CURSO BIOLOGÍA CELULAR

TRANSPORTE A TRAVÉS DE MEMBRANAS

Profesor Dr. Marco Tulio Núñez

Departamento de Biología, Facultad de

Ciencias, Universidad de Chile
 Difusión de moléculas y iones en solución

En una solución los solutos se transportan debido a fuerzas impulsoras, que

pueden ser gradientes de concentración, potencial eléctrico o presión.

Difusión: es el transporte neto de un soluto desde una región de mayor potencial

químico a otra de menor potencial químico.

Si el soluto es neutro este difunde desde una región de mayor concentración a

otra de menor concentración

La base molecular de la difusión está en el movimiento al azar de las partículas

de soluto debido choques entre ellas o con el moléculas del solvente, causado por
la agitación térmica.
Difusión
Primera ley de Fick
Fick (1855) descubrió empíricamente que la velocidad de difusión de un soluto (flujo,
J) es directamente proporcional al gradiente de concentración:
J = -D(dC/dx)
J = No de moléculas o iones transportados por unidad de tiempo a través de
la unidad de área (moles × s-1 × cm-2);
D (cm2 s-1): coeficiente de difusión del soluto;
-(dC/dx): gradiente de concentración;

-dC/dx
 Difusión de un soluto a través de la membrana celular

Si el medio donde se realiza la difusión es la membrana celular y si suponemos que el

gradiente de concentración del soluto es lineal a través de ésta, la ecuación de Fick queda:

J = -D(dC/dx) = -D(∆C/∆x)= -D(Ce - Ci)/δ = P(Ce - Ci) = P∆C

Ce1 membrana
J = P∆C
Ce

Ci
Ce2
δ ( Δx)

Donde: J = flujo de soluto: (moles × s-1 × cm-2);

δ = grosor de la membrana
P = -D/δ (cm/s) es el coeficiente de permeabilidad del soluto en la membrana
∆C = diferencia de concentración del soluto a través de la membrana.

Al equilibrio las concentraciones del soluto en el medio externo e interno se igualan:

Ce = Ci
y el flujo neto es ????
 Osmosis

Es el flujo de volumen J, del solvente (agua) a través de una membrana

semipermeable que separa dos soluciones de diferente concentración.

Jv = Lp (∆π - ∆p)

Lp: coef. de filtración.

La presión hidrostática, p, aplicada que impide el flujo neto de agua

equivale a la presión osmótica (π) de la solución que contiene el soluto.

Lodish et al. 2004

 Osmosis

La expresión que describe la presión osmótica π de una solución fue derivada por
van’t Hoff depende de la concentración de cada una de las especies disueltas:
π =. RT(C1 + C2 + …….Cn) =RT ΣCi

Donde R, es la constante de los gases, T la temperatura absoluta y Ci la

concentración del soluto i.

La diferencia de presión osmótica a través de la membrana es entonces:

∆π = RT Σ∆Ci

:p

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Respuestas de células animales y vegetales a cambios en la osmolaridad del medio

Lodish et al. 2004

 Potenciales de membrana
En las células, las membranas (plasmática o de organelos) separan
compartimentos con distintas composiciones iónicas. Los iones
[aniones (-) y cationes (+)] presentan diferentes permeabilidades
o velocidades de difusión a través de las membranas. Estas
diferencias en permeabilidades generan diferencias de potencial
eléctrico a través de la membrana.
tiempo 0 equilibro

∆V

A B
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 Potenciales de membrana
Si la membrana es permeable a sólo una especies iónica (ej. al ión
K+) que se encuentra a diferente concentración a ambos lados de
ésta, la difusión del ión produce un leve exceso de cargas positivas
en el compartimiento de menor concentración, que genera una
diferencia de potencial eléctrico (∆V o E) a través de la membrana,
llamado, potencial de difusión.
tiempo 0 equilibro

∆V

A B
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 Potenciales de membrana

El flujo neto del ión se detiene cuando la magnitud del potencial es tal que se
balancea con efecto del gradiente de concentración. Esta situación de
equilibrio está descrita por la Ecuación de Nernst.

RT Ce RT [K+]e [K+]e
E= ∆V = ln = ln = 58 log (mV)
zF Ci zF [K+]i [K+] i

Donde, R es la constante de los gases (8,31 J • mol-1 • oK-1),

T, la temperatura absoluta (273 + t oC),
z la carga del ión,
F la constante de Faraday (96.500 Coulomb • mol-1), y
Ce y Ci las concentraciones del ión en cada compartimento (mol).
 Transporte a través de las Membranas Biológicas

Debido a la naturaleza no polar de la bicapa, las membranas de

fosfolípidos puros son altamente impermeables a iones y moléculas
orgánicas polares.

