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Ao de la Integracin Nacional y el Reconocimiento de Nuestra Diversidad

RECONOCIMIENTO DE LOS MICROORGANISMOS DEL REINO PROTISTA


1. OBJETIVOS:  Demostrar la presencia naturaleza. de diversos tipos de microorganismos en la

 Reconocer la coloracin simple y compuesta.

 Buscar algas, bacterias, protozoarios.

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2. MARCO TEORICO El Reino Protista est conformado por un grupo de organismos que presentaban un conjunto de caractersticas que impedan colocarlos en los reinos ya existentes de una manera plenamente definida. Esto se debe a que algunos protistas pueden parecerse y actuar como individuos del reino plantas, otros protistas pueden parecerse y actuar como organismos del reino animal, pero los organismos del reino protista no son ni animales ni plantas. Los individuos del reino de los protistas son los que presentan las estructuras biolgicas ms sencillas entre los eucariotas (ya que su ADN est incluido en el ncleo de la clula), y pueden presentar una estructura unicelular (siendo esta la ms comn), multicelular o colonial (pero sin llegar a formar tejidos). Los protistas son auttrofos (en su mayora) y producen un alto porcentaje del oxgeno de la tierra. Sin embargo, es complicado establecer un cuadro de caractersticas generales para los organismos del reino protista. Con todo, procuraremos presentar las caractersticas ms comunes en la mayora (No estn presentes en todos los protistas) de estos organismos a continuacin: El microscopio de campo claro es ms til para la observacin de especmenes teidos. Los colorantes son compuestos qumicos utilizados para aumentar el contraste. Existen algunos, llamados colorantes vitales, que pueden aadirse directamente a una preparacin en fresco; por tanto, colorean clulas vivas. No obstante, la mayora de los colorantes son solamente efectivos despus de que los microorganismos hayan sido fijados, es decir, se encuentren muertos y adheridos al portaobjetos. TIPOS DE COLORANTES.- Casi todos los colorantes son sales, compuestos formados por iones cargados. Los colorantes bsicos son aquellos en los cuales el agente que tie es el ion cargado positivamente, mientras que en los cidos, el colorante es el ion cargado negativamente. Los colorantes ms utilizados son los de tipo bsico, va que la mayor parte de las clulas microbianas Poseen cargas dbilmente negativas en su superficie, lo cual facilita su unin. Entre los colorantes bsicos ms comunes se encuentran la safranina, la fucsina bsica, el cristal violeta y el azul de metileno. Los colorantes cidos se unen a las partes de las clulas cargadas positivamente. Se utilizan para teir tejidos animales infectados con microorganismos. Entre los ms frecuentes estn la eosina, la fucsina cida y el rojo Congo. La forma ms simple de preparar un espcimen para su examen microscpico es hacer una preparacin en fresco. Existen dos tcnicas, una preparacin en fresco simple ("entre porta y cubre") Las preparaciones en fresco se utilizan para observar microorganismos vivos. Por ejemplo, para la bsqueda de Trichomonas vaginalis en secreciones vaginales. Este protozoo de gran movilidad causa inflamacin de la vagina y la uretra. Si en la preparacin se observan clulas en forma de huso que se mueven mediante contracciones o sacudidas cruzando el campo, probablemente se tratar de T. vaginalis, pudindose efectuar el diagnstico. Sin embargo, el inconveniente de la observacin en fresco es que no permite aumentar el contraste de la preparacin. Por tanto, su uso, con un microscopio ptico de campo claro, est bastante limitado. Normalmente, para observar microorganismos vivos se utiliza alguno de los otros microscopios pticos que hemos mencionado anteriormente.

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COLORACIN SIMPLE.- Un colorante; proporciona contraste para observar mejor un organismo completo.

