UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE CC. QQ Y FARMACIA

ESCUELA DE QUIMICA FARMACEUTICA
DEPTO. DE FARMACOGNOSIA Y FITOQUIMICA
LAB. DE FITOQUIMICA
INTRUCTOR: LIC. CARLOS PALENCIA

REPORTE PRÁCTICA No. 9

INVESTIGACIÓN DE SAPONINAS EN RAIZ DE ZARZAPARRILLA (Smilax officinalis).

INTRODUCCION
En la práctica de laboratorio se determinó la presencia de saponinas en un extracto de
zarzaparrilla (Smilax officinalis) mediante las pruebas cualitativas, test de espuma, test de
hemolisis y cromatografía en capa fina (CCF). En la prueba de espuma se utilizaron tres tubos con
distintas muestras (material vegetal, agua y control de saponinas) a las cuales se les agrego agua
destilada, se les aplico calor para luego dejarlos enfriar, se agitaron por 30-40 segundos y se
dejaron reposar 30 minutos para observar la presencia de espuma; en el extracto de zarzaparrilla
se observo la presencia de proteínas o ácidos grasos (Medinilla, 2012).
El test de hemolisis se realizó en una caja de Petri con agar de sangre en la cual contenía tres
copas que fueron llenadas con tres muestras (extracto vegetal acuoso, control de saponinas y
agua destilada), se dejo reposar 24 horas para observar la presencia de zonas claras de hemolisis
(Medinilla, 2012).
Para la cromatografía en capa fina el material vegetal seco se extrajo con 10ml de etanol, se
calentó en baño maría hasta evaporar a 1ml para mezclar con 0.5ml de agua para luego volver a
extraer con 3ml de butanol; se utilizo como estándar saponinas 0.1% en metanol, y como fase
móvil cloroformo-metanol-agua (65:50:10) y cloruro de antimonio III como reactivo revelador
(Medinilla, 2012).
Una vez detectada la presencia de saponinas por métodos cromatográficos en capa fina (CCF) se
procedió a análisis cuantitativo mediante espectrofotometría visible (VIS) en el cual se leyó a
430nm utilizando una curva estándar de diosgenina, y como blanco una mezcla de acetato de etilo
con los reactivos A y B. Se obtuvo la curva de calibración (Y=-3.54544x+1.736625) y así determinar
la concentración de saponinas en zarzaparrilla (Medinilla, 2012).

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RESULTADOS

Tabla No. 1 “Test de Espuma en Zarzaparrilla (Smilax officinalis)”.

No. Tubo Resultado después de 30 Interpretación
min.
1 Mx. de Zarzaparrilla 2.5 cm de espuma Mínima concentración de saponinas
2 Estándar de Saponinas (0.5%) >3 cm de espuma (+) para saponinas
3 Agua 0 (-) para saponinas
(+)= positivo (-)= negativo.
Fuente: Datos experimentales obtenidos en el laboratorio de Fitoquímica, Edificio T-10, Facultad de
Ciencias Químicas y Farmacia, USAC.

Tabla No. 2 “Test de Hemólisis (Smilax officinalis)”.

No. Muestra Resultado Interpretación
1 Mx. de Zarzaparrilla Positivo Se observo hemolisis en agar
sangre, ++++
2 Estándar de Saponinas (0.5%) Negativo +
control positivo
3 Agua, control negativo Negativo Sin hemolisis
Fuente: Datos experimentales obtenidos en el laboratorio de Fitoquímica, Edificio T-10,
Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia, USAC.

Tabla No. 3 “Cromatografía de Capa Fina (Smilax officinalis)”

Rf Rx Coloración Con tx químico

STd 0.225 - Verde (Luz UV)

Saponinas 5% 0.475 - Naranja (Luz UV)
Mx 0.0375 - Rojo
Zarzaparrilla 0.2875 1.28 Naranja (Luz UV)
0.575 1.21 Verde (Luz UV)
0.700 3.11 Naranja (Luz UV)
0.813 1.71 Verde (Luz UV)
0.875 3.88 Naranja (Luz UV)

(mx) = muestra, (tx) = tratamiento.

Fuente: Datos experimentales obtenidos en el laboratorio de Fitoquímica, Edificio T-10, Facultad de
Ciencias Químicas y Farmacia, USAC.

