instituto de Bioquímica
UACH

. C
e s o rA
Pr of El heterodímero de α,β-
tubulina es la unidad estructural α β
básica de los microtúbulos. GTP GTP
Una vez formado, el
tubulin
heterodímero no pueder ser heterodimer
separado.
Las α & β tubulinas, de 55 kDa c/u, son homologas pero
no idénticas. Ambas poseen un sitio de unión a nucleótidos.
α-Tubulina une GTP, sin hidrólisis.
β-Tubulina puede unir GTP ó GDP.
Bajo ciertas condiciones, β-tubulina puede hidrolizar su
GTP unido a GDPi, liberar Pi, y luego intercambiar el
GDP unido por GTP.

1
 Un microtúbulo es un cilindro
hueco, de 24 nm de diámetro.
+
A lo largo de su eje, heterodímeros β-GTP
de tubulina se unen para formar α-GTP
protofilamentos, con subunidades
α & β alternadas.
El ensamblaje escalonado de 13 β-GDP −
α-GTP
protofilamentos produce una
organización helicoidal de seam
heterodímeros de tubulina. microtubule 3-start helix
La estructura comúnmente observada es "3-start helix."
Cada vuelta de la hélice desplaza 3 monómeros de tubulina
(e.g., α, β, α). Esto produce una “costura" donde en lugar
de los contactos laterales αα & ββ predominantes,

d e
lau
subunidades α están en contacto lateral con β.

. C
e s o rA
Pr of α β
GTP GTP

tubulin
heterodimer

GTP debe estar unido a subunidades α & β para que los

heterodímeros de tubulina se asocien para producir
protofilamentos y microtúbulos.
In vitro los heterodímeros se unen longitudinalmente
para formar protofilamentos, que se asocian en forma
lateral para formar hojas, y eventualmente
microtúbulos.

2
 α β α β
GTP GDP GTP GTP

(−) protofilament (+)

Los heterodímeros se pueden agregar o disociar en ambos

extremos del microtúbulo in vitro, pero esto ocurre
predominantemente por el extremo positivo, donde β-
tubulina está expuesta.
Este crecimiento lleva a la subunidad de β-tubulina
expuesta, a estar en contacto con α-tubulina.
Esta adición produce la hidrólisis del GTP unido a β-
tubulina. Pi se disocia, pero β-tubulina en el interior de un
microtúbulo no puede intercambiar su GDP por GTP.
El GTP en α-tubulina no es hidrolizado.

d e
. C lau
e s o rA
Pr of α β α β
GTP GDP GTP GTP
(−) protofilament (+)

El extremo negativo de α-tubulina contribuye un

residuo esencial para la actividad catalítica de β-
tubulina.
El extremo negativo de una subunidad α puede
servir de GAP (proteína activadora de GTPasa)
para la β-tubulina de un dímero adyacente en un
protofilamento.

3
 Tubulin α,β Dimer Taxol
GTP GDP

minus plus
end end

α β PDB 1TUB

Cada nucleótido en el protofilamento está en la interfase α-

β. El GTP no puede disociarse de la subunidad α debido a
la oclusión causada por un asa de la subunidad β.
Un fenómeno similar impide el intercambio de GDP por
d e
lau
GTP en β-tubulinas internas de protofilamentos.

. C
e s o rA
Pr of
El sitio de unión a GDP
nucleótidos en tubulinas
es estructuralmente
similar al de proteínas
que unen GTP de la
superfamilia Ras.
El GTP se une adjacente
a una hoja β plegada
(en magenta). PDB 1TUB β-Tubulin

Los sitios de unión a GTP en proteínas motrices miosina

y kinesina también son estructuralmente similares a los
de Ras.

4
 GDP

PDB 1TUB β-Tubulin

El sitio de unión a nucleótidos en tubulinas incluye la

secuencia conservada GGGTG(T/S)G, en negro, que
es parte de un asa que se extiende desde una hebra β y
está en contacto con los fosfatos del nucleótido.
d e
. C lau
e s o rA
Pr of
A B

A B C

Los microtúbulos dobles y triples poseen paredes en

común.
El túbulo A es un cilindro completo, compuesto de 13
protofilamentos. Los túbulos “adicionales” B o C están
compuestos de menos de 13 protofilamentos,
normalmente 10.

