MICROORGANISMOS

PROCARIOTAS
PAREDES CELULARES

PROCARIOTAS
 Tinción de
Gram
Aunque el alumno realizará en prácticas de labororatorio la
tinción de Gram, vamos a explicarla aquí brevemente. La
tinción de Gram es la más importante entre las tinciones
llamadas diferenciales (aquellas que no tiñen de la misma
manera a todos los tipos de bacterias). Resumiendo, esta
tinción consta de varios pasos:

1. Imaginemos un frotis en porta de vidrio con una

muestra de varios tipos de bacterias, que se han fijado por
calor. En la primera fase, esta preparación de trata con un
primer colorante llamado violeta cristal o violeta de
genciana.

2. A continuación se añade una solución de lugol (yodo-

ioduro), que actúa como “mordiente”, formando una laca
relativamente resistente con el violeta. En este momento
todas las bacterias están teñidas de color violeta.
3. Ahora realizamos una descoloración diferencial con etanol o
una mezcla de etanol y acetona. Lo que ocurre es que algunas
bacterias (las que llamaremos Gram-negativas) pierden el color
violeta (quedarían prácticamente transparentes al
microscopio), mientras que otras (las Gram-positivas) resisten
el tratamiento, y retienen el colorante violeta.

4. Finalmente, tratamos el porta con un segundo colorante

(colorante de contraste), de color rojo o rosa, como la fucsina
o la safranina. Este colorante tiñe ahora a las bacterias
previamente descoloradas por el etanol. Por lo tanto, el
resultado en la observación al microscopio es que las bacterias
Gram-positivas se ven de color violeta, y las Gram-negativas de
color rosa o rojo.

Como veremos enseguida, esta diferencia de comportamiento

ante la tinción de Gram refleja el hecho de que ambos tipos de
eubacterias poseen dos tipos estructuralmente diferentes de
pared celular, aunque ambas posean en común la posesión de
peptidoglucano. A continuación estudiaremos con cierto
detalle la pared celular de eubacterias.
Paredes de las eubacterias
Consisten en un esqueleto macromolecular rígido, llamado
peptidoglucano (= mucopépdo o mureína), que

· En Gram-positivas se encuentra inmerso en una matriz

aniónica de polímeros azucarados;

· Y en Gram-negativas está rodeada por una membrana

externa, e inmersa en un espacio periplásmico.

Comenzaremos abordando esa macrolécula tan peculiar

llamada peptidoglucano, para después estudiar
globalmente y por separado la pared de Gram-positivas y
Gram-negativas, estudiando entonces los demás
componentes que, en cada caso, aparecen en las
correspondientes paredes celulares.
El peptidoglucano es un polímero complejo que consiste, con fines de
descripción, de tres partes: una estructura básica, compuesta de moléculas
alternadas de N-acetilglucosamina y de ácido N-acetilmurámico y un grupo idéntico
de enlaces peptídicos cruzados

Gram+. El esqueleto del polímero consiste de subunidades alternadas de N-

acetilglucosamina y de ácido N-acetilmurámico conectados por enlaces β1→4. Los
residuos de ácido murámico se unen a péptidos cortos y la composición de éstos varía
de un género bacteriano a otro. En algunos géneros bacterianos, los residuos de L-
lisina se sustituyen con ácido diaminopimélico, un aminoácido que se encuentra en
estado natural sólo en las paredes de células procariotas. Los D-aminoácidos son
constituyentes característicos de las paredes de células procariotas
: Representación esquemática de un entramado de peptidoglucanos que se forma
por medio de enlaces cruzados. Los puentes compuestos por cadenas peptídicas de
pentaglicina conectan los residuos carboxilo-α de los residuos terminales de D-
alanina en una cadena con un grupo ε-amino de residuos de L-lisina de la siguiente
cadena. La naturaleza de los enlaces cruzados varía entre los diferentes géneros
bacterianos.
 Peptidoglucano: composición
química
Repeticiones
Está formado por(n=10-100) de disacarídica
repeticiones de una unidad una unidad
fundamental unida a su vez a un tetrapéptido. Distintas
disacarídica, unida
cadenas (formadas a su devez
por el esqueleto a un
azúcares) se unen
tetrapéptido
entre sí por determinados enlaces peptídicos entre
tetrapétidos de cadenas diferentes. Veamos todo ello en su
concreción química:
 Distintas cadenas de PG se unen entre
sí por determinados enlaces peptídicos
entre tetrapéptidos de cadenas
diferentes
 Peptidoglucano: composición
química La unidad disacarídica repetitiva: consiste en N-
acetilglucosamina (NAG) unida por enlace ß(1à4) a N-
acetilmurámico (NAM). Obsérvese que el NAM es el 3-O-D-
lactil-éter de la NAG (o sea, se deriva de unir el ácido D-láctico
con el OH del C-3 de la NAG).

