LABORATORIO DE DIVERSIDAD CELULAR 1 CELULAS PORCARIOTAS: TINCION

Y SU OBSERVACION.
Diaz, Osmer1; Hernández, Carolina2; Lobo, Jonier3; Viloria, Carlos4
1 3
2019161009 2019161051
2 4
2019161041 2019161020
________________________________________________________________________________
RESUMEN.

Las células tienen un tamaño determinado por su complejidad y en este laboratorio se

pretende tener una visión de lo que la diferencia de estas es mediante la utilización de la
tinción y otras técnicas.

Palabras clave: laboratorio, células, tamaño.

ABSTRACT.

The cells have a certain size depending on their complexity, in this laboratory we
pretend to have a vision of what is that difference through some techniques.

Key words: Laboratory, cells, size

________________________________________________________________________________
INTRODUCCIÓN.
Después de la invención del microscopio y
todos los nuevos espacios de estudio que este
invento supone para la humanidad, se
necesitaba un método por el cual se pudiera
distinguir entre las infinidades de
microorganismos existentes en nuestro
mundo y otros por descubrir, he aquí la gran
hazaña de Zacharias Janssen. Desde ese punto
surgieron grandes dudas acercas del tamaño,
color, grado de complejidad de los
microorganismos etc.
En el siguiente laboratorio se hace
observación y caracterización de las bacterias
que se desarrollan en un medio de cultivo
(bebidas lácteas y cavidad bucal) por medio
de algunas técnicas de coloración (coloración
simple y la de GRAM) para que así de esta
forma poder reconocer las diferentes formas y
tamaños de las células procariotas y sus
diferencias para con las células eucariotas.
Materiales:
 Kumis.
 Guantes de nitrilo.
 Azul de metileno.
 Cristal de violeta.
 Colorante de GRAM de bacterias.
 Etanol al 95%
 Microscopio.
 Papel secante.
 Aceite de inmersión.
 Asa de inoculación punta redonda.
 Porta y cubre objetos.
 Beaker.
  Lámpara de alcohol.  Extensión: se toma una pequeña
 Agua destilada. cantidad del medio de cultivo con el
 Goteros. asa y en un porta objetos se realiza
 Gradilla de tinciones. un movimiento en zigzag para
extender la muestra
MÉTODOS
EXPERIMENTO#1 Coloración simple.

 Esterilización de Asa de inoculación

punta redonda.

 Fijación: se acerca el portaobjetos a
(Figura 1)
 Preparación del medio de cultivo en
caja de Petri: mezclar con el asa ya
esterilizada un poco de Kumis y
agua destilada.
.
(Figura 3)
la llama del mechero de alcohol y se
realizan pequeños movimientos
tratando de que el calor llegue por
igual a toda la muestra sin
proporcionarle un exceso de calor ya
que puede dañar la muestra.

(Figura 4)
(Figura 2)
 Tinción: una vez se encuentra
uniformemente seca la muestra, se
ubica en la gradilla de tinciones y se
aplican unas gotas de Azul de
metileno el cual es extendido de
manera uniforme en toda la muestra,
se deja 1 min y luego se retira el
exceso de tinte con agua.
(Figura 5)
 Se retira el exceso de agua con
toallas secantes y para no alterar la
muestra con estas se acerca
nuevamente al mechero hasta
completar el secado.
(Figura 6)
 Se cubre la muestra con el cubre
objetos y una vez ubicado el
portaobjetos en la platina del
microscopio, sobre el cubre objetos
se pone una pequeña gota de aceite
de inmersión, se procede a observar
con el objetivo 100X (figura).
(Figura 7)
EXPERIMENTO #2 Coloración GRAM.
 Se toma un portaobjetos limpio y con
el asa de inoculación se toma
muestra de la caja de Petri ya
anteriormente preparada, se realiza
un zigzagueo para esparcir la
muestra.
(Figura 8)
 Se coloca el portaobjetos con la
muestra en la gradilla de tinciones, se
cubre con cristal de violeta y se deja
actuar 1 minuto, lavar el exceso de
cristal de violeta con agua.
 Cubrir con etanol al 95%, dejar
actuar 30 segundos, se hacen
movimientos oscilatorios hasta
quitar el exceso de colorante, lavar
con agua.