5
 Los Centríolos son estructuras Centrioles at right angles,
cilíndricas usualmente en pares as in the centrosome.
orientados en ángulos rectos
uno del otro.
La pared de cada centríolo esta
compuesta de nueve tripletes de
microtúbulos interconectados. cartwheel structure
at one end

El interior de cada centríolo aparece vacío, excepto por la

“rueda de carreta” en un extremo.

d e
. C lau
e s o rA
Pr of
Los microtúbulos centriolares Centrioles at right angles,
son relativamente estables. as in the centrosome.

Los heterodímeros de α,β

tubulina presentes in micro-
túbulos triples centriolares han
sido modificados por
poliglutamilación. cartwheel structure
at one end

Los organismos que contienen centríolos poseen

tubulinas adicionales, designadas δ, ε, ζ, & η, que se
presume están involucradas en el ensamblaje o
mantención de la estructura del centríolo.
Proteínas centriolares adicionales han sido identificadas.

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 El centrosoma es una masa
MTOC
protéica, también llamada el
centro organizador de
microtúbulos (MTOC), que
rodea los centríolos en células nucleus
(−) (+)
animales.
Proteínas centrosomales
incluyen pericentrina y γ-
tubulina. microtubules

El MTOC está cerca del núcleo durante la interfase. Los

microtúbulos crecen desde el MTOC, formando una red
circular durante la interfase.
Con sus extremos negativos anclados al centrosoma, los
microtúbulos crecen y disminuyen mediante adición y
d e
lau
pérdida de heterodímeros por el extremo positivo.

. C
e s o rA
Pr of centrosome
Cilium
plasma
membrane

axoneme
astral
microtubule
basal body
polar chromosomal (centriole)
microtubule microtubule cytosol

Durante la división celular, el centrosoma se duplica para

organizar el huso mitótico.
El material centrosomal también juega un papel esencial
en la formación inicial de los cilios y flagelos. Ambos
crecen de un centríolo, llamado el cuerpo basal.

7
 lockwasher
shape
cap
γ-tubulin ring complex

γ-tubulina, similar en estructura a α & β tubulinas, forma

el núcleo de ensamblaje de microtúbulos en el centrosoma.
Múltiples (12-14) copias de γ-tubulina se asocian con otras
proteínas en un complejo llamado “grips” (gamma ring
proteins).
Este complejo de anillo de γ-tubulina aparece por EM

d e
como un anillo abierto, con una esfera en un costado.

. C lau
e s o rA
Pr of
Los Microtúbulos nucleados lockwasher
con el γ-tubulin ring shape
complex aparecen con una cap
estructura adicional o “cap”
γ-tubulin ring complex
en el extremo negativo.

En los microtúbulos con un “cap”de complejo anillado

de γ-tubulina, la polimerización en el extremo negativo
está bloqueada.
Las proteínas Grip del “cap” están supuestamente
involucradas en unión al centrosoma.

8
 d e
. Clau
e s orA
Pr of

9
 slower
microtubule growth
length

rapid
disassembly
time

Los microtúbulos presentan inestabilidad dinámica. Pueden crecer

en forma sostenida y luego acortarse rápidamente por el extremo (+).
In vitro, la tendencia a crecer o acortarse depende de la concentración
de dímeros de tubulina. Esta disminuye al crecer los microtúbulos. Por
debajo de una concentración crítica, los microtúbulos se acortan. Esta

e
inestabilidad ha sido atribuida a la pérdida de casco de GTP ó “GTP

d
lau
cap.”