Tamaño,
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Carga,
Polaridad
 Transporte a través de las Membranas Biológicas

Las membranas celulares tienen una permeabilidad mucho mayor a

iones y moléculas polares como azúcares que lo predicho para una
membrana constituida solo por una bicapa de fosfolípidos.
• La razón es que varias de las proteínas integrales de membrana
constituyen vías específicas de transporte para iones y moléculas polares
y agua que facilitan su paso: transporte o difusión facilitada

DIFUSIÓN FACILITADA
Transporte a favor del gradiente de
potencial químico TRANSPORTE ACTIVO
Transporte en contra del gradiente
de potencial químico
 Transporte a través de las Membranas Biológicas
•En las membranas celulares los principales tipos de proteínas de
membrana que facilitan el transporte de iones y moléculas polares son
los canales de iones, canales de agua, los transportadores y las
bombas de iones.
•A través de las proteínas transportadoras los solutos se pueden mover
a favor de su gradiente de potencial químico (transporte o difusión
facilitada) o en contra de su gradiente (transporte activo).

DIFUSIÓN FACILITADA
Transporte a favor del gradiente de
potencial químico TRANSPORTE ACTIVO
Transporte en contra del gradiente
de potencial químico
Difusión Facilitada

•La Difusión Facilitada de solutos (iones o moléculas orgánicas polares pequeñas)

tiene lugar a través de proteínas de transporte como canales iónicos o
transportadores, a favor del gradiente de potencial químico.
•Es más rápida que lo que predice la ecuación de Fick
•Es específica para un soluto determinado
•Es saturable (se llega a un flujo máximo Jmax o V max)

JG = PG ∆C

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Proteínas de membrana transportadoras de solutos

Lodish et al. 2004

Proteínas de membrana transportadoras de solutos

Lodish et al. 2004

 Canales de iones

•Son proteínas integrales de

membrana plegadas formando
un poro a través del que se
transportan iones.

•El tamaño del poro y la densidad

de cargas en su interior
determinan su selectividad a los
diferentes iones.

•Pueden estar en un estado

conformacional no conductor
(cerrado) o conductor (abierto).
 Canales de iones
Su apertura o cierre puede estar
regulada por factores físicos
(voltaje, tensión mecánica) o
químicos (iones, neurotransmisores,
hormonas, fosforilación, etc.).

•Pueden estar constituidos por una

o varias cadenas polipeptídicas.

•En el estado abierto, transportan

107 a 108 iones/s,
Están involucrados en procesos
fisiológicos como conducción del
impulso nervioso, secreción celular,
regulación del volumen celular,
apertura de estomas, quimiotaxis,
etc.
Algunos canales de iones están constituidos por una sola cadena
polipeptídica

Lodish et al. 2004

 Algunos canales de iones están formados de varias subunidades

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Algunos canales de K+ y canales activados por nucleótidos, cNG, forman homotetrámeros.

 La permeación de los iones a través del poro del canal puede considerarse como un
proceso de saltos a través de barreras de energía y unión a sitios de la proteína

+ +
- - + +
-
+

+
- -

+
+
+
+
-

+
+

- -
+

+
-
+

- -
+ -
-

-
+

+
-
+
+
+

+
+
G A
S1 B S2

Inter. ión-dipolo
Inter. ión-dipolo Unión a sitios
en el canal
 Canales de agua o acuaporinas
En las células el agua se transporta a través de proteínas de membrana
llamadas canales de agua o acuaporinas, que forman poros selectivos al
agua, excluyendo iones y otras moléculas orgánicas polares de bajo PM
La permeabilidad al agua aumenta de 1×10-3 cm/s a 2×10-2 cm/s.
La expresión de estos canales de agua se ha detectado mediante ensayos
de hinchamiento de ovocitos Xenopus expuestos a un medio hipotónico,
inyectados con mRNA que codifica para acuaporinas.

exptal.

control

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0,5 min 1,5 min 2,5 min 3,5 min

Canales de agua o acuaporinas.

Los canales están formados por

homotetrámeros de subunidades de
28 kDa c/u con seis hélices.

La cadena polipeptídica posee seis

dominios de transmembrana acuaporina γ-TIP de tonoplasto,

Se ha postulado los monómeros son

las unidades funcionales que
forman poros de un radio de entre
1,5 a 2,0 Å.

Las moléculas de agua se moverían

en fila india: cinco a nueve
moléculas de agua ocuparían la vía
del transporte.
 Transportadores

Los transportadores son proteínas integrales de membrana mono u oligoméricas

que a igual que los canales iónicos poseen varios dominios de transmembrana
con estructura de hélices α.

Pueden transportar una especie molecular o ión a favor de su gradiente de

potencial: transportador simple (uniporters).

También existen los cotransportadores (simporters) y los contra-

transportadores (antiporters) que pueden catalizar el transporte de un soluto en
contra de su gradiente de potencial químico acoplado al movimiento de otros
iones o moléculas a favor de su gradiente de potencial químico.
Modelo de la difusión facilitada de D-Glucosa mediada
por el transportador GLUT-1
 Estructura de los
transportadores

Modelo estructural de un típico transportador

de células eucarióticas de 12 segmentos de
transmembrana.
Por ejemplo el transportador de glucosa
GLUT1.
 Mantención de los gradientes iónicos: Transporte Activo.

