Resumen del procedimiento

Medidas comunes

Se esterilizó las zonas de trabajo en cada

sesión, se trabajó en un área de 20 cm cerca
del mechero de bunsen cuando fue necesario
usarlo, cerca de este se esterilizaba el asa
bacteriológica si se usaba, se hizo uso de
equipo de protección al ser necesario, se
etiquetaron las cajas de agar y tubos para
pruebas bioquímicas se atendió estrictamente el reglamento del laboratorio y
finalmente en cada sesión se limpió cada zona junto con el material usado de
experimentación al finalizar cada sesión.

Preparación de muestras y cultivo en un medio

selectivo

Para la toma de la muestras se realizó una disolución de

la muestra bacteriana con solución en medida tipo 1:10,
posteriormente con un asa esterilizada se tomó la
muestra bacteriana y se procedió a realizar la siembra
en una caja con agar de MacConkey y se dejó
reposando en un horno por 24 horas.

Aislamiento de las características de las bacterias

obtenidas

Se analizaron las muestras obtenidas el día anterior

mediante sus características.

A continuación se tomaron
todas las muestras necesarias
para hacer una re-siembra
nuevamente en cajas con agar
MacConkey, luego se dejaron
reposar nuevamente 24 horas.

Al final las muestras sobrantes se tiñeron con tinción de

Gram (usando cristal de violeta, lugol, alcohol-acetona,
safrina y agua) y se observaron con un microscopio

Pruebas bioquímicas

Con las bacterias que había sido re-sembradas se tomaron muestras con el asa
bacteriológica estéril y se añadieron dos muestras bacterianas (mas una prueba
sin bacterias para probar la pureza de los tubos de muestra) a las pruebas con
catalasa y oxidasa. Aquellas colonias puras de bacterias que resultaran positivas
en la primera y negativas en la segunda se usarían para ser cultivadas en los
tubos con los siguientes reactivos: hierro triple azúcar, caldo de urea, citrato de
Simmons, caldo semisólido de SIM y caldo de VP-RM. Al concluir se dejaron
calentando en un horno por 24 horas

Se procedió a realizar la tinción de Gram nuevamente usando los cultivos puros y

fueron observadas mediante un
microscopio

Identificación de las de las

entero bacterias

Se realizaron observaciones en
cada prueba bioquímica, las que
dieron los resultaos que se
muestran en la siguiente
sección.
Resultados
Discusión conclusión
(Comparación con otros resultados)

Teniendo como objetivos (cada uno con el número de sesión que le corresponda):

- Aprender a preparar la muestra y sembrar por estría cruzada.

- Observar y conocer las características macroscópicas y microscópicas
de las colonias aisladas, así como el tener cultivos puros.
- Y aprender a interpretar las pruebas bioquímicas identificando las
bacterias.
De los cuales todos fueron llevados a cabo, son las bases para que cada uno de
los experimentos fuera explicado claramente. Sin embargo, a nosotros se nos
dificultaron ciertos pasos como en la primera sesión, que por no haber enfriado
correctamente el asa, en una de las cajas de MacConkey no crecieron bacterias
debido a la quema de las mismas. Por otro lado, en una ocasión tuvimos que
repetir alguno de los experimentos (Tinción de Gram, para ser más concreto)
debido a que no supimos controlar la cantidad de sustancias que se le tenía que
añadir adecuadamente teniendo como primer resultado una mancha negra en el
portaobjetos (del cual, el color correcto era morado o rosa dependiendo de si es
positivo Gram o negativo Gram).

Gracias a esas experiencias, se puede recomendar que se asegure en enfriar

correctamente las asas y así prevenir la eliminación de bacterias, así como el ir
añadiendo de menor a mayor cantidad las sustancias, comenzando con una sola
gota de cada producto y sólo si es necesario aumentarle otra gota más si llegó a
hacer falta y así evitar lo que nos sucedió.

Es fundamental que las prácticas de laboratorios estén relacionadas con

problemas de la actualidad, debido a que, aparte de cumplir con una de las
características del sistema modular de la UAM-X (que es la “enseñanza a partir de
su vinculación con la realidad”), facilita el entendimiento y la relación que tiene la
ciencia con el exterior. También reconozco que el manual de laboratorio es fácil de
entender, así como la práctica es sencilla de realizar a pesar de sus tantos
componentes que lleva a cabo (preparación de muestras, tinción de Gram, estudio
de entero bacterias y la relación que hay con la bioquímica).
Descripción de la bacteria encontrada
Escherichia Coli

Taxonomía

Esta entero bacteria fue descubierta por Theodor Escherich en 1885 y la

denomino Bacterium coli, esta bacteria pertenece al reino bacteria, el filo es proteo
bacteria, pertenece a la clase gamma proteo bacteria, su orden es entero
bacteriales, perteneciente a la familia entero bactericeae, su género es escherichia
y su especie E. coli.
Estructura

Escherichia Coli: es una bacteria mesofilica capaz de descomponer la materia

inorgánica a temperaturas de 30 a 40 °C. Se multiplican en aerobiosis la
temperatura de incubación debe ser de los 20 a los 37°C, pueden
ser patógenas o saprofitas. Proporcionan información acerca del número de
bacterias viables, por lo que representan un recurso valioso adicional para
determinar el grado de exposición de los alimentos a la contaminación por
microorganismos.

Reproducción

Su reproducción es por fisión binaria simple también son bacilos aspérgenos Gram
negativos, móviles, tienes flagelos periticos que se cultiva en medios ordinarios de
laboratorio fácilmente, su respiración suele ser aerobios y anaerobios facultativos,
fermentan glucosa, realizan la reducción de nitratos a nitritos, también tienen
oxidasa negativa y catalasa positiva, no forman esporas; se encuentra en el tracto
gastrointestinal de humanos y animales de sangre caliente. La importancia de esta
entero bacterias se reconoce como un patógeno humano que está relacionada con
las enfermedades: diarrea, colitis hemorrágica, disentería, infecciones de la vejiga
urinaria y de los riñones; también se encargan del funcionamiento correcto
digestivo porque producen vitaminas (A y k).

Importancia

En las industrias alimentarias es utilizado como indicador de mala higiene por

probables contaminaciones fecales en agua y leche.

(OMS; Bell, Kyriakides and Ramis Vergés, 2000; Seguridad e Higiene alimentaria,
2018).
Cuestionario

Bibliografía

Bustos Martínez Jaime, Drago Serrano Elisa, Moles y Cervantes Luis Pedro,
Ramírez Ibarra Rodrigo, Rojas Serranía Nora. 2007. Métodos básicos para el
aislamiento e identificación de enterobacterias del agua. Primera edición.
Universidad Autónoma Metropolitana, Unidad Xochimilco. México D.F.