MANUAL DE MICROBIOLOGÍA

PRACTICA 8
Medios de cultivo y técnicas de siembra

Introducción
Las bacterias deben ser cultivadas en los medios correspondientes de
laboratorio para caracterizar su crecimiento, hacer su identificación y determinar
sus actividades metabólicas.
Las técnicas de aislamiento, permiten la obtención de microorganismos a
partir de muestras complejas (suelo, agua, alimentos, etc.) en las que hay gran
diversidad microbiana, así como comprobar la pureza de los cultivos obtenidos.
Los cultivos puros está formados por un solo tipo de microorganismo; y son
indispensables para conocer las características morfológicas, propiedades de
tinción, actividad bioquímica, patogenicidad, sensibilidad a antibióticos e
identificación de las especies microbianas.

Objetivos
 Conocer las diferentes técnicas de aislamiento en medios de cultivo sólido
para la obtención de cultivos puros de bacterias.
 Conocer los medios de cultivo de uso general, diferenciales y selectivos.
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Materiales de laboratorio por equipo Material del equipo

2 Mecheros Cinta adhesiva (masquin)
1 Asa bacteriológica en punta Cerillos
1 Asa bacteriológica en aro 1 Plumón indeleble o lápiz graso
3 tubos de caldo nutritivo Franela
3 Tubo con agar nutritivo Colores
3 Cajas de Petri con agar nutritivo Cloro
1 cajas de Petri con agar KTP
1 Cajas de Petri con EMB

Actividad de la practica
Técnica de estría cruzada
1. En la parte posterior y exterior de la caja, dividirla en 4 cuadrantes. Tomar
una muestra con el asa previamente flameada y fría, inocular la muestra
haciendo 4-5 estrías simples muy juntas de lado a lado sobre el primer
cuadrante.
2. Flamear el asa de inoculación y hacer girara la caja Petri un cuarto de
vuelta. Abrir nuevamente la caja y enfriar el asa de siembra tocando la
superficie del medio lejos de la zona de estrías recién hechas.
3. Rozar con el asa una vez la superficie del conjunto original de estrías y
hacer un segundo grupo de estrías en el segundo cuadrante, esta vez mas
separadas y en una sola dirección.
4. Repetir el paso 2 y 3 para el tercer cuadrante (enfriar en el mismo lugar que
el anterior) y para el cuarto cuadrante no se flameará el asa, las estrías
serán más separadas o abiertas.

Siembra en tubos
1. Sembrar en los tubos de agar nutritivo (inclinados), con el asa previamente
esterilizada, realizando una pequeña estría desde abajo hasta el pico,
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finalizando con una picadura en la base y en los tubos de agar nutritivo en

forma recta por picadura.
2. Incubar los tubos a 35 ° C durante 24 hrs.
3. Los tubos con caldo nutritivo se dejaran en agitación

Siembra de cajas de Petri con medios diferenciales y selectivos.

1. Dividir en tres partes, una caja de Petri con EMB y agar KTP, sembrar por
estría simple.
2. Incubar a 35 ° C en forma invertida durante 24 hrs.

Resultados Recopilar la información de la caracterización colonial de

cada cepa en el cuadro de resultados.
Bacteria1 Bacteria 2 Sin inocular (3)
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Aislamiento por
estría cruzada
(agar nutritivo)

Forma:
Color
Tamaño(mm)
Borde
Superficie
Aspecto
Elevación
Luz transmitida
Luz reflejada
Consistencia
Medio EMB Medio KTP

Siembra en medios
selectivos y 1 1
diferenciales
2 3 2 3

Bacteria 1
Forma
Color
Tamaño
Tamaño(mm)
Borde
Superficie
Aspecto
Elevación
Luz transmitida
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Luz reflejada
Consistencia
Bacteria 2
Forma
Color
Tamaño
Tamaño(mm)
Borde
Superficie
Aspecto
Elevación
Luz transmitida
Luz reflejada
Consistencia

Nota: la descripción colonial puede hacerse considerando los siguientes criterios.

Bacteria1 Bacteria 2 Sin
Forma: circular, irregular, filamentosa o rizoide
Borde: entero, lobulado, aserrado inocular
Superficie: lisa o rugosa
Aspecto: húmeda, seca, butirosa
Elevación: convexa, de
Tubos inclinados plana,
agar hundida
nutritivo:
Luz transmitida: translúcida, opaca
Luz reflejada: brillante, mate
Consistencia: dura, blanda, mucoide
Crecimiento: arborescente, filiforme,
rizoide, disperso, puntiforme.
Color
Bacteria1 Bacteria 2 Sin
inocular

Tubos de caldo nutritivo

Crecimiento: superficie como película,

como sedimento, turbidez en todo el
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tubo.
Color
Bacteria1 Bacteria 2 Sin
inocular
Tubos rectos de agar nutritivo

Crecimiento: en forma de película

superficial, a lo largo de la picadura,
solo en el fondo.
Color

Cuestionario

1. ¿Que es el agar y de donde se obtiene?, ¿cuáles son los

nutrimentos que proporciona a los microorganismos?

2. ¿Cuál es la composición química de los medios EMB, KTP, MM?

3. ¿cuáles son los componentes o propiedades responsables de su

función como medios selectivos o diferenciales?
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4. ¿Por qué el agar nutritivo es un medio de uso general para el

cultivo de bacteria? Proponga algunas sustancias que se le agregarían para
hacerlo selectivo para bacterias Gram negativas?

Fichas catolográficas del material bibliográfico sugerido que se encuentran

en la biblioteca de la UMAR
Ficha No. 2768
CLASIFICACION 571. 638293 M507
ISBN:
Título: Manual de Medios de Cultivos / Publicación patrocinada por MERCK
Autor:
Editorial: Alemania: E. MERCK, 1990
Descripción: 355 p.
TEMAS: 1. MICROBIOLOGIA - CULTIVOS - MANUALES \ 2. MICROBIOLOGIA
INDUSTRIAL - INDUSTRIA QUIMICO FARMACEUTICA - INVESTIGACION Y
DESARROLLO \ 3. MEDIOS DE CULTIVO GRANULADOS - PREPARACION -
CONSERVACION
Notas: Incluye referencias bibliográficas e índice

Ficha No. 1416

CLASIFICACION 616.014 M507p
ISBN: 968-7157-10-0
Título: Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia
clínica / Jean F. Mac Faddin, Irma Lorenzo trad.
Autor: Mac Faddin, Jean F.
Editorial: México : Médica Panaméricana, 1990
Descripción: 301 p.
TEMAS: 1. BACTERIOLOGIA - LABORATORIO, REACTIVOS DE - VIRUS \ 2.
MICROORGANISMOS - OBSERVACION - MANUAL \ 3. BACTERIAS -
IDENTIFICACION - LABORATORIO
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Notas: Fotocopia de original