Las células mantienen asimetrías iónicas entre el interior y el exterior.

Esto lo hacen transportando iones en contra de su gradiente de potencial químico. A

este tipo de transporte se le denomina transporte activo.

El transporte activo de iones no es un proceso que ocurra espontáneamente ya que su

∆G es positivo. Para que ocurra, debe estar acoplado a un proceso cuyo ∆Gq sea
negativo de modo que la suma sea < 0.
∆Gt + ∆Gq < 0

La concentración de K+ es mayor en el citosol que

en el exterior y lo contrario ocurre con el Na+. K+ Na+
 Bombas iónicas o ATPasas transportadoras
de iones

En las membranas celulares existen bombas iónicas o ATPasas

transportadoras de iones que conducen activamente iones
usando como fuente de energía (∆G) de hidrólisis del ATP

Se encuentran en las membranas plasmáticas de células animales,

vegetales y bacterias y en membranas de organelos (mitocondrias,
cloroplastos, vacuolas, endosomas, etc.).

Existen tres tipos de bombas iónicas: ATPasas de membrana tipo P,

tipo V y Tipo F, que se diferencian por su estructura molecular así
como por el mecanismo de transporte activo.
 Bombas iónicas o ATPasas transportadoras de iones

ATPasas de membrana tipo P

Están presentes en las membranas plasmáticas de células eucarióticas y en organelos como
retículo endoplásmico, aparato de Golgi. Están formadas por una o dos cadenas polipeptídicas y
durante el ciclo de transporte forman un intermediario fosforilado :

Mg2+
Ci+ + E1 E1Ci+ + ATP E1Ci+ATP E1Ci+Pi + ADP
 Esquema del ciclo de transporte de Na+ y K+ por la bomba de sodio

Es la más estudiada de las bombas tipo P. Está presente en las MPs de las células animales y mantiene
los gradientes de concentración de Na+ y K+ entre la célula y el medio extracelular.
Transporta 3 iones Na+ hacia el espacio extracelular y 2 K+ hacia el citosol utilizando una molécula de
ATP por cada ciclo de transporte.

K+ release
(intracellular)

Lodish et al. 2004

 Estructura de la Na+-K+-ATPasa
α
Está compuesta de dos subunidades: Sitio de fosforilación As369
una α, con un peso de 110 kDa y otra β,
más pequeño de alrededor de 55 kDa.
β
Las funciones catalíticas están en la
subunidad α, que contiene el residuo
fosforilable por el ATP. La cadena α extracelular
(≈1000 AAs) posee 10 segmentos de
transmembrana unidos por 5 cortas
asas extracelulares (análogo a otras
ATPasas tipo P) y está muy conservada.
citosol
La subunidad β un glicopéptido (≈ 370
AAs) tiene un solo segmento
transmembrana y expone la mayor
parte de su estructura muy plegada al
interior. Se postula que se requiere para
el adecuado plegamiento de la proteína y
su destinación a la membrala plasmática.
ATPasas de membrana tipo V
Están presentes en las membranas de las vacuolas y en organelos como lisosomas,
retículo endoplásmico, cisternas del aparato de Golgi y endosomas, bombean
electrogenicamente H+ desde el citosol al lumen del organelo.
Están compuestas de dos partes. Una parte hidrofóbica integral en la membrana (V0)
formada por varias copias del proteolípido c y una de a y que constituye la vía de
transporte de protones. La forman siete tipos de subunidades diferentes con un PM
total de entre 400 y 500 kDa
Una cabeza (V1) hidrofílica que está orientada hacia el citoplasma y donde se realiza la
hidrólisis del ATP. + H
H+ lumen organelo
H+

citosol

H+

Lodish et al. 2000

ATPasas de membrana tipo F
Están presentes en las membranas plasmáticas de las bacterias, en la membrana tilacoide de
cloroplastos y en la membrana interna de las mitocondrias.
Catalizan la síntesis de ATP a partir de ADP y Pi.
La energía proviene del gradiente de potencial electroquímico de protones (H+) a
través de la membrana generado por la actividad de la cadena transportadora de electrones.
Es decir, actúan como ATP sintasas.
Al igual que las ATPasas tipo V están formadas por dos dominios: F1 y F0
El complejo integral F0 contiene tres tipos de subunidades a, b y c: (a1b2c10 en bacterias) y
contiene el canal a través del que se transportan los protones. El complejo F1 está compuesto
de 5 polipéptidos diferentes :α,β, y γ.

ADP + Pi ATP

lumen mitocondria

H+ H+ H+
Lodish et al. 2000 H+ H+ espacio inntermembranas
Diversos procesos de transporte en el eritrocito
Fin