 Se aplican unas gotas de safranina o

fuscina y se dejan actuar 1 minuto,
lavar el exceso con agua.

(Figura 9)
 Se cubre con lugol y dejar actuar 1
minuto, lavar con agua.

 Quitar el exceso de agua con toallas

absorbentes y para secar
completamente se hacen
movimientos oscilatorios cerca al
mechero.
 Se ubica en la platina del
microscopio y se observan las
distintas coloraciones que absorben
(Figura 10) las bacterias.
EXPERIMENTO #3 Relación células procariotas RESULTADDOS
y eucariotas
Experimento 1.
 Tomar un palillo de madera y hacer un
raspado en el epitelio interno de la mejilla
 Esparcir la muestra en el porta objetos
zigzagueando sobre este, se seca la
muestra acercándola al mechero.
 Una vez seca se ubica en la gradilla de
tinciones y se agregan unas gotas de azul
de metileno y se deja actuar 1 minuto.

Experimento 2.

 Retirar el exceso de tinte con agua y secar

con toallas absorbentes y acercándola al
mechero.

Experimento 3.

 Una vez seca ubicar en la platina del

microscopio y observar.
 DESARROLLO PREGUNTAS
COMPLEMENTARIAS
1. ¿Por qué se deben utilizar coloraciones
para observar microorganismos?
RTA// La tinción de microorganismos se
utiliza con el fin de generar suficiente
contraste para poder ser observados por
medio de un microscopio en un campo
claro (19fe2).
2. ¿Para qué se usa la coloración de Azul
de Metileno?
RTA// El Azul de metileno se utiliza en la
tinción de células eucariotas para hacer
más visibles sus núcleos.
3. Según GRAM, ¿cómo se dividen las
bacterias?
RTA// La tinción de GRAM, creada por
Christian Gram, ayuda a clasificar las
bacterias en dos grupos, GRAM + y
GRAM-, ésta tinción depende de la pared
celular que tengan las distintas bacterias
(19fe2).
4. ¿Por qué se debe dejar enfriar el asa?
RTA// ya que el asa se debe calentar para evitar la
contaminación de los microorganismos en estudio
con otros organismos que estuvieron presentes en
el filamento metalico esto se llama esterilización y
se debe dejar enfriar antes de tomar la muestra
para evitar que el calor destruya a los
microorganismos que se están estudiando
(vicerrectorado de estudios, s.f.)
5. ¿Cómo se clasifican las bacterias según
su forma? Descríbelas:
RTA// Según su forma las podemos clasificar
como:
• Coco: con forma esférica y puede vivir como
células juntas o individuales
• Bacilo: con forma de bastón y son negativas y
positivas
• Vibrio: con forma de coma son microorganismos
acuáticos, algunas de las cuales causan
enfermedades graves en humanos y otros
animales.
• Espirilo: con forma helicoidal y son dañinos para
la salud
• Espiroqueta: con forma de tirabuzón muy activa
y rápida, que carece de pared celular rígida (pino,
s.f.).
6. ¿Porque se dice que la coloración con
azul de metileno es una coloración
simple y directa y con GRAM es una
coloración diferencial?
RTA// tinción simple se llama así porque nada
más usan un solo colorante, que puede ser azul de
metileno y tinción diferencial es aquella donde
usas más de un colorante
7. ¿Cuál es la diferencia entre capsula y
capa mucosa en las bacterias?
RTA// La Cápsula Bacteriana es la cubierta
protectora de las bacterias rechazando la
fagocitosis, funcionando como depósito de
alimentos y lugar de exclusión como sustancia de
desecho, evitando así el ataque de bacteriófagos,
permitiendo la adhesión de la bacteria a las células
animales del hospedador. Mientras la Capa
Mucosa, son los que examinan el interior de los
órganos digestivos, los respiratorios, los
urológicos y genitales femeninos. Son tejidos
orgánicos suaves y húmedos (brainly, 2018).
8. ¿Cuál es la composición química de la
capsula bacteriana?
RT// Generalmente contiene glicoproteínas y un
gran número de polisacáridos diferentes,
incluyendo polialcoholes y aminoazúcares.
De mayor a menor espesor, las cápsulas se
clasifican en: macrocápsulas (visibles con el