COLORACION COMPUESTA (GRAM).bacterias Gram positivas y Gram negativas

Dos o ms colorantes; distingue entre

3. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:            MATERIALES: Microscopio Cubre objeto Porta objeto Agua estancada Azul de metileno Cristal violeta Lugol Alcohol Safranina Aceite de inmersin mechero

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OBSERVACIN AL AGUA ESTANCADA:  Tomamos pequeas muestras del agua estancada y colocamos algunas gotas en el porta objeto para luego ser cubierto con el cubre objeto.  A continuacin se deber colocar en el microscopio para poder observar los microorganismos existentes en la muestra tomada la medida que utilizamos fue 10x 40x  Pudimos distinguir los siguientes microorganismos: - Se pudo observar protozooarios y bacterias(chica)

OBSERVACIN A LA NUESTRA DE SALIVA:  Tomamos pequeas muestras de la saliva y colocamos al porta objeto para luego llevarlo al mechero para que la llama pueda fijar la muestra, teniendo en cuenta que el calor no debe ser directo (slo se pasa por la llama), puesto que el calor excesivo puede cambiar la morfologa celular de las bacterias a observar. El calor deseable es aqul en el que el portaobjetos sea apenas demasiado caliente para ser colocado sobre el dorso de la mano.

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COLORACIN SIMPLE:  Con azul de metileno se utiliza una cantidad suficiente sobre la muestra, luego se debe enjuagar la lmina conteniendo la muestra con agua destilada. Para realizar el lavado, se debe tener en cuenta que el chorro de agua NO debe caer directamente sobre la muestra, sta debe caer sobre la parte superior de la lmina que no contiene muestra. El chorro debe ser un chorro delgado, aproximadamente de medio a un milmetro de espesor. Tambin el enjuague se debe realizar poniendo la lmina portaobjetos en posicin inclinada hacia abajo.  Pudimos distinguir los siguientes microorganismos: -Estafilococos, estreptococos.

COLORACIN COMPUESTA:  Se utiliza cristal violeta como para lograr cubrirla por completo; se deja actuar el colorante por 1 minuto. Esta tincin de 1 minuto est dada para trabajar a una temperatura ambiente de 25 C. Luego se enjuaga con agua destilada

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 Una vez enjuagado el portaobjetos, se aplica como mordiente yodo o lugol durante 3 minuto ms. El mordiente es cualquier sustancia que forme compuestos insolubles con colorantes y determine su fijacin a las bacterias.

 Pasado el minuto de haber actuado el mordiente, el frotis se decolora con alcohol-acetona, hasta que ya no escurra ms lquido azul. Para esto se utiliza el gotero del frasco del decolorante. Se van aadiendo cantidades suficientes del decolorante, hasta lograr que ste salga totalmente transparente, es decir, hasta que ya no escurra ms lquido azul.

 Una vez que la lmina ya sec, procedemos a teir nuevamente, pero esta vez se va a utilizar un colorante de contraste como por ejemplo la safranina, dejar actuar durante 1 minuto.

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 Para observar al microscopio ptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersin.

 Pudimos distinguir los siguientes microorganismos: - Staphylococcus aureus (Coco Gram positivo) y Escherichia coli (bacilo Gram negative)

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4. CONCLUSIN  Los protozooarios se trasladan ms rpido que las bacterias.  Los virus no pueden ser observados por microscopios normales.  El aceite de inmersin tiene los siguientes usos:
a) Los objetivos de mayor aumento, tienen una distancia focal muy pequea y adems la

primera lente del objetivo es de pequeo dimetro. b) Los rayos que desde la muestra se dirigen al objetivo atraviesan el vidrio del cubreobjetos y al pasar al aire se separan de la normal. Algunos rayos incluso sufren reflexin total en la interface vidrio-aire c) Solo llega al microscopio una pequea parte de la luz que parte de la muestra, con el problema que conlleva para la visin. d) Al intercalar, entre el objetivo y el cubreobjetos una gota de aceite de cedro o aceite de inmersin, al ndice de refraccin casi igual al vidrio, los rayos emergentes ya no se apartan de la normal, sino que continan su camino sin desviacin, consiguiendo as que una mayor cantidad de luz llegue al objetivo, mejorando notablemente la visin.

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5. BIBLIOGRAFA  http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen/uni _02/56/cap304.htm  http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n__Gram  http://www.slideshare.net/andresricote/tincin-simple-presentation  http://mx.answers.yahoo.com/question/index?qid=20080212164301AAO7moG

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1. INDICE: OBJETIVOS ....1 MARCO TEORICO ....2 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL..3 CONCLUCION .8 BBLIOGRAFIA .9 INDICE .....10

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