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 Tabla No. 4 “Prueba Espectrofotométrica (Smilax officinalis)”.
Tubo No Concentración Absorbancia
(mg/dL)
1 0.1 1.35780
2 0.2 1.0483
3 0.3 0.70431
4 0.4 0.29065
Concentración -0.078138397 ---------------------
(X)
Ecuación de la curva: Y=-3.54544x+1.736625
a=1.736625 b=-3.54544 r=-0.997800297

mg= miligramos
Fuente: Datos experimentales obtenidos en el laboratorio de Fitoquímica, Edificio T-10, Facultad de
Ciencias Químicas y Farmacia, USAC.

DISCUSION DE RESULTADOS
Las saponinas esteroidales están menos distribuidas en la naturaleza que las saponinas
triterpenoides pentacíclicas. Se les encuentra en muchas familias de las monocotiledóneas,
especialmente en Dioscoreaceae, Amarylidaceae y Lilliaceae (Smilax officinalis). Para la
determinación de saponinas en Smilax officinalis se realizó: el Test de espuma, Test de hemólisis,
Cromatografía en capa fina y Cuantificación espectrofotométrica (Medinilla, 2012).

Para la determinación de saponinas en Smilax officinalis se realizó el Test de Espuma, en el

cual se determino la de forma cualitativa la presencia de saponinas, interpretándose como prueba
positiva si la formación de la capa de espuma era mayor a 3 cm. de altura en el tubo en la superficie
liquida después de 30 minutos (previa agitación 30-40 segundos), evidenciando la presencia de
saponinas, esto fue lo que se observo en el tubo con el estándar de saponinas al 0.5% (Cáceres,
1996). Sin embargo al evaluar el tubo con la muestra de Smilax officinalis (Ver tabla No. 1), se
observaron 2 cm. de espuma únicamente, lo cual según la interpretación se atribuye a una mínima
concentración de saponinas o a la presencia de proteínas o ácidos orgánicos (prueba < 3cm.), a
pesar de que las saponinas tienen la propiedad de formar soluciones acuosas (en presencia de
agua), con abundante espuma debido a que disminuyen la tensión superficial; en el tubo No. 3 con
agua no evidencio presencia alguna de saponinas (Medinilla, 2012).

Las saponinas son glucósidos amargos que pueden causar hemólisis en eritrocitos. Debido a la
propiedad tensioactiva se produce la hemólisis de los glóbulos rojos de la sangre. La prueba de
Hemolisis es la más específica y la más sensible de todas las técnicas para determinar
cualitativamente saponinas (Medinilla, 2012).
Este ensayo es más confiable que el de la espuma. En una caja de agar sangre, se añade una
solución de la muestra que se presume que es o que contiene saponinas. Si los glóbulos rojos se

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rompen (lisan o hemolizan), se asume que la prueba es positiva. Cuando la muestra contiene
taninos, deben eliminarse antes de realizar la prueba ya que la interfieren, y pueden obtenerse
resultados erróneos. Esto se logra por tratamiento repetido de la muestra con óxido de magnesio,
el cual forma complejos insolubles con los taninos, por lo cual es fácil eliminarlos por filtración
(Korate, 2008).

Durante la experimentación se utilizó el mismo extracto de zarzaparrilla de la

cromatografía en capa fina, además de un control negativo el cual fue agua destilada y un control
positivo que fue una solución de saponinas al 5%. Todas las soluciones fueron sembradas en el agar
sangre y se dejaron reposar 24 horas. Los resultados obtenidos mostraron la actividad hemolítica
de la zarzaparrilla, sin embargo se observó que la muestra utilizada mostraba mayor actividad
hemolítica que el estándar utilizado para el control positivo, situación que debía darse al contrario,
esto probablemente debido a que el estándar se encontraba muy diluido o no se encontraba en las
mejores condiciones. El control negativo la cual fue el agua destilada no presentó ninguna
actividad hemolítica como se esperaba (Korate, 2008).