 La unidad disacarídica que se repite es:

Las distintas unidades disacarídicas se van uniendo entre sí
por enlaces ß(1à4) entre el NAM de una unidad y la NAG de la
siguiente. Este enlace es susceptible a la rotura catalizada por
el enzima lisozima. El número de repeticiones (n) puede

 N-acetilglucosamina (NAG)...
oscilar entre 10 y 100.

La cadena tetrapeptídica: Desde el grupo carboxilo de cada

...unida por enlace β(14) con...

ácido NAM, y mediante un enlace amido, se encuentra unido
 el tetrapéptido. Un tetrapéptido típico de muchas bacterias
es:

 ... N-acetilmurámico (NAM)

L-alanina---D-glutámico---meso-diaminopimélico---D-alanina

Obsérvese la alternancia de aminoácidos D y L en el

Las distintas unidades disacarídicas se unen

tetrapéptido.

 La estructura global: Las distintas cadenas polisacarídicas, con

entre sí mediante enlaces β(1—4)

sus respectivos tetrapéptidos, se unen entre sí por medio de
puentes o enlaces peptídicos, entre un aminoácido de una
cadena (p. ej., el aminoácido nº3, como el meso-DAP del
ejemplo) y otro aminoácido de una cadena adyacente (la D-
ala terminal). De este modo, la estructura global es una sola

 Este enlace puede ser roto por la lisozima

macromolécula gigante que envuelve al protoplasto,
formando un sáculo rígido, a modo de tejido continuo, que
tiene el volumen y la forma de la bacteria respectiva.

 La cadena tetrapeptídica sale desde el grupo

–COOH del lactilo de cada NAM y suele ser:
 L-ala  D-glu  m-DAP  D-ala
Fórmula de un peptidoglucano típico. Observar:

• La unidad disacarídica NAG-NAM

• Las distintas unidades disacarídicas se unen entre sí por

enlaces β(1à4) entre el NAM de una unidad y el NAG de la
siguiente. Este enlace es susceptible de rotura por lisozima
en muchas bacterias

• El tetrapéptido, con su alternancia de aminoácidos en L y

en D
Comparación entre el meso-diaminopimélico (m-DAP) y la L-
lys. Ambos son diaminoácidos. El m-DAP se puede considerar
como una Lys en la que el –H terminal de la cadena lateral
está sustituido por un carboxilo (-COOH)

m-DAP L-lys
 Peptidoglucano: estructura
globalLa estructura global: Las distintas cadenas polisacarídicas,
con sus respectivos tetrapéptidos, se unen entre sí por
medio de puentes o enlaces peptídicos, entre un
aminoácido de una cadena (p. ej., el aminoácido nº3,
 Las distintas cadenas lineales de PG (cada
como el meso-DAP del ejemplo) y otro aminoácido de una
cadena adyacente (la D-ala terminal). De este modo, la

una con n repeticiones del disacárido y sus

estructura global es una sola macromolécula gigante que
envuelve al protoplasto, formando un sáculo rígido, a
modo de tejido continuo, que tiene el volumen y la forma
tetrapéptidos) se unen entre sí por enlaces
de la bacteria respectiva.

peptídicos Frecuentemente enlace entre el ε-

NH2 del m-DAP (3) y el –COOH de D-ala (4)
•· En bacterias Gram-negativas este sáculo está formado
por una sola capa (o unas pocas) de cadenas de PG.

 La estructura
•· Englobal
Gram-positivas es
existen una sola
varias capas (hay varios
niveles de PG).
macromolécula gigante que forma un sáculo
rígido alrededor del protoplasto bacteriano
 El PG de bacterias
Gram-negativas
En la mayor parte de Gram-negativas el peptidoglucano
corresponde a la composición y estructura que acabamos
de describir. Sin embargo, en las espiroquetas, el
diaminoácido en posición 3, en vez de ser meso-DAP, está
sustituido por la L-ornitina (que también es un
diaminoácido).

 Normalmente:
El enlace entre cadenas polisacarídicas se realiza
 1 o unas pocas capas de PG.
normalmente mediante unión peptídica directa entre el
grupo carboxilo de la D-ala terminal y el grupo e-amino
del meso-DAP. Ahora bien, en este enlace participan

 Las distintas cadenas se unen por enlaces

solamente el 50% de los tetrapéptidos. Los demás péptidos
no participan en enlaces, y entre estos últimos se
encuentran incluso dipéptidos y tripéptidos.

peptídicos directos entre el grupo ε-NH2 del m-

DAP (3) de una cadena con el –COOH de la D-ala
El resultado es una capa simple de PG (de 1 nm de

(4) de otra cadena

espesor), a modo de malla floja, y con grandes poros (los
“huecos” dejados por las zonas donde no hay enlace
peptídicos). Ello explica el comportamiento de las bacterias
Gram-negativas en la tinción de Gram: al añadir el alcohol,
 Malla floja con grandes “poros”: 50% NAM carece
se produce una deshidratación que tiende a contraer la
estructura del PG, pero los poros son grandes y por ellos

de tetrapéptidos
sale el primer colorante (el violeta de genciana). El ulterior
tratamiento de la preparación con el colorante de
contraste (fucsina o safranina) tiñe a estas bacterias de
rojo.