microscopio óptico en células tratadas con tinción
negativa), microcápsulas (solo visibles con el
microscopio electrónico o con técnicas
serológicas) y capas mucosas (slime-layers), capas
difusas débilmente asociadas a la superficie
celular. La mayoría de las cápsulas se componen
de polisacárido, ya sea homopolisacárido (p. ej.,
celulosa, dextrano, levano) o heteropolisacárido
(p. ej., alginato, ácido colánico, ácido hialurónico)
(clinica universidad de navarra, s.f.).
9. ¿Qué tipo de antibióticos se conocen
para bacterias GRAM+ y GRAM-?
RTA// Antibióticos.
Antibióticos para bacterias GRAM positivas:
 Las PENICILINAS actúan frente a
multitud de bacterias gram-positivas.
- De espectro dominante sobre bacterias
Gram-positivas, por ejemplo beta-
lactámicos (con extensión para bacterias
Gram-negativas en el caso de la
amoxicilina y cefalosporinas) y polipéptidos, solo para bacterias Gram-
macrólidos.
 La ERITROMICINA y fármacos
similares (claritromicina, azitromicina,
etc) son activos, sobre todo, frente a
microorganismos de los llamados ‘gram-
positivos' y tienen utilidad en muchas
infecciones (amigdalitis, infecciones
bucales, neumonías ,etc), sobre todo en
alérgicos a penicilina. Producen molestias
de estómago en muchas personas.
 GLICOPEPTIDOS: VANCOMICINA,
TEICOPLANINA: Son antibióticos muy
activos frente a microorganismos
llamados "gram-positivos", incluso los
resistentes a penicilinas y cefalosporinas.
Por ello se emplean en infecciones
hospitalarias graves, sobre todo en
alérgicos a penicilina.
 LINCOMICINA Y CLINDAMICINA:
Son activos también frente a 
microorganismos llamados "gram-
positivos", pero además pueden con otros
microorganismos llamados anaerobios.
También se emplean en infecciones de
hospital, sobre todo en alérgicos a
penicilina. La clindamicina se utiliza
tópicamente en algunas infecciones de
piel.
 Las PENICILINAS G son eficaces contra
estreptococos gram-positivos,
estafilococos, enterococos y
meningococos: se emplean en el
tratamiento de la sífilis, gonorrea,
meningitis, ántrax y el pián. La penicilina
V se utiliza en el tratamiento de las
infecciones respiratorias.
Antibióticos para bacterias GRAM
negativas:
 Los AMINOGLUCÓSIDOS, también de
espectro restringido, actúan frente a
bacterias gram-negativas.
- De espectro dominante frente a bacterias
Gram-negativas, por ejemplo,
negativas; aminósidos (con extensión para
bacterias Gram-positivas en el caso de la
gentamicina, y para Mycoplasmas en el
caso de la espectinomicina), y quinolonas
(con extensión para bacterias Gram-
positivas y Mycoplasmas para el caso de
las fluoroquinolonas).
 AMINOPENICILINAS (Amoxicilina,
ampicilina, etc). Tienen más actividad
frente a los microorganismos llamados
‘gram-negativos', y si se asocian con
sustancias como el ácido clavulánico o el
sulbactam, también pueden con las
bacterias que producen beta-lactamasa,
como el estafilococo.
 GENTAMICINA, TOBRAMICINA,
AMIKACINA, NETILMICINA. Se usan
sólo en infecciones graves por
microorganismos de los llamados gram-
negativos.
QUINOLOMAS: Hay 2 subgrupos de
quinolonas. Las más antiguas (ácido
nalidíxico, ácido pipemídico) sólo actúan
contra algunos microorganismos de los
llamados ‘gram-negativos' y se utilizan
sólo como antisépticos urinarios (en
infecciones leves de orina). Las más
recientes, o fluoroquinolonas, incluyen
fármacos como norfloxacino ,
 ciprofloxacino y ofloxacino y son activos
frente a otras muchas bacterias,
incluyendo la llamada Pseudomona (una
bacteria peligrosa que causa infecciones
muy graves).
 La AMPICILINA y la AMOXICILINA
tienen un rango de acción similar a la
penicilina-G, con un espectro de acción
algo mayor, que incluye a las bacterias
gram-negativas. La ampicilina y espectro, las tetraciclinas pueden, en
derivados, son eficaces frente a la fiebre
tifoidea, bronquitis, infecciones del tracto