En la cromatografía en capa fina se le aplico un estándar de saponinas al 0.1% en metanol, y

para las otras muestras se peso 1 g de material vegetal seco, y se extrajo con 10 mL de etanol,
calentando en baño de maría durante 5 minutos; luego se evaporó a 1 mL, posteriormente se
mezcló con 0.5 mL de agua, y luego se extrajo con 3 mL de butanol, fue la fase butanólica la que se
utilizo para aplicar en la cromatoplaca. Al momento de observar los resultados se logro observar
seis puntos (Ver Tabla 3). El rango del Rf teórico es de 0.20-0.75 (Martinez, 2012). Se logró
observar un punto con Rf menor a 1 con coloración roja por lo que existe la presencia de saponinas
triterpenoides (Medinilla y Cruz, 2012) las cuales podría ser Estigmasterol o −sitosterol ya que son
las saponinas que dan coloración roja en la prueba por CCF; el siguiente punto se encuentra con un
Rf de 0.29 con una coloración naranja las cuales podrían ser saponinas de tipo sarsasapogenina
pero el Rf no coincide debido a que el Rf de la sarsasapogenina es elevado y cercano a 0.9 por lo
que el punto de referencia para este tipo de sapogenina seria el punto en el cual el Rf es de 0.88 y
con la respectiva coloración Naranja; de igual manera se observan dos puntos de color verde los
cuales pueden ser saponinas esteroidales (Medinilla y Cruz, 2012).

La espectrofotometría es un método de análisis óptico para investigaciones biológicas. El

espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la radiación absorbida o transmitida
por una solución (Harris, 2007).
La espectrofotometría de absorción es la medida de la absorción o emisión de energía radiante, la
energía que incide sobre una muestra es una radiación monocromática (de una sola longitud de
onda), este instrumento se utiliza para cuantificar de una especie absorbente. La ventaja de este
instrumento es tener amplia intervalo de longitud de onda, Cuando el rayo de luz llega a la cubeta
óptica lleva el 100% de su energía. A medida que penetra en la sustancia, puede ir perdiendo su
potencia en función de tres variables: el grado de concentración de la sustancia, la longitud del

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medio absorbente o sea la distancia que el rayo debe recorrer y la longitud de onda o color del
rayo que se está usando, porque si la sustancia que está estudiándose tiene un color determinado,
se comporta diferente frente a los diferentes colores de luz que se puedan hacer pasar a través de
ella (Harris, 2007).
El blanco se prepara para no interferir en las próximas lecturas de absorbancia, ya que no contiene
otras sustancias a examinar por lo que se utilizan reactivos de anisaldehído, acetato de etilo y
ácido sulfúrico como blanco. Toda sustancia puede absorber energía radiante, como el vidrio y
agua. La absorción depende de la estructura de las moléculas y características (Skoog, 2008).
Estos valores se utilizan para elaborar una gráfica de absorbancia versus concentración, en donde
por regresión lineal se sabe la pendiente y el intercepto, los cuales son valores constantes que se
aplican en la ecuación x = y –a / b para encontrar una concentración desconocida (Skoog, 2008).

Para obtener la curva de calibrado, se prepararon soluciones de diferentes concentraciones

de una solución madre de zarzaparrilla (Smilax officinalis), determinando para cada una de ellas el
valor de absorbancia a un longitud máxima de 430nm. No se logro calcular la concentración de
saponinas en zarzaparrilla debido a que los datos obtenidos (Ver tabla No. 4) fueron inversamente
proporcionales a la teoría, debido a que se dio una disminución en las absorbancias al aumentar las
concentraciones por lo que se observa un descenso lineal; Según ley de Lambert-Beer, la
absorbancia es directamente proporcional a su concentración (Skoog, 2008).
Esto se pudo deber a que las diluciones no fueron preparadas correctamente, las cubetas no se
lavaron antes de su uso o estas pudieron haber tenido grasa y huellas dactilares debido a que se
manipularon sin guates por el lado en que pasa la radiación (Skoog, 2008).

CONCLUSIONES
1. Por medio del Test de Espuma, una prueba cualitativa, se logró determina que la
concentración de saponinas presentes en la Smilax officinalis fue minina con 2 cm de
espuma.
2. La cantidad mínima de saponinas en Smilax officinalis puede deberse a la pureza de la
materia prima y la cantidad utilizada para el extracto utilizado.
3. Cualitativamente se comprobó la presencia de saponinas en Zarzaparrilla, al ser positivo el
Test de Hemolisis realizado.
4. La solución de zarzaparrilla utilizada en el Test de Hemolisis presento mayor actividad
hemolítica que el control positivo de saponinas al 5% probablemente a que este se
encontraba muy diluido o no se encontraba en condiciones adecuadas para su uso.
5. La prueba cualitativa realizada para detección de saponinas, test de espuma, no es
suficientemente concluyente y confiable para asegurar la presencia de las mismas debido a
que otras sustancias como las proteínas y ácidos orgánicos también son capaces de formar
espuma por lo que es necesario realizar una prueba cuantitativa, como la
espectrofotometría.