 En espiroquetas, el diaminoácido en posición

nº3 es la L-ornitina (en lugar de m-DAP)
Manner in which the peptide and glycan units are connected
in formation of the peptidoglycan sheet. (a) No interbridge in
gram-negative Bacteria. (b) Glycine interbridge in
Staphylococcus aureus (gram-positive). (c) Overall structure of
peptidoglycan. The diagram depicts several ribbons of
peptidoglycan cross-linked to one another. To visualize an
entire single layer of peptidoglycan, imagine these cross-linked
ribbons extending around a cylinder or sphere representing
the cell as shown. G, N-acetylglucosamine; M, N-
acetylmuramic acid.
 Desde el punto de vista estructural, el peptidoglucano de
Gram-positivas se caracteriza por la existencia de múltiples
capas, existiendo entrecruzamientos tanto entre cadenas
adyacentes en el mismo nivel como entre niveles distintos.
El resultado es una red tridimensional gruesa (hasta 50
capas en algunos Bacillus), y más compacta que en Gram-
negativas. De todas formas, el grado de compacidad varía
entre especies, y depende de:

·nº de NAM que contengan tetrapétidos que participen en

entrecruzamientos;

· longitud del puente peptídico

Ello condiciona a su vez la intensidad de la gram-

positividad en la tinción de Gram.

GRAM POSITIVOS
 Ejemplos de entrecruzamientos en el
peptidoglucano
Comparación entre la unión interpeptídica en:

• E. coli: enlace peptídico directo entre D-ala(4) y el

diaminoácido(3)

• S. aureus (Gram-positiva): a través de un puente de

pentaglicina

Directo (muchas Puente pentaglicina (algunas

Gram-negativas) Gram positivas
Relaciones estructura-función
en el peptidoglucano Esta estructura confiere una serie de importantes
propiedades:

1)Gran rigidez, que contrarresta las fuerzas osmóticas a que

está sometido el protoplasto (aguanta presiones de unas 5 a

 Gran rigidez  aguanta las fuerzas osmóticas del

15 atmósferas). Esta rigidez depende de:

protoplasto (5-15 atm). Rigidez viene de:

a)el grado de entrecruzamiento;

b)el hecho de que el enlace ß(1à 4) es muy compacto. La

 El grado de entrecruzamiento
alternancia regular entre anillos piranósicos de NAG y de
NAM genera uno de los polisacáridos más estables desde
el punto de vista termodinámico, que recuerda en su
 El enlace β(14) es muy compacto. La alternancia de NAM
“estilo” a la quitina y a la celulosa;

y NAG  uno de los polisacáridos más estables que existen

c)la alternancia en el tetrapéptido, de aminoácidos en
configuraciones D y L supone una factor adicional que
confiere aún más fuerza estructural, y además permite
 La alternancia de aa en L y en D  estabilidad adicional
que todas las cadenas laterales de estos aminoácidos se
dispongan hacia el mismo lado, facilitando la formación

(cadenas laterales al mismo lado, ptes H)

de puentes de H.

2)Pero, al mismo tiempo, la estructura permite una notable

 Al mismo tiempo, gran flexibilidad  soporta
flexibilidad. Ello colabora, junto con su rigidez, a soportar
variaciones amplias de la tensión osmótica del protoplasto.

variaciones de presión osmótica protoplasto

3)Condiciona la forma celular. Aunque la química del PG,
por sí misma, no determina la forma, es su disposición

Condiciona la forma celular

espacial la responsable principal de esta forma.



 La matriz de la pared celular
de las Gram-positivas
Como ya dijimos, el PG de las bacterias Gram-positivas se
encuentra inmerso en una matriz, que puede representar
 El PG de Gram-positivas está inmerso en una
hasta el 50% del peso de la pared celular, y que está
matriz aniónica (hasta 50%) de:
constituida por largos polímeros denominados ácidos
teicoicos, pudiendo existir también (o en su lugar) los ácidos
 Ácidos teicoicos:
teicurónicos polímeros
y los lipoteicoicos. Estos(n<30) de llegan
componentes ribitol-P
a o
sobresalir de la superficie celular y suministran especificidad
glicerol-P,
antigénica.con –OH sustituidos por –H, azúcares,
aminoazúcares o D-ala
 Ácidos teicurónicos (en ausencia de P):
copolímeros de urónicos y aminoazúcares
 Ácidos lipoteicoicos: glicerol-teicoicos unidos a la
membr. citopl. Sus extremos quedan expuestos
hacia el exterior
Ácidos teicoicos:
Están presentes en muchas
bacterias Gram-positivas, pero no en
todas. Son polímeros de hasta 30
unidades de glicerol-fosfato o ribitol-
fosfato, unidas entre sí por enlaces
fosfodiéster, en los que la mayoría de los
grupos -OH están sustituidos por -H,
azúcares, aminoazúcares o D-alanina.