urinario, neumonía, meningitis y controlada por el sistema inmunológico
bacteriemia. Las penicilinas resistentes a
la penicilinasa son efectivas frente a las
bacterias que han desarrollado resistencia
a la penicilina G. Las penicilinas
antipseudomonas permiten el tratamiento
de las infecciones provocadas por la
bacteria gram-negativa Pseudomonas, que
es una bacteria frecuente en la flora
hospitalaria. Las penicilinas
antipseudomonas se pueden administrar
de forma profiláctica a los pacientes con
una alteración del sistema inmunológico
que tienen una susceptibilidad
incrementada a las infecciones por gram-
negativos.
 AMINOGLUCÓSIDOS: La
ESTREPTOMICINA es el más antiguo de
los aminoglucósidos y, después de la
penicilina, el antibiótico más empleado.
Los aminoglucósidos son antibióticos de
espectro restringido que inhiben la
síntesis de proteínas bacterianas en
bacilos gram-negativos y estafilococos.
En ocasiones se utilizan en combinación
con la penicilina. Los efectos adversos
asociados con la utilización prolongada de
aminoglucósidos son infrecuentes e
incluyen lesión de la región vestibular del
oído interno, pérdida auditiva y lesiones
en el riñón.
 TETRACICLINAS: Las tetraciclinas son
antibióticos bacteriostáticos que inhiben
la síntesis de proteínas bacterianas. Son
antibióticos de amplio espectro eficaces
frente a cepas de estreptococos, bacilos
gram-negativos, las bacterias del género
Rickettsia (las bacterias que producen el
tifus) y espiroquetas (las bacterias que
producen la sífilis). Se emplean también
en el tratamiento del acné, la enfermedad
inflamatoria pélvica, las infecciones del
tracto urinario, las bronquitis y la
enfermedad de Lyme. Debido a su amplio
ocasiones, alterar el equilibrio de la flora
bacteriana interna que normalmente es
DISCUSION.
Las células procariotas y las células
eucariotas son en efecto, organismos
completamente diferentes, mientras una
tiene una cantidad casi incalculable de
material genético, la otra tiene solo una
ristra de ADN circular, esto se refleja
también en su tamaño a lo largo de este
informe al ver que mientras las células
eucariotas se pueden ver perfectamente
con los objetivos 4x, 10x y 40x, los
portaobjetos con material biológico
procarionte se tienen que detallar con el
objetivo 100x con ayuda del aceite de
inmersión (clinica universidad de navarra,
s.f.).
CONCLUSION.
Luego de acatar los pasos del laboratorio
#2 al pie de la letra,Se pudo identificar,
que la coloración de muestras de
bacterias u otras muestras de diminuto
tamaño es muy importante para que el
ojo humano con la ayuda del
microscopio sea capaz de de identificar
dichos microorganismos dentro de un
ambiente determinado.
También, para la identificacion los
diferentes tipos de células por medio de
coloraciones distintas.
 No obstante, se pudo notar la gran
diferencia de menor y mayor tamaño
entre una celula procariota y celula
eucariota respectivamente, aun teniendo
encuenta la notable diferencia de
complejidad en su estructura entre
ambos tipos de células.

Bibliografía
(s.f.). Recuperado el 16 de febrero de 2019, de
http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/dem
os/microbiologia/unidades/curso/UNI_02
/u2c1s3.htm#Anchor3

brainly. (4 de septiembre de 2018). Recuperado

el 16 de febrero de 2019, de
https://brainly.lat/tarea/10242844

clinica universidad de navarra. (s.f.). cun.es.

Recuperado el 16 de febrero de 2019, de
https://www.cun.es/diccionario-
medico/terminos/capsula-bacteriana

pino, f. (s.f.). explora. Recuperado el 16 de

febrero de 2019, de
https://www.vix.com/es/btg/curiosidade
s/2011/06/30/clasificacion-de-las-
bacterias-segun-su-forma

vicerrectorado de estudios. (s.f.). Recuperado el

16 de febrero de 2019, de
https://sites.google.com/a/goumh.umh.e
s/practicas-de-
microbiologia/indice/esterilizacion/Aseps
ia-y-esterilizacin