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 6. En los resultados de la cromatografía los valores de Rf pudieron haber variado por la forma
de la extracción y por la calidad de la muestra, pero los resultados evidenciaron la presencia
de saponinas lo cual es el objetivo de la misma.
7. Al momento de revelar la cromatoplaca se lograron observar los diferentes puntos que
hicieron visibles a las sapogeninas triterpenoides y esteroidales dando la coloración
característica de los mismos.
8. En la caracterización cromatográfica, se observo la presencia de saponinas que se
encontraban dentro del rango teórico de Rf =0.20-0.75.
9. Los resultados obtenidos de las absorbancias en el espectrofotómetro fueron erróneos en
consecuencia de una mala dilución al preparar las soluciones por lo tanto no se pudo
calcular la concentración de saponinas en Zarzaparrilla.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
▪ Alonso, J (2004). Tratado de Fitofármacos y Nutracéuticos. Corpus Ed. Buenos Aires,
Argentina.
▪ Cáceres, A. (1996). Plantas de uso medicinal en Guatemala. Guatemala. Ed. Universitaria.
Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia. Universidad de San Carlos de Guatemala.
▪ Castillo, E. (2007). Manual de fitoterapia. México: Editorial Reverté.
▪ Harris, D. (2007). Análisis Químico Cuantitativo. (3ª Ed.). España: Editorial Reverte.
▪ Korate, C., Purohit, A. y Gokhale, S. (2008). Pharmacognosy (4a Ed.). Estados Unidos:
Editorial NiraliPrakashan.
▪ Medinilla, B. y Cruz, S. “Curso de Fitoquímica”. Facultad de Ciencias Químicas Y Farmacia,
Universidad de San Carlos de Guatemala, Guatemala, 2012.
▪ Medinilla, B., Cruz, S., et al. (2012). “Manual de Laboratorio de Fitoquímica”. Facultad de
Ciencias Químicas Y Farmacia, Universidad de San Carlos de Guatemala, Guatemala.
▪ Ocampo, R. (2008). Curso Práctico de Química, enfocado a Biología y Alimentos. Editorial
Universidad de Caldas.
▪ Salama, A. (2005). Manual de farmacognosia, Análisis microscópico y fitoquímico, y usos de
plantas medicinales. Universidad Nacional de Colombia, Departamento de Farmacia.
Bogotá.
▪ Skoog, D. (2008). Principios de Análisis Instrumental. (6ª Ed.). México: Editorial Mc Graw
Hill.
▪ Wagner, H., S. Bladt & E. Zgaionski. (1996). Plant Drug Analysis. Springer-Verlag. Berlin. P.
305.

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ANEXOS

ZARZAPARRILLA (Smilax officinalis)

SINONIMOS
Zarzaparrilla, Uva de perro, Arínjol, Arítol, Endalarr, Latx,
Salsaparilla, Sarsaparilla, Salsepareille, Sarsaparilla, Zarza morisca.

DESCRIPCION
Planta trepadora y leñosa, con tallos serpenteantes y
provistos de aguijones. Las hojas son brillantes, coriáceas, a veces
con márgenes espinosos y con dos zarcillos en la base. Pueden ser
de forma variable, desde acorazonadas, hasta estrechas y
puntiagudas, de color verde que puede estar moteado de un verde
más pálido. Las flores son pequeñas, de color amarillo pálido, de
suave perfume, colgantes en inflorescencias. Hay plantas masculinas
y plantas femeninas. Las femeninas dan bayas que al madurar pasan
del verde al rojo y al negro, sucesivamente. Posee unas largas raíces,
de hasta 2 m de longitud.

HABITAT
Originaria de Sudamérica, se ha distribuido por todo el mundo, conociéndose infinidad de
subespecies. Se puede ver en bosques y malezas, cubriendo troncos de árboles y arbustos.