Ácidos teicurónicos:
Ciertas bacterias Gram-positivas,
cuando se someten a un régimen de
limitación de fosfato son incapaces de
sintetizar ácidos teicoicos, pero en su lugar
producen ácidos teicurónicos. Los
teicurónicos consisten en polímeros
aniónicos formados por la alternancia de
ácidos urónicos (que tienen grupos -COOH
libres) y aminozúcares como la N-acetil-
galactosamina.
Ácidos lipoteicoicos:
Están presentes en todas las
bacterias Gram-positivas, aun en
condiciones de carencia de fosfato. Se
trata simplemente de ácidos glicerol-
teicoicos que se encuentran unidos a la
membrana citoplásmica, concretamente
se unen por enlace fosfodiéster con
glucolípidos de membrana, mientras que el
otro extremo de la cadena queda expuesto
al exterior.
En Streptococcus pyogenes las
cadenas de lipoteicoicos se encuentran
asociadas con la llamada proteína M,
originando una microfibrillas que
sobresalen notablemente hacia el exterior
celular (observables a microscopio
electrónico), y que facilitan la unión a las
células de animales en que parasitan estas
bacterias
Funciones de los polímeros de la matriz:

Parece ser que su papel principal es suministrar una carga neta negativa a
la pared celular, lo que permite captar cationes divalentes (p. ej., Mg++),
que a su vez se necesitan para muchas actividades enzimáticas de la
membrana citoplásmica o del espacio periplásmico, que participan de la
morfogénesis y división de la pared celular.

os ácidos teicoicos y teicurónicos son buenos antígenos. Cuando no están cubiertos

L

por estructuras más externas (como cápsulas), constituyen el antígeno somático O

de las bacterias Gram-positivas.

Finalmente, en algunas bacterias, sumistran, junto con el PG, receptores

específicos para la adsorción de ciertos bacteriófagos.
 Ácidos teicurónicos: Ciertas bacterias Gram-positivas,
cuando se someten a un régimen de limitación de fosfato
son incapaces de sintetizar ácidos teicoicos, pero en su
lugar producen ácidos teicurónicos. Los teicurónicos
consisten en polímeros aniónicos formados por la
alternancia de ácidos urónicos (que tienen grupos -COOH
libres) y aminozúcares como la N-acetil-galactosamina.

Ácidos lipoteicoicos: Están presentes en todas las bacterias

Gram-positivas, aun en condiciones de carencia de fosfato.
Se trata simplemente de ácidos glicerol-teicoicos que se
encuentran unidos a la membrana citoplásmica,
concretamente se unen por enlace fosfodiéster con
glucolípidos de membrana, mientras que el otro extremo
de la cadena queda expuesto al exterior.

MATRIZ DE LA PARED CELULAR DE GRAM POSITIVOS

 Pared de las bacterias ácido-alcohol
resistentes (AAR)
Determinadas bacterias Gram-positivas (corineformes,
Nocardia y, en especial Mycobacterium) presentan una
pared celular muy compleja, con abundancia de lípidos
 Pared especial de ciertas Gram-
(algo excepcional entre las Gram-positivas).

positivas:EstasNocardia,
bacterias no se tiñen conMycobacterium
los colorantes normales,
pero una vez que se han teñido con fucsina (forzando
 Resisten mediante
la decoloración con
calentamiento de la preparación), tienen clorhídrico-
resistencia a decolorarse por una mezcla de ácido
etanol ( ácido-alcohol resistentes)
clorhídrico al 3% en etanol de 96 . Por ello se denominan
o

como bacterias ácido-alcohol resistentes. Esta propiedad

 Esta propiedad deriva de:

depende esencialmente de la presencia, en su pared celular
de unos lípidos llamados ácidos micólicos.

 Ácidos También
micólicos
contribuyen a ello otros lípidos, incluyendo de tipo
ceras.
 Glucolípidos
 Ceras
Determinadas bacterias Gram-positivas
(corineformes, Nocardia y, en especial
Mycobacterium) presentan una pared celular
muy compleja, con abundancia de lípidos (algo
excepcional entre las Gram-positivas).
Estas bacterias no se tiñen con los
colorantes normales, pero una vez que se han
teñido con fucsina (forzando mediante
calentamiento de la preparación), tienen
resistencia a decolorarse por una mezcla de ácido
clorhídrico al 3% en etanol de 96o. Por ello se
denominan como bacterias ácido-alcohol
resistentes. Esta propiedad depende
esencialmente de la presencia, en su pared
celular de unos lípidos llamados ácidos micólicos.
Químicamente, esta pared celular consiste en un esqueleto formado por dos tipos de
polímeros, unidos covalentemente entre sí:

un peptidoglucano especial (la diferencia más

importante es que en vez de N-acetil
murámico existe N-glucolil-murámico);
un arabinogalactano de gran peso molecular.
Ambos polímeros se encuentran enlazados a
través de fosfodiéster entre una unidad de
murámico y una de las arabinosas. Pero a su
vez, este esqueleto se une covalentemente a
los ácidos micólicos.
Los ácidos micólicos son ß-hidroxiácidos grasos ramificados en  , cuya longitud de
cadena es grande (desde C78 a C91 en Mycobacterium). Están unidos al esqueleto de la P.C. de
forma uniforme, a través de enlaces con los -OH en 5 de las unidades de arabinosa.
Por lo tanto, el esqueleto de la P.C. de estas bacterias consiste en:
peptidoglucano---arabinogalactano---ácidos micólicos.
Pero aparte de este esqueleto complejo, la P.C. de las bacterias ácido-alcohol resistentes exhibe
una variedad de lípidos:
 Papeles conferidos por la
pared AAR
El alto contenido en lípidos confiere una serie de
propiedades a estas bacterias (aparte de la ácido-alcohol
 Aspecto y consistencia cérea de las colonias
resistencia ya citada):

en placas de Petri
· aspecto y consistencia cérea de sus colonias;
 En líquidos crecen formando grumos
· crecen formando grumos en medios líquidos;
 Gran impermeabilidad
·gran impermeabilidad de la P.C., que a su vez condiciona
 Resistencia a desecación
una gran resistencia a la desecación y gran resistencia a
 Resistencia a agentes (detergentes,
sustancias antibacterianas antibacterianos
oxidantes, ácidos,
bases, etc).
 Detergentes
 Oxidantes
 Ácidos y bases
 La pared celular de
eubacterias Gram-
negativas
La pared de las bacterias Gram-negativas es estructuralmente
más compleja que la de Gram-positivas, cosa que se puede
comprobar al observar un corte transversal al microscopio
 Estructuralmente más compleja que
electrónico: por encima de la membrana citoplásmica y hasta el
exterior se pueden apreciar 5 capas, alternándose las claras (L 2,

Gram-positivas (ver micrografía electr.):

L5) y las oscuras (más densas a los electrones: L 1, L3, L4).

 El delgado
La capapeptidoglucano
densa L corresponde al peptidoglucanoestá
4 inmerso en
(ya estudiado),
que se encuentra inmerso en la capa clara L , que consiste en
un compartimento llamado ...
5
un espacio periplásmico, limitado entre la membrana
citoplásmica y una membrana externa. La delgada capa de
peptidoglucano no constituye más del 5-10% de la pared. A
 ... espacio periplásmico
continuación (lleno
estudiaremos la peculiar membrana externa de con el gel
las bacterias Gram-negativas y el espacio periplásmico.
periplásmico), el cual a su vez limita con ...
 ... la membrana externa
 La membrana externa de
bacterias Gram-negativas
La membrana externa de Gram-negativas (descripción
general):

Se trata de una estructura de bicapa lipídica exclusiva de las

bacterias Gram-negativas. Como otras bicapas lipídicas,

 Bicapa proteolípídica muy asimética:

consta de una doble capa de lípidos, junto con proteínas de
matriz (estas últimas atravesando total o parcialmente la
bicapa). Por supuesto, en la bicapa lipídica, los grupos
polares quedan hacia afuera, mientras que los hidrófobos

En la lámina externa:
tienden al interior.

Ahora bien, la composición química y la disposición de los

60% de proteínas
elementos de esta membrana externa son muy distintos a
 los de una membrana típica:

 40% de lipopolisacárido (exclusivo de Gram-)

· la bicapa es altamente asimétrica:

· en la capa externa existe un 60% de proteínas y un 40% de

En la lámina interna:
una macromolécula exclusiva de esta membrana externa: el
 lipopolisacárido (LPS);

· en la capa interna no hay LPS, existiendo fosfolípidos (FL),

 No hay lipopolisacárido
lipoproteínas (LPP) y otras proteínas.

El conjunto es un mosaico fluido que permite el

 Existen desplazamiento lateral de los fosfolípidos, del LPS, y de las
proteínas, pero no de las lipoproteínas unidas
covalentemente al peptidoglucano. Sin embargo, esta
 Fosfolípidos
fluidez es menor que la de la membrana citoplásmica.

 Lipoproteínas
 Otras proteínas
 PG

Micrografía electrónica de corte transversal de pared de

bacteria Gram-negativa

Espacio Por encima de la membrana citoplásmica y hasta el exterior

se pueden apreciar 5 capas, alternándose las claras (L2, L5) y
periplásmico las oscuras (más densas a los electrones: L1, L3, L4).

La capa densa L4 corresponde al peptidoglucano (ya

Membrana estudiado), que se encuentra inmerso en la capa clara L5,
que consiste en un espacio periplásmico, limitado entre la
externa membrana citoplásmica y una membrana externa. La
delgada capa de peptidoglucano no constituye más del 5-
10% de la pared. A continuación estudiaremos la peculiar
membrana externa de las bacterias Gram-negativas y el
espacio periplásmico.
 El lipopolisacárido A.G. saturados
El lípido A: Dos unidades de glucosamina unidas por
(C-14): beta-
enlace ß(1à6), pero donde todos los grupos -OH (menos
uno) y -NH2 están sustituidos (unidos a otras moléculas):
hidroximirístico
Obsérvese que

·existen 5 (a veces 6) ácidos grasos, todos ellos saturados,

con predominio de ß-hidroximirístico (un ácido graso C14).

· El -OH original en 4´ está sustituido por arabinosamina-

fosfato.

· El -OH en 1 está sustituido por fosforil-etanolamina (a

veces pirofosforil-etanolamina).

El oligosacárido medular (también llamado corazón o

núcleo): se une al lípido A a través del -OH en 3´. Se
pueden considerar dos fracciones:

· núcleo interno, a base de dos tipos de azúcares

exclusivos de Gram-negativas: 2-ceto-3-desoxioctónico
(KDO) y L-glicero-D-manoheptosa (Hep).. Alguna de las
Hep y alguno de los KDO pueden a su vez estar unidos a
fosforil-etanolamina (o pirofosforil-etanolamina). Esta
región es muy rica en grupos cargados, especialmente con
carga negativa (de los fosfatos y KDO).

· La fracción del núcleo externo está constituida a base de

hexosas (glucosa, galactosa, NAG, y a veces algunas
hexosas más raras).

Cadena lateral específica: polisacárido repetitivo, que se

proyecta hacia el exterior celular. Consiste en la repetición
(n<40 veces) de unidades tri-, tetra- o pentasacarídicas
(en estos dos últimos casos uno de los azúcares de cada
Glucosamina-
repetición queda lateral respecto del esqueleto lineal que
forman los demás).
ß(16)-
Unidad repetitiva de glucosamina, con
la cadena lateral Núcleo externo Núcleo interno
–OH en 1
sustituido con –P-
etanolamina
 Composición del
lipopolisacárido (LPS)
Se trata de una macromolécula exclusiva de la lámina
externa de la membrana externa de bacterias Gram-
negativas, responsable de muchas de las propiedades
 Región proximal:Lípido A (hidrófobo)
biológicas de estas bacterias. Se le conoce también con el
nombre de endotoxina (toxina termoestable, no difusible).
Se trata de un glucolípido complejo, que podemos
 Región intermedia: oligosacárido
considerar compuesto de tres regiones o dominios:

medular hidrofóbico;
• lípido A, que es la porción más proximal, y de carácter

 Región distal: cadena lateral específica,

·región intermedia, llamada oligosacárido medular;

polisacarídica (hidrófila): Antígeno

·región distal (cadena lateral específica, polisacarídica) a
base de repeticiones de unos pocos azúcares. Es de carácter

somático bacterias
“O”Gram-negativas.
de bacterias Gram-
hidrofílico y constituye el antígeno somático O de las

negativas
 Papeles y funciones del
LPS 1. Papel estructural: el LPS es el componente esencial de la
membrana externa. La porción hidrofóbica (las cadenas de
ácidos grasos del lípido A) se proyectan hacia el interior de esta

 Papel estructural: Carácter masivo lípido A

membrana. Precisamente es la estructura del lípido A la
principal responsable de la menor fluidez de dicha membrana,
y por lo tanto de la mayor resistencia física. (Obsérvese que,

ENDOTOXINA
mientras cualquier fosfolípido tiene dos cadenas de ácido
graso, el lípido A posee 5 o 6, todas ellas unidas al mismo
disacárido, generando una molécula más “masiva.”).

 Menor fluidez de esta membran

2. A su vez, la propiedad anterior hace que sea menos soluble
a detergentes y más resistente a disolventes orgánicos.

 Más resistente a detergentes y solventes

3. Es menos permeable a muchas moléculas hidrofóbicas,

Las cadenas laterales

incluyendo antibióticos, debido a las largas cadenas laterales

 hidrofílicas. El LPS, y concretamente las cadenas laterales

constituyen el antígeno somático O, cuya especificidad viene
determinada por la secuencia repetitiva de azúcares. Esta

menos permeable a moléculas hidrofóbicas (Ej.:

porción condiciona la virulencia de las bacterias Gram-
 negativas patógenas, por lo que debe de ser esencial en la
interacción hospedador-parásito.

resisten mejor muchos antibióticos)

4. Se une a cationes divalentes (como Mg++ o Zn++), lo que
contribuye a la mayor estabilidad de la membrana externa.

Antígeno somático “O” bacterias Gram-negativas

Esta presencia de cationes suministra un ambiente adecuado
 para muchas funciones de la P.C. (Si añadimos un agente
quelante como el EDTA, o eliminamos el Mg++ y lo sustituimos
por Ca++, se produce la desorganización de la membrana
 Condiciona virulencia en bacterias patógenas
externa)

 Se une a cationes Mg, Zn

 Si añadimos agente quelante, como EDTA 
desorganización de la membrana externa
PAPELES Y FUNCIONES DEL LPS
1. Papel estructural: el LPS es el componente esencial de la membrana externa. La
porción hidrofóbica (las cadenas de ácidos grasos del lípido A) se proyectan hacia el
interior de esta membrana. Precisamente es la estructura del lípido A la principal
responsable de la menor fluidez de dicha membrana, y por lo tanto de la mayor
resistencia física. ( mientras cualquier fosfolípido tiene dos cadenas de ácido graso, el
lípido A posee 5 o 6, todas ellas unidas al mismo disacárido, generando una molécula
más “masiva.”).
2. La propiedad anterior hace que sea menos soluble a detergentes y más
resistente a disolventes orgánicos.
3. Es menos permeable a muchas moléculas hidrofóbicas, incluyendo
antibióticos, debido a las largas cadenas laterales hidrofílicas.
4. Se une a cationes divalentes (como Mg++ o Zn++), lo que contribuye a la mayor
estabilidad de la membrana externa. Esta presencia de cationes suministra un
ambiente adecuado para muchas funciones de la P.C. (Si añadimos un agente
quelante como el EDTA, o eliminamos el Mg++ y lo sustituimos por Ca++, se produce la
desorganización de la membrana externa).
5. El LPS constituye la endotoxina de las bacterias Gram-negativas. La función
como endotoxina se debe a la región del lípido A. Sus propiedades como endotoxina
están en el origen de muchos síntomas patológicos propiciados por patógenos Gram-
negativos:
a. pirogenicidad (inducción de fiebre)
b. hipotensión
c. en casos graves, choque letal, por fallo cardíaco
6. Pero igualmente, tiene efectos beneficiosos: estimula una serie de
mecanismos defensivos del hospedador, incluyendo la activación del
complemento, que puede ocasionar la lisis de la bacteria, mejora las
propiedades de los fagocitos, etc. Es decir, a pesar del nombre de endotoxina,
el LPS no es intrínsecamente tóxico, sino que su efecto depende de la
respuesta del hospedador. El macrófago es la célula del hospedador principal
responsable de la mediación de los efectos del LPS, tanto los positivos como
los negativos. El macrófago posee receptores de membrana para detectar el
LPS bacteriano, y en respuesta a él, libera una serie de moléculas mediadoras
(citoquinas) que actúan a su vez sobre diversas partes del sistema inmunitario.
De hecho, los efectos negativos se deben a comportamientos incontrolados
desencadenados en el propio sistema inmunitario.
7. El LPS, y concretamente las cadenas laterales constituyen el antígeno
somático O, cuya especificidad viene determinada por la secuencia repetitiva
de azúcares. Esta porción condiciona la virulencia de las bacterias Gram-
negativas patógenas, por lo que debe de ser esencial en la interacción
hospedador-parásito.
La lipoproteína (LPP, lipoproteína de
Braun)

La principal (y probablemente única) función de la

lipopproteína es meramente estructural: estabilizar
el complejo entre peptidoglucano y membrana
externa. Esta unión es tan fuerte que permite
aislar la membrana externa y el peptidoglucano
como una unidad.
 Proteínas de la membrana externa
Están intercaladas en esta membrana, participando en la
estabilización de la arquitectura tridimensional, interaccionando unas
con otras y con los lípidos. Entre ellas, las más importantes son las
porinas.
Las porinas son proteínas de unos 35 kDa, que se
agregan formando trímeros con canales interiores, y que
atraviesan la membrana de parte a parte. Su función es permitir el
paso de sustancias a través de dichos canales interiores, siempre
que su peso molecular sea compatible con el tamaño de los
canales (suelen ser moléculas entre 500 y 700 dalton). En las
enterobacterias, las porinas colaboran en la protección contra las
sales biliares que existen en el ecosistema intestinal donde pasan
parte de su vida.
Existen otras proteínas minoritarias parecidas a porinas, que
actúan como canales específicos que permiten el paso de ciertas
moléculas: vitamina B12, quelatos de Fe, nucleósidos, maltodextrinas,
etc. Algunas de ellas sirven simultáneamente como receptores de
fagos.
PAPELES Y FUNCIONES DE LA MEMBRANA EXTERNA
1) Actúa como tamiz molecular, que permite la difusión únicamente de moléculas
relativamente pequeñas. Esto supone una protección frente a muchos agentes
antibacterianos: colorantes, ácidos biliares, antibióticos, enzimas (p. ej., la lisozima,
que podría alcanzar y atacar al PG). Recuérdese que las porinas sólo permiten el paso
de sustancias hidrofílicas por debajo del tamaño especificado por el diámetro de los
canales.
2) Condiciona propiedades de superficie:
a) grado de humedad (humectabilidad)
b) adhesividad
c) carga eléctrica.
3) Es la estructura donde se fijan los componentes del complemento (sistema
defensivo de los animales superiores que conduce a la inserción, en la membrana
externa, de una serie de proteínas llamadas complejo de ataque a la membrana, que
agujerea dicha membrana y ocasiona la lisis de la bacteria).
4) Ciertas proteínas y cadenas laterales del LPS pueden ser lugares de adsorción
(receptores específicos) de fagos y bacteriocinas.
5) Punto de anclaje del anillo externo (“L”) del corpúsculo basal de los flagelos.
 EL ESPACIO PERIPLÁSMICO
Entre la membrana externa y la membrana citoplásmica
existe un compartimento acuoso bañando al peptidoglucano,
denominado periplasma o espacio periplásmico. El volumen
de este compartimento puede llegar a representar un 20-40%
del volumen celular total.

El periplasma cumple una función de osmorregulación: El

periplasma es una solución densa, con alta concentración de
macromoléculas, y que participa en la regulación de la
osmolaridad celular frente a la tonicidad del medio exterior. Para
ello, existe en este espacio periplásmico un oligosacárido
derivado de la membrana citoplásmica (ODM, o según sus
iniciales inglesas, MDO), a base de 10 unidades de ß-D-glucosa
(unidas entre sí por enlaces 12) con sustituyentes ácidos.
Imagen general de las envueltas de una bacteria Gram-
negativa.

Observa la estructura general de la pared celular:

• el espacio periplásmico contiene el PG, el cual se une

covalentemente con la lipoproteína de Braun, que a su vez
contacta con la lámina interna de la membrana externa

• la membrana externa es una bicapa proteolipídica muy

asimétrica:

• su lámina externa contiene el LPS (observa las cadenas

laterales proyectadas hacia el exterior)

• atravesando la membrana externa hay varios tipos de

proteínas, incluyendo los trímeros de porinas, con sus
correspondientes canales internos, que solo dejan pasar
moléculas hidrófilas por debajo de cierto tamaño
 Paredes de las arqueas Aunque las arqueas pueden comportarse como Gram-
positivas o como Gram-negativas, no se suele aludir a esto
en este dominio de procariotas, ya que sus paredes tienen
poco que ver con las de eubacterias. Exceptuando el género
Thermoplasma, carente de pared celular, las demás arqueas

En muchos casos, la función de P.C. la ejerce la capa

poseen, por encima de la membrana citoplásmica, algún
 tipo de estructura con funciones de pared celular.

S paracristalina, a base de subunidades de

· En muchos casos las funciones de pared celular son
ejercidas simplemente por una capa S paracristalina (véase

(gluco)proteínas tema 4), a base de disposición regular de subunidades

idénticas de una proteína o glucoproteína (p. ej.,
Methanococcus, Methanogenium). Recuerde que en ciertas

 En Methanosarcina y Halococcus: capa S rodeada de

arqueas de ambientes extremos, esta capa S está
estabilizada por factores de esos ambientes: En el halófilo
obligado Halobacterium las subunidades de glucoproteína se

metanocondroitina estabilizan por altas concentraciones de ión Na+. En el

termoacidófilo Sulfolobus la estabilidad la confieren los
bajísimos pH.
 En Metanobacteriales: pseudomureína:
· En Methanospirillum y en Methanothrix varias células, cada

Unidades repetitivas de NAGß(1-3)NAT (N-acetil-

una con su capa S, se encuentran englobadas por una vaina
 común, a base de proteínas y carbohidratos, con una
estructura a base de anillos paralelos.
talosaminourónico)
· En Methanosarcina y Halococcus la capa S se encuentra
 Del grupo –NH del NAT sale un tetrapéptido, con aminoácidos
rodeada de metanocondroitina, un polímero a base de N-
acetil-galactosamina, glucurónico, glucosa y manosa. (Esta

de la serie L metanocondroitina es similar al condroitín sulfato presente

en tejido conjuntivo de animales).

 Cadenas se entrecruzan por puentes peptídicos entre aa(4) de

una y di-aa(3) de otra

 Protoplastos y esferoplastos

 En laboratorio se pueden lograr células

Mediante procedimientos de laboratario se puede lograr
desprovistas total o laparcialmente
eliminar total o parcialmente pared celular bacteriana.de
Se PC
denominan protoplastos las células bacterianas a las que se
 Protoplastos: células
ha desprovisto totalmente procarióticas
de pared celular, mientrascarentes
que
totalmente deaquellas
esferoplastos son pared celular
células bacterianas que poseen
restos de pared.
 Esferoplastos: células procarióticas
carentes parcialmente de pared celular
Los protoplastos… (a) en medios hipotónicos el agua entra y
termina lisando la célula; (b) en una solución isotónica, el
agua no entra al protoplasto, y este permanece estable.
¿Recuerdas dónde actúa la lisozima para desorganizar el
peptidoglucano?
 ¿Para qué sirven los protoplastos y
esferoplastos?
Se emplean en varios aspectos de investigación básica y
aplicada:

 Método suave de obtener extractos

· método suave para luego obtener extractos libres de células
y fracciones subcelulares.

libres de células y fracciones

· en algunas bacterias, método para hacerlas permeables al

subcelulares
ADN, en experimentos de transformación genética (para
hacer ingeniería genética, por ejemplo).

 Para hacerlas permeables a ADN, en

· para realizar fusión entre protoplastos de diferentes cepas
de la misma especie e incluso entre especies distintas. Se

experimentos de transformación
trata de un método de obtención de “recombinantes
somáticos” usado para determinados estudios genéticos en

artificial (ej.: en ingeniería genética)

bacterias que no tengan sistemas naturales de transferencia
genética.

 Fusión de protoplastos (para obtener

recombinantes somáticos)