UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS – ESPE

CÓDIGO: SGC.DI.505
VERSIÓN: 1.0
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA Y LA AGRICULTURA FECHA ULTIMA
REVISIÓN: 26/10/16

CARRERA: INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

GUÍA PARA LAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO

PERIODO
ASIGNATURA: Fundamentos Bioquímica Abril-Agosto 2018 NIVEL: III
LECTIVO:
DOCENTE: Sungey Sánchez, Ph.D. NRC: 5267 PRÁCTICA N°: 13
LABORATORIO DONDE SE DESARROLLARÁ LA PRÁCTICA: Laboratorio Múltiple 2
TEMA DE LA
Extracción, identificación y desnaturalización de proteínas
PRÁCTICA:
INTRODUCCIÓN:
Las proteínas son elementos vitales para los organismos, encontrándose en plantas y animales en una proporción elevada. Hay
una gran variedad de proteínas y cada una desempeña una función biológica específica que puede ser de reserva, de sostén,
transporte y estructural. Químicamente las proteínas están constituidas por combinaciones complejas de carbono, hidrogeno,
oxigeno, nitrógeno y otros elementos en menor proporción como son azufre cobre y fosforo.

Cuando la estructura de la proteína se desorganiza, se dice que se encuentra desnaturalizada y esto trae como consecuencia la
perdida de la actividad biológica. La desnaturalización puede lograrse por medios físicos como el calor o químicos como una
variación de pH, observándose una disminución en la solubilidad y la formación de un coagulo. Este método es utilizado para
demostrar la presencia de proteínas. También se puede identificar proteínas mediante el uso de sustancias que al ponerse en
contacto con ellas, producen una coloración específica, tal es el caso de la Reacción de Biuret.

OBJETIVOS:
Objetivo general:
 Aplicar técnicas para la separación y obtención de proteínas y su identificación mediante reacciones químicas.
MATERIALES:
REACTIVOS: INSUMOS:
 Sulfato de cobre  Vaso de precipitación de 250 ml
 Citrato sódico  Tubos de ensayo
 Carbonato de sodio  Varilla de vidrio
 Ácido acético  Gotero
 Etanol  Embudo
 Hidróxido de sodio  Pipeta aforada
 Acetato de plomo  Varilla de vidrio
 Ácido nítrico concentrado
EQUIPOS:
 Balanza
 Plato agitador (Hot Plate)
 Baño María
MUESTRA: Leche y clara de huevo
INSTRUCCIONES:

 Utilizar mandil y guantes.

 Mantener el área de trabajo en laboratorio limpio y ordenado
 No utilizar ninguna herramienta o máquina sin conocer su uso, funcionamiento y normas de seguridad específicas.
 Manejar con especial cuidado los insumos a utilizar.
 Al acabar la práctica, limpiar y ordenar el material utilizado.
 Los ácidos y las bases fuertes deben manejarse con mucha precaución.
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CÓDIGO: SGC.DI.505
VERSIÓN: 1.0
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA Y LA AGRICULTURA FECHA ULTIMA
REVISIÓN: 26/10/16

CARRERA: INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:

Prueba de Biuret (Albúmina-clara de huevo)
 Se toma un tubo de ensayo y se colocan tres centímetros cúbicos de albúmina de huevo, es decir, la clara.
 Se añaden 2 centímetros cúbicos de solución de hidróxido de sodio al 20%.
 Más adelante se agregan 4 o 5 gotas de solución de sulfato cúprico diluida al 1%. (Reactivo de Biuret)
 El resultado es que la mezcla se torna de color violeta, indicando la presencia de proteínas.

Reacción Xantoproteica (Albúmina-clara de huevo)

 Obtener albúmina de huevo (clara de huevo).
 En un tubo de ensayo se adiciona 1ml de albúmina.
 Adicionar 0.5 ml de ácido nítrico concentrado.
 Llevar a baño María a 70 °C, durante dos minutos.
 Observar un cambio progresivo de la sustancia, dando un tono amarillo.
 Colocar el tubo de ensayo en agua fría (Enfriar el tubo de ensayo).
 Proceder adicionar gota a gota de NaOH 40% sin agitar. Observar la formación en la parte superior un anillo de color
naranja, indicando que la prueba es positiva en la reacción Xantoproteica.

Reacción para compuestos azufrados

 Se colocó en el tubo de ensayo de 2 a 3cc. de albúmina de huevo (clara de huevo). Se añadió 2cc. de solución de
hidróxido sódico al 20%. Y se añadió 10 gotas de solución de acetato de plomo al 5%.
Se calentó el tubo hasta su ebullición, si se formó un precipitado de color negruzco nos indicó que se ha formado sulfuro
de plomo, utilizándose el azufre de los aminoácidos, lo que sirvió para identificar proteínas que tienen en su
composición aminoácidos con azufre.

RESULTADOS OBTENIDOS:

Elaborar una tabla con los resultados de las reacciones realizadas indicando muestra, coloración y observaciones.
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CARRERA: INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

CONCLUSIONES:
Explicar qué cambios observo durante y después de cada ensayo.
Interpretar y explicar con fundamento el porqué de los fenómenos que se producen en cada ensayo.
RECOMENDACIONES:

Al momento de extraer albúmina tener cuidado que no se vaya a mezclar con la yema, debido a que dificultaría la preparación de
la solución para su respectivo análisis.

FIRMAS

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Sungey Sánchez, Ph.D. Ing. Javier Romero Sandra Naranjo, Ph.D.
DOCENTE COORDINADOR DE ÁREA DE COORDINADORA DE LABORATORIOS
CONOCIMIENTO