Macromoléculas de la levadura

A. F. Bermúdez, S.A. García, M.A Giraldo

Programa académico de Biología, Facultad de Ciencias,
Universidad del Valle, Cali (Colombia)
24 de abril de 2016

RESUMEN
En esta práctica se obtuvieron datos cualitativos referentes a la presencia de macromoléculas en
la levadura de panadería, ya que esta al igual que todas las células eucariotas, presentan una
estructura química compleja, en base a esto la posibilidad de obtener pruebas a partir de la
precipitación de proteínas, la separación por densidad del glucógeno (al igual que la prueba del
almidón y el glucógeno con Lugol) y la comparación entre las muestras mediante el orcinol con
ADN, ARN y los ácidos nucleicos obtenidos en la práctica, pudieron evidenciar que las
macromoléculas cumplen una función estructural en las células.
INTRODUCCION
En esta práctica se logró identificar cualitativamente los diferentes tipos de macromoléculas,
presentes en las células eucariotas, también se conocieron algunos métodos de identificación
(coloración de compuestos específicos). Las macromoléculas tienen masas moleculares elevadas
(gran grupo de átomos), las cuales forman polímeros. Pueden ser tanto orgánicas como
inorgánica, un ejemplo de estos en forma sintética son los plásticos. Es necesario la inclusión de
fuerzas de van der Waals, puentes de hidrogeno, interacciones hidrofóbicas y enlaces covalentes.
Las macromoléculas más importantes y comunes en los sistemas vivos son: polisacáridos
compuestos por subunidades de azúcar, proteínas formadas por cadenas lineales de aminoácidos,
ácidos nucleicos formados por bases nucleotidicas y lípidos formados por glicerol ácidos grasos
o colesterol.
El organismo utilizado para llevar a cabo el proceso es la levadura, hongos microscópicos
unicelulares con organización eucariota, que presentan características específicas que facilitan
ser objeto de estudio como es su fácil y rápida reproducción, fácil de modificar genéticamente,
adaptabilidad y versatilidad para crecer en ambientes controlados además de sus pocas
necesidades nutricionales. Estas características específicas son tenidas en cuenta para poder
realizar la práctica ya que se acopla al objetivo principal.
Una de las pruebas que se utilizó para obtener resultados cualitativos es la reacción de biuret,
prueba que detecta la presencia de enlaces peptídicos. El sulfato de cobre es el reactivo utilizado,
este reacciona con el enlace peptídico y cambia de color cuando entra en contacto. El color
verde, es el color positivo para la prueba.
METODOLOGÍA
La primera parte de la práctica inicio con la trituración de la levadura de panadería con ácido
tricloroacético, posteriormente se dejó reposar durante algunos minutos y se agregaron
exactamente 20g de la suspensión de proteínas a la centrifuga. Luego se obtuvieron sedimentos
con proteínas y ácidos nucleicos que fueron agregados en un baño hielo, mientras el
sobrenadante fue decantado y luego precipitado con alcohol etílico, nuevamente se agregaron
20g de esta suspensión y se pasó a la centrifuga, por último se realizó la prueba del Lugol que
consistió en comparar la coloración entre el sedimento de glucógeno obtenido de la
centrifugación y una solución de almidón.
La siguiente parte consistió en la separación de las proteínas y los ácidos nucleicos, y esto se
realizó mediante la adición de una solución de NaCl y un baño de agua hirviendo, luego se
pasaron 20g de esta sustancia a la centrifuga, el sobrenadante con ácidos nucleicos fue decantado
a otro tubo y el precipitado de proteínas fue dejado en un baño de hielo.
La precipitación del ácido nucleico se llevó a cabo mediante alcohol etílico y la utilización de la
centrifuga, posteriormente se realizó la prueba con el orcinol, en la cual se agregaban 3 mL de
esta sustancia, 2 mL de amortiguador salino pH 7 a tres tubos de ensayo con ADN, ARN y los
ácidos nucleicos obtenidos de la levadura de panadería, y finalmente se realizaba un baño de
agua hirviendo hasta el cambio en la coloración de estas sustancias.
La parte final del laboratorio consistió en la prueba de Biuret, donde se tomó el sedimento de
proteínas anteriormente obtenido y se le agregaron 2 mL de solución NaCl, finalmente se agregó
1mL de sulfato cúprico y 2mL de hidróxido de sodio, al realizar esto, se observó un cambio en la
coloración de la muestra para las proteínas.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Para la prueba realizada sobre las proteínas, denominada prueba de Biuret, se hizo uso de
proteínas provenientes de células maceradas de levadura de panadería (Saccharomyces spp), y
CuSO4 en solución salina de NaOH, las proteínas se obtuvieron por el tratamiento con ácido
tricloroacético, centrifugado de las células maceradas, y finalmente una resuspensión en una
solución de NaCl para centrifugarse nuevamente; después de esto fue añadido el CuSO4 lo que
dio como resultado una solución de color violeta, Lo que indica el positivo de esta prueba 1;
también se observaron algunos grumos blancuzcos como precipitado, esto no ocurrió para el tubo
de ensayo que contiene solución salina sola , a la que también se le añadió CuSO4.
Teniendo en cuenta lo anterior, se puede afirmar que la reacción ocurre debido a las proteínas de
la solución, y no a las sales presentes en ella, en este caso las sales únicamente desestabilizan las
fuerzas eléctricas débiles de las proteínas para que adquieran una forma no globular y menos
soluble en agua; de aquí se tiene también que la solución cambia de color debido a la formación
de un complejo coordinado entre los electrones de los Nitrógenos del enlace peptídico de las
proteínas y el ion Cu+2 liberado por la disociación del sulfato cúprico.
Esta prueba funciona únicamente para moléculas que contengan 2 o más enlaces peptídicos ya
que el Cu+2, requiere de 4 interacciones coordinadas de Nitrógenos de este tipo para estabilizarse.
CONCLUSIONES
Para la extracción de las diferentes macromoléculas presentes en la levadura es necesario
modificar el medio de reacción como la temperatura, rompimiento mecánico de moléculas,
reacción con otros reactivos, etc.

 La prueba para determinar cuantitativamente la presencia de ácidos nucleicos dio

positiva, aunque no con un resultado completamente optimo, una probable causa del
fracaso de esta prueba se puede deber a que los reactivos se encontraban contaminados
por errores en la manipulación o perdida en la cantidad de la macromolécula en cada
etapa de la práctica.

REFERENCIAS
 [1]Guarnizo, A y Martínez, P. 2009. Experimentos de química orgánica con enfoque
en ciencias de la vida. Ediciones Elizcom. Armenia.