. C
e s o rA
Pr ofLa hidrólisis de GTP por
β-tubulina, a medida que la +
adición de nuevas sub- β-GTP
α-GTP
unidades la pone en contacto
α-tubulina, toma tiempo.
Un microtúbulo que crece en β-GDP −
forma rápida puede acumular α-GTP
varias capas de β-tubulina- seam
GTP en su extremo (+). microtubule 3-start helix
Este GTP cap estabiliza el extremo (+) de los microtúbulos.
Si la [dímeros] es baja, las dímeros de tubulina-GTP pueden
disociarse, exponiendo tubulina-GDP en el extremo (+).
Esto causa inestabilidad en este extremo y un rápido
acortamiento del microtúbulo.

10
 Descompactación o
curvatura de los proto- protofilament
filamentos es observada en +
las puntas de microtúbulos
en fase de acortamiento microtubule
rápido. during rapid
shortening at
Esto puede ser causado por the plus end
un cambio de
conformación cuando las
subunidades β en el
extremo (+) están unidas a
GDP en vez de GTP. −

In vitro, heterodímeros de tubulina con GDP en la subunidad

β se ensamblan en anillos. Protofilamentos rectos solo se

d e
lau
obtienen en presencia de heterodímeros unidos a GTP.

. C
e s o rA
P of
r Inestabilidad dinámica In Vivo
La inestabilidad dinámica de los microtúbulos in
vivo puede ser regulada por interacción con otras
proteínas en el extremo (+).
E.g., durante la profase, los microtúbulos crecen
desde los centrosomas. Si el extremo (+) de un
microtúbulo hace contacto con un cromosoma, este
extremo se estabiliza.
De lo contrario, un rápido acortamiento ocurre por
el extremo (+), y los dímeros resultantes de
tubulina pueden intercambiar su GDP por GTP,
para ser reciclados en un nuevo microtúbulo.

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 Proteínas que cortan y desestabilizan microtúbulos
han sido identificadas. Algunas pertenecen a la familia
de las quinesinas (kinesinas).
Algunas de estas proteínas producen una catástrofe al
cortar microtúbulos, generando nuevos extremos sin el
cap de GTP.
Otras actúan en forma gradual al unirse y promover la
hidrólisis de GTP en los extremos (+) de los
microtúbulos, reduciendo o eliminando el cap de GTP
estabilizador.

d e
. C lau
e s o rA
Pr of
MAPs (Proteínas asociadas a microtúbulos) son una clase
diversa de proteínas que unen microtúbulos.
! Multiples MAPs estabilizan microtúubulos,
inhibiendo su despolimerización.
! Pueden causar cross-link de microtúbulos adyacentes,
determinando el espaciamiento de microtúbulos en
haces paralelos. Algunos unen microtúbulos a
membranas o filamentos intermedios.
MAPs tipo I ocurren en axones y dendritas de neuronas y
en ciertas células no neurales. Poseen múltiples
repeticiones de la secuencia KKEX (Lys-Lys-Glu-X) que
une tubulina.
MAPs tipo II (e.g., MAP4 & Tau) existen en múltiples
células. Poseen 3-4 repeticiones de una secuencia de 18
residuos que une tubulina.

12
 Cascadas dependientes de factores de crecimiento activan
quinasas que fosforilan los dominios de unión a
tubulina en MAPs. La fosforilación de MAPs causa su
disociación de microtúbulos.
Fosfatasas que desfosforilan MAPs, también están
reguladas.

Al comienzo de la mitosis, aumenta la fosforilación

MAPs. Esto desestabiliza los microtúbulos y causa su
despolimerización, y los heterodímeros de tubulina
forman el huso mitótico.
Al final de la mitosis predomina la actividad fosfatásica,

e
para reestablecer la red de microtúbulos durante la
interfase.

lau d
. C
e s o rA
Pr of Toxinas & Drogas
Algunas toxinas and drogas (que inhiben mitosis)
afectan la polimerización y despolimerización de
tubulina:
! Taxol, una droga anti cáncer, estabiliza los
microtúbulos.
! Colchicina une tubulina y bloquea polimerización.
! Vinblastina causa despolimerización y formación
de paracristales de vinblastina-tubulina.
! Nocodazol causa despolimerización de
microtúbulos.

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