COMPOSICION QUIMICA Y PROPIEDADES MEDICINALES

Es rica en glicósidos, flavonósidos, passicapsina y passibiflorina, glucósidos cianogénicos,
vixentina, isovitexina, kampferol, crisina, quercetina, neohisperidina y otros, su concentración en
hojas y flores alcanza entre 1.5-2.1% dependiendo de la época de recolección. También contiene
varios derivados de fenol como 4-hidroxi-β-ionol, vomifoliol y dehidrovomifoliol, linalol y α-
terpenol y otros. Los alcaloides reportados son harmano, harmina, harmalina, y harmalol
presentándose la mayor concentración en las hojas.

USOS POPULARES
La zarzaparrilla tiene propiedades refrescantes, aperitivas, digestivas, diuréticas,
sudoríficas, depurativas, antiasmáticas y depurativas. Las partes utilizadas con fines terapéuticos
son sus raíces y su rizoma, una especie de raíz gruesa que se ramifica abundantemente y forma
largos tallos subterráneos de color marfil. La zarzaparrilla se utiliza desde hace siglos con fines
medicinales. Los españoles llevaron hasta Europa semillas de la especie S. utilis, con el fin de
utilizarla para curar la sífilis. Las propiedades depurativas de S. officinalis son excelentes. También

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es un buen diurético y útil en caso de estados infecciosos. Por vía externa, se ha utilizado para
elaborar remedios contra diversas afecciones de la piel, el siglo pasado también contra la lepra.
Diurética: elimina sobre todo el ácido úrico, los principios nitrogenados y la urea. Depurativo
general: reuma, gota, etc. Enfermedades infecciosas, infecciones por hongos. Psoriasis,
dermartitis, eccema crónico: se aplica externamente. Maceración: 40 gramos por litro de agua. Se
macera durante 8 días en agua fría. Luego se hierve durante 20 minutos. Se bebe a lo largo del día.
Se hacen tratamientos de varias semanas. Maceración para aplicaciones externas: 50 a 100 gramos
por litro de agua. Tintura madre: 30 gotas, tres veces al día. Extracto líquido: 1 a 10 gramos diarios.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
o Bernardo RR, Pinto AV, Parente JP. (1996) Steroidal saponins from Smilax officinalis.
Phytochemistry. Sep; 43 (2): 465-9.
o Links Hu Y, Xia Z, Sun Q, Orsi A, Rees D. (2005) A new approach to the pharmacological
regulation of memory: Sarsasapogenin improves memory by elevating the low muscarinic
acetylcholine receptor density in brains of memory-deficit rat models. Brain Res. Oct 26;
1060 (12): 26-39.
o Sautour M, Miyamoto T, Lacaille-Dubois MA. (2005) Steroidal saponins from Smilax medica
and their antifungal activity. J Nat Prod. Oct; 68 (10): 1489-93.
o Shao B, Guo H, Cui Y, Ye M, Han J, Guo D. (2007) Steroidal saponins from Smilax china and
their anti-inflammatory activities. Phytochemistry. Mar; 68 (5): 623-30.

Figura No. 1 Test de Espuma en extracto de raíz de ZARZAPARRILLA (Smilax officinalis),

comparado con control de saponinas y agua (respectivamente en la imagen de izquierda a
derecha)

Fuente: Datos experimentales obtenidos en el laboratorio de Fitoquímica, Edificio T-10,

Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia, USAC.

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Figura No 2. Test de Hemolisis para saponinas en ZARZAPARRILLA (Smilax officinalis). Se observa
coloración blanquecina en la muestra (Mx) de zarzaparrilla y en el estándar sembrada,
característico de la hemolisis de los eritrocitos del agar sangre. Se observa una mayor coloración
en la muestra que en el estándar.

Mx
Mx

H20 H20
STd
STd

Fuente: Datos experimentales obtenidos en el laboratorio de Fitoquímica, Edificio T-10, Facultad

de Ciencias Químicas y Farmacia, USAC.

Figura No 3. Cromatoplaca para Identificación de Saponinas en extracto de raíz de

ZARZAPARRILLA (Smilax officinalis) por cromatografía en capa fina, empleando estándar de
saponinas al 1% en metanol.

Fuente: Datos experimentales obtenidos en el laboratorio de Fitoquímica, Edificio T-10,

Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